HPLC测定羌活药材中羌活醇和异欧前胡素含量的效果分析

目的研究高效液相色谱（HPLC）测定不同产地和不同采收期羌活药材中羌活醇和异欧前胡素含量的效果。方法采用HPLC仪,色谱条件：色谱柱采用Waters symmetry C18（4.6mm×250.0mm,5μm）,流动相为乙腈-水（45∶55）,流速为1mL/min,柱温30℃,检测波长为310nm。结果羌活醇和异欧前胡素的线性范围分别为0.240 8-1.505 0μg和0.117 6-0.735 0μg,平均加样回收率（n=6）分别为0.98%和1.42%。不同产地羌活药材中羌活醇和异欧前胡素含量差别较大,采收期和生长年限对这2种成分的含量均有影响。结论 HPLC测定简单快捷,为确定羌活药材的最佳产地及采收期提供了依据。

九龙化风丸中升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、羌活醇、异欧前胡素和细辛脂素的HPLC梯度洗脱法测定

目的 采用高效液相梯度洗脱法测定九龙化风丸（防风、羌活、细辛、大黄、桔梗等）中升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、羌活醇、异欧前胡素和细辛脂素的量.方法 Hypersil C18色谱柱（4.6mm×150mm,5μm）,体积流量0.9 mL/min,升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷的色谱条件,流动相A为甲醇-乙腈（2∶1）,流动相B为0.5％磷酸溶液,检测波长254 nm.羌活醇和异欧前胡素的色谱条件,流动相A为乙腈,流动相B为0.1％醋酸水溶液,检测波长310 nm,细辛脂素的色谱条件,流动相为乙腈-甲醇（85∶15）,检测波长286 nm.结果 升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷分别在0.0146～0.2920μg （r=0.999 1）、0.0108～0.2160μg （r=0.9993）范围内进样量与峰面积呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为97.55％、97.73％,RSD （n=6）分别为1.46％、1.18％;羌活醇和异欧前胡素分别在0.017 4 ～0.348 0 μg（r=0.999 3）、0.0128～0.2560 μg （r=0.9997）范围内进样量与峰面积呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为97.62％、98.11％,RSD （n=6）分别为1.43％、1.39％;细辛脂素在0.012 4～0.2480 μg （r=0.999 2）范围内进样量与峰面积线性关系良好,平均加样回收率为97.65％,RSD （n=6）为1.24％.结论 该方法测定结果准确、灵敏、重复性好.

高效液相色谱法测定沉香曲中羌活醇、异欧前胡素、木香烃内酯和去氢木香内酯的含量

目的 建立HPLC法测定沉香曲中羌活醇、异欧前胡素、木香烃内酯和去氢木香内酯的含量。方法 色谱柱为Hypersil C18柱（4.6 mm×250 mm,5μm）;流速：0.9 mL min-1;检测羌活醇和异欧前胡素的流动相为乙腈-0.5%磷酸溶液（67：33）,检测波长：312 nm;检测木香烃内酯和去氢木香内酯的流动相为乙腈-甲醇-1%冰醋酸溶液（45：24：31）,检测波长：225 nm。结果 羌活醇和异欧前胡素进样量分别在0.018 6～0.372 0μg（r=0.999 2）、0.011 2～0.224 0μg（r=0.999 1）与峰面积呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为96.6%、98.0%,RSD分别为1.6%、1.2%（n=6）;木香烃内酯和去氢木香内酯进样量分别在0.041 4～0.828 0μg（r=0.999 5）、0.010 8～0.216 0μg（r=0.999 7）与峰面积呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为98.0%、96.2%,RSD分别为1.4%、1.1%（n=6）。结论 该方法测定结果准确性强、灵敏度高、重复性好。

不同商品等级羌活中羌活醇和异欧前胡素的含量测定

目的:比较羌活不同商品等级中羌活醇和异欧前胡素的含量,探讨中药材商品等级与药材化学成分含量的相关性。方法:采用高效液相色谱法测定羌活药材中羌活醇、异欧前胡素的含量。结果:各等级羌活中的羌活醇含量均高于异欧前胡素,二者的总量为蚕羌>尾羌>竹节羌>疙瘩头>条羌。结论:此测定方法为今后修订羌活药材商品规格标准提供了实验依据。

高效液相色谱法测定养血生发胶囊中羌活醇和异欧前胡素的含量

[目的]建立高效液相色谱法（HPLC）测定养血生发胶囊中羌活醇和异欧前胡素的含量测定方法。[方法]色谱柱：Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18（250 mm×4.6 mm,5μm）,流动相：乙腈-0.1%磷酸水溶液（45∶55）,流速：1 m L/min,检测波长：310 nm,柱温：25℃。[结果]羌活醇和异欧前胡素分别在0.204～1.224μg（r=0.999 7）和0.103～0.616μg（r=0.999 8）线性关系良好,平均回收率分别为99.24%（RSD=0.74%）和99.86%（RSD=1.36%）。[结论]该方法简便易行、重复性好,可用于养血生发胶囊中羌活醇和异欧前胡素的质量控制。

羌活醇提物预处理对大鼠HIRI模型的防护作用

目的探讨羌活醇提物对大鼠肝缺血再灌注损伤(hepatic ischemia reperfusion injury,HIRI)模型肝功能和抗氧化酶的影响。方法将60只Wistar大鼠分为空白组(6只)、模型组(18只)、丹参预处理组(DS组,18只)和羌活预处理组(QH组,18只),后三组组内再分为缺血45min组(I45)、缺血45min再灌注30min组(I45R30)和缺血45min再灌注60min组(I45R60)3小组,每组6只,造模后测定大鼠各时点即刻的血清丙氨酸氨基转移酶(alanine amiotransferase,ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)水平以及大鼠肝组织中丙二醛(malondiadehyde,MDA)含量、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力水平。结果MDA:羌活组I45R30min即刻点MDA含量明显高于I45min即刻点(P<0.01);I45min即刻点,羌活组MDA含量高于模型组(P<0.05);I45R30min即刻点,丹参组与羌活组MDA含量均明显高于模型组(P均<0.01);SOD:羌活组I45R30min和I45R60min时点的肝组织SOD活力均高于I45min时点(P均<0.01);I45R30min即刻点模型组肝组织SOD活力均低于丹参组和羌活组(P均<0.001)。结论羌活醇提物可能是通过提高HIRI大鼠肝组织的总SOD活力,增强其对氧自由基的清除能力,减轻脂质过氧化损伤,从而起到保护肝脏的作用。

HPLC同时测定天麻片中羌活醇和异欧前胡素的含量

目的：建立高效液相色谱法（HPLC）同时测定天麻片中羌活醇和异欧前胡素的含量.方法：色谱柱：Shimadzu C18柱（250 mm×4.6 mm,5μm）,流动相：乙腈-水（44：56）,流速为1.0 mL/min,柱温：30℃,检测波长：310 nm.结果：羌活醇和异欧前胡素选样浓度分别在2.4～120 μg/mL（r=0.999 9）,1.21～60.5 μg/mL（r=0.999 9）范围内线性关系良好,平均加样回收率分别为98.22％、97.82％（n=9）.结论：本法简便,准确,重现性好,能排除其他成分的干扰,提供了更好的控制该药质量的方法.

羌活醇及异欧前胡素对脂多糖诱导大鼠成纤维样滑膜细胞增殖抑制的影响

目的探讨羌活醇及异欧前胡素对大鼠成纤维样滑膜细胞增殖抑制的影响。方法复制经脂多糖(LPS)诱导的大鼠成纤维样滑膜细胞(CIA-FLS)模型,分别给予不同浓度的羌活醇(25、50、100、200、400μg·mL^-1)、异欧前胡素(25、50、100、200、400μg·mL^-1)及阳性药泼尼松龙(400μg·mL^-1),另设空白对照组,观察给药前后成纤维样滑膜细胞形态差异;采用噻唑蓝(MTT)法测定不同给药时间、不同给药浓度下成纤维样滑膜细胞的抑制率,计算半数抑制浓度(IC 50);硝酸还原酶法测定羌活醇和异欧前胡素对大鼠成纤维化滑膜细胞中一氧化氮(NO)水平的影响;酶联免疫吸附实验(ELISA)法测定肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达的影响。结果造模细胞较正常细胞增殖力强,细胞粗大,纤维样,呈层叠状生长;羌活醇组给药后细胞增殖力减弱,生长良好;异欧前胡素给药后细胞增殖力锐减,生长状况不佳。给药12 h,羌活醇未测出半数抑制浓度值,异欧前胡素半数抑制浓度值为160μg·mL^-1;给药36 h,羌活醇、异欧前胡素半数抑制浓度值分别为190、120μg·mL^-1;给药60 h,分别为80、45μg·mL^-1,异欧前胡素的增殖抑制能力强于羌活醇(P<0.01)。给药羌活醇与异欧前胡素对一氧化氮总体含量和细胞因子肿瘤坏死因子α含量均有显著性降低(P<0.01),且异欧前胡素的降低更显著。结论羌活醇及异欧前胡素对大鼠成纤维样滑膜细胞均有增殖抑制作用(P<0.05),均使一氧化氮含量和细胞因子肿瘤坏死因子α的含量显著减少(P<0.01),二者都有很好的增殖抑制能力,且异欧前胡素的抑制效果优于羌活醇。

HPLC测定大鼠体内羌活醇血药浓度及药代动力学研究

目的研究羌活提取物中羌活醇在大鼠体内的药代动力学规律。方法羌活醇分别以60、30和15mg·kg-1剂量大鼠灌胃给药,给药后于不同时间点采血,血浆样品经乙腈处理后,用高效液相色谱(HPLC)-荧光法测定血药浓度,色谱柱:Spherisorb 10ODS(1)(250mm×4.6mm);流动相:甲醇-乙腈-0.025mol·L-1磷酸三乙胺溶液(15∶45∶40);流速:1mL·min-1;检测波长:EM=480nm。不同时间点的数据采用DAS 2.0药代动力学软件拟合处理,计算该药的药代动力学参数,分析羌活醇在体内药代动力学特点。结果血浆样品中,羌活醇的线性范围为1.164×10-4～1.164×10-2 mg·mL-1(r=0.997);各血药浓度的提取回收率均大于80%,日内或日间精密度实验RSD<4%,血浆中回收率>90%。经DAS 2.0药代动力学软件进行自动拟合处理不同时间点的药物血浆浓度,药物药代动力学参数显示:高、中、低3个剂量组(分别为11.64×10-3、5.82×10-3、1.164×10-3 mg·mL-1的血浆样品)中,羌活醇的平均高峰血药浓度(Cmax)分别为(5.243±3.116)、(1.892±0.888)、(0.764±0.120)mg·L-1,血药浓度-时间面积(AUC)(0-∞)相应分别为(32.658±31.202)、(17.511±2.287)、(3.246±2.432)mg·L-1.h-1,说明随着药物剂量的增加,Cmax与AUC也相应的增加。羌活醇高、中、低3个剂量组消除半衰竭(T1/2z)分别为(3.184±1.959)、(3.207±3.036)、(3.013±3.225)h,表明剂量不同,其T1/2z差异无统计学意义(P>0.05)。结论利用HPLC-荧光法对中药羌活中羌活醇进行药代动力学研究,方法稳定、灵敏度高、专属性强。药代动力学试验显示药物在动物体内吸收、消除较快,代谢迅速,所得结果可为下一步新药试验研究提供参考。

一种羌活醇衍生物的合成和其抗类风湿关节炎活性及作用机制研究

目的 设计合成一种新的羌活醇(Notopterol, Not)衍生物(NotC),对其抗炎、抗风湿性关节炎(Rheumatoid arthritis, RA)的作用进行评价,探讨其作用机制。方法 以Not结构为基础,采用化学合成的方法合成出羌活醇二氧化硫供体衍生物(NotC)。通过测量脂多糖诱导的RAW264.7细胞炎症模型的NO含量,λ-角叉菜胶引起的急性足肿胀大鼠模型的足肿胀度和胶原诱导的大鼠关节炎模型(CIA)的足肿胀度和炎症因子等指标,系统地评价了NotC抗炎和抗RA的作用。通过网络药理学的GO和KEGG分析以及分子对接等方法对NotC的作用机制进行探讨。结果 通过化学合成的方法成功合成出了目标化合物(NotC),核磁结果表明其结构与目标结构一致,高效液相测得其纯度为95.4%。体内外药效实验结果显示,NotC明显抑制了LPS诱导的RAW264.7细胞中NO的表达,抑制了λ-角叉菜胶诱导的大鼠急性炎症,能缓解CIA大鼠的关节炎并抑制炎症细胞因子的表达。网络药理学分析和分子对接表明,NotC可通过调节MAPK信号通路,发挥比Not更好的抗RA作用。结论 在抗炎和治疗RA方面,NotC比Not更有效。

羌活醇对葡聚糖硫酸钠诱导的结肠炎小鼠作用的研究

背景:免疫功能失调在炎症性肠病(IBD)的发病机制中起着关键作用。羌活醇是中药羌活的主要活性成分,具有抗炎的作用。目的:探究羌活醇对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的小鼠结肠炎的作用。方法:将C57BL/6小鼠随机分为正常组、阴性对照组、模型组、羌活醇组。模型组、羌活醇组小鼠自由饮用2%DSS溶液诱导结肠炎模型。阴性对照组、羌活醇组小鼠给予腹腔注射羌活醇溶液40 mg/kg,正常组、模型组小鼠给予腹腔注射等体积0.9%NaCl溶液。10 d后处死小鼠,行疾病活动指数(DAI)评分、结肠长度和组织病理学评分,ELISA法检测结肠组织中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-17A水平,定量PCR法检测结肠和脾脏组织中IL-17A、RORγt mRNA表达。结果:与正常组相比,模型组DAI评分、组织病理学评分、结肠组织中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-17A水平、结肠和脾脏组织中IL-17A、RORγt mRNA表达均显著增高(P<0.01),结肠长度明显缩短(P<0.01)。与模型组相比,羌活醇能明显降低小鼠DAI评分、组织病理学评分(P<0.01),下调TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-17A水平(P<0.01),抑制IL-17A、RORγt mRNA表达(P<0.01),明显恢复结肠长度(P<0.01)。结论:羌活醇对小鼠结肠炎有保护作用,其机制可能与减少促炎细胞因子的产生、抑制Th17细胞的功能和分化相关。

裂叶羌活中1个新的天然产物O-甲基羌活醇

目的:研究裂叶羌活Notopterygium incisum干燥根和根茎甲醇提取物的乙酸乙酯溶性部位化学成分。方法:采用多种色谱方法对其化学成分进行分离和纯化,核磁共振波谱法和质谱法鉴定其结构。结果:从裂叶羌活甲醇提取物的乙酸乙酯溶性部位分离得到5个化合物,分别鉴定为镰叶芹二醇(1),O-甲基二氢镰叶芹酮醇(2),川白芷素(3),东莨菪素(4),O-甲基羌活醇(5)。结论:化合物5为新的天然产物;化合物2～4为首次从裂叶羌活根和根茎中分离得到。

羌活醇对异丙肾上腺素诱导的H9c2心肌细胞损伤的保护作用

目的探讨羌活醇对异丙肾上腺素(ISO)诱导大鼠H9c2心肌细胞损伤的保护作用及机制。方法体外无菌培养大鼠H9c2心肌细胞,利用ISO(30 mol·L^(-1),48 h)建立心肌细胞损伤模型。将细胞分为5组:空白对照组(正常培养的心肌细胞)、模型组(ISO组)和低、中、高3个剂量实验组(10,20和40 mol·L^(-1)羌活醇)。用噻唑蓝法测定细胞活力,用试剂盒法检测乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)水平,膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶双染法和流式细胞术检测细胞凋亡率,蛋白质印迹法测定B淋巴细胞瘤-2蛋白(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)和蛋白激酶B(Akt)磷酸化蛋白的相对表达水平。结果空白对照组、模型组和低、中、高3个剂量实验组的细胞存活率分别为(100.00±2.00)%,(66.51±1.50)%,(69.96±3.43)%,(85.54±0.73)%和(87.60±1.22)%;这5组的LDH释放量分别为(159.60±7.11),(238.33±8.39),(182.95±8.66),(167.30±7.88)和(155.80±7.35)U·L^(-1);这5组的SOD酶活性分别为(33.90±1.57),(18.63±0.84),(67.46±3.13),(77.29±3.59)和(86.45±8.64)U·mL^(-1);这5组的MDA含量分别为(1.02±0.44),(1.17±0.03),(0.82±0.03),(0.78±0.01)和(0.73±0.01)nmol·mL^(-1);这5组的细胞凋亡率分别为(7.80±0.62)%,(23.70±1.41)%,(18.27±0.40)%,(16.27±0.35)%和(14.90±1.22)%;这5组的Bcl-2蛋白相对表达量分别为1.00±0.04,0.71±0.03,1.26±0.05,1.30±0.06和1.53±0.07;这5组的Bax蛋白相对表达量分别为1.00±0.05,1.30±0.06,1.21±0.03,1.15±0.03和1.10±0.03;这5组的Caspase 3蛋白相对表达量分别为1.00±0.03,1.10±0.04,0.73±0.07,0.97±0.03和1.04±0.02;这5组的p-Akt蛋白相对表达量分别为1.00±0.06,0.81±0.04,1.22±0.02,1.01±0.05和0.84±0.04。上述指标:模型组与空白对照组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05);实验组与模型组相比,除高剂量Caspase 3和Akt磷酸化蛋白相对表达量外,差异均具有统计学意义(均P<0.05)。结论体外培养条件下羌活醇可能对ISO诱导的H9c2心肌细胞损伤具有一定的保护作用,其保护作用机制可能与增强抗氧化酶的活性、抗凋亡有关。

基于RP-HPLC-DAD法检测风湿寒痛片中延胡索乙素、羌活醇和桂皮醛活性成分的含量

目的建立RP-HPLC-DAD法用于检测风湿寒痛片中延胡索乙素、羌活醇和桂皮醛3种活性成分含量。方法采用Capcell Pak UG C_(18)色谱柱分离,柱温设定为30℃、流速设定为1.0 mL·min^(-1),流动相A为乙腈,流动相B为0.5%磷酸溶液,梯度洗脱,检测波长:280 nm(延胡索乙素)、310 nm(羌活醇)、290 nm桂皮醛;进样体积10μL,采用RP-HPLC行定量检测。结果延胡索乙素、羌活醇和桂皮醛分别在质量浓度0.4568-45.6800、0.0585-5.8500、0.00988-0.98000μg·mL^(-1)内具有良好的线性,平均回收率分别为99.39%、100.27%和99.13%;仪器精密度和方法重复性均在5.0%以内。结论实验建立的RP-HPLC-DAD法具有简单、快速、准确等特点,可以用于风湿寒痛片产品的质量控制。

甘肃省宽叶羌活品质对比及其与土壤因子的相关性

为了评价甘肃省栽培羌活主产区药材品质的优劣及土壤因子对羌活药材品质的影响情况,对甘肃宽叶羌活主产区的栽培宽叶羌活及土壤进行调查采样,采挖两年生宽叶羌活鲜样,测定其羌活醇、异欧前胡素含量。同时采集土壤样品,分析测定土壤有机质、全氮、全磷、有效磷、速效钾的含量,测定了土壤容重、pH、土壤中粘粒、粉粒、砂粒的比重。通过Pearson相关、冗余分析(RDA)方法分析化学成分与土壤因子间的相关性。结果表明,各产区宽叶羌活中羌活醇与异欧前胡素总含量均达到《中华人民共和国药典》要求;不同产地宽叶羌活中羌活醇和异欧前胡素含量相差较大,药材品质呈现区域性,武都地区、康乐县和卓尼县样品中羌活醇和异欧前胡素总量较高。羌活醇与有机质、全氮、全磷呈显著正相关,与速效钾呈显著负相关;异欧前胡素与容重、有效磷呈极显著正相关,与全氮、有机质呈显著正相关,与速效钾呈显著负相关。因此,土壤容重、全氮、有机质、有效磷、速效钾是影响羌活化学成分积累的主要因素,土壤容重大有利于化学成分的积累。在一定范围内,全氮、有机质含量越高,越能促进化学成分积累,同时还需合理控制速效钾的含量。研究结果可对甘肃省栽培羌活的推广及种植提供借鉴。

羌活提取物微乳剂制备及体外抗真菌活性

采用乙醇溶液热萃取方法提取羌活根茎活性成分,通过稳定性等物理性能测试进行评价并确定微乳剂最优配方。微乳剂由质量分数(下同)为15%的羌活提取物(含羌活醇0.34%)、9%的环己酮、16%的HMK-2100、10%的乙醇、49.9%的水和0.1%的AF1506组成。理化性质测试结果表明,所制备的羌活提取物微乳剂各项指标均符合国家标准。为了比较研究其抑菌活性,同时还制备了5%羌活提取物(含羌活醇0.11%)微乳剂和30%羌活提取物(含羌活醇0.68%)乳油。采用菌丝生长速率法研究了羌活提取物不同剂型产品对小麦纹枯病菌Rhizoctonia cerealis、辣椒疫霉Phytophthora capsici、水稻稻瘟病菌Pyricularia grisea和水稻纹枯病菌Rhizoctonia solani的抑制作用。结果显示,15%羌活提取物微乳剂的抑菌效果显著,在用水稀释500倍(羌活提取物质量浓度为300 mg/L,羌活醇质量浓度为6.75 mg/L)后施用,其对水稻稻瘟病菌和水稻纹枯病菌菌丝生长的抑制率均在90%以上。应用性能测试结果表明,羌活提取物微乳剂在绿萝叶片表面具有优异的铺展和润湿能力。

异地栽培对羌活生长及有效成分含量的影响

研究异地栽培对羌活生长指标及有效成分含量的影响。采用药典法和HPLC法测定比较两地羌活中异欧前胡素和羌活醇含量。结果表明,8月前羌活主要以地上生长为主,有效成分的积累量较少;9月中旬地上部分的生长量不再变化,有效成分积累加快,且达到最大量;10月过后,随着气温的降低,地上部分开始枯萎,植物代谢消耗能量主要由根提供,有效成分有所降低。因此,确定羌活的最佳采收期为9月中旬。异地羌活异欧前胡素含量高于当地羌活,而羌活醇含量差异不大,当地略高。

包装、储藏条件对羌活饮片质量的影响

目的研究不同包装、储存条件对羌活饮片内在质量的影响。方法开展1年的留样观察实验,对不同包装、不同储藏条件下的羌活饮片进行含有量测定。UPLC法测定羌活醇、异欧前胡素、绿原酸、阿魏酸、紫花前胡苷和佛手柑内酯的含有量。结果包装材料中,绿原酸的含有量以纸袋包装的较高,紫花前胡苷的含有量以塑料袋包装的较高,羌活醇的含有量则以铝塑复合袋包装的较高,但以铝塑复合袋包装的羌活中异欧前胡素的含有量波动最大;储藏温度中,阿魏酸的含有量高低排序为常温>低温>阴凉,佛手柑内酯的含有量高低排序是阴凉>低温>常温。结论塑料袋包装、低温、光照条件下储存更适宜于羌活饮片内在质量的保存。