BYL-719对结核杆菌诱导异常破骨细胞分化的作用及机制

背景:PI3K/AKT信号通路调控破骨激活在维持骨稳态中具有关键作用,而骨关节结核中的骨质破坏正是由于结核杆菌感染引起的异常破骨细胞生成所致,但是PI3K信号通路在结核杆菌诱导的异常破骨细胞生成中发挥的作用尚不明确。目的:探究PI3K/AKT信号通路抑制剂BYL-719对结核杆菌诱导的异常破骨细胞生成的影响及机制。方法:使用牛结核杆菌卡介苗(BCG)感染RAW264.7细胞,Ag85B进行细胞免疫荧光染色;CCK-8法确定BYL-719安全使用浓度。实验分为空白对照组、BYL-719组、卡介苗组、卡介苗+BYL-719组。各组细胞在RANKL诱导下,通过抗酒石酸酸性磷酸酶染色和鬼笔环肽染色,探究BYL-719对结核杆菌感染后破骨细胞分化、融合的影响;RT-PCR和Western Blot检测破骨细胞相关基因及蛋白表达情况,并进一步探索作用机制。结果与结论:①免疫荧光染色结果显示,RAW264.7细胞吞噬结核杆菌;②CCK-8数据显示,40 nmol/L浓度BYL-719没有细胞毒性;③抗酒石酸酸性磷酸酶染色和鬼笔环肽染色提示,BYL-719能抑制结核杆菌感染后的破骨细胞生成、融合能力;④RT-PCR和Western blot结果也提示,BYL-719抑制了结核杆菌感染诱导的破骨细胞特异性基因(包括c-Fos、NFATc1、基质金属蛋白酶9和CtsK)表达升高(P<0.05);⑤Western blot和免疫荧光染色结果揭示,BYL-719通过下调IκBα-p65来抑制结核杆菌诱导的破骨细胞过度分化;⑥结论:BYL-719通过下调IκBα/p65抑制结核杆菌诱导的异常破骨细胞生成,说明IκBα/p65信号通路是骨关节结核潜在治疗靶点,BYL-719有预防和改善骨关节结核中骨质破坏的潜在价值。

重组结核杆菌融合蛋白在肺结核密切接触者中筛查结核分枝杆菌感染效果分析

目的:探讨重组结核杆菌融合蛋白(recombinant mycobacterium tuberculosis fusion protein,EC)皮肤试验在筛查肺结核患者密切接触者结核分枝杆菌感染中的实用性和有效性,为进一步优化结核感染检测提供技术建议,了解密切接触者结核分枝杆菌潜伏感染(LTBI)现状。方法:2023年10月23日至11月14日在上海市奉贤区和金山区共选取140名肺结核密切接触者作为研究对象,对每名研究对象同时采用γ-干扰素释放试验(IGRA)和EC皮肤试验进行结核感染检测,采用Kappa值检验两种方法结果一致性,采用χ^(2)检验比较两组检测方法之间的差异,以P<0.05为差异有统计学意义。结果:140名研究对象,包括男性55例,女性85例;IGRA阳性率为15.00%(21/140),EC皮肤试验阳性率为14.29%(20/140),两种试验方法一致性检验Kappa值为0.857,差异无统计学意义(χ^(2)=0.029,P=0.866),两种检测方法检测结果为高度一致性;以IGRA作为结核感染的参考标准,EC皮肤试验的敏感度为85.71%(18/21)、特异度为98.32%(117/119)、阳性预测值为90.00%(18/20)、阴性预测值为97.50%(117/120);男性EC阳性率(32.73%,18/55)明显高于女性(2.35%,2/85),差异有统计学意义(χ^(2)=17.983,P<0.001)。结论:EC皮肤试验具有较强的特异性,可用于肺结核密切接触者结核分枝杆菌感染筛查,但受限于使用年龄和接种禁忌证,可采用IGRA对无法进行EC皮肤试验者进行补充检测。

石蜡组织中结核杆菌DNA检测在辅助诊断儿童结核病中的回顾性研究

目的探讨荧光探针PCR法检测石蜡组织中结核杆菌DNA在辅助诊断儿童结核病中的应用价值,同时分析、总结可能对实验结果产生影响的因素及注意事项。方法回顾性选取2017年8月至2019年9月重庆医科大学附属儿童医院用荧光探针PCR法检测石蜡组织中结核杆菌DNA的病例177例,将检测结果与石蜡切片抗酸染色及病理诊断结果进行比较,验证其诊断价值,同时总结荧光探针PCR法检测石蜡组织标本中结核杆菌的影响因素及注意事项。结果177例病例中84例诊断为结核、卡介苗病或符合结核、卡介苗病、结核伴感染,结核分枝杆菌DNA(荧光探针PCR法)检出阳性59例,荧光探针PCR法灵敏度为70.238%;其余93例病理诊断为肉芽性肿、化脓性炎症、猫抓病、淋巴瘤等非结核性疾病,结核分枝杆菌DNA检测结果均为阴性,荧光探针PCR法特异度为100%。151例同步行抗酸染色,荧光探针PCR法检出结核病灵敏度为69.333%(52/75),显著高于抗酸染色的14.667%(11/75),差异有统计学意义(P<0.05)。结论与结核杆菌抗酸染色比较,荧光探针PCR法检测组织中结核杆菌DNA具有更高的灵敏度,能显著提高结核病/卡介苗病的检出率,为临床诊疗提供有力证据。

结核杆菌抗原85B抑制自噬促进霍奇金淋巴瘤细胞凋亡机制研究

目的探讨结核杆菌抗原85B(mycobacterial antigen 85B,Ag85B)抑制自噬促进霍奇金淋巴瘤(Hodgkin lymphoma,HL)细胞凋亡及机制。方法回顾性收集新疆医科大学第一附属医院收治的80例HL及同期30例淋巴结反应性增生患儿(对照组)临床资料及病理组织切片。采用免疫组化分析微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)、自噬降解底物蛋白1(sequestosome 1,P62/SQSTM1)、Beclin-1在HL及对照组患儿病理组织中的表达。将人霍奇金淋巴瘤细胞(HDLM-2)分为HDLM-2组、HDLM-2+结核杆菌抗原85B(mycobacterial antigen 85B,Ag85B)组(Ag85B分别为0.5、1、2、4μg/mL)。采用CCK8法检测HDLM-2细胞增殖;实时荧光定量聚合酶链式反应法检测LC3、P62、Beclin-1、磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K)、蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)mRNA的表达;凋亡试剂盒检测细胞凋亡。结果HL组LC3、Beclin-1阳性表达高于对照组(P<0.05),P62阳性表达低于对照组(P<0.05);Ⅲ~Ⅳ期较Ⅰ~Ⅱ期LC3、Beclin-1阳性表达增高,P62阳性表达降低(P<0.05)。细胞实验结果显示,HDLM-2+Ag85B组与HDLM-2组比较,细胞增殖受抑,LC3和Beclin1的mRNA表达减低,P62、PI3K、Akt和mTOR的mRNA表达增高,细胞凋亡增加,且在Ag85B为2μg/mL时,Ag85B干预HDLM-2细胞24 h作用最强,差异有统计学意义(P<0.05)。结论自噬在HL患儿中增强,且随疾病的分期增加而增强;Ag85B可抑制HL肿瘤细胞增殖及自噬,促进细胞凋亡,其机制可能与促进PI3K/Akt/mTOR通路相关。

结核杆菌检验中涂片抗酸染色法与荧光定量PCR法的价值对比

目的比较涂片抗酸染色法与荧光定量聚合酶链式反应(PCR)法在检验结核杆菌中的价值,为肺结核诊断提供依据。方法选取2021年8月至2023年8月本中心就诊的60例疑似肺结核患者,采集患者痰液标本,分别采用荧光定量PCR法、涂片抗酸染色法对其进行检测,并将痰培养所得结果作为本研究的“金标准”,就两种检测方法的具体诊断效能(特异度、准确度与灵敏度、阳性预测值、阴性预测值)进行对比。结果在疑似肺结核患者60例当中,通过痰培养确诊肺结核患者38例,所占比重为63.33%;荧光定量PCR法诊断阳性36例,涂片抗酸染色法为34例。荧光定量PCR法检测的特异度(95.45%)、准确度(93.33%)、灵敏度(92.11%)、阳性预测值(97.22%)、阴性预测值(87.50%)均较涂片抗酸染色法(68.18%、70.00%、71.05%、79.41%、57.69%)高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论采用荧光定量PCR法对结核杆菌进行检测,其在诊断肺结核方面的效能,优于涂片抗酸染色法,更具适用性。

结核感染T细胞γ干扰素释放试验及结核杆菌抗体在肺结核患者诊断中的应用

目的:探讨对结核感染T细胞γ干扰素释放试验(TB-IGRA)及结核杆菌抗体(TB-Ab)在肺结核患者诊断中的应用价值。方法:选择2022年1—12月荆州市第三人民医院收治的216例疑似肺结核患者,将病理学诊断作为“金标准”,依据是否存在结核病进行分组,分为肺结核组(n=151)和非肺结核组(n=65),采集患者清晨空腹静脉血分别检测TB-IGRA、TB-Ab水平,观察两项指标检测肺结核阳性结果,观察不同检查方式诊断效能。结果:肺结核组中TB-IGRA阳性检出率、TB-Ab阳性检出率均高于非肺结核组,差异有统计学意义(P<0.05)。TB-IGRA、TB-Ab诊断肺结核的阳性预测值、特异度比较,差异无统计学意义(P>0.05),TB-IGRA诊断肺结核的敏感度、阴性预测值高于TB-Ab,差异有统计学意义(P<0.05)。年龄>60岁肺结核患者TB-IGRA阳性检出率、TB-Ab阳性检出率高于≤60岁肺结核患者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:临床肺结核诊断中应用TB-IGRA、TB-Ab检查均有较高诊断效能,但相对而言TB-IGRA检查方式更优,且该检查方式阳性率易受年龄因素影响。

流式细胞术检测荧光素标记结核杆菌的方法

目的:建立流式细胞术检测荧光素标记结核杆菌(M.tb)的方法。方法:以异硫氰酸荧光素(FITC)、二乙酸荧光素(FDA)、PKH26和碘化丙啶(PI)标记M.tb,应用流式细胞仪检测M.tb标记率。结果:FITC标记M.tb,在PBS缓冲液中,不同浓度FITC(10~40μg/ml)标记率随浓度增加而增高,FITC浓度10μg/ml标记率为85%,FITC浓度增加到40μg/ml标记率可达到93%,差异具有统计学意义(P<0.05);而在CB缓冲液中,不同浓度FITC(10~40μg/ml)标记M.tb标记率均在90%左右,差异无统计学意义(P>0.05)。FDA标记M.tb标记率均达到92%以上。PKH26标记M.tb标记率均达到90%以上。PI标记M.tb,酒精作用1 min标记率在47%左右,酒精作用2 min标记率达到97%左右,且标记率随时间增加而增高(P<0.05)。结论:建立流式细胞术检测荧光素标记M.tb的方法可为结核病基础研究提供实验思路。创新性建立应用荧光素FITC、FDA、PKH26、PI标记M.tb,并利用流式细胞术检测标记率,可为结核病基础研究提供实验思路。

肺结核痰液标本分枝杆菌涂片抗酸染色镜检与结核杆菌培养试验结果分析

目的 探讨肺结核痰液标本分枝杆菌涂片抗酸染色镜检与结核杆菌培养试验结果。方法 选去2020年1月至2023年9月就诊于我中心的68例肺结核患者和68例非肺结核患者,均留取3~5 mL痰液,分别作为抗酸染色镜检组和结核杆菌培养试验组。以临床最终诊断结果为准,分析两种检查方式诊断肺结核的价值,并对比两种检查方式所需时间及费用。结果 两种检查方式诊断肺结核的特异度和阳性预测值均为100.00%,其中结核杆菌培养试验诊断肺结核的灵敏度为79.41%、准确度为89.71%,均高于抗酸染色镜检,差异具有统计学意义(P<0.05);两种检查方式诊断肺结核阴性预测值对比无统计学差异(P>0.05);结核杆菌培养试验检查所需时间和费用均高于抗酸染色镜检,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 结核杆菌培养试验、抗酸染色镜检诊断肺结核各有优缺点,前者诊断灵敏度与准确度高,后者能快速出结果且所需费用低,临床可先采用抗酸染色镜检筛查,再采用结核杆菌培养试验检查确诊。

基于YOLOv7网络的高分辨率结核杆菌识别方法研究

结核病已经被列为全球十大主要死亡原因之一,针对痰涂片图像背景复杂,结核杆菌目标尺寸小等难题,提出基于痰涂片图像的单阶段YOLOv7结核杆菌检测网络。骨干网络中,分别在不同尺度的高效聚合网络后嵌入CBAM注意力模块,以提取不同尺度的特征,在颈部网络中引入分离合并操作以改进MPConv结构,减少深层网络因卷积下采样引起的图像特征损失,并在头部网络中引进高斯分布距离来避免因边界框重叠而引起的小目标漏检,得到一种精度高、检测速度快的结核杆菌方法。实验表明,改进模型的均值平均精度达到了87.8%,相比基线网络模型提升5.1%,且优于同类算法,对推进结核杆菌的智能化检测具有重要意义。

结核杆菌/利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术联合干扰素-γ释放试验对肺结核的诊断效能

目的探讨结核杆菌利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测(Gene Xpert-MTB/RIF)技术联合干扰素-γ释放试验(IGRA)对肺结核的诊断效能,为临床治疗提供参考。方法选取2022年3月至2024年3月睢宁县中医院收治的78例疑似肺结核患者的临床资料,进行回顾性分析。所有患者均接受结核分枝杆菌(MTB)培养、Gene Xpert-MTB/RIF、IGRA检查,以MTB培养结果为金标准,分析Gene X-pert MTB/RIF联合IGRA对肺结核的诊断效能。结果MTB培养结果显示:78例疑似肺结核患者中,阳性58例,阴性20例;联合检测结果显示:阳性72例,阴性6例。联合检测准确度为85.90%,灵敏度为94.83%,特异度为60.00%,阳性预测值为91.67%,阴性预测值为66.67%,均高于各项单一检测(均P<0.05)。结论Gene Xpert-MTB/RIF联合IGRA诊断肺结核的价值较高,值得临床应用。

抗结核分枝杆菌单克隆抗体用于结核杆菌抗原分析、鉴定及检测的研究

目前,结核病仍是严重危胁人类健康的传染病,如何有效控制结核病,并且降低结核病患病率和发病率是我国乃至世界卫生工作中一项迫在眉睫的任务。因此,对于结核病的诊断和治疗的研究仍有许多工作要做。抗结核分枝杆菌单克隆抗体的研制对于结核病的血清学诊断、结核病的治疗以及结核分枝杆菌抗原的分析都有重要的意义。

狼毒类中药对结核杆菌抗菌作用的比较

对１２种狼毒类中药的乙醇提取物进行了结核杆菌的体外抑菌试验，实验结果表明，１２种狠毒均有不同程度的抑菌作用。其中以狠毒大戟（Ｅｕｐｈｏｒｂｉａｆｉｓｃｈｅｒｉａｎａ）根、大狠毒（Ｅ．ｎｅｍａｔｏｃｙｐｈａ）根的抑菌作用最强。

基于结核杆菌耐热抗原小分子多肽刺激人外周血T细胞产生TNF-α和IFN-γ鉴别肺结核和潜伏性结核感染

目的研究结核杆菌耐热抗原小分子多肽(Mtb-HAg-10k)刺激人外周血T细胞产生细胞因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和干扰素-γ(IFN-γ)的作用特点及肺结核患者和潜伏性感染者IFN-γ产生细胞的数量差异,初步探讨Mtb-HAg-10k作为诊断抗原鉴别肺结核和潜伏性结核感染的可行性。方法以超滤离心法获得的Mtb-HAg-10k为刺激剂作用于人外周血单个核细胞(PBMCs),并以Mtb-HAg、植物血凝素PHA作为对照,用多色流式细胞术检测T细胞亚群中TNF-α和IFN-γ产生细胞比例,酶联免疫斑点法检测肺结核患者和潜伏性感染者PBMCs中IFN-γ产生细胞数量。结果流式细胞术检测人外周血Mtb-HAg-10k特异性γδT细胞中TNF-α产生细胞比例显著高于IFN-γ产生细胞比例(P<0.01);与PHA刺激组相比,γδT细胞中TNF-α和IFN-γ产生细胞比例增高(P<0.01),而αβT细胞中TNF-α和IFN-γ产生细胞比例显著降低;酶联免疫斑点法检测Mtb-HAg-10k刺激的健康者PBMCs中IFN-γ产生细胞数量低于Mtb-HAg刺激组和PHA对照组(P<0.01);肺结核患者IFN-γ产生细胞数量低于潜伏性结核感染者(P<0.01)。结论以Mtb-HAg-10K为刺激剂可使人外周血γδT细胞优势产生TNF-α和IFN-γ,通过酶联免疫斑点法检测PBMCs中IFN-γ产生细胞数量差异有助于鉴别肺结核和潜伏性结核感染。

可激活人γδT细胞的结核杆菌耐热多肽抗原的初步纯化与活性鉴定

目的 对结核杆菌耐热多肽抗原（Mtb-Ag）的蛋白组成进行定性分析,并观察Mtb-Ag及其纯化组分刺激人外周血rδT细胞和αβT细胞增殖反应的量效关系。方法 用快速蛋白液相色谱仪（FPLC）定性分析Mtb-Ag的蛋白组成,并用不同剂量的Mtb-Ag及其纯化组分体外刺激健康人外周血PBMC,培养9d后经流式细胞仪检测细胞表型。结果 Mtb-Ag经FPLC MonoQ离子交换柱分析存在20种蛋白成分。Mtb-Ag在合适刺激剂量时对人rδT细胞发挥优势扩增;当剂量过大则对αβT细胞发挥优势扩增;其分离纯化的含大分子蛋白的蛋白峰I随着刺激剂量增加而对αβT细胞的扩增表现显著增强趋势;而其分离的含低分子多肽的蛋白峰Ⅱ随着刺激剂量增加则对rδT细胞扩增表现显著增强趋势,并且其活性明显高于蛋白峰I,同时其对αβT细胞的扩增效应并不明显,并显著低于Mtb-Ag和蛋白峰I。结论 Mtb-Ag刺激rδT细胞扩增时应选择合适的刺激剂量,其所含的低分子多肽抗原能特异性激活rδT细胞,而其所含的大分子蛋白抗原则特异性激活αβT细胞。

刺激人γδ^+ T细胞增殖的结核杆菌多肽抗原的纯化与活性鉴定

目的:纯化可刺激人γδ+ T细胞增殖的结核杆菌耐热多肽抗 原。方法:采用快速蛋白液相色谱仪(FPLC)S-100分子筛层析柱,对结核杆菌耐热抗原(Mtb-Ag)初步分离。将获得的结核杆菌耐热Mr低的多肽抗原(Mtb-LW-Ag)洗脱峰,分别再经FPLC Mono Q离子交换层析柱进一步纯化,并且采用流式细胞仪对获得的Mtb-LW-Ag进行刺激γδ+ T细胞增殖活性的测定。结果:Mtb-Ag经FPLC S-100柱可分离出1个大分子蛋白峰A和3个M,低的多肽峰(B,C,D)。Mr低的多肽峰分别经Mono Q柱层析,鉴定出B峰含有6个主峰,C峰含有1个主峰,D峰含有8个主峰。对Mtb-LW-Ag及其纯化多肽进行活性检测,发现多肽峰B和C以及纯化多肽B-Ⅲ和C-主肽均可显著刺激γδ+ T细胞扩增。结论:利用FPLC法可快速高效地从Mtb-Ag中纯化出多种Mr低的多肽,而且其中的B-Ⅲ多肽和C-主肽可能是促进γδ+ T细胞活化增殖的主要多肽。

布氏杆菌和结核杆菌二重实时荧光定量PCR检测方法的建立与初步应用

本试验旨在利用二重实时荧光定量PCR技术建立鉴别诊断布氏杆菌和结核杆菌的方法。通过筛选布氏杆菌omp10、omp19、omp17、omp25、omp31和结核杆菌cfp10基因的最佳引物组合,建立二重实时定量PCR鉴别诊断方法,对该方法进行稳定性、特异性和敏感性试验,并对临床样品及模拟样品进行检测。经筛选布氏杆菌的omp25基因与结核杆菌cfp10基因引物组合最佳,该二重实时荧光定量PCR方法中布氏杆菌Tm值为88～89℃,结核杆菌Tm值为90～91℃,对其他供试的菌株则为阴性;该方法对布氏杆菌的DNA最低检出量为20拷贝.μL-1,结核杆菌为50拷贝.μL-1,两病原都存在时为100拷贝.μL-1,比常规PCR高100倍。利用所建立的二重荧光定量PCR方法及常规PCR,对24份结核痰样、11份布氏杆菌基因粗提物及30份模拟奶样进行检测,符合率为100%。本试验建立的方法可用于同时检测布氏杆菌和结核杆菌,并且具有良好的特异性、敏感性和稳定性。

纯化的结核杆菌多肽抗原刺激人γδT细胞的效应分析

目的 :探讨从结核杆菌多肽抗原 (Mtb Ag)纯化的多肽 (C主肽 )对人新鲜外周血γδT细胞的促增殖效应以及对已活化扩增的T细胞再次刺激的激活效应。方法 :采用不同剂量的C主肽体外刺激健康人外周血PBMC ,培养 10天时经流式细胞仪检测细胞表型 ;另外以γδT细胞活化标志分子CD6 9的表达为指标 ,分析C主肽对已被Mtb Ag激活扩增 13天的γδT细胞再次刺激的激活效应。同时以MTT法检测C主肽的再刺激对已活化扩增的γδT细胞的促增殖活性。结果 :结核杆菌C主肽对人新鲜的γδT细胞具有显著扩增效应 ;当C主肽再刺激已经活化的γδT细胞时 ,可使其显著表达CD6 9分子 ,同时对γδT细胞具有显著促增殖活性。结论 :结核杆菌C主肽可能是Mtb

细胞因子IL-2、IL-12及IL-18增强结核杆菌ESAT-6 DNA疫苗的免疫保护作用

目的探讨白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-12(IL-12)以及白细胞介素-18(IL-18)对结核分枝杆菌ESAT-6DNA疫苗免疫保护作用的影响。方法50只雌性Balb/c小鼠随机分为IL-2-pcDNA-ESAT-6、IL-12-pcDNA-ESAT-6、IL-18-pcDNA-ESAT-6、pcDNA-ESAT-6以及PBS对照组,分别于0、2、4周共免疫3次。末次免疫2周后各组处死5只小鼠,ELISA检测小鼠血清IgG、IgA,并分别检测0、2、4、6周小鼠阴道灌洗液中sIgA水平。CCK-8法检测免疫小鼠脾细胞的增殖情况,并测定脾细胞上清中细胞因子IFN-γ、IL-2、TNF-α、IL-6、IL-10的分泌水平。末次免疫2周后,腹腔注射结核杆菌H37Rv感染小鼠,感染后4周取小鼠肺组织进行菌落培养计数;同时通过HE染色以及肺组织炎症因子检测评估其炎症情况。结果细胞因子IL-2、IL-12以及IL-18均能够显著增加小鼠血清IgG、IgA以及阴道灌洗液sIgA的分泌(P<0.05),并促进免疫小鼠脾淋巴细胞的增殖(P<0.05);IL-2、IL-12及IL-18还能够显著增加脾细胞中IFN-γ、IL-2、TNF-α的分泌水平;此外,相较于ESAT-6真核疫苗组以及PBS对照组,IL-2、IL-12及IL-18均能够显著降低小鼠肺组织菌体载量以及炎性侵润,并减少炎性因子分泌。结论细胞因子IL-2、IL-12及IL-18均能不同程度的增强结核杆菌ESAT-6 DNA疫苗的体液以及细胞免疫应答水平,并显著提高其免疫保护效果。

刺激人γδT细胞增殖的结核杆菌多肽抗原的生物学特性分析

目的 :分析可刺激人γδT细胞增殖的结核杆菌多肽抗原(Mtb Ag)的某些生物学特性。方法 :以结核杆菌分泌蛋白与经透析或链霉蛋白酶处理的Mtb Ag体外分别刺激人外周血单个核细胞 (PBMC)增殖 ,培养 10d时 ,采用流式细胞仪分析细胞的表型。结果 :透析后的Mtb Ag刺激γδT细胞增殖的活性未见明显降低 ;而经链霉蛋白酶处理的Mtb Ag促进γδT细胞增殖的活性则显著下降。另外 ,与结核杆菌分泌蛋白相比较 ,Mtb Ag刺激γδT细胞增殖的活性显著增强。 结论 :Mtb Ag中可刺激人γδT细胞增殖的成分是一种相对分子质量 (Mr)大于 10 0 0 0、非分泌性。