针刺对大鼠“足三里”穴缝隙连接蛋白Cx43表达的影响

目的观察大鼠“足三里”穴与非经非穴处缝隙连接蛋白Cx43的表达及针刺对该表达的影响,探讨缝隙连接蛋白与穴位的可能关系。方法20只健康成年SD大鼠随机分为非针刺组、针刺组,每组10只;应用荧光双重标记免疫组织化学方法和激光扫描共聚焦显微镜技术对“足三里”穴、非经非穴处皮肤组织Cx43进行定位、定量分析。结果皮肤组织中Cx43主要在上皮细胞胞浆、胞膜上表达,包括皮肤表皮和部分毛囊等上皮角质形成细胞;非针刺组中穴位处Cx43的表达显著高于非经非穴处(P<0.01),针刺组中穴位针刺后Cx43表达显著增加,与非针刺组中穴位比较差异有非常显著性意义(P<0.01)。结论缝隙连接蛋白及缝隙连接可能是穴位的主要组成成分,且针刺能明显增加缝隙连接蛋白在穴位处的表达。

缝隙连接脱耦联剂庚醇对大鼠缺血-再灌注损伤心肌的保护作用

目的:在整体大鼠心脏缺血-再灌注损伤模型上研究庚醇的心肌保护作用,并在离体缺氧心脏模型上观察庚醇对电耦联参数的影响。方法:在体大鼠实验模型,结扎冠状动脉左前降支30min和复灌2h,观察不同剂量的庚醇(0.03、0.06、0.30和0.60mg/kg)的作用;离体大鼠实验模型,全心停灌70min,应用四电极法观察不同浓度的庚醇(0.05、0.10、0.50和1.00mmol/L)对缺氧期间心肌整体阻抗和电脱耦联参数的影响。结果:庚醇对在体大鼠缺血-再灌注损伤心肌具有减少心律失常发生和缩小心肌梗死面积的作用;各浓度庚醇(0.05-1.00mmol/L)均明显延迟心肌缺氧期间电脱耦联时间和平台时间,降低电脱耦联最大速率。结论:适度剂量的庚醇对在体缺血-再灌注损伤心肌有保护作用,其作用可能与其引起的电脱耦联延迟有关。

缝隙连接蛋白26在肝细胞癌组织的表达及意义

目的：研究缝隙连接蛋白26（Cx26）在人肝细胞癌（HCC）组织中的表达程度及定位，探讨该基因在HCC发生中的作用。方法：应用免疫组织化学染色法检测159份肝脏石蜡包埋组织中Cx26蛋白的表达和定位，其中正常肝组织20份、肝炎30份、肝硬化33份，HCC76份。另在体外使用人正常肝细胞株L02和肝癌细胞株SMMC-7721，采用蛋白质印迹法和免疫荧光法检测Cx26蛋白表达和定位，细胞接种荧光示踪法检测缝隙连接功能。结果：与正常肝组织比较，肝炎、肝硬化和HCC组织中Cx26蛋白阳性表达率显著下降（均P〈0．05）。Cx26蛋白表达强度在HCC中明显高于非癌肝组织（均P〈0．05）。非癌肝组织Cx26多呈轻中度表达，主要定位于相邻细胞间相互接触的细胞膜上，偶见于细胞质；而HCC组织中阳性表达的Cx26染色多较强，且多数定位于细胞质，偶见于细胞膜。Cx26蛋白与肿瘤大小呈正相关（P〈0．05），而与年龄、性别、肿瘤病理分级、TNM分期、伴肝炎肝硬化、淋巴结转移及脉管癌栓无明显相关（均P〉0．05）。体外实验进一步证实，与L02细胞比较，sMMC-7721肝癌细胞存在Cx26蛋白表达降低及分布异常，并且功能性缝隙连接明显下调。结论：Cx26蛋白的表达及定位异常可能与HCC的发生有关，HCC中残存的缝隙连接可能成为抗肝癌治疗新靶点。

缝隙连接蛋白Cx43在爆炸伤兔脑组织中的表达

目的研究缝隙连接蛋白Cx43在爆炸伤脑组织中的表达。方法新西兰大白兔80只,随机分为对照组(n=10)和颅脑损伤组(n=70)。颅脑损伤组采用纸雷管制作兔颅脑爆炸伤模型,对照组不行爆炸致伤。颅脑损伤组根据处死时间再分为伤后即刻、6h、12h、24h、3d、7d、14d等7组,每组10只。采用苏木精-伊红染色、免疫组化法及Western-blot法观察各组兔脑组织病理变化及Cx43在皮质的表达。结果颅脑损伤组内各时间点Cx43表达差异显著(P<0.01),随时间推移,Cx43表达逐渐增加,伤后6h即可见表达增强,3d达到高峰,14d基本正常。颅脑损伤组各时间点Cx43表达均高于对照组(P<0.01)。结论颅脑损伤后Cx43表达逐渐增加,其变化规律与颅脑损伤进展的时间框架相吻合,提示Cx43参与颅脑损伤的病理形成过程,在颅脑损伤早期发挥协同杀伤效应,加重继发性脑损害。

缝隙连接在局灶脑梗死脑缺血损伤中的作用

目的:探讨缝隙连接在急性局灶脑梗死的脑缺血损伤中的作用。方法:使用光化学局灶性脑梗死模型,采用免疫组织化学和尼氏染色技术,观察缝隙连接蛋白Cx43表达及甘珀酸预治疗对脑梗死灶体积的影响。结果:光化学局灶性脑梗死后Cx43-LI表达阳性的细胞呈纤维状、斑点状,分布于梗死灶的周边区。于脑缺血后1h出现,12h最显著,至24h开始减少;生理盐水对照组大鼠局灶性脑梗死体积为(182.54±6.24)μm3,甘珀酸预治疗组大鼠局灶性脑梗死体积为(128.53±3.39)μm3,两者相比差异有显著性意义(t=17,P<0.01)。结论:本研究提示局灶性脑梗死后缝隙连接活动加强并参与脑缺血损伤过程,缝隙连接阻断剂甘珀酸可减轻脑梗死后神经元的损害。

脑蛋白水解液对大鼠神经胶质细胞间缝隙连接通讯的研究

目的探讨脑蛋白水解液对大鼠神经胶质细胞间缝隙连接通讯功能的影响。方法由大鼠神经干细胞诱导培养神经胶质细胞至致密单层,分为脑蛋白水解液组、对照组及佛波酯阴性对照组继续培养,利用划痕标记染料示踪技术,以荧光黄染料在细胞间的扩散距离作为评价缝隙连接通讯的指标,测定脑蛋白水解液对大鼠胶质细胞间缝隙连接通讯的影响;采用逆转录-聚合酶链反应法检测脑蛋白水解液组和对照组细胞Cx43 mRNA表达的变化。结果脑蛋白水解液组荧光黄染料5 min扩散距离为(189．80±6．56)μm,对照组扩散距离为(154．70±6．02)μm,组间差异有统计学意义(P<0．01);逆转录-聚合酶链反应检测显示脑蛋白水解液组细胞中Cx43 mRNA相对表达量为0．89±0．13,高于对照组细胞的0．67±0．10,两组比较差异有统计学意义(P<0．01)。结论脑蛋白水解液可通过上调胶质细胞Cx43基因的表达水平,增强大鼠胶质细胞间缝隙连接通讯,这可能是其在机体损伤修复过程中对胶质细胞起保护作用的重要机制。

纳米二氧化钛颗粒对人肺成纤维细胞缝隙连接通讯的影响

目的:研究不同粒径纳米二氧化钛(TiO2)颗粒对人肺成纤维细胞间缝隙连接通讯功能的影响。方法:将25 nm和80 nm两种不同粒径的TiO2,以不同的质量浓度(0、10、20、40、80 mg/L)染毒人肺成纤维细胞24 h,采用激光漂白荧光恢复技术(FRAP)测定细胞间缝隙连接通讯水平。结果:荧光恢复结果显示,25 nm和80 nm的TiO2均可影响细胞的荧光恢复率,随着染毒浓度的增加,这种抑制作用逐渐增强,对照组的荧光恢复率为20.81%±1.93%,25 nm 80 mg/L组的荧光恢复率为7.26%±0.91%(P<0.05),80 nm 80 mg/L组的荧光恢复率为9.94%±2.08%(P<0.05)。染毒组的细胞荧光恢复率显著低于对照组,相同的质量浓度下,粒径25 nm的TiO2对细胞缝隙连接通讯的抑制作用略大于粒径80 nm的TiO2。结论:纳米TiO2可以抑制人肺成纤维细胞的缝隙连接通讯功能。

缺血预处理在心瓣膜置换术中对心电活动及细胞缝隙连接的保护作用

目的:从心肌细胞缝隙连接结构角度探讨缺血预处理(IP)在心脏瓣膜置换术中发挥保护作用的机制。方法:连续随机观察2004年4月-2004年12月接受心脏瓣膜置换手术治疗的患者54例,随机分成两组:IP组(n=22),主动脉阻断前实行单次缺血2min开放3min的IP方案,阻断主动脉后采用冷晶体心脏停搏液心肌保护进行手术;对照组(n=32),无缺血预处理,余步骤同IP组。观察两组术后心律失常发生、缝隙连接蛋白(Cx43)表达(免疫组化SABC法)以及电镜下心肌细胞结构及闰盘的变化。结果:IP组有1例(4.55%)发生室性心律失常(偶发室性早博);11例(50.00%)室上性心律失常(房颤、房扑、各种室上速、各种房室传导阻滞);有10例(45.50%)发生心肌缺血性ST-T段改变。对照组有14例(43.75%)发生室性心律失常(各种室性早博、心动过速);18例(56.25%)室上性心律失常;有28例(87.50%)发生心肌缺血性ST-T段改变,两组心律失常发生率有显著差异(P<0.05)。两组术前Cx43表达阳性单位无显著差异(P>0.05)。术后IP组为16.15±4.40,较术前无显著变化(P>0.05);对照组为11.92±1.26,较术前明显下降(P<0.05)。术后两组Cx43表达有显著差异(P<0.05)。电镜下观察:对照组闰盘不连接、紊乱、部分断裂,甚至完全断裂、崩解;心肌纤维也发生了大量坏死性结构改变:肌丝纤维肿胀,排列紊乱,肌丝Z线增宽,其它各带模糊,部分肌纤维溶解。IP组心肌细胞闰盘基本正常、连续,而心肌结构也基本正常。结论:IP维持了心肌缝隙连接蛋白Cx43的表达,具有保护细胞间缝隙连接结构和心肌电活动的正常传导作用。

反义miR-221/222上调Cx43恢复人胶质瘤细胞系U251细胞间缝隙连接通讯的体外研究

目的探讨反义miR-221/222上调缝隙连接蛋白43(Cx43)以恢复人胶质瘤细胞系U251细胞间缝隙连接通讯的作用机制。方法脂质体共转染反义寡核苷酸(AS-miR-221/222),下调U251细胞miR-221和miR-222表达水平,采用Northern blotting法检测U251细胞miR-221和miR-222表达水平;虫荧光素酶活性分析并获得靶基因;Western blotting法和免疫荧光法检测U251细胞Cx43表达水平;划痕标记染料示踪技术检测细胞间缝隙连接通讯。结果 AS-miR-221/222组U251细胞miR-221(t=1312.152,P=0.000)和miR-222(t=1226.031,P=0.000)表达水平明显降低;荧光活性明显高于其他各组(均P=0.000),证实Cx43基因为miR-221和miR-222靶基因;Cx43表达水平亦明显升高,且高于无义序列组(t=735.768,P=0.000)和对照组(t=686.252,P=0.000)。对照组和无义序列组U251细胞细胞间缝隙连接通讯缺失,罗氏黄仅传递划痕细胞边缘单列细胞;AS-miR-221/222组U251细胞细胞间缝隙连接通讯明显恢复,罗氏黄传递至划痕细胞邻近7～8列细胞。结论反义miR-221/222可通过上调Cx43表达水平恢复人胶质瘤细胞系U251细胞间缝隙连接通讯。

缝隙连接蛋白36表达变化对帕金森病模型大鼠基底节环路功能的影响

目的 观察缝隙连接蛋白36(Cx36)在帕金森病模型大鼠纹状体和运动皮质区的表达变化,并探讨缝隙连接功能异常与帕金森病基底节环路功能紊乱间的关系。方法 采用6羟多巴胺注射法建立帕金森病动物模型,免疫组织化学染色及Westernblotting法检测纹状体及运动皮质区Cx36表达变化,免疫荧光双标染色进一步分析纹状体脑啡肽阳性传出神经元及Parvalbumin阳性中间神经元Cx36表达变化。结果 (1)免疫组织化学染色显示,帕金森病组大鼠右侧纹状体及运动皮质区Cx36表达水平高于正常对照组(均P<0.05)。(2)免疫荧光双标染色显示,纹状体脑啡肽阳性神经元数目和Cx36表达水平高于正常对照组(均P<0.05),而Parvalbumin阳性神经元数目和Cx36表达水平低于正常对照组(均P<0.05)。(3)Westernblotting法检测显示,帕金森病组大鼠右侧纹状体[(119.31±8.92)%]及运动皮质区[(138.20±17.88)%]Cx36表达水平高于正常对照组[(104.05±3.82)和(105.27±2.82)%,均P<0.05]。结论 帕金森病大鼠右侧纹状体及运动皮质区Cx36表达水平升高,纹状体脑啡肽阳性传出神经元Cx36表达上调,Parvalbumin阳性中间神经元Cx36表达下调。提示缝隙连接异常可能参与帕金森病皮质基底节皮质环路功能紊乱的发生机制。

缝隙连接参与认知功能的机制研究

Gap junction is one kind of synapse coexisting with chemical synapse in the nervous system. Nowadays with the development of electrophysiological technique,more research began to focus on the role of gap junction in the neural network,especially in the cognitive function. Gap junction collaborates with chemical synapses to induce the neural network activities related to memory and perception,such as gamma and ripple oscillation,which is regarded as the mechanism of the role of gap junction in cognitive function. This review introduces the structure of gap junction,distribution and expression of different kinds of connexins in central nervous system,which are the basic element of gap junction. Furthermore,this review discusses the role of gap junction in cognition related network oscillations and activity-dependent plasticity of gap junction.

抑制细胞间缝隙连接通讯功能对星形胶质细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的：研究抑制细胞缝隙连接通讯功能对星形胶质细胞缺氧／复氧损伤的影响。方法：原代培养的新生SD大鼠大脑皮层星形胶质细胞分为正常对照组、空白对照组及细胞缝隙连接抑制剂18－α－甘草次酸和油酸酰胺组。荧光示踪法检测星形胶质细胞的缝隙连接通讯功能；MTT法检测抑制缝隙连接通讯功能对缺氧／复氧损伤星形胶质细胞存活率的影响；Annexin V／碘化丙啶双染流式细胞术及Hoechst 33258荧光染色法检测抑制缝隙连接通讯功能对缺氧／复氧损伤星形胶质细胞凋亡的影响。结果：与正常对照组相比，空白对照组星形胶质细胞缝隙连接通讯功能明显增强（P＜0．01），细胞存活率明显降低（P＜0．01），细胞凋亡明显增加（ P＜0．01）；与空白对照组相比，18－α－甘草次酸及油酸酰胺可显著降低星形胶质细胞缝隙连接通讯功能（均P＜0．01） ，减轻缺氧／复氧损伤引起的星形胶质细胞存活率的降低（均P＜0．01） ，且可减少缺氧／复氧损伤引起的星形胶质细胞凋亡（均P＜0．01）。结论：抑制细胞间缝隙连接通讯功能对星形胶质细胞缺氧／复氧损伤具有保护作用。

磁场对大鼠胚胎脊髓干细胞缝隙连接的影响

目的:中枢神经系统中神经干细胞间缝隙连接通讯在神经发生、细胞迁移等方面起着重要作用,而作为电突触的缝隙连接易受到电磁力学的影响。实验拟研究磁场对大鼠胚胎脊髓神经干细胞缝隙连接的作用。方法:实验于2004-01/10在第三军医大学野战外科研究所完成。应用13E大鼠脊髓神经干细胞离体培养,同时应用磁场方向与培养皿底面垂直的恒定磁场处理。在激光共聚焦显微镜下,观察缝隙连接蛋白32(Connexin32,Cx32)的变化。结果:显微镜下,没有磁场处理的脊髓神经干细胞Cx32表达非常明显,而在同样时期培养神经干细胞经过磁场处理后,Cx32的表达减少了,神经球和数量也有减少的趋势。结论:外加磁场影响缝隙连接的表达可能遵照霍尔效应原理。同样,中枢神经系统中,生物电磁场可能如同电磁泵样调节着缝隙连接通讯,以适应神经发育、细胞迁移、细胞的同步化等活动。这可能是早期神经干细胞以及成年时星形胶质等细胞缝隙连接工作的重要原理。

压力超负荷心力衰竭大鼠心室肌电生理失稳态及缝隙连接蛋白Cx43的变化

目的观察压力超负荷所致心力衰竭(HF)大鼠心室肌电生理失稳态和缝隙连接蛋白Cx43表达的变化。方法采用腹主动脉缩窄法建立压力超负荷大鼠HF模型,取左室舒张末压≥15mmHg的存活大鼠入HF组,另设假结扎对照组。术后32周两组大鼠以颈总动脉插管法和心脏B超测定心功能,并检测电生理指标,以免疫印迹方法检测心肌细胞Cx43蛋白表达的变化,通过透射电镜观察心室肌缝隙连接分布的变化。结果 HF大鼠出现明显电生理失稳态和心功能不全,左室舒张末压明显增高而心室有效不应期明显延长,左室射血分数明显下降,同时大鼠心室肌中缝隙连接蛋白Cx43表达明显下调(0.929±0.095 vs 1.250±0.083,P<0.05)并出现空间重构。结论压力超负荷所致HF大鼠心室肌存在明显缝隙连接重构,这可能是导致HF时心肌电生理重构的重要机制。

缝隙连接与运动障碍性疾病研究进展

缝隙连接是细胞间信号转导的重要方式。缝隙连接及其所组成的蛋白结构和(或)功能改变与多种疾病相关。运动障碍性疾病作为中枢神经系统的常见疾病,与缝隙连接有一定的关联性,其已成为国内外研究中枢神经系统疾病发病与治疗机制的关键因素。本文就缝隙连接及其与运动障碍性疾病的相关性进行概述。

心肌缝隙连接在缺血预适应中的作用

目的探讨心肌缝隙连接(GJ)在缺血预适应(IPC)心肌保护中的地位和作用。方法将72只大鼠分为缺血再灌注组(对照组)、IPC组、IPC+5-羟基奎酸(5-HD)组、二氮嗪(Dia)组、Dia+5-HD组、甘草次酸(GA)组、GA+5-HD组、GA+IPC组,测量各组的血流动力学指标、心肌梗死面积和心律失常发生情况。结果与对照组相比,IPC组、Dia组、GA组能降低心肌梗死面积,减少心律失常;5-HD能阻断IPC和Dia的心肌保护作用,对GA无影响。IPC加用GA不能抑制IPC的保护作用。结论在IPC信号传导通路中,GJ位于线粒体ATP敏感性钾通道的下游,可能是IPC的终末效应器,但在IPC触发阶段不起作用。

缝隙连接蛋白43在癫痫持续状态过程中的表达变化

[目的]观察缝隙连接蛋白43（Cx43）在大鼠癫痫持续状态过程中的表达变化及Cx43阻断剂对大鼠痫性发作的作用。[方法]健康雄性大鼠18只随机分为三组，每只6只，分别为Cx43组、Cx43阻断组（干预组）、空白对照组。观察各组大鼠行为学、脑电图（EEG）变化并应用免疫组化方法检测海马Cx43的表达。[结果]致痫后Cx43组大鼠出现典型癫痫持续状态，持续4～6h，EEG上记录到癫痫波，注药后4h注药侧海马Cx43表达显著增加（P〈0．05）；干预组EEG放电次数较Cx43组显著减少（P〈0．05）；注药后4h注药侧海马Cx43表达明显低于Cx43组（P〈0．05）。[结论]缝隙连接蛋白Cx43参与癫痫持续状态过程，Cx43阻断剂可能通过影响神经胶质细胞缝隙连接的形成进而影响癫痫的发生、发展过程。

胆红素和内毒素联合作用对NRK52E细胞缝隙连接功能的影响

目的:观察胆红素(BR)和内毒素(LPS)联合作用对肾小管上皮细胞(NRK52E)生长及细胞间缝隙连接(GJ)的影响。方法:体外培养NRK52E细胞,不同浓度的BR和LPS联合干预,用MTT测量细胞生长;观察它们对生长融合细胞(有GJ形成)和生长未融合细胞(无GJ形成)集落形成的影响;采用细胞荧光免疫示踪法分析细胞间GJ的功能。结果:BR从17.1μmol/L增加至513μmol/L,可浓度依赖性地增加细胞生长;当BR浓度继续增加时,细胞生长逐渐降低。LPS(10-1 000μg/L)能浓度依赖性地降低NRK52E细胞生长。BR和LPS联合作用下,513μmol/L BR增加100μg/L LPS作用下的细胞生长(P<0.05),而684μmol/L BR降低100μg/L LPS的细胞生长(P<0.05);513μmol/L BR能增加100μg/L LPS作用下GJ传递数目(P<0.05),684μmol/L BR降低100μg/L LPS作用下的GJ传递数目。结论:BR和LPS联合作用时,513μmol/L BR降低LPS的细胞毒性,684μmol/LBR增加LPS的细胞毒性,其改变可能是通过细胞间缝隙连接发挥作用的。

慢性神经痛大鼠脊髓运动神经元缝隙连接蛋白43对运动神经元凋亡及其运动功能恢复的影响

目的:研究慢性神经痛大鼠脊髓缝隙连接蛋白43(connexin43,Cx43)在运动功能调节中的作用。方法:实验于2003-01/2004-06在广州市临床医学研究中心完成。10只SD大鼠接受右坐骨神经结扎手术,模拟慢性神经痛模型。手术前以及手术后1,3,5,7,14d,观察大鼠疼痛行为学并测定右后肢热刺激回缩潜伏期(pawwithdrawthermallatency,PWTL)、电刺激回缩潜伏期(pawwithdrawelectricthreshold,PWET的变化,然后于第14天切取大鼠L4～5)脊髓采用免疫组化分析两侧脊髓运动神经元Cx43表达差异。结果:手术前,右后肢PWTL,PWET分别为(13.0±1.9)s和(12.5±0.3)mA,第14天右后肢PWTL,PWET比术前明显降低(t=9.17和27.41,P<0.01)。右侧脊髓大量运动神经元Cx43表达阳性,200倍单个视野内阳性数量为28.9±6.7)个,而左侧仅为((9.6±4.2)个,明显少于右侧(t=7.72,P<0.01)。结论:慢性神经痛大鼠脊髓运动神经元缝隙连接蛋白43表达增加,提示缝隙连接可能对慢性神经痛后运动协调和康复起着重要作用。

缝隙连接与糖尿病足

缝隙连接参与了细胞间电信号传递的电偶联和物质交换的代谢偶联，长期高血糖导致患者缝隙连接蛋白结构及表达发生改变，机体神经再生、血管生理功能及伤口愈合发生障碍，同时促进血管动脉粥样硬化形成。这些病变是糖尿病患者足部发生溃疡或坏疽的重要原因。本文就缝隙连接在糖尿病足发生发展中的研究进展进行文献综述。