应用依赖随机化末端连接物聚合酶链反应技术研究重铬酸钾对大鼠肺p53基因DNA损伤

应用依赖随机化末端连接物PCR(RandomizedTerminalLinker-dependentPCR ,RDPCR)技术于体内试验的研究 ,从而检测特定基因的DNA损伤。腹腔注射重铬酸钾染毒大鼠 ,提取肺组织基因组DNA ,经p5 3基因外显子 7特异性引物P1重复直线延伸后与接头 (Linker)连接 ,用基因特异性引物P2和连接物引物经PCR扩增 ,电泳、转印 ,再与地高辛标记的探针杂交后显色。结果显示 ,在 2 0 .0mg kg和 40 .0mg kg剂量下 ,出现了两条清晰的杂交带 ,表明重铬酸钾可引起大鼠肺p5 3基因外显子 7的DNA损伤 ,且有两个损伤位点。此结果有助于进一步探讨六价铬化合物的致突变机制 。

实时荧光定量聚合酶链反应技术对结核性脑膜炎的诊断价值

目的探讨实时荧光定量聚合酶链反应技术(RT-PCR)对结核性脑膜炎的诊断价值。方法分别采用涂片法、RT-PCR法对结核性脑膜炎、疑似结核性脑膜炎以及非结核性脑膜炎患者的脑脊液标本进行检测,并对检测结果进行比较分析。结果涂片法共检出10例阳性,其中结核性脑膜炎7例(70.00%),疑似结核性脑膜炎3例(30.00%);RT-PCR法共检出46例阳性,其中结核性脑膜炎31例(67.39%),疑似结核性脑膜炎15例(32.61%)。对结核性脑膜炎患者检测,涂片法阳性率(12.28%)低于RT-PCR法阳性率(54.39%),差异有统计学意义(P<0.05);对疑似结核性脑膜炎患者检测,涂片法阳性率(2.91%)低于RT-PCR法阳性率(14.56%),差异有统计学意义(P<0.05);脑脊液涂片法检测结核性脑膜炎的灵敏度为12.28%,漏诊率为87.72%,RT-PCR法检测的灵敏度为54.39%,漏诊率为45.61%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 RT-PCR法诊断结核性脑膜炎具有灵敏度好,准确度高等特点,临床有重要的指导意义。

用聚合酶链反应技术探讨B群链球菌与胎膜早破的关系

目的:探讨应用聚合酶链反应技术检测B群链球菌与胎膜早破之间的关系。方法:将316例孕妇采取细菌培养法进行生殖道B群链球菌筛查的结果汇总为对照组,再采取聚合酶链反应技术对同样316例孕妇实施生殖道B群链球菌筛查并将结果汇总为研究组;对比两组筛查结果的准确性。而后按照筛查结果将316例孕妇分为阳性组与阴性组,通过对比分析B群链球菌与发生胎膜早破的关系。结果:对照组生殖道B群链球菌阳性检测准确率为76.53%,研究组准确率为98.98%;阳性组胎膜早破发生率为29.59%,阴性组发生率为11.93%。结论:聚合酶链反应技术的检出率明显高于细菌培养法,尽早检出生殖道B群链球菌感染可有效降低或预防胎膜早破的发生。

聚合酶链反应技术检测阴道毛滴虫的研究

目的:建立PCR检测阴道毛滴虫的方法。方法:按照滴虫TV-E650-1基因设计一对引物,采用PCR技术扩增滴虫目的基因,将扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳,根据扩增及电泳结果判断PCR法体外诊断阴道毛滴虫感染的可行性。同时,通过与其它常见阴道微生物PCR结果对比,判断所设计引物的特异性;根据模板DNA的稀释倍数判断引物的敏感性。结果:设计的一对引物以滴虫DNA为模板,扩增出大小为438bp的基因片断,与目的基因相符;空白对照扩增阴性。以乳酸杆菌、大肠杆菌、阴道加德纳菌等阴道常见微生物DNA为模板,扩增结果均为阴性。将滴虫DNA稀释至1 000倍(相当于1.36pg/μL)仍可见明显扩增。结论:PCR检测滴虫方法可行,且准确,特异性好,敏感性高,能用于临床批量检测,可作为体外诊断阴道毛滴虫感染及流行病学调查的候选方法。

脆性X染色体综合征快速筛查的聚合酶链反应技术

目的 建立一种简便的筛查脆性X综合征的聚合酶链反应 (PCR)方法。 方法 提取 76例原因不明的智力低下男性患儿外周血DNA ,用PCR扩增FMR1基因的三核苷酸重复序列。 结果 96 1% (73/ 76 )的标本PCR反应出现产物 ,条带大小为 4 0 0～ 5 0 0bp ,相当于三核苷酸重复次数 2 0～ 30 ;3 9% (3/ 76 )PCR反应无产物 ,其中 2例被证实为脆性X综合征患者。 结论 该方法简便、快速、价廉 ,可用于高危人群的快速筛查。

聚合酶链反应技术对棘阿米巴角膜炎诊断的临床应用

目的 探讨聚合酶链反应 (PCR)技术临床应用于棘阿米巴角膜炎诊断的可行性及优越性。方法 以一段特异性通用引物并配合热启动聚合酶链反应技术来检测临床标本中的棘阿米巴原虫。结果 在门诊初诊为棘阿米巴角膜炎的 13例 (13只眼 )中 ,通过 PCR检测法有 11只眼证实为棘阿米巴原虫感染 ,同时角膜刮片染色后镜检有 5例发现了棘阿米巴包囊。

聚合酶链反应技术应用进展

全血不需分离细胞 ,将红细胞低渗溶解 ,直接取细胞胞溶物进行PCR基因分型 ,结果可靠 ;血管紧张素转换酶 (ACE)等位基因缺失在缺血性心肌病中有重要意义 ,而ACE基因插入 /缺失 (I/D)多态性检测由FerencSomogyVari提出的迅速PCR ,在Lightcycler仪器上采用荧光标记的寡核苷酸杂交探针能准确快速的进行基因分型 ;DNA模板无需变性 ,进行HBVDNA扩增。

荧光定量聚合酶链反应技术在儿童肺炎支原体及肺炎衣原体感染中的应用

肺炎支原体是1898年Nocord等发现的一种类似细菌但不具细胞壁的原核微生物。肺炎支原体是对人类有致病性的病原体，引起原发性非典型肺炎（细支气管周围间质性肺炎），还可引起全身多脏器损害。肺炎支原体感染的临床表现复杂多样，无特异性，有效的实验室诊断对于判断肺炎支原体感染具有重要的意义。

FQ-聚合酶链反应技术在结核病诊断中的价值

结核病是一种严重危害人类健康的传染病，近几年来，全球结核发病率有所回升。据2011年资料，全球每年新增870万结核患者，140万人死于结核病。目前，我国大约有600多万肺结核患者，每年约有25万人因结核病死亡，亦呈增长的趋势。其原因有很多，其中结核病尤其肺外结核和菌阴肺结核病的早期诊断不理想是其重要原因。

聚合酶链反应技术检测后天感染鸭乙型肝炎病毒模型中共价闭环状DNA表达

目的:聚合酶链反应方法检测后天感染鸭乙型肝炎病毒模型中共价闭环状DNA的表达。方法:实验于2006-06/2007-01在解放军总医院老年医学研究所完成。1日龄北京雏鸭6只经腿静脉注射上海麻鸭DHBV阳性血清(中国医学科学院提供)0.2mL/只,感染7d后处死动物取血分离血清并取肝组织,同时取同日龄正常鸭6只肝组织作为对照。聚合酶链反应技术检测肝脏、血清中鸭乙型肝炎病毒DNA及共价闭环状DNA的表达。结果:①血清斑点杂交显示模型制备成功,平均病毒吸光度值为0.62±0.12。②琼脂糖凝胶电泳显示,模型肝脏、血清中DHBVDNA均高表达,而共价闭环状DNA仅在模型肝脏表达,正常鸭DNA与共价闭环状DNA均不表达。结论:后天感染鸭乙型肝炎病毒模型中共价闭环状DNA高表达,可作为临床乙肝药物筛选模型。

聚合酶链反应技术对慢性粒细胞白血病进行分子学诊断和监测

慢性粒细胞白血病(CML)是一种起源于造血多能干细胞的肿瘤性疾病。Ph染色体是CML的标记染色体,其分子基础是第9号染色体上的原癌基因c—abl易位至第22号染色体,并与bcr基因5’端相连接,形成bcr/abl融合基因。为从分子水平探讨bcr/abl融合基因在CML诊断及微量残留病(MRD)监测等方面的意义,我们应用筑巢法逆转录/聚合酶链反应(RT/PCR)技术。

用聚合酶链反应技术鉴别恶性疟原虫不同地理株的初步研究

目的 阐明 Fcc1/ HN株与云南株间的不同生物学特性。 方法 用 M2 6 - 32 作探针 ,筛选恶性疟原虫 c DNA基因表达文库 ,根据所获得的靶抗原决定簇表位的基因序列设计引物 ,分别进行 PCR扩增 ;地高辛酶促生物标记 Fcc1- HN株 DNA的 PCR扩增产物 ,分别与 Fcc1/ HN株 DNA、云南株 DNA和阳性克隆 5 11的扩增产物杂交。 结果 PCR扩增后 Fcc1/ HN株 DNA在约 5 0 0 bp和 4 5 0 bp处有 2条特异性条带 ;云南株 DNA在约 5 0 0 bp处有 1条较淡的条带和 130 0bp处一较亮的特异性条带 ;阳性克隆 5 11仅在约 5 0 0 bp处有 1条特异性条带。标记探针能与克隆 DNA、恶性疟原虫Fcc1/ HN株和云南株的 PCR扩增产物杂交。 结论 恶性疟原虫 Fcc1/ HN株与云南株在基因组 DNA结构上可能存在差异。

聚合酶链反应技术在β－地中海贫血基因诊断中的应用

从云南省德宏州、西双版纳州、玉溪地区和昆明地区采集临床诊断为β－地中海贫血的病例２４例，经提取ＤＮＡ，聚合酶链反应和非同位素（加强化学发光，ＥＣＬ）标记寡核苷酸探针点杂交进行基因诊断。文献报道β－地中海贫血的基因突变主要有十种类型。本组在已完成杂文的病例中最常见的突变为Ｃｏｄｏｎｓ４１－４２，即编码子４１－４２发生框架位移，减少ＴＴＣＴ四个碱基，这与国内广东、四川的研究相似。

探究荧光定量聚合酶链反应技术在常见染色体非整倍体检测中的应用效果

目的:探究荧光定量聚合酶链反应(quantitative fluorescent polymerase chain reaction,QF-PCR)技术在常见染色体非整倍体检测中的应用效果。方法:选取2019年1月至2020年12月产前诊断500例标本中的13、18、21、X、Y染色体,并与传统的G显带染色体核型分析结果做对比。结果:在500例样本中,通过QF-PCR技术检测出非嵌合型染色体数目异常有60例,其中有21三体综合征25例,18三体综合征20例,13三体综合征5例,X单体3例,XXX1例,XXY2例,XYY2例,XXX合并18三体综合征2例,检测结果与核型分析结果一致。结论:QF-PCR技术在常见染色体非整倍体检测中具有很大的应用价值,在临床检测中的应用效果较好。

用聚合酶链反应技术诊断结核病

用聚合酶链反应技术对结核杆菌特异性重复序列ＩＳ６１１０部分基因１２３ｂＰ的片段进行扩增。该法检测人型结核杆菌灵敏度可达到１０ｆｇＤＮＡ，对１４９份结核患者临床标本检测结果显示ＰＣＲ总阳性率（６９．１％）明显高于直接涂片荧光镜检（１５．４％）与细菌培养（１０．１％）的阳性率（Ｐ＜０．０１）。研究表明ＰＣＲ是一种特异、敏感、快速诊断结核病的好方法，值得推广。

应用聚合酶链反应技术(PCR)检测HBV-DNA和HCV-RNA的方法探讨

随着国内外对乙型肝炎和丙型肝炎病毒研究的深入,我们与2002～2004年间用免疫PCR对HBV-DNA,用套式PCR对HCV-RNA进行检测,对296份新入院的急性肝炎病人血清进行了检测,共检出抗-HCVIgM阳性14份,HCV-RNA阳性6份,检出HBV-DNA阳性53份.在试验过程中,取得了一定的经验和体会,现总结如下: