八肽缩胆囊素调节脂多糖诱导ECV-304细胞核转录因子-κB表达的受体机制研究

目的探讨八肽缩胆囊素(CCK 8)调节脂多糖(LPS)诱导血管内皮细胞核转录因子κB(NFκB)表达的受体机制。方法培养人脐静脉内皮细胞株ECV 304;用溶剂(生理盐水)、LPS、CCK 8、CCK受体(CCK R)非特异性拮抗剂丙谷胺、CCK A受体(CCK AR)特异性拮抗剂CR 1409、CCK B受体(CCK BR)特异性拮抗剂CR 2945分别或联合刺激ECV 304细胞1 h。用蛋白质免疫印迹法(W esternb lot)检测NFκB p65蛋白表达;用免疫细胞化学技术检测NFκB p65蛋白核移位。结果与溶剂对照组比较,LPS可诱导ECV 304细胞NFκB p65蛋白核移位,且其表达明显上调;CCK 8可呈剂量依赖性地抑制LPS诱导的核移位及表达上调;CCK受体拮抗剂可翻转CCK 8的上述抑制效应,其中CR 1409、CR 2945、丙谷胺作用依次增强。结论CCK AR和CCK BR参与介导了CCK 8对LPS诱导ECV 304细胞NFκB表达的抑制作用,其中CCK BR的作用比CCK AR稍强。

缩胆囊素-A受体基因多态性与焦虑症的相关性

目的探讨焦虑症(AD)与缩胆囊素-A(CCKA)受体基因多态性的相关性。方法运用PCR技术检测88例AD患者和87例健康对照(NC)组缩胆囊素-A受体基因多态性,并加以对照分析。结果CCKA受体基因的3种基因型(A1/A1、A1/A2和A2/A2),在AD组的分布分别为5%、41%和54%,在NC组分别为1%、44%和55%,两组间无显著性差异(P>0.05);A1和A2等位基因频率,在广泛性焦虑(GAD)组分别为34%、66%,惊恐障碍(PD)组分别为18%和82%,两组间均有显著性差异(P<0.05);A1/A1、A1/A2、A2/A2基因型分布频率,GAD组分别为5%、59%、36%,PD组分别为6%、24%和70%,两组间均有显著性差异(P<0.05)。结论CCKA受体基因多态性与AD之间无显著关联;AD两种亚型间CCKA受体基因多态性有显著性差异。

缩胆囊素和促胰液素对豚鼠离体胃平滑肌运动的影响

用８个肌槽同时记录豚鼠胃不同部位肌条的收缩活动，以观察八肽缩胆囊素（ＣＣＫ－８）和促胰液素的影响。结果表明：ＣＣＫ－８能（１）增高各部位纵行肌和环行肌的张力；（２）加快胃体纵行肌，胃窦纵行肌、环行肌和幽门环行肌的收缩频率；（３）增大胃窦环行肌收缩波平均振幅和（４）增加幽门环行肌收缩波运动指数，但减少胃体和胃窦纵行肌收缩波平均振幅。上述作用均不能被阿托品和消炎病所阻断。而促胰液素对各部位肌条的收缩活动没有明显的影响。

脑内八肽缩胆囊素水平与提高针刺镇痛疗效的机制研究

目的:探讨八肽缩胆囊素(CCK-8)对抗电针对大鼠尾核中痛反应神经元放电和测量甩尾潜伏期(TFL)痛阈的同时影响。方法:本实验以大鼠尾核中痛兴奋神经元(PEN)和痛抑制神经元(PIN)电变化及辐射热照大鼠尾所引起TFL三者为指标,观察了电针、CCK-8对同时记录PEN或PIN电活动和TFL的影响。结果:①辐射热照大鼠尾可使63个PEN平均放电的净增值(NIV)增加了(285.89±11.58)%或42个PIN平均放电NIV下降了(81.60±8.14)%的同时发生甩尾反射,表现出辐射热致疼痛效应。②电针双侧“足三里”15min后,19个PEN平均放电的抑制率为66.30±10.82%,而平均TFL的延长率是(76.74±9.93)%或12个PIN的平均抑制时程(ID)缩短了(51.45±9.58)%,同时使TFL延长了(77.68±11.38)%,即呈现出电针的镇痛效应。③脑室注射CCK-8(10ng)能同时对抗电针所引起PEN放电的抑制或PIN的ID缩短和TFL的延长作用。结论:CCK-8的抗电针镇痛作用在中枢痛反应神经元电活动和整体行为反射水平上是协同一致的。提示PEN和PIN的电活动作为疼痛和镇痛指标是确实可行的。

早期中药配合肠内营养与单纯肠外营养对食管癌术后患者血缩胆囊素及T细胞亚群的影响

【目的】探讨中药配合肠内营养与单纯肠外营养支持对食管癌术后患者血缩胆囊素及T细胞亚群的影响。【方法】收集147例食管癌术后患者,按不同主诊治疗分为中药配合肠内营养组75例、肠外营养组72例。2组患者均于术后第1天开始进行营养支持,持续8 d,患者的营养需要量根据Harris-Benedict公式供给。在术前及术后第8天分别测定血缩胆囊素、T细胞亚群(CD4、CD8及CD56)水平。【结果】术后第8天,2组患者血缩胆囊素水平均较术前下降,中药配合肠内营养组显著高于肠外营养组(P<0.05);中药配合肠内营养组患者CD4/CD8比值较术前明显升高,且显著高于肠外营养组(P<0.05);2组患者CD4、CD56水平与术前比较均有下降,且中药配合肠内营养组显著高于肠外营养组(P<0.05)。【结论】早期中药配合肠内营养可有效维持食管癌术后患者血缩胆囊素和T细胞亚群的水平。

电针足阳明足少阳经对胃窦及奥狄氏括约肌缩胆囊素-A受体基因表达的影响

目的:为了比较针刺足阳明胃经、足少阳胆经穴对胃窦平滑肌及Oddi括约肌组织中缩胆囊素(cholecystokinin,CCK)受体基因表达的影响。方法:将60只家兔随机分为空白组、阿托品组、足三里(足阳明经)、阳陵泉(足少阳经)、四白组(足阳明经)、承筋组(足太阳经)组。除空白组外,各组均静滴阿托品造成平滑肌抑制状态,与此同时足三里、阳陵泉、四白、承筋组分别电针足三里、阳陵泉、四白及承筋穴20min。实验结束后取胃窦平滑肌及Oddi括约肌组织,采用RT-PCR方法测上述组织内缩胆囊素A受体基因(CCKA-R-mRNA)表达。结果:电针足阳明及足少阳经穴均能上调胃窦及Oddi括约肌组织中CCKA-R-mRNA的表达。对胃窦平滑肌组织CCKA-R-mRNA表达上调作用,针刺足三里(2.533±0.413)作用大于阳陵泉(1.453±0.508)及承筋组(1.098±0.230),差异有显著性意义(F=15.252,P<0.01);对奥狄氏括约肌组织CCKA-R-mRNA表达上调作用,阳陵泉组(1.921±0.655)大于承筋组(0.820±0.399),差异有显著性意义(F=6.628,P<0.01)及足三里组(1.359±0.105)。以上各组中以四白穴对上述两组织受体基因表达上调作用最强。结论:针刺足阳明、足少阳经对胃、胆运动的特异性调整作用,不仅与相关脑肠肽的释放有关,还与脑肠肽受体基因表达差异有关。

鸡缩胆囊素-33串联体的构建、原核表达及免疫原性研究

根据鸡缩胆囊素(choleystok in in,cck)-33基因的碱基序列及大肠杆菌高频密码子,设计了大肠杆菌表达系统偏爱的cck基因序列.将cck-33基因克隆至pRSET A质粒上,利用载体上的同尾酶构建cck基因四串联体并在大肠杆菌E.coliBL 21中成功表达.将所表达的融合蛋白进行纯化后,以纯化的蛋白为免疫原制备油佐剂疫苗主动免疫胡须肉鸡.结果表明,CCK蛋白主动免疫肉鸡后,抗血清水平显著升高,P/N值远远大于2.

鸡缩胆囊素(CCK)在T4噬菌体表面的展示及免疫原性研究

采用T4噬菌体表面展示系统,将CCK-33肽四多串联体及八多串联体展示在T4噬菌体表面,并研究其免疫原性。将CCK四串联体和八串联体与SOC基因缺失的、依赖溶菌酶的噬菌体ΦT4-Z1重组,获得重组噬菌体ΦT-4CCK和ΦT-8CCK。SDS-PAGE和Western Blot检测结果表明,CCK多串联体蛋白已经成功展示在T4噬菌体表面,其融合蛋白分子量约30 ku和41 ku,能够与CCK标准阳性血清发生特异性反应。以重组噬菌体为免疫原制备油佐剂疫苗主动免疫胡须肉鸡后,抗体浓度显著升高,肉鸡的体重、采食量都有所提高,而料肉比有所下降。结果说明,鸡CCK蛋白展示在T4噬菌体表面具有良好的免疫原性。

缩胆囊素分子印迹整体柱的制备及固相微萃取-高效液相色谱分析研究

采用抗原决定簇法,开展了对缩胆囊素(CCK)神经肽具有特异性识别和富集作用的新的分子印迹聚合物(MIP)整体柱合成与制备的研究。对MIP整体柱合成条件进行了系统的选择和优化,以缩胆囊素五肽(CCK5)为模板分子,在小移液器吸头中原位聚合制备了可以特异性识别和富集CCK神经肽的MIP整体柱。用扫描电镜和红外光谱对该分子印迹聚合物进行了表征。将此MIP整体柱作为固相微萃取小柱,研究并优化了固相微萃取条件,结合高效液相色谱-紫外检测法,建立了脑脊液中CCK5和CCK8的分析检测方法;本方法成功应用于加标脑脊液中CCK神经肽的分离富集,CCK5和CCK8的检测限分别为4.38和15.95 ng/m L,平均加标回收率分别为90.2%和87.6%,相对标准偏差分别为3.2%和3.9%。此CCK-MIP整体柱具有特异性强、经久耐用的特点。

重组缩胆囊素融合蛋白制备及其免疫原性研究

成功扩增了猪缩胆囊素(CCK)基因C末端片段,并在大肠杆菌中成功表达,SDS-PAGE检测到相对分子质量约为45 000的融合蛋白,最高表达量占菌体总蛋白的40.21%,蛋白可溶性分析表明,融合蛋白主要是以可溶性形式表达.Western-blotting证实,可溶表达的融合蛋白能与CCK-8阳性血清具有良好的免疫反应性.以纯化后的蛋白为免疫原制备油乳剂疫苗免疫蛋鸡,结果表明,CCK蛋白可在鸡体内引起免疫反应,加强免疫后蛋鸡血清和卵黄中CCK抗体可维持在较高水平.为了研究含有CCK抗体的蛋黄粉对鸡生长性能的影响,将其作为添加剂饲喂20日龄肉鸡,试验结果表明,饲喂添加100和300 g/t含CCK抗体蛋黄粉的肉鸡与阴性对照组相比,试验全期体增质量分别提高2.34%、3.80%,采食量分别提高0.91%、2.65%,且对饲料体增质量比无显著影响.

老年期抑郁症患者血浆缩胆囊素水平变化及其临床意义

缩胆囊素（cholecystokinin，CCK）既是胃肠道激素又是神经肽，广泛分布于胃肠道和中枢神经系统，具有广泛的生物学活性，可调节胃肠活动、胃泌素、胆汁、胰液分泌、摄食、行为、情绪、记忆等多种生物功能。有证据表明CCK及其受体在焦虑相关行为和抑郁症的病因中发挥着重要的作用。目前有关血浆中CCK水平的变化与抑郁症关系的研究较少，本研究对此进行了初步研究，现将结果报告如下。

高脂血症大鼠胰腺腺泡细胞缩胆囊素/三磷酸肌醇信号通路的变化及意义

目的探讨高脂血症对胰腺腺泡细胞三磷酸肌醇(IP3)介导的信号通路的影响。方法将24只大鼠随机分为两组各12只,观察组建立高脂血症模型,予高脂饲料饮食,对照组予普通饲料饮食,4周后检测两组胰腺腺泡细胞内IP3水平及缩胆囊素(CCK)刺激的腺泡细胞淀粉酶释放率。结果观察组胰腺腺泡细胞IP3水平、淀粉酶释放率均明显高于对照组,P均<0.01。结论高脂血症大鼠胰腺腺泡细胞CCK/IP3信号通路发生变化,其信号分子IP3表达增高,腺泡细胞对CCK刺激的外分泌敏感性增加。

缩胆囊素受体拮抗剂对血浆缩胆囊素生物测定的影响

利用生物法测定了102例正常人空腹及进食二个油煎鸡蛋30min后血浆CCK浓度,结果分别为1.4±0.1pmol/L和4.9±0.4pmol/L(X±SE)。血浆CCK浓度不随性别和年龄而变化。本文研究了三种不同类型的CCK受体拮抗剂对CCK生物测定的影响。一组将L364,718(5.0nmol/L),丙谷胺(1.0mmol/L)或Bt_2-cGMP(0.1mmol/L)分别加入含8pmol/LCCK-8的人血浆,用SEP-PAK提取,另一组先提取血浆,于测定前向血浆提取物内加入上述拮抗剂,两组同时测定。结果显示,在有L364,718存在时仍可利用生物法测定血浆CCK浓度,如血中含有丙谷胺或Bt_2-cGMP则无法准确测定。

胆囊结石中胆固醇含量与胆囊动力、缩胆囊素及其受体间关系的研究

目的分析胆囊结石中胆固醇的含量与胆囊动力、CCK及其受体间的关系。方法收集来我院进行治疗的93例胆囊结石患者分为三组(n=31):胆色素结石组(A组)、混合性结石组(B组)和胆固醇结石组(C组)。选取健康研究对象30例作为正常对照组(D组)。结果 A、B、C组间的胆固醇含量差异有统计学意义(P<0.05);C组、B组患者的FV、RVmin及EVmax与其他的组别间差异有统计学意义(P<0.05);脂餐后CCK的浓度、CCK-AR含量及活性在各组别中的差异有统计学意义(P<0.05);胆囊结石中胆固醇的含量明显正相关于脂餐后CCK浓度,负相关于EVmax%、胆囊壁中CCK-AR活性、含量(P<0.05);胆囊壁CCK-AR含量、活性明显负相关于脂餐后血浆CCK浓度、明显正相关于EVmax%(P<0.05)。结论胆固醇通过对CCK造成影响而使机体的胆囊动力减弱,从而对于形成胆固醇结石起到了促进作用。

缩胆囊素在神经系统中的作用

目的总结缩胆囊素(cholecystokinine,CCK)的生物学特性及其在中枢神经系统中的生物学作用。方法通过检索近年来相关文献,分析总结关于CCK作为神经肽/神经递质在信号传递、神经保护及镇痛等方面的研究进展。结果CCK作为神经递质能够拮抗致痫剂的致痫作用;CCK8还能够对抗神经元的手术和化学损伤以及延缓神经元老化;CCK在痛觉传导过程中起到了重要的整合作用。结论CCK是大脑中最丰富的神经递质/神经肽之一,同时也是中枢和外周神经系统中一重要的信号因子,在神经系统中有着非常重要的生物学作用。

缩胆囊素生物学作用的多样性

缩胆囊素（cholecystokinin,CCK）是一个具有广泛生物学活性的脑肠肽,它既是胃肠道主要调节激素之一,也作用于中枢神经系统,起着神经递质或调质的作用。研究表明,CCK参与摄食、胃肠运动、镇痛、情绪、记忆和睡眠等活动的调节及参与癫(?)、帕金森病等疾病的发生。本文综述近年来CCK在上述方面的研究进展。

脾阳虚大鼠下丘脑和小肠缩胆囊素信号转导途径的变化研究

目的：通过检测下丘脑和小肠组织缩胆囊素（Cholecystokinin,CCK）信号转导途径的变化,研究脾阳虚的发生机制。方法：16只SD大鼠随机分为对照组和脾阳虚组（模型组）,每组8只; ELISA法检测下丘脑和小肠组织CCK-8、环-磷酸腺苷（cycle monophosphate,c AMP）和蛋白激酶A（protein kinase A,PKA）含量;免疫组化法检测下丘脑CCK2受体（CCK 2 receptor,CCK2R）和小肠CCK1R表达。结果：与对照组相比,下丘脑和小肠CCK-8水平明显升高,而下丘脑的CCKR2表达、c AMP和PKA水平以及小肠CCKR1表达和c AMP水平均显著下降,但小肠PKA水平没有明显变化。结论：脾阳虚的发生与下丘脑和小肠组织中CCK过度释放有关。

CR1409拮抗缩胆囊素升高细胞内Ca^(2+)的作用

CR1409是一种新合成的缩胆囊素(CCK)受体拮抗剂。本文使用荧光指示剂Fura-2作为细胞内钙离子的探测物,在离体的大白鼠胰腺细胞研究OR1409对CCK引起细胞内钙离子浓度升高的拮抗作用。结果表明:10μmol/L CR1409完全抑制1nmol/L CCK的作用,半效抑制浓度为0.37μmol/L,比另一种拮抗剂双丁酰环鸟嘌呤核苷(db cGMP)强100倍。随着CR1409浓度的递增,使CCK升高细胞内钙离子浓度的量效曲线右移,根据Schild方法计算,pA_2值为6.93(r=0.992)。CR1409对氯氨甲酰胆碱和蛙皮素无拮抗作用。实验结果证明CR1409是一种效力较强的、特异性的和竞争性的CCK受体拮抗剂。