三组固定方式对应小鼠耳蜗组织染色效果的研究

目的研究不同固定方式对耳蜗结构及细胞形态的影响、探索耳蜗内特定细胞类型的最佳固定方式,最大限度保存耳蜗不同细胞类型以及细胞内细胞器的形态结构,为生理和病理条件下的耳蜗细胞形态学研究提供一种更为个性化的免疫荧光染色方法。方法选择野生型C57BL/6小鼠9只,将小鼠随机分为一组、二组及三组,每组3只。一组采用0.9%氯化钠溶液+4%多聚甲醛(polyformaldehyde,PFA)心脏灌流、二组采用直接4%PFA心脏灌流、三组采用耳蜗4%PFA灌流。对3组固定后的耳蜗采用常规切片免疫荧光染色,激光扫描共聚焦显微镜在低倍镜、高倍镜以及超高分辨率等模式下观察并比较3组耳蜗内不同细胞和细胞内形态结构。结果3种染色方法在不同观察模式下均能清楚显示毛细胞、神经丝形态结构,3组毛细胞、神经丝形态结构比较,差异无统计学意义(P>0.05)。血管纹区域在一组的固定方式下,其形态结构相比于其他两种固定方式保存的更为完整。结论3组耳蜗固定方式均可以用来研究Corti's器、螺旋神经节区域的形态结构,而一组的固定方式更适合用于研究血管纹区域内的细微结构。