红景天苷对缺氧/缺糖损伤神经细胞的保护作用

目的 :以SH SY5Y细胞缺氧 /缺糖损伤为模型 ,观察红景天苷对神经细胞保护的作用。方法 :流式细胞术检测细胞凋亡百分率及细胞内 [Ca2 + ]i浓度 ,荧光显微镜观察细胞形态学变化和坏死百分率 ,用试剂盒显色法测定LDH的含量。结果 :缺氧 /缺糖损伤 2h可诱导神经细胞凋亡和坏死 ,分别为 18.5 9% (P <0 .0 1)和 4 .94 % (P <0 .0 1)。形态学观察也发现大量神经细胞染色质凝聚 ,核碎裂 ,凋亡小体产生 ,并显著增加细胞内 [Ca2 + ]i浓度和LDH的释放 ,分别为 8.4 6nmol·L-1(P <0 .0 1)和 16 .5 9% (P <0 .0 1) ,并随缺氧 /缺糖损伤时间的延长而明显增高 ;红景天苷 (1～ 3μmol·L-1)能显著降低神经细胞凋亡及坏死的百分率 ,降低细胞内 [Ca2 + ]i浓度 ,减少LDH的释放 ,其作用随剂量增加而作用增强。结论 :红景天苷具有抑制SH SY5Y细胞凋亡的作用 ,可对神经细胞起到保护作用 ,这种作用可能与其降低细胞内 [Ca2 + ]i浓度有关。

不同浓度芬太尼对大鼠脑片缺氧缺糖损伤的保护作用

目的探讨高浓度芬太尼对大鼠脑片缺氧缺糖损伤的保护作用及其机制。方法建立大鼠脑片缺氧缺糖损伤模型,设立对照组(Control)、缺氧缺糖损伤组(OGD)、芬太尼50μg.L-1组(F50)、芬太尼500μg.L-1组(F500)。利用2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色定量比色、乳酸脱氢酶(LDH)、免疫组化、电镜评价高浓度芬太尼对脑损伤的保护作用。同时激光共聚焦显微镜测定脑片胞内钙变化。结果不同浓度芬太尼(50、500μg.L-1)抑制脑片OGD损伤所致的TTC染色降低;减少LDH释放;减轻神经元凋亡,改善神经元超微结构的病理损伤。OGD损伤增加bax和bc l-2蛋白表达,增加胞内钙离子浓度。不同浓度芬太尼(50、500μg.L-1)进一步上调bc l-2蛋白表达,降低bax蛋白表达,同时抑制胞内钙离子浓度。与芬太尼500μg.L-1相比,芬太尼50μg.L-1作用较强。结论高浓度芬太尼具有脑保护作用,能够抑制缺氧缺糖损伤导致的大鼠脑片神经元损伤及其凋亡过程,且芬太尼对于胞内钙离子的调控可能是其发挥保护作用的重要机制之一。随着芬太尼的剂量增加,其保护作用减弱,但在临床应用的剂量范围内未见明显的毒性作用。

淫羊藿甙对原代培养神经元缺氧缺糖损伤的保护作用

目的 探讨淫羊藿甙对体外原代培养神经元缺氧缺糖损伤的作用。方法 原代培养大鼠乳鼠皮质神经元,在缺氧缺糖4、6、8 h时检测正常对照组、损伤模型组、淫羊藿甙处理组的神经元细胞噻唑蓝、乳酸脱氢酶(LDH)病理学指标变化。结果 模型组在缺氧缺糖4、6、8 h后噻唑蓝值明显低于相应对照组(P<0.01),LDH漏出率明显高于对照组(P<0.05或<0.01)。淫羊藿甙组与相应模型组比较,可提高缺氧缺糖的神经元生长能力,使噻唑蓝值有所上升;LDH漏出率有所下降;改善细胞形态。 结论 淫羊藿甙对体外原代培养神经元具有保护作用,可减轻神经元缺血性损伤。淫羊藿甙有利于缺血性脑血管疾病的治疗。

SYK调控缺氧/缺糖损伤诱导的大脑皮质神经元凋亡及其机制

目的探讨抑制脾酪氨酸激酶(spleen tyrosine kinase,SYK)对缺氧/缺糖损伤诱导的大脑皮质神经元的凋亡的影响及相关机制。方法分离培养10只SD怀孕大鼠(190~230 g,胎龄16 d)胎鼠的大脑皮质神经元细胞并用MAP2免疫荧光法进行鉴定。建立缺氧/缺糖损伤的体外模型,caspase-3荧光检测试剂盒检测caspase-3活性,Annexin-V FITC/PI法检测细胞凋亡,q RT-PCR检测SYK和凋亡相关的原癌基因Fra-1 m RNA的表达,Western Blot检测SYK、Bcl-2和Fra-1蛋白的表达。Control组:无转染处理的缺氧/缺糖损伤的神经元;SYK siRNA组:转染SYK siRNA的缺氧/缺糖损伤的神经元;SYK-Fra-1 siRNA组:同时转染SYK siRNA和Fra-1 siRNA的缺氧/缺糖损伤的神经元;non-specific siRNA组:转染non-specific siRNA的氧/缺糖损伤的神经元。结果 MAP2免疫荧光鉴定为神经元细胞。缺氧/缺糖损伤诱导神经元SYK表达(P<0.01),RNA干扰抑制SYK表达后caspase-3活性(P<0.05)和细胞凋亡(P<0.01)均显著降低,但是Fra-1 m RNA(P<0.01)和蛋白(P<0.05)表达量明显上升。用RNA干扰技术同时抑制SYK和Fra-1后,caspase-3活性(P<0.01)显著上升但Bcl-2蛋白表达(P<0.01)显著降低。结论 Fra-1介导了SYK对缺氧/缺糖损伤诱导的神经元凋亡的调节,为脑卒中所致的神经元缺血性损伤的治疗提供了新的靶点。

吡那地尔对体外培养大鼠大脑皮层神经细胞缺氧缺糖损伤的保护作用

目的 :探讨ATP敏感性K+ 通道 (KATP)开放剂吡那地尔 (pinacidil,Pin)对缺氧缺糖再复氧损伤大鼠大脑皮层神经细胞的保护作用。方法 :体外培养大鼠大脑皮层神经细胞 ,细胞培养至 10d ,建立神经细胞缺氧缺糖损伤模型 ,观察Pin及KATP阻断剂格列苯脲对缺氧缺糖不同时间 ,再复氧 2 4h后细胞死亡率、丙二醛 (MDA)含量、超氧化物歧化酶 (SOD)活力的影响。结果 :缺氧缺糖、再复氧后大鼠的神经细胞死亡率均显著升高、MDA生成增多、SOD的活力下降 ,Pin干预后 ,细胞死亡率下降、MDA生成减少、SOD的活力升高 ;格列苯脲能拮抗Pin这种保护作用。结论 :Pin对缺氧缺糖损伤神经细胞具有保护作用 。

不同产地丹参脂溶性成分对H9C2心肌细胞缺氧缺糖损伤保护作用的差异

通过HPLC谱图比较不同产地丹参脂溶性成分含量的差异,采用MTT染色法测定缺氧、缺糖1、2、3 h后H9C2心肌细胞的成活率以建立缺氧缺糖模型组,以低、中、高剂量的丹参脂溶性成分加入模型组细胞,观察细胞的状态确定加药浓度。检测各组的乳酸脱氢酶(LDH)含量、总抗氧化活力(T-AC)和细胞存活率(SR),以此作为考察丹参脂溶性成分保护作用差异的指标。结果表明,缺氧缺糖组以及不同产地丹参脂溶性成分治疗各组的SR与正常对照组相比有显著性差异(P<0.05),不同产地丹参脂溶性成分治疗各组的SR与缺氧缺糖组相比有显著性差异(P<0.05)。缺氧缺糖组以及不同产地丹参脂溶性成分治疗各组的LDH与正常对照组相比有显著性差异(P<0.05),不同产地丹参脂溶性成分各组的LDH含量与缺氧缺糖组相比有显著性差异(P<0.05)。缺氧缺糖组以及不同产地丹参脂溶性成分各组的T-AC与正常对照组相比有显著性差异(P<0.05),不同产地丹参脂溶性成分各组的T-AC与缺氧缺糖组相比有显著性差异(P<0.05)。丹参脂溶性成分明显减少心肌细胞缺氧缺糖损伤后LDH的溢出,提高了心肌细胞的T-AC和SR,其对缺氧缺糖损伤后心肌细胞确实有修复保护作用,不同产地丹参中脂溶性成分对心肌细胞缺氧缺糖保护作用确实存在药效差别。

葡萄糖调节蛋白75在缺糖损伤PC12细胞中的表达

目的观察葡萄糖调节蛋白75(GRP75)在缺糖条件下在PC12细胞中的表达。方法体外模拟能量代谢障碍建立细胞缺糖模型,MTT检测PC12细胞活率;LDH测定细胞膜损伤程度;流式细胞仪PI单染色法和An-nexinV/PI双染色法检测细胞的损伤形式;RT-PCR和W estern b lot分别检测GRP75基因在RNA和蛋白水平上的表达。结果随着缺糖时间的延长细胞活力逐渐降低,LDH释放率明显增加,缺糖死亡的细胞有部分凋亡细胞,并出现明显的凋亡峰,GRP75 mRNA在24 h内表达上调,同时蛋白表达上调。结论GRP75在缺糖损伤PC12细胞中有一定的保护作用。

安氟醚、异氟醚和七氟醚对大鼠脑缺氧缺糖损伤的保护作用

目的探讨安氟醚、异氟醚和七氟醚对大鼠皮层脑片缺氧缺糖损伤的保护作用及其机制。方法大鼠皮层脑片随机分为四组:对照组、损伤组(缺氧缺糖损伤10min)、吸入麻醉药+损伤组、印防己毒碱(GABAA受体拮抗剂)+吸入麻醉药+损伤组。通过脑片病理切片、HE染色和TTC染色、定量比色测定吸光度A值,观察脑片缺氧缺糖损伤程度。结果1.0MAC安氟醚、异氟醚和七氟醚处理30min后,皮层脑片神经细胞的病理损伤较损伤组明显减轻。1.0MAC和2.0MAC的安氟醚、异氟醚和七氟醚明显提高损伤所致脑片的低A值(P<0.01)。50μmol/L的印防己毒碱完全抑制了2.0MAC安氟醚的作用(P<0.01),部分抑制了2.0MAC异氟醚的作用(P<0.01),但不影响2.0MAC七氟醚的效果(P>0.05)。结论1.0MAC和2.0MAC的安氟醚、异氟醚和七氟醚对大鼠皮层脑片缺氧缺糖损伤均有一定的保护作用;GABAA受体参与了安氟醚和异氟醚的脑缺血保护作用.

丹酚酸B对PC12细胞缺糖损伤的保护作用及机制

目的观察丹酚酸B(SAB)对PC12细胞缺糖损伤的作用并探讨其作用的机制。方法以PC12细胞(大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞)的无糖培养建立细胞缺糖损伤模型,MTT法检测细胞的存活率;应用流式细胞仪检测亚二倍体细胞的比率及线粒体跨膜电位的改变;应用免疫细胞化学、RT-PCR法研究细胞内应激蛋白grp75的表达变化,激光共聚焦显微镜(Confocal)观察SAB作用下Ca2+的变化。结果无糖培养24h细胞存活率降低,凋亡率高达26.10%,大部分细胞线粒体跨膜电位去极化。在无糖培养液中加入丹酚酸B成分后,细胞无糖损伤有明显的改善,存活率上升,凋亡率显著下降,线粒体跨膜电位去极化状态明显改善。免疫细胞化学法和RT-PCR结果均显示丹酚酸对grp75表达没有影响;但经SAB作用后,细胞内Ca2+浓度明显降低。结论SAB对细胞缺糖损伤有明显的保护作用,其作用机制与抑制钙离子内流有关。

促红细胞生成素对新生大鼠皮质神经元体外缺氧缺糖损伤的保护作用研究

目的研究rhEPO对新生大鼠皮质神经元氧糖剥夺(OGD)损伤的保护作用及rhEPO的作用剂量及作用时间。方法新生Wistar大鼠皮质神经元原代培养7 d^11 d,随机分为正常对照组、OGD损伤组和rhEPO处理组。(1)建立皮质神经元的OGD模型,给予不同剂量的rhEPO(0.1、1、10、100 U/ml);(2)在不同时间(OGD损伤后0 h、24 h、48 h)给予10 U/ml rhEPO。观察各组细胞形态学改变,MTT法检测细胞存活率。结果与OGD损伤组比较,rh EPO(0.1、1、10 U/ml)处理可增加OGD损伤的皮质神经元的存活率(P<0.05),且浓度为10 U/ml时rhEPO保护作用最强(P<0.05)。皮质神经元OGD损伤后立即加入rhEPO(10 U/ml)保护作用最强(P<0.05),损伤后24 h及48 h给药没有增加皮质神经元存活率。结论 rhEPO对体外缺氧缺糖损伤的大鼠皮质神经元具有保护作用,rhEPO有效浓度为0.1~10 U/ml,且其浓度为10 U/ml时保护作用最强;rhEPO在神经元损伤后立即给药保护作用最强。

缺糖损伤对PC12细胞的效应及对葡萄糖调节蛋白75的表达影响

目的 :探讨缺糖损伤对PC12细胞的效应及对葡萄糖调节蛋白 75 ( grp75 )的表达影响。 方法 :通过形态学观察、MTT法及流式细胞术检测缺糖损伤对PC12细胞活力的影响 ,通过RT -PCR法检测缺糖损伤对 grp75在PC12细胞中表达的影响。结果 :PC12细胞在无糖培养条件下 ,细胞活力逐渐下降 ,48小时后 ,大部分细胞死亡 ,部分细胞为凋亡。而 grp75的表达随着无糖培养时间的增加而上调。 结论 :缺糖损伤导致PC12细胞活力下降 ,并引起

脑溢安颗粒剂对缺糖损伤后海马神经细胞凋亡的影响

根据sadrozaden报道的方法复制胎鼠海马神经细胞原代培养缺糖损伤模型 ,采用细胞形态学、DNA裂解率、流式细胞仪方法 ,观察缺糖损伤后 ,原代培养的胎鼠海马CA1神经细胞的形态结构 ,DNA完整性、神经细胞发生凋亡的数量 ;结果 ,缺糖损伤后 ,培养神经细胞DNA裂解率随时间延长而增加 ,12h达到 83 % ,脑溢安颗粒剂 (NYA)对缺糖损伤后神经细胞DNA裂解率的抑制作用大于模型组 ,差异具有统计学意义 (P <0 0 5 ) ;流式细胞仪器检测 ,在 12h时间点 ,NYA组神经细胞凋亡数量比模型组减少 37% ,差异具有统计学意义 (P <0 0 5 )。本研究提示 ,NYA具有抑制培养神经细胞DNA断裂 ,减少神经细胞凋亡的作用。

HAMI 3379抑制自噬减轻BV2细胞缺氧缺糖损伤的机制

目的探讨HAMI 3379抑制自噬减轻BV2细胞缺氧缺糖损伤的机制。方法随机将对数生长期BV2细胞分为正常对照组、氧糖剥夺(OGD)组和1、10、100 nM HAMI 3379组,然后采用OGD处理对细胞进行造模,培养48 h,采用MTT检测、LDH释放检测及蛋白印记检测观察HAMI 3379对OGD处理后BV2细胞活性及自噬的影响。结果与正常对照组比较,1、10、100 nMHAMI 3379组细胞均有明显损伤,且LDH释放增加(P<0.05);而与OGD组比较,给予1 nM HAMI 3379有改善细胞活性趋势,但差异无统计学意义(P>0.05);10、100 nM HAMI 3379可明显增加细胞存活率,减少LDH的释放(P<0.05)。与正常对照组比较,OGD组和10、100 n M HAMI 3379组Beclin-1表达量显著升高(P<0.05);而与OGD组比较,10、100 nM HAMI 3379组的BV2细胞Beclin-1表达量明显降低(P<0.05)。与正常对照组比较,OGD组和10、100 nM HAMI 3379组LC3Ⅱ/Ⅰ表达量显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05);与OGD组比较,10、100 nM HAMI 3379组BV2细胞LC3Ⅱ/Ⅰ表达量明显降低(P<0.05)。结论HAMI 3379可改善OGD处理后BV2细胞活性,减少LDH释放,也可降低OGD处理激活的自噬信号分子Beclin-1和LC3的表达,说明HAMI 3379可通过调节自噬信号通路分子部分逆转OGD处理后BV2细胞的损伤。

谷氨酰胺对细胞缺糖损伤的保护作用

目的观察谷氨酰胺(glutamine,Gln)对细胞缺糖(glucose desprivation,GD)损伤的保护作用,并探讨可能的作用机制。方法在以无糖培养大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞建立细胞缺糖损伤模型的基础上,首先以噻唑蓝比色(MTT)法、流式细胞法、细胞线粒体跨膜电位检测等方法观察Gln对缺糖损伤细胞模型的作用;再以大鼠大脑中动脉线栓法建立动物脑缺血模型,观察Gln对动物缺血性损伤的保护作用;同时用免疫细胞化学法、Western blot印迹法检测细胞中应激基因葡萄糖调节蛋白75(grp75)的表达变化。结果Gln能使离体细胞在缺糖应激下存活率增加、凋亡率降低,线粒体跨膜电位稳定;动物实验显示Gln能减轻动物因缺血造成的脑损伤;免疫细胞化学法、Western blot印迹法检测结果表明Gln可以上调细胞中grp75的表达。结论Gln对细胞缺糖损伤和动物缺血性脑损伤具有一定的保护作用,这种保护作用可能与上调细胞中的应激基因grp75的表达有关。

通塞脉微丸和丁基苯酞对PC12细胞缺氧缺糖损伤模型的保护作用

目的探讨通塞脉微丸和丁基苯酞对PC12细胞缺氧缺糖损伤模型的保护作用。方法以肾上腺嗜铬瘤克隆化细胞株PC12细胞为材料,制备缺氧、缺糖损伤模型;MTT法测定PCl2细胞存活数及乳酸脱清酶法测定细胞损伤程度。结果形态学检查发现,通塞脉微丸和丁基苯酞对两种损伤模型中的PC12细胞具有明显保护作用,MTT染色和乳酸脱氢酶活性测定显示,通塞脉微丸和丁基苯酞可显著提高损伤模型中PC12细胞的存活数,降低细胞损伤程度,其中以对缺氧损伤保护作用尤为显著。结论通塞脉微丸和丁基苯酞对PC12细胞缺氧和缺糖损伤模型均有显著保护作用。

MK-801对海马脑片培养缺氧缺糖损伤中bcl-2、bax蛋白质表达的影响

目的 :观察NMDA受体拮抗剂MK -80 1对缺氧缺糖海马脑片CA1区Bcl-2蛋白和Bax蛋白表达的影响。方法 :将体外培养 2周的海马脑片随机分为正常对照组 (HOTC)、单纯缺氧缺糖组 (OGD)和预加MK -80 1后再缺氧缺糖组 (MK -80 1+OGD) ,作HE染色 ,Bcl -2、Bax免疫组化反应染色。结果 :HOTC组、OGD组和MK -80 1+OGD海马脑片CA1区均有不同程度Bcl -2、Bax蛋白表达和细胞缺失形成的空洞。HOTC组MK -80 1+OGD组Bcl-2蛋白的表达均强于OGD组 (2组均P <0 .0 5 ) ;Bax蛋白的表达均弱于OGD组 (2组均P <0 .0 5 ) ,同时细胞缺失形成的空洞有所减少。结论 :MK -80

PC12细胞缺糖损伤的分子生物学特征

目的 在体外模拟能量代谢障碍研究PC12细胞缺糖损伤的分子生物学特征。方法 电镜观测形态改变。MTT检测功能异常，RT-PCR测定Bcl-2在RNA水平上的表达。结果 电镜观察到细胞有凋亡现象；MTT显示细胞活力降低；RT-PCR结果表明Bcl-2在6-16h表达上调。结论 缺糖损伤的PC12细胞既有形态的变化也有功能上的变化。并同时伴随着凋亡和坏死两种死亡现象。

黄芪与川芎有效成分配伍对乳鼠海马神经元细胞缺氧缺糖损伤的保护作用

目的 研究黄芪与川芎有效成分(黄芪甲苷、藁本内酯、川芎嗪、阿魏酸)配伍对乳鼠海马神经元细胞缺氧缺糖损伤的保护作用。方法 原代培养海马神经元细胞,以免疫组化染色法鉴定神经元特异性烯醇化酶(NSE),建立缺氧缺糖损伤模型,MTT法确定药物安全浓度。细胞随机分为正常组、模型组、阳性对照组、配伍组,比色法检测细胞中半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及一氧化氮(NO)水平,检测细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性,Hoechst 33342染色观察海马神经元凋亡,流式细胞术检测各组早期凋亡率。结果 不同剂量黄芪与川芎配伍能有效减轻乳鼠海马神经元缺氧缺糖损伤,增强SOD、GSH-Px活性,降低NO水平、LDH活性、caspase-3活性、早期凋亡率。最优组合为川芎嗪200μg/mL,黄芪甲苷5μg/mL,阿魏酸20μg/mL,藁本内酯5μg/mL。结论 黄芪与川芎有效成分配伍能有效保护缺氧缺糖所致的海马神经元损伤,为相关临床应用提供依据。

甲磺酸法舒地尔对大鼠脑片缺氧缺糖损伤的保护作用

目的：探讨甲磺酸法舒地尔（ethanesulfonic fasudil）对大鼠脑片缺氧缺糖损伤的保护作用。方法：建立大鼠脑片缺氧缺糖损伤模型，设立正常对照组、缺氧缺糖损伤组、损伤给药组（甲磺酸法舒地尔三个剂量：10^-7、10^-6、10^-5mol·L^-1）。利用2，3，5-三苯基氯化四氮唑（TTC）染色定量比色、乳酸脱氢酶（LDH）活力测定、激光共聚焦显微镜图像扫描评价不同浓度甲磺酸法舒地尔对大鼠脑片缺氧缺糖损伤的保护作用；同时测定各组脑片SOD活力。结果：与对照组比较，损伤组脑片TTC染色后OD值明显降低，LDH释放明显增加（P〈0．05）。与损伤组比较，给药组脑片TTC染色后OD值明显升高（P〈0．05）；LDH释放明显降低（P〈0．05）；SOD活力明显升高（P〈0．05）；激光共聚焦显微镜图像扫描显示损伤给药组脑片神经细胞凋亡数明显低于损伤组。结论：甲磺酸法舒地尔具有神经保护作用，能够减轻缺氧缺糖损伤所致大鼠脑片神经元损伤及其凋亡，甲磺酸法舒地尔的神经保护作用可能与其抗氧化作用有关。