佛耳草总黄酮联合抗生素对大鼠慢性阻塞性肺疾病引起的气道炎症的缓解作用

【目的】探讨佛耳草总黄酮联合抗生素对肺炎克雷伯菌和脂多糖(LPS)诱发的慢性阻塞性肺疾病(COPD)的治疗效果,并从相关蛋白和基因层面探究其相关抗炎机制,为该疾病的治疗提供一个新的思路。【方法】将54只Wistar大鼠随机分为6组:对照组、模型组、氨茶碱组、佛耳草总黄酮组、抗生素组、佛耳草总黄酮+抗生素组,每组9只。除对照组外,其余各组大鼠均采用气管滴注肺炎克雷伯菌和脂多糖的方法建立COPD模型,对照组以等体积的生理盐水代替肺炎克雷伯菌和脂多糖同法处理。COPD造模12周确认成功后,治疗组大鼠每天分别给予氨茶碱(50 mg/kg BW)、佛耳草总黄酮(50 mg/kg BW)灌胃处理,头孢他啶(200 mg/kg BW)肌内注射处理,佛耳草总黄酮+抗生素组大鼠同时给予佛耳草总黄酮(50 mg/kg BW)和头孢他啶(200 mg/kg BW)处理,对照组和模型组大鼠不做处理。连续治疗7 d后,采用动物肺功能检测仪检测大鼠呼气峰流量(PEF)、吸气峰流量(PIF)、0.3 s用力呼气容积与用力肺活量比值(FEV0.3/FVC)。分别采用HE染色和TUNEL染色检测大鼠肺脏组织病理学形态和组织细胞凋亡水平;采用Western blotting检测大鼠肺脏组织B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、活化的半胱氨酸蛋白酶-3(Cleaved Caspase-3)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9、金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)蛋白表达水平;采用实时荧光定量PCR检测大鼠肺脏组织中MMP-2、MMP-9及TIMP-1基因mRNA表达水平;采用ELISA方法检测各组大鼠血清及肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;采用流式细胞术检测大鼠肺脏组织Th17、Treg细胞比例。【结果】与对照组相比,模型组大鼠PEF、PIF、FEV0.3/FVC、Bcl-2、Treg细胞比例均显著降低(P<0.05),TUNEL阳性率,Bax、Cleaved Caspase-3蛋白表达水平,Th17细胞比例、Th17/Treg比值,MMP-2、MMP-9、TIMP-1及IL-1β、IL-6、TNF-α水平均显著增加(P<0.05)。与模型组相比,氨茶碱组、佛耳草总黄酮组、抗生素组、佛耳草总黄酮+抗生素组大鼠PEF、PIF、FEV0.3/FVC、Bcl-2、Treg细胞比例均显著增加(P<0.05),TUNEL阳性率,Bax、Cleaved Caspase-3蛋白表达水平,Th17细胞比例、Th17/Treg比值、MMP-2、MMP-9、TIMP-1及IL-1β、IL-6、TNF-α表达水平均显著降低(P<0.05)。与佛耳草总黄酮组及抗生素组相比,佛耳草总黄酮+抗生素组大鼠PEF、PIF、FEV0.3/FVC、Bcl-2、Treg细胞比例均显著增加(P<0.05),TUNEL阳性率、Bax、Cleaved Caspase-3、Th17细胞比例、Th17/Treg比值、MMP-2、MMP-9、TIMP-1、IL-1β、IL-6、TNF-α均显著降低(P<0.05)。【结论】佛耳草总黄酮和抗生素联用对减轻COPD大鼠气道炎症损伤具有显著效果,其作用机制与二者抑制细胞凋亡、抑制基质金属蛋白酶(MMPs)和炎症反应、降低Th17/Treg比值有关。

不同产地白花蛇舌草中东莨菪亭和耳草酮B的含量分析比较

目的建立HPLC法对不同产地白花蛇舌草药材中东莨菪亭和耳草酮B含量进行了考察研究,为药材的开发利用奠定了基础。方法应用高效液相色谱法进行含量测定,色谱柱:Agilent Eelipse XDB-C18(5μm,4.6 mm×150 mm);流动相:甲醇-0.1%冰醋酸水溶液,梯度洗脱;检测波长:385 nm;柱温:30℃;流速:10 m L/min;进样量:10μL。结果江西产白花蛇舌草药材中东莨菪亭和耳草酮B含量均高于其他产地,其次为湖北、安徽,广西产含量最低。结论不同产地的白花蛇舌草中东莨菪亭和耳草酮B的含量有较大的差异,通过方法学考察验证,该方法精密度高、稳定性良好,方法可行。

白花蛇舌草氯仿部位的化学成分研究

目的:研究白花蛇舌草氯仿部位的化学成分。方法:采用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱和薄层色谱对白花蛇舌草氯仿部位化合物进行分离纯化,根据理化性质和波谱数据分析鉴定化合物结构。结果:从白花蛇舌草氯仿部位中分离得到11个化合物,分别鉴定为2-羟基-3-甲基蒽醌(1)、2-羟基-1-甲氧基-3-甲基蒽醌(2)、2-羟基-1-甲氧基蒽醌(3)、邻苯二甲酸二丁酯(4)、甲基异茜草素(5)、熊果酸(6)、耳草酮B(7)、莨菪亭(8)、2,6-二羟基-3-甲基-4-甲氧基蒽醌(9)、2-羟基-3-羟甲基蒽醌(10)、正十六烷(11)。结论:化合物4、7、10、11为首次从白花蛇舌草植物中分离得到,本研究为白花蛇舌草质量评价奠定了一定基础。