结肠小袋纤毛虫PCR-RFLP分型方法的建立

目的建立高效、特异的结肠小袋纤毛虫遗传亚型分析方法。方法选择限制性内切酶ApoI和PflMI对结肠小袋纤毛虫ITS1-5.8S rDNA-ITS2的PCR扩增产物进行酶切分析,建立PCR-RFLP分型方法,利用建立的PCR-RFLP方法对猪源、羊源和豚鼠源临床粪便样品进行遗传亚型分析。结果基于ApoI和PflMI的PCR-RFLP方法可以准确区分结肠小袋纤毛虫遗传变异型A和B,用PflMI可以进一步将遗传变异型B细分为B-c和B-t两个亚型。与镜检和测序结果比较,建立的PCR-RFLP方法具有良好的特异性和更高的灵敏性,不仅可以鉴定临床样品中结肠小袋纤毛虫单个亚型,而且可以鉴别单个样品中结肠小袋纤毛虫多个亚型的混合感染。结论本研究成功建立了结肠小袋纤毛虫PCR-RFLP方法,可用于结肠小袋纤毛虫遗传多态性鉴定和分子流行病学研究。

猪结肠小袋纤毛虫病的诊断与防治

【目的】旨在有效诊断和防治猪结肠小袋纤毛虫病,降低其对养猪业的危害。【方法】通过查阅大量文献对猪结肠小袋纤毛虫的病原特性、流行特点进行梳理分析,根据患病猪的临床症状结合实验室检测方法和临床综合诊断方法进行准确诊断,并依据结果提出有效的防治措施。【结果】明确了猪结肠小袋纤毛虫的形态特征和生活习性,确定了其流行区域和传播途径。通过实施优化饲养环境、强化卫生管理和合理药物防治等措施后,猪结肠小袋纤毛虫病的发病率和危害程度得到有效控制。【结论】猪结肠小袋纤毛虫病对养猪业构成一定威胁,了解其病原特性和流行特点,掌握准确的诊断方法,并采取综合防治措施,能够有效降低该病的发生和传播风险,保障养猪业的健康发展。

猪结肠小袋纤毛虫的诊断及防治措施

生猪腹泻是生猪养殖环节中较为常见的一类疫病。引起生猪腹泻的病因较为复杂,其中结肠小袋纤毛虫感染是造成生猪严重腹泻的原因之一。小袋纤毛虫侵袭生猪的肠道黏膜,破坏肠黏膜的完整性,造成溃疡性肠炎。患病猪表现为腹泻、严重脱水、消瘦以及贫血等临床症状,严重时可引起死亡,对生猪养殖行业的发展造成一定的威胁。本文就猪结肠小袋纤毛虫的病原学、临床症状、诊断方法以及综合防治措施进行综述,以期为临床上预防、控制该病提供参考。

猪结肠小袋纤毛虫病的诊断方法与防治措施

猪结肠小袋纤毛虫病病原是结肠小袋纤毛虫,主要寄生在猪的肠道,引起猪出现腹泻以及肠道系统疾病,成年猪感染症状不明显,仔猪感染会出现明显的腹泻症状,若治疗不及时,很容易导致仔猪死亡。该文主要介绍了猪结肠小袋纤毛虫病的诊断方法与防治措施,为相关养殖管理人员提供参考。

猪源结肠小袋纤毛虫培养、分子鉴定和显微观察

小袋纤毛虫病是一种人畜共患寄生虫病。本研究从浙江地区病猪盲肠内分离到了一株结肠小袋纤毛虫,通过RPMI1640培养基对其进行了体外培养,结肠小袋纤毛虫在28℃和37℃均能良好生长,在培养后第5天和第4天分别达到高峰值,虫体密度分别为1.60×104和2.31×104个·m L-1。显微镜下滋养体胞口、胞肛和食物泡结构明显,DAPI染色后大核明显呈哑铃型,且滋养体有大小差别明显的2种类型。18S r RNA基因PCR扩增、测序和聚类分析结果显示,猪源结肠小袋纤毛虫分离株存在2条明显不同的18S r RNA基因序列,序列间趋异性为0.6%,且该分离株序列与国外分离株间存在显著差异,在进化树上形成一独立的亚枝。在高倍显微镜下,滋养体内常见有许多生物活动,种类不明,16S r RNA基因PCR扩增到3条未知细菌序列,未知细菌16S r RNA基因序列与结肠小袋纤毛虫内微生物间的确切关系有待研究。

洛阳地区规模化猪场结肠小袋纤毛虫感染情况调查及分析

结肠小袋纤毛虫病（Balantidiosis）是由结肠小袋纤毛虫（Balantidium coli）引起的人畜共患寄生虫病，呈世界性分布．主要流行于热带和亚热带地区。目前已知包括人在内的33种动物可以感染本病，人感染结肠小袋纤毛虫病后在临床上可表现为腹痛、腹泻、里急后重等症状，有些病例还可表现为尿生殖道感染．对人体健康危害较大。猪结肠小袋纤毛虫感染非常普遍．感染率可高达20％～100％。

RPMI 1640培养基体外培养结肠小袋纤毛虫的研究

试验旨在建立结肠小袋纤毛虫RPMI 1640培养方法,为进一步研究其生活史及致病机制奠定基础。研究不同淀粉含量、不同血清含量、不同初始pH及不同接种量下RPMI 1640培养结肠小袋纤毛虫的培养效果。结果发现,用RPMI 1640培养结肠小袋纤毛虫,最适宜的淀粉含量为30 mg/安瓿,血清含量为20%,pH为7.0;种群自然增长率和种群所达到的最高种群密度随接种量的不同而明显改变。RPMI 1640培养基可用于结肠小袋纤毛虫的体外培养。

广东集约化猪场结肠小袋纤毛虫感染情况调查

为了解广东省集约化猪场的结肠小袋纤毛虫的感染情况,我们于2001年7月至2003年12月,采用粪便检查法抽检了广东省20个代表性集约化猪场的种猪和肉猪共1906头的粪样。结果发现,场阳性率为100%,各场的感染率为14.2%～72.2%。其中种母猪的感染率为46.8%,种公猪的感染率为50.5%,育肥猪的感染率为49.8%,生长猪的感染率为34.8%,保育猪的感染率为20.1%。本文的调查结果表明,广东省集约化猪场不同生长阶段猪结肠小袋纤毛虫的感染情况均很严重,调查结果为猪场制定防制结肠小袋纤毛虫的措施提供了科学依据。

三种药物对结肠小袋纤毛虫的体外急性毒杀试验

通过结肠小袋纤毛虫对高锰酸钾、福尔马林和鲁哥氏液的急性毒性试验,以机率单位法获得半数致死浓度(LC50)。结果,高锰酸钾、福尔马林和鲁哥氏液对结肠小袋纤毛虫2h的半数致死浓度(LC50,2h)分别是27.92mg/L、43.51×10-6、50.14×10-5,12h的半数致死浓度(LC50,12h)分别是25.09mg/L、32.28×10-6和49.80×10-5。高锰酸钾是体外杀灭结肠小袋纤毛虫的理想药物。

结肠小袋纤毛虫体外培养观察

本文对猪结肠小袋纤毛虫 (Balantidiumcoli)在体外培养的条件进行了试验并观察其生长情况。试验结果表明 :小袋纤毛虫在外界环境中接触空气 1h左右由滋养体形成包囊 ,滋养体在相对厌氧环境下的深层粪便中 ,或RSS培养液(Ringer液—血清—淀粉 )中能存活并繁殖。在 2 8.0～ 32 .3℃的夏季室温下小袋纤毛虫滋养体在 4cm深层粪便中存活至10 8h ,在RSS培养液中滋养体存活时间最长达 192h ,比在 37℃培养时间延长 96～ 12 0h。培养基pH值 6 .2～ 6 .4与 pH7.0～7.2相比未见明显差异 ;米粉用量过多加速滋养体死亡。本试验尚为摸索阶段 。

一例食蟹猴结肠小袋纤毛虫感染情况调查

为了加强实验猴群寄生虫病控制、提高养殖场的经济效益,试验在广西食蟹猴饲养场无菌采集产生腹泻症状的食蟹猴粪便进行细菌分离培养,并采用饱和蔗糖漂浮离心法、水洗沉淀集卵法、卢氏碘液染色法、直接涂片法等方法检测寄生虫虫卵和卵囊。结果表明:粪便中发现结肠小袋纤毛虫滋养体和包囊,未见其他致病性细菌和寄生虫。判断为结肠小袋纤毛虫感染引起的慢性腹泻导致营养吸收不良。采用替硝唑、伊维菌素、甲硝唑治疗发现,甲硝唑的治疗效果较好。建议预防和治疗猴群发生结肠小袋纤毛虫时,做好饲养人员、兽医工作者以及相关工作人员的个人卫生清洁及环境消毒工作,定期对猴场工作人员进行体检、检查环境卫生,防止造成严重后果。

猪结肠小袋纤毛虫病的防控措施

结肠小袋纤毛虫(Balantidium coli)首先由Malmsten(1857)从瑞典两例急性痢疾病人的粪便中发现,定名为结肠草履虫(Paramecium coli)。之后,Leukart(1861)在猪的大肠中也有发现。Stein(1863)认为前两人所见为同一种,更名为Balantidium coli[1-2]。已知有30多种动物能感染结肠小袋纤毛虫,感染之后可引起宿主腹泻,其中猪的感染率可达60%耀70%,是最主要的传染源[3]。

结肠小袋纤毛虫动物感染的实验研究

实验Ⅰ，10头仔猪和4只猴分别灌服含1．2×104～4．8×104人源结肠小袋纤毛虫包囊的接种物，结果导致1～7号仔猪出现中度腹泻；8～10号仔猪和注射氯化可的松的3～4号猴呈严重腹泻）1～2号猴则呈亚临床感染。8～10号仔猪和3～4号猴从回肠末端至直肠呈高度感染，伴有严重的肠粘膜损伤；1～7号仔猪的大肠有严重的感染并伴有轻度的肠粘膜损伤。实验Ⅱ，6头仔猪和2只猴分别灌服含2．6×104～5．2×104猪源结肠小袋纤毛虫包囊的接种物，感染后引起1～6号仔猪的严重腹泻．从回肠末端至直肠是高度感染，伴有严重的肠粘膜损伤；2只猴出现轻度腹泻，大肠呈中度感染并伴有轻度的肠粘膜损伤。

金华地区奶牛结肠小袋纤毛虫感染情况调查

为了解金华地区奶牛结肠小袋纤毛虫的感染情况,采用廖党金的方法通过对不同规模奶牛养殖场(户)中随机选择的215头奶牛粪便进行检测。结果显示金华地区奶牛结肠小袋纤毛虫场感染率达100%,奶牛平均感染率为63.26%,平均EPG值在96～442之间。其中青年牛的感染率为最高,达78.13%,在被调查的寄生虫阳性的青年牛中小袋纤毛虫为100%感染。结肠小袋纤毛虫已成为金华地区奶牛感染的优势虫种,应引起重视并进行针对性的驱虫治疗。

结肠小袋纤毛虫体外药物急性毒杀试验

通过结肠小袋纤毛虫对甲硝唑、氟苯尼考和血虫净(三氮咪)的急性毒性试验,以机率单位法获得半数致死浓度(LC50),结果显示:甲硝唑、氟苯尼考对结肠小袋纤毛虫2 h的半数致死浓度(LC50,2 h)分别是457.8 mg/L,1705 mg/L,12 h的半数致死浓度(LC50,12 h)分别是25.64 mg/L、973.8 mg/L。血虫净(三氮咪)12h和24h半数致死浓度(LC50)分别是331.8 mg/L、295.4 mg/L。甲硝唑是杀灭结肠小袋纤毛虫的理想药物。

中国实验动物中结肠小袋纤毛虫快速鉴定及感染调查

目的建立结肠小袋纤毛虫快速鉴定方法,进行国内实验动物感染调查,为国家标准的修订提供参考依据。方法选择2012年12月～2017年12月期间全国60个不同厂家的14 964只实验动物(包括:猴382只,小型猪725只,犬806只,兔1 517只,地鼠422只,豚鼠1 545只,大鼠1 489只,小鼠8 053只,鸡25只)作为调查对象。应用实时动态显微技术识别结肠小袋纤毛虫病原体。利用PCR和测序技术鉴定结肠小袋纤毛虫ITS,18SrRNA和SSU RNA基因。结果通过实时动态显微技术,在这些样本中发现了少量的结肠小袋纤毛虫滋养体和包囊。通过PCR扩增和测序鉴定ITS,18S rRNA和SSU RNA基因的分子特性证明了样本中结肠小袋纤毛虫的存在。2012年12月～2017年12月期间,对14 964只实验动物调查结果显示,结肠小袋纤毛虫感染率为0.03%(4/14 964)。结论实时动态显微技术、PCR和测序技术相结合可完成实验动物的结肠小袋纤毛虫检验工作。国内实验动物中存在结肠小袋纤毛虫感染。因此,建议设计合理的筛查程序用于防止动物传播的结肠小袋纤毛虫病。有必要开发新的诊断工具,特别是快检技术用于这一重要人兽共患病的未来研究。

结肠小袋纤毛虫体外培养特性的初步观察

目的观察结肠小袋纤毛虫（Balantidium coli）在体外培养条件下的生长情况。方法取粪样分别置于4℃～8℃冰箱，28℃和37℃恒温培养箱中，观察记录虫体数量，统计不同温度条件下滋养体生存时间。28℃恒温条件下，将粪液加入不同稀释液（蒸馏水、生理盐水及洛克氏液）中，观察滋养体的活力及数量；采用同样的观察方法，统计滋养体在双相培养基以及免血水培养基内的生存时间。在28℃和37℃恒温条件下，分别观察滋乔体在RSS培养液（Ringer液＋血清＋米粉）及不加米粉的RSS培养液内的生存时间。结果结肠小袋纤毛虫滋养体在体外的最适生存温度为28℃，在洛克氏夜中生存时间明显长于生理盐水和蒸馏水，在RSS培养基及双相培养基中可在培养24h时达到高峰。在含有诺氟沙星的兔血水培养基中，滋养体的数量可在培养后96h达到高峰，生存时间可达到180h。结论结肠小袋纤毛虫体外培养受很多因素的影响，有待于进一步研究。

猪结肠小袋纤毛虫病的诊断与防制

猪结肠小袋纤毛虫病是由纤毛虫纲、小袋科、小袋属的结肠小袋纤毛虫(Balantidium coli)引起的一种人畜共患的原虫病。在一般情况下,虫体对肠黏膜无损害,故不显症状。但当猪发生应激或消化功能紊乱,特别是并发肠道感染时,虫体可乘机侵入肠黏膜,破坏组织,形成溃疡性肠炎。在我国南方,小猪常发生本病,但河南省以往很少有本病的发生。进行解剖病理学检查和实验室粪便检查,可迅速做出确切诊断,从而为有效防制本病提供科学依据。