罗汉果苷V提取条件优化研究

建立罗汉果苷V的最佳提取工艺。采用单因素试验和正交试验考察提取溶剂浓度、提取时间、提取温度、料液比对罗汉苷V的影响。结果表明,罗汉果苷V的最佳提取工艺条件:以浓度为50%的乙醇溶液作为提取剂,回流时间为120min,物料比为1∶15(m∶V),回流温度为60℃。该条件下罗汉果苷V的提取率可达到72%。

罗汉果苷V促进LncRNA TUG1表达刺激成骨细胞的增殖与分化

背景:骨质疏松是骨在进行重塑的过程中,成骨细胞的骨形成和破骨细胞的骨吸收之间的动态平衡紊乱所致。在细胞水平严格控制骨重建,对于维持骨稳态和避免发生骨质疏松有重要意义。前期研究表明1.25×10^(-2)g/L的罗汉果苷V可促进成骨细胞增殖、分化,其机制可能涉及Lnc RNA TUG1。目的:探讨Lnc RNA TUG1在罗汉果苷V促进成骨细胞增殖与分化中的作用。方法:采用两步酶消化法提取SD乳鼠成骨细胞,随后将细胞分为2组,分别给予0,1.25×10^(-2)g/L的罗汉果苷V干预,干预培养2 d后进行Lnc RNA基因检测;设计并合成Lnc RNA TUG1沉默病毒,将新提取的成骨细胞分为正常细胞对照组、罗汉果苷V干预组、罗汉果苷V+阴性病毒组、TUG1沉默组、罗汉果苷V+TUG1沉默组。按实验分组对成骨细胞进行干预处理,随后分别在2,4,6 d后通过FDA荧光染色观察成骨细胞增殖活性,干预6d后通过碱性磷酸酶染色、茜素红染色及q RT-PCR检测TUG1在罗汉果苷V促进成骨细胞增殖与分化中的作用。结果与结论:(1)Lnc RNA基因检测表明1.25×10^(-2)g/L的罗汉果皂苷显著促进成骨细胞内Lnc RNA TUG1表达;(2)FDA荧光染色显示TUG1沉默可抑制罗汉果苷V促进成骨细胞增殖;(2)干预6 d后,碱性磷酸酶染色及茜素红染色实验均显示TUG1沉默可抑制罗汉果苷V促进成骨细胞成骨矿化;(3)q RT-PCR结果显示成骨分化相关基因RUNX2、BSP、OCN和COL1A1在罗汉果苷V干预组显著高表达,而在罗汉果苷V干预+TUG1沉默组则表达受抑制;(4)以上结果表明,罗汉果苷V通过促进Lnc RNATUG1表达刺激成骨细胞的增殖与分化。

罗汉果皂苷V对RSL3诱导的SH-SY5Y细胞铁死亡的抑制作用及其机制

目的:探讨罗汉果皂苷V(MV)对铁死亡诱导剂RAS选择性致死分子3(RSL3)诱导的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞铁死亡的抑制作用及可能机制。方法:用RSL3诱导SH-SY5Y细胞建立铁死亡模型。MTT法检测细胞活力;倒置显微镜观察细胞形态;亚铁离子荧光探针FerroFarRed检测细胞内亚铁离子含量;线粒体红色荧光探针MitoTracker Red CMXRos检测线粒体膜电位(MMP);超氧化物阴离子荧光探针二氢乙啶和线粒体超氧化物红色荧光探针MitoSoX Red分别检测细胞内和线粒体内活性氧(ROS)。微板法检测细胞谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)水平。Western blot检测脂酰辅酶A合成酶长链家族成员4(ACSL4)、环加氧酶2(COX-2、)谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)和溶质载体家族7成员11(SLC7A11)蛋白表达水平。分子对接技术预测MV与ACSL4、COX-2、GPX4和SLC7A11的靶向关系。结果:与control组相比,RSL3组SH-SY5Y细胞活力显著降低(P<0.01),细胞内亚铁离子含量、细胞内和线粒体内ROS水平及MDA水平显著升高(P<0.05或P<0.01),MMP和GSH水平显著降低(P<0.01),ACSL4和COX-2蛋白表达水平显著升高,而GPX4和SLC7A11蛋白表达水平显著降低(P<0.01),提示成功建立了细胞铁死亡模型。MV处理使细胞活力显著升高(P<0.05),细胞内亚铁离子含量、细胞内和线粒体内ROS水平及MDA水平显著降低(P<0.01),MMP和GSH水平显著升高(P<0.05或P<0.01);ACSL4和COX-2蛋白水平显著降低,而GPX4和SLC7A11蛋白水平显著升高(P<0.05或P<0.01)。分子对接结果显示,MV与铁死亡核心蛋白ACSL4、COX-2、GPX4和SLC7A11存在结合位点。结论:MV可抑制RSL3诱导的SH-SY5Y细胞铁死亡的发生,其机制可能与激活SLC7A11/GPX4和抑制ACSL4/COX-2有关。

罗汉果提取物和罗汉果苷V对胰岛素分泌的调节作用(英文)

罗汉果作为一种保健食品和甜味剂已有长期的应用,有报道认为罗汉果及其提取物对糖尿病有一定的防治作用,然而目前还未见对其相关活性成分以及活性的报道。本研究运用鼠β细胞系细胞RIN-5F研究了罗汉果提取物以及罗汉果苷V对于胰岛素分泌的影响。本研究结果显示,罗汉果提取物和罗汉果苷V对胰岛素分泌有显著的促进作用。本研究从细胞水平揭示了罗汉果和罗汉果苷V对于糖尿病人具有血糖调节作用,提示罗汉果提取物以及罗汉果苷对于Ⅱ型糖尿病的防治作用。

罗汉果苷V通过Wnt/β-catenin信号通路对糖尿病状态成骨细胞增殖与分化的影响

目的:探索罗汉果苷V(mogroside V,MV)对糖尿病状态下成骨细胞增殖分化的影响及其可能的作用机制。方法:构建糖尿病大鼠模型,分离培养正常大鼠和糖尿病大鼠下颌骨成骨细胞。CCK8法检测不同质量浓度MV对糖尿病大鼠成骨细胞的毒性和增殖活性,并筛选出适宜的MV浓度用于后续实验;取正常大鼠和糖尿病大鼠下颌骨成骨细胞,分别设立正常对照组、高糖组及MV+高糖组,茜素红染色及定量分析检测成骨分化情况,实时荧光定量PCR检测成骨相关因子ALP、OCN及Wnt/β-catenin信号通路相关因子Runx2,β-catenin,Axin2,Lef1及Osterix的mRNA表达。结果:0~0.4 g·L^(-1)质量浓度范围内MV对糖尿病状态成骨细胞均未表现出毒性,且浓度为6.25×10^(-3)g·L^(-1)时促进细胞增殖活性最强;与高糖组相比,MV+高糖组(含质量浓度为6.25×10^(-3)g·L^(-1)MV)成骨分化能力增强,ALP、OCN、Runx2、β-catenin、Lef1、Osterix的表达显著升高,Axin2的表达显著降低。结论:罗汉果苷V可促进糖尿病状态成骨细胞增殖与分化,其机制可能与调控Wnt/β-catenin信号通路有关。

RP-HPLC法测定罗汉果中罗汉果皂苷V的含量

目的:建立 RP—HPLC 测定罗汉果药材中罗汉果皂苷 V 含量的方法。方法:采用 Alltima—C_(18)(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,乙腈-水(23:77)为流动相,流速1.0 mL·min^(-1),检测波长203 nm,柱温32℃。结果:罗汉果皂苷 V 线性范围为0.17～4.2μg,平均回收率为99.05%(RSD=0.78%,n=9)。结论:所建立的方法结果稳定,回收率良好,可用于测定罗汉果药材中罗汉果皂苷 V 的含量。

采后处理方式对罗汉果鲜果中皂苷V含量的影响及其稳定性研究

研究采后处理方式对不同品种鲜果中罗汉果皂苷V含量的影响及其稳定性。结果表明:鲜果中罗汉果总皂苷及皂苷V的含量与品种和部位有关,青皮果中罗汉果皂苷的含量高于白毛果,果皮中罗汉果皂苷含量低于果肉。后熟方式和干燥处理对不同品种罗汉果皂苷V含量的影响较大。白毛果和青皮果的最佳后熟方式为冷藏保存40d及室内后熟2周;其最佳干燥处理方法为中火微波干燥及直接烘干。此外,罗汉果皂苷提取物中皂苷V稳定性较好,受加热温度、加热时间、pH及放置时间等因素的影响较小。

利用RP-HPLC法研究罗汉果采后贮藏期甜苷V的含量变化趋势

以RP-HPLC法检测罗汉果中甜苷V的含量,研究罗汉果采后不同贮藏期内甜苷V的含量变化趋势。结果表明：所检测的罗汉果在采后第1天甜苷V含量为0.3232%,第7天为0.3643%,第14天为0.3818%。由此可见,罗汉果在采后1-14 d的贮藏期间甜苷V含量依然会逐步增加,但前7 d增加较快,后7 d增加较慢。

罗汉果甜苷V人工抗原免疫原性检测法的建立与评价

目的制备罗汉果甜苷V(mogroside V,MogV)-载体蛋白复合物人工抗原及抗血清,建立抗血清与MogV特异性反应的检测方法,为进一步制备MogV的单克隆抗体、建立快速检测MogV的ELISA法提供技术基础。方法将MogV与丁二酸酐、载体蛋白牛血清蛋白(BSA)和人血清蛋白(HSA)反应偶联,制得半抗原-载体蛋白复合物后,通过紫外扫描光谱计算出结合的半抗原数目;以此抗原免疫Balb/c小鼠,制备抗血清,并通过ELISA法检测效价和特异性。结果合成的人工抗原MogV-HS-BSA结合比约为44∶1,MogV-HS-HSA结合比约为64∶1;通过免疫小鼠得到特异性针对MogV的抗血清,血清效价较高。结论 MogV人工抗原有较好的免疫原性,建立的免疫原性检测方法简便可行。

富硒罗汉果中罗汉果皂苷V的HPLC测定

建立富硒罗汉果（Siraitia grosvenorii）果实中罗汉果皂苷V的HPLC测定方法,以Diamonsil C18（250 mm×4.6 mm,5μm）为固定相,乙腈-水（24∶76,V/V）为流动相,检测波长203 nm,流速1.0 m L/min,柱温30℃。结果表明,罗汉果皂苷V在0.21-2.10μg范围内线性关系良好（r=0.999 3）,平均回收率为97.64%,RSD为1.66%。该方法可用于富硒罗汉果果实中罗汉果皂苷V含量的测定。

HPLC测定罗汉果中罗汉果甜苷V的含量

[目的]建立HPLC法测定罗汉果药材中罗汉果甜苷V的含量。[方法]用Nucleosil 100-5 NH2（5μm，4．6mm×250mm）色谱柱，以乙腈-水-2．5％四氢呋喃（77：22：1）为流动相，流速为1ml／mln，检测波长为203nm，柱温30℃。[结果]罗汉果甜苷V进样量在0．2136～21．3600μg线性关系良好（r=0．99993），平均回收率为96．96％，RSD为0．72％（n=5）。[结论]本方法简便、快速、准确，可作为罗汉果药材的质量控制方法。

罗汉果皂苷V对胎粪吸入综合征大鼠的保护作用及其初步机制研究

目的 观察罗汉果皂苷V对胎粪吸入综合征(MAS)大鼠急性肺损伤的保护作用,并初步探讨其作用机制。方法 将48只健康Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、罗汉果皂苷V低、中、高剂量组(2.5、5、10 mg/kg)和地塞米松组(0.5 mg/kg),8只/组;采用经口直视气管插管法构建MAS模型;罗汉果皂苷V低、中、高剂量组及地塞米松组于造模后灌胃给药,模型组和假手术组给予等量生理盐水灌胃。采用HE染色观察肺组织病理变化;测量肺组织湿干质量比(W/D);ELISA法检测血清和肺泡灌洗液肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素6(IL-10)、白介素1β(IL-1β)水平;比色法检测肺组织中丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性;Western blot检测肺组织c-Jun氨基末端激酶(JNK)、磷酸化JNK(p-JNK)蛋白表达。结果 与假手术组比较,模型组肺组织病理评分、W/D升高(P<0.05),肺泡灌洗液及血清TNF-α、IL-6、IL-1β水平升高(P<0.05),肺组织MDA与MPO水平升高、SOD水平降低(P<0.05),肺组织p-JNK蛋白表达水平上调(P<0.05)。与模型组比较,罗汉果皂苷V中、高剂量组及地塞米松组肺组织病理评分、W/D降低(P<0.05),肺泡灌洗液及血清TNF-α、IL-6、IL-1β水平降低(P<0.05),肺组织MDA与MPO水平降低、SOD水平升高(P<0.05);罗汉果皂苷V中、高剂量组肺组织p-JNK蛋白表达水平下调(P<0.05)。结论 罗汉果皂苷V可能通过抑制JNK磷酸化,减轻MAS病程中炎性和氧化应激损伤而发挥急性肺损伤保护作用。

罗汉果甜苷V对持续光照小鼠脂肪积累的缓解作用

【目的】探究罗汉果甜苷V(MV)缓解持续光照导致小鼠脂肪积累的作用,为罗汉果在畜禽健康养殖中的应用提供参考依据。【方法】以15周龄雄性C57BL/6小鼠为研究对象,随机分为对照组(12 h光照∶12 h黑暗)、持续光照组(24 h光照)及持续光照添加MV处理组(每日灌胃100 mg/kg的MV),试验周期为5周。试验期间监测小鼠体质量和采食量,并检测其体脂率和能量代谢水平;试验结束后处死小鼠,采集腹股沟白色脂肪(iWAT)和附睾白色脂肪(e WAT)进行称重,通过苏木精—伊红(H-E)染色观察脂肪细胞形态学特征,并以实时荧光定量PCR检测脂肪组织中脂肪代谢及能量代谢相关基因的表达情况。【结果】在整个试验过程中,各处理组小鼠的体质量与采食量均无显著差异(P>0.05),但持续光照能导致小鼠体脂率极显著升高(P<0.01,下同),而氧气消耗量、二氧化碳排出量及产热量等基础代谢参数均极显著降低,iWAT和eWAT的百分比及细胞直径均极显著增大;iWAT和eWAT中的脂肪合成相关基因(Fabp4、Pparg2和Zfp423)相对表达量极显著上调,脂肪分解相关基因Lpl相对表达量极显著下调,能量代谢基因(Sirt1和Ppargc1a)相对表达量显著(P<0.05)或极显著下调,炎症反应相关基因Nfkb1相对表达量极显著上调。经MV处理后能使持续光照小鼠上述变化指标均恢复至正常水平,即MV能有效改善持续光照导致的小鼠能量代谢紊乱、缓解脂肪累积,以及缓解脂肪代谢、能量代谢及炎症反应相关基因的异常表达。【结论】持续光照会在不改变能量摄入的情况下导致机体脂肪积累,影响机体的正常代谢和健康。MV通过调控Sirt1、Ppargc1a等重要代谢相关基因表达,改善机体代谢紊乱,并通过促进脂肪分解和抑制脂肪合成相关基因表达,有效缓解持续光照导致的小鼠脂肪积累。

HPLC-MS法同时测定罗汉果不同部位中4种皂苷

目的建立HPLC-MS法同时测定罗汉果Siraitia grosvenorii不同部位中11-O-罗汉果苷V、罗汉果苷V、赛门苷I、罗汉果苷IV的含有量。方法罗汉果甲醇提取物的分析采用Agilent Eclipse Plus C18色谱柱(150 mm×2. 1 mm,3. 5μm);流动相0. 1%甲酸水溶液-乙腈,梯度洗脱;体积流量0. 5 m L/min;柱温30℃。结果 11-O-罗汉果苷V在3. 5~24. 4μg/m L (r=0. 995 5)、罗汉果苷V在4. 0~193. 2μg/m L (r=0. 996 7)、赛门苷I在0. 1~4. 9μg/m L (r=0. 995 9)、罗汉果苷IV在0. 4~11. 5μg/m L (r=0. 995 5)范围内线性关系良好,平均加样回收率96. 9~108. 7%,RSD 3. 2~7. 5%。结论该方法准确稳定,重复性好,可用于罗汉果的质量控制。

转录组学结合蛋白质组学筛选罗汉果皂苷V缓解OVA诱导哮喘小鼠的关键通路

目的基于转录组学和蛋白质组学,探讨罗汉果皂苷V缓解哮喘小鼠肺部炎症的潜在关键机制。方法采用卵清蛋白(ovalbumin,OVA)诱导雌性BALB/C小鼠哮喘,给予罗汉果皂苷V,观察肺部组织及其病理变化。选择空白组、模型组和罗汉果皂苷V给药组,分别每组3个样本进行转录组学和蛋白质组学分析,筛选出差异基因和差异蛋白,对其进行趋势分析,再对所有趋势基因和趋势蛋白进行KEGG富集分析。结果肺组织形态学和HE染色结果显示,罗汉果皂苷V缓解OVA诱导的肺部炎症。基于组学分析发现,在1122个趋势基因中,空白与模型组比较上调且模型与给药组比较下调的基因有454个,反之,有111个;在497个趋势蛋白中,空白与模型组比较上调且模型与给药组比较下调的差异表达基因有238个,反之,有91个。基于转录组和蛋白质组趋势分析其KEGG富集到PI3K/Akt信号通路,经分子生物学方法验证其关键因子Igha、Ighg1、PI3K及Akt在模型组升高且在给药组降低。结论基于转录组学和蛋白质组学的方法揭示罗汉果皂苷V可能通过抑制PI3K/Akt信号通路的激活,改善哮喘小鼠肺部炎症,发挥润肺止咳的作用,本研究为治疗哮喘的药物开发提供实验参考。

HPLC法测定罗麦颗粒中罗汉果皂苷V、甘草苷和甘草酸的含量

目的:建立高效液相色谱法(HPLC)测定罗麦颗粒中罗汉果皂苷V、甘草苷和甘草酸含量的方法。方法:采用ZORBAX SB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),罗汉果皂苷V、甘草苷和甘草酸的流动相分别为乙腈-水、0.1%磷酸-乙腈,流速:0.8 m L/min,柱温:30℃,检测波长分别为203 nm、237 nm。结果:罗汉果皂苷V、甘草苷和甘草酸分别在0.95~4.75μg(r=0.9996)、0.152~1.064μg(r=0.9998)、0.074~0.518μg(r=0.9998)范围内呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为100.06%、99.96%、100.08%,RSD%分别为1.01%、1.03%、1.02%(n=6)。结论:该方法操作简便、准确度高、重复性好,可作为罗麦颗粒中罗汉果皂苷V、甘草苷和甘草酸的含量测定方法,也可用于罗麦颗粒的质量控制。

罗汉果皂苷V刺激成骨细胞增殖与分化

背景:骨在一生中不断地进行重塑,骨稳态是成骨细胞的骨形成和破骨细胞的骨吸收之间的动态平衡。在细胞水平严格控制骨重建,对于维持骨稳态以响应结构和代谢需求是至关重要的。目的:探讨罗汉果皂苷V对成骨细胞增殖、分化的影响。方法:采用两步酶消化法提取大鼠成骨细胞,通过MTT实验检测罗汉果皂苷V的细胞毒性;不同质量浓度(0,6.25×10^-3,1.25×10^-2,2.5×10^-2g/L)罗汉果皂苷V对成骨细胞干预2,4,6d后通过FDA/PI荧光染色观察成骨细胞活性,干预6d后通过碱性磷酸酶染色、茜素红染色及qRT-PCR检测观察罗汉果皂苷V对成骨细胞分化的影响。结果与结论:①MTT实验表明罗汉果皂苷V在6.25×10^-3-2.5×10^-2g/L时显著促进成骨细胞增殖;②FDA/PI荧光染色显示6.25×10^-3,1.25×10^-2,2.5×10^-2g/L罗汉果皂苷V可提高成骨细胞活力、促进细胞增殖,尤其以1.25×10^-2g/L效果显著;③罗汉果皂苷V干预6d后,碱性磷酸酶染色(定量)及茜素红染色实验均显示罗汉果皂苷V促进成骨细胞成骨矿化,特别是在1.25×10^-2g/L时最为明显;④qRT-PCR结果显示罗汉果皂苷V组的成骨分化相关基因RUNX2、BSP、OCN和COL1A1表达高于对照组,特别是罗汉果皂苷V在1.25×10^-2g/L时表达最高;⑤结果表明,罗汉果皂苷V可刺激成骨细胞增殖、分化,在1.25×10^-2g/L时作用最为明显。

快速溶剂萃取-超高效液相色谱法测定罗汉果中罗汉果皂苷V含量

目的建立测定罗汉果中罗汉果皂苷V含量的超高效液相色谱法。方法快速溶剂萃取条件,萃取剂为甲醇,萃取温度为100℃,静态萃取5min;色谱条件,色谱柱为Thermo Syncronis C_(18)柱(100mm×3.0mm,3μm),流动相为乙腈-水(23∶77,V/V),流速为0.5mL/min,检测波长为203nm,柱温为40℃,进样量为2μL。结果罗汉果皂苷V质量浓度在4.402~440.2μg/mL,r=0.99998(n=6)范围内与峰面积线性关系良好;精密度、稳定性、重复性试验的RSD均小于2.0%(n=6);平均回收率为95.40%,RSD为3.91%(n=9)。结论该方法简便、快捷、准确、重复性好,可用于测定罗汉果中罗汉果皂苷V的含量。

超高效液相色谱法测定清咽含片中罗汉果皂苷V

目的建立超高效液相色谱法(ultra performance liquid chromatography,UPLC)测定清咽含片中罗汉果皂苷V含量的方法。方法色谱条件为色谱柱:XSELECT HSS T_3(100 mm×2.1 mm,2.5μm);流动相:乙腈:0.1%磷酸水溶液,梯度洗脱,流速:0.4 mL/min;柱温:40℃;进样量:5μL;检测波长:203 nm。结果结果表明,罗汉果皂苷V线性范围为0.033~0.333 mg/mL(r=1.0000),检出限66.4μg/g,定量限221.6μg/g,精密度(relative standard deviation,RSD)为1.5%,平均回收率97.6%(n=9)。结论此法操作简单、准确、快速,可作为清咽含片中罗汉果皂苷V含量的检测方法。