雷公藤经鲜羊血炮制前后HPLC指纹图谱的比较研究

目的探讨鲜羊血炮制雷公藤解毒的机制。方法采用Agilent Eclipse XDB-C18柱为色谱柱,以乙腈和0.1%磷酸溶液为流动相,梯度洗脱,流速为0.4 mL/min,检测波长230 nm;运用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”和SPSS17.0统计软件分析雷公藤经羊血炮制前后指纹图谱的差异,观察其成分的变化。结果初步建立了雷公藤经羊血炮制前、后的HPLC指纹图谱,发现雷公藤经羊血炮制后包括雷公藤红素在内的6种成分含量降低。结论建立的雷公藤指纹图谱具有较好的重现性,能准确反映雷公藤经羊血炮制前后成分的变化。

一步等电聚焦纯化羊血铜锌超氧化物歧化酶

本文用水平板制备等电聚焦电泳纯化了羊血红细胞铜、锌超氧化物歧化酶。其粗酶液经过一步等电聚焦比活力由271.6u/mg蛋白提高到6254u/mg蛋白,纯化倍数提高了22.2倍,活力回收72.9％。聚丙烯酰胺凝胶电泳及薄层聚丙烯酰胺等电聚焦电泳均呈一条带,等电点为pH6.8。

血水比例对羊血豆腐凝胶特性和品质的影响

血水比例是调控血豆腐口感品质的关键。本实验以湖羊血液为原料,按照血水比(v/v)1∶0、1∶1、1∶2、1∶3、1∶4、1∶5、1∶6稀释后制作血豆腐凝胶,从血浆纤维蛋白原浓度、动态流变特性、微观结构、质构、保水性等指标的角度,研究血水比例对血豆腐凝胶特性和品质的影响。结果表明:随着血浓度降低,血豆腐储能模量、损能模量弱化,凝胶强度呈下降趋势,同时血豆腐凝胶蒸煮损失和离心损失增大,不易流动水比例下降,水分向慢弛豫方向移动。当血水比<1∶3时,凝胶网状结构稳定性下降,水分易渗出,且不具有动态流变特性,凝胶强度极弱;除弹性外,血豆腐硬度、咀嚼性、内聚性以及黏性均显著降低。血水比≥1∶3时能较好地保持羊血豆腐凝胶的质构特性和持水力,是制作血豆腐的适宜比例范围。

碱性蛋白酶酶解提取羊血血红素工艺条件优化

以羊血为试材,血红素得率为指标,在加酶量、酶解pH、酶解温度和酶解时间等单因素实验基础上,采用正交实验优化工艺参数。结果表明最佳反应参数为碱性蛋白酶加酶量8000U/g血红蛋白、酶解pH8.5、酶解温度55℃、酶解时间4h,在此条件血红素得率达到85.3%,即1L羊血可提取3.93g血红素。该法所得产品的安全性高,适合工业化生产。

离子交换层析法纯化羊血SOD及其稳定性研究

以羊血为原料,通过热处理、透析、离子交换层析等方法获得SOD提取物,测定其酶活力和蛋白质含量,并从温度、pH稳定性和外源试剂耐受性等几个方面对SOD稳定性进行了研究.结果表明:经过离子交换层析后,SOD的比活力达到5289.1U·mg-1,回收率为60%,纯化倍数为25.3倍;在40～60℃保温30min,SOD酶活力基本不变;pH6～9范围内SOD的稳定性较好;SOD对2mmol·L-1H2O2和尿素较敏感,2mmol·L-1SDS对SOD没有明显的抑制作用.

简易快速从微量羊血中提取高质量基因组的方法

以碘化钾法为基础,建立了一种简单快速从微量羊血中提取高质量基因组DNA的改进方法。该方法提取的基因组DNA经0.6%琼脂糖凝胶电泳检测,DNA带整齐,无拖尾。OD260/OD280为1.81±0.13,浓度为(234±36.4)μg/mL,PCR扩增得到了满意的扩增效果。

不同酶对羊血红蛋白酶解液抗氧化活性的影响

试验旨在研究不同种类的酶对羊血红蛋白酶解液抗氧化活性的影响。采用5种酶酶解羊血红蛋白5h,试验按酶种类随机分为胃蛋白酶组(4×10~5 U/g)、木瓜蛋白酶组(5×10~5 U/g)、中性蛋白酶组(5×10~5 U/g)、胰蛋白酶组(4×10~5 U/g)和不加酶的空白对照组,每组3个重复,加酶量均为原料质量的3%;以1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基清除能力、羟自由基清除能力、2,2'-联氮-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸(ABTS)自由基清除能力和还原力为抗氧化指标。结果表明:随着酶解时间的增加,4组酶解液基本上均表现出一定的抗氧化能力,其中中性蛋白酶组羟自由基清除力及2 h对2,2'-联氮-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸(ABTS)自由基的清除力均高于其他组(P<0.01);木瓜蛋白酶组水解度及除2 h外对2,2'-联氮-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸(ABTS)自由基的清除力均高于其他组(P<0.01);胃蛋白酶组1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基清除力及还原力高于其他组(P<0.01)。综合清除自由基能力与还原力角度考虑,用中性蛋白酶酶解的羊血红蛋白酶解液具有较好的抗氧化活性,可作为开发羊血抗氧化肽的工具酶。

壳聚糖固定化羊血超氧化物歧化酶工艺条件优化及酶学性质比较研究

以羊血为材料获得超氧化物歧化酶(SOD)酶液,采用壳聚糖进行SOD固定化,对壳聚糖用量、戊二醛体积分数、反应时间及pH值对SOD固定化的影响进行研究,通过正交试验优化工艺参数,并比较固定化酶与天然酶的酶学性质。结果表明:10mL比活力为5219.3U/mg的SOD样液与0.25g用体积分数0.7%戊二醛活化的壳聚糖在pH5.6的条件下充分反应2h,所得的固定化酶的活力最强;固定化SOD比天然SOD热稳定性提高了65.2%,耐酸碱性提高了48.4%,Km值为0.18mmol/L。因此,壳聚糖可用于制备性能较优的固定化羊血超氧化物歧化酶。

羊血中Cu,Zn-SOD酶活的研究

以羊血为原料提取了Cu,Zn-SOD,利用邻苯三酚自氧化法对Cu,Zn-SOD的酶活进行了测定。实验结果表明:1L羊血中提取的Cu,Zn-SOD,经丙酮沉淀、冷冻干燥及SephadexG-100葡聚糖凝胶过滤后的酶活分别为3.2×103U/mg、4.51×103U/mg和5.85×103U/mg。

月桂酰氯修饰羊血超氧化物歧化酶工艺优化及酶学性质

以羊血为材料获得超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)酶液,采用月桂酰氯修饰SOD,在修饰温度、修饰时间、月桂酰氯添加量和丙酮添加量的单因素试验基础上,通过正交试验优化工艺参数,并比较修饰酶与天然酶的酶学性质。结果表明:10 mL酶比活力为4 348.6 U/mg的SOD样液在修饰温度60℃、修饰时间30 min、月桂酰氯用量0.1 mL、丙酮添加量为酶液体积的1.5倍条件下充分反应,所得修饰酶活力最强;修饰酶热稳定性、pH值耐受性、半衰期等均优于天然酶。月桂酰氯可用于修饰性能较优的羊血超氧化物歧化酶。

羊血球水解蛋白和酸变性血浆蛋白对肉仔鸡生产性能的影响

在肉仔鸡日粮中添加盐酸水解羊血球蛋白和酸变性血浆蛋白,研究对鱼粉的替代效果。结果显示,羊血球水解蛋白和酸变性血浆蛋白均可代替鱼粉而不影响肉鸡的生长速度,且更为经济。利用盐酸来处理血液蛋白是一种较为有效的改善血粉品质的方法。

山羊血淋巴结的解剖学观察

对山羊血淋巴结的输入和输出管道进行了追踪解剖学观察,发现所观察到的山羊血淋巴结位于淋巴循环的径路上,过滤的是含有红细胞的淋巴液而不是血液,所观察到的山羊血淋巴结就是淋巴结。

羊血铜锌超氧化物歧化酶(Cu-ZnSOD)的分离纯化

目的:对羊血进行提取SOD。方法:采用有机溶剂去除血红蛋白、热变性、丙酮沉淀、DEAE-32离子交换柱层析的方法,对羊红细胞Cu,Zn-SOD进行分离纯化。利用非变性凝胶电泳NBT活性染色鉴定SOD,SDS-PAGE测定分子量。结果:表明1 000ml羊血中得到SOD干粉1 257mg,总活力为79 453U,比活力为3 871.4U/mg。活性染色结果证明羊血SOD有2条带,表明已达到电泳纯。SDS-PAGE测得SOD亚基分子量分别为16.71kDa、15.97kDa。H2O2对羊血CuZn-SOD活性有抑制作用,通过紫外光谱扫描,羊血SOD在231nm处有最大吸收峰。

响应面分析法优化羊血中SOD的热变性提纯工艺条件

利用响应面分析法(Response Surface Methodology)对羊血中SOD的热变性提纯工艺进行优化。在单因素实验基础上选取实验因素与水平,根据中心组合(Box-Benhnken)实验设计原理采用3因素水平的响应面分析法,依据回归分析确定各工艺条件的影响因子,以SOD的比活力为响应值作响应面和等高线。在分析各个因素的显著性和交互作用后,得出最佳工艺条件为:热变性温度55℃;热变性时间15min;0.01mol/lCuCl2的添加量2%。在最佳工艺条件下,SOD活性为1072.43U/mg蛋白。

羊血中超氧化物歧化酶提取工艺研究——热变温度、热变时间和热变方式对SOD提取的影响及最佳工艺条件选择

目的:重点研究热变温度、热变时间、热变方式对SOD分离提取的影响,确定最优工艺参数。方法:采用正交试验设计。由正交试验得出最优组合为A2B2C2,即热变温度55℃,热变时间15min,0.01mol/lCuCl2的添加量2%。结论:热变性是羊血SOD提取的关键,按此工艺热变性后的SOD活性在1000U/mg蛋白以上。

羊血中SOD的提取工艺研究

本文采用乙醇-氯仿提取法对羊血中的SOD进行提取。在研究提取温度、缓冲溶液的pH值等单因素对SOD得率的影响的基础上,通过正交试验确定出最佳的提取条件:提取时间为15min,温度为65℃,缓冲溶液pH为7.4。

羊血中凝血酶粗品的提取

本文用有机溶剂沉淀法从羊血中提取凝血酶。同时探讨了醋酸浓度、pH值和激活时间、激活温度对凝血酶得率的影响,通过正交试验确定了最佳提取工艺条件:即激活温度30℃,醋酸浓度1%,pH值5.3,激活时间是1.5 h,并做了验证性试验验。

响应面法优化提取羊血SOD除血红蛋白工艺研究

对沉淀剂的体积比、沉淀剂与溶血液的体积比和沉淀时间对羊血红蛋白去除效果的影响进行了研究,确定了最优工艺参数.采用中心试验组合设计和响应面分析法,得出的最优组合为A2B2C2,即沉淀剂为95%的乙醇与丙酮、沉淀剂与溶血液,体积比均为1∶1,沉淀时间为30 min.除血红蛋白是羊血超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)提取的关键,用响应面法工艺除羊血红蛋白后得到的SOD粗酶液,活性为302.59 U/mg.

藏羊血中血红素提取工艺研究

通过正交试验确定了藏羊血中提取血红素的最优工艺条件,即:溶血时添加蒸馏水1倍、氯仿5倍、分离血红素时加丙酮5倍、离心时间为20min,pH值为3。

羊血铜锌超氧化物歧化酶的提取

用低浓度氯化钠与羊血浆匀浆 ,采用 75℃加热 ,硫酸铵分级沉淀、透析 ,柱层析等方法 ,从羊血中提取铜锌超氧化物歧化酶 (Cu·Zn -SOD) ,其比活性为 4 6 32U/mgpr,紫外吸收峰在 2 6 0nm。实验还表明 ,硫酸钾缓冲液浓度对Cu·Zn -SOD活性有显著影响。