聚合酶链反应检测4种猪源细胞系中的内源性反转录病毒(英文)

为了建立检测猪内源性反转录病毒 (porcine endogenous retrovirus,PERV)的特异性方法 ,根据已发表的 PERV的序列 ,设计并合成了针对 PERV核心蛋白 (gag)、多聚酶 (pol)、囊膜蛋白 (env)基因的 3对引物 ,预期扩增片段分别为 36 1、15 0、2 6 5 bp。应用 PCR技术检测了 PERV在 4株猪源细胞中的整合情况。结果表明 ,在所有被检细胞的基因组中均存在有 PERV的前病毒序列 ;应用 RT- PCR检测上述 4株猪源细胞中 PERV特异性 m RNA的表达 ,结果均为阳性。试验还对建立的上述 2种方法的特异性进行了探讨 ,结果表明试验建立的 PERV检测法具有较高的特异性。该方法的建立为进一步研究 PERV奠定了基础 ,还可对异种移植动物模型及异种移植受体进行病原安全性监测。

聚合酶链反应检测肝硬化患者腹水中细菌DNA

目的:探讨PCR方法检测肝硬化患者腹水中细菌DNA的可行性。方法:在细菌16SrRNA基因保守区设计一对通用引物,对7种对照菌株、人基因组DNA、HBVDNA、3 7份肝硬化患者腹水进行聚合酶链反应扩增。结果:7种对照菌株均获得5 3 0bpDNA片段。而与人基因组DNA、HBVDNA无交叉阳性反应,敏感性试验可检测出1pg的细菌DNA。3 7份腹水中有9份获得5 3bpDNA片段,阳性率2 4 3 % (9/3 7) ,而腹水细菌培养阳性率为5 4%(2 /3 7) ,两者比较差异有显著性意义(P <0 0 5 )。结论:将通用引物通过PCR方法扩增细菌16SrRNA基因,具有高度敏感性、特异性,可应用于肝硬化患者腹水中细菌DNA的检测及细菌移位的研究。

实时荧光聚合酶链反应检测视神经损伤后NgR mRNA表达的变化

目的:定量检测成年大鼠视神经损伤后NgRmR-NA表达的变化情况,探讨Nogo-A和NgR在视神经损伤后的表达变化间的关系。方法:采用荧光定量PCR(FluoresenceQuantivepolymerasechainreaction,FQ-PCR)法,定量分析视神经损伤后1,3,5,7,15d视神经NgRmRNA表达的变化。结果:大鼠视神经钳夹伤后其NgRmRNA表达无显著变化。结论:Nogo-A和其受体NgR表达变化的不一致,提示了Nogo-A除了抑制再生外,可能还有其它尚未阐明的功能。

荧光定量聚合酶链反应检测肺结核和非典型分枝菌肺病的结果分析

目的了解荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术检测在临床工作中对结核分枝杆菌检测的敏感性和特异性,鉴别结核分枝杆菌和非典型分枝杆菌。方法留取病者痰液行FQ-PCR检测及抗酸杆菌培养鉴定。结果FQ-PCR监测结核病组阳性率52.5%,而非典型分枝杆菌肺病组也有12.5%阳性率,经χ2检查P<0.01,两者差异显著。结论FQ-PCR检测对于鉴别结核分枝杆菌和非典型分枝杆菌有一定的意义,但在临床工作中的敏感性和特异性有待提高。

反转录聚合酶链反应检测水产品中甲型肝炎病毒的研究

目的:建立一种特异、灵敏的RT-PCR方法检测水产品中甲肝病毒。方法:采用抗体捕获RT-PCR和直接RNA提取RT-PCR对细胞传代的甲肝病毒、模拟染毒水产品中甲肝病毒、上海农贸市场水产品中的甲肝病毒进行检测。结果:2种RT-PCR检测细胞传代的甲肝病毒,检测灵敏度无明显区别;而对模拟染毒水产品中甲肝病毒的检测,两者检测灵敏度有显著差异。对农贸市场94份水产品中的甲肝病毒检测,检出率分别为2.13%、13.83%。结论:对于水产品中的甲肝病毒的检测,直接RNA提取RT-PCR要比抗体捕获RT-PCR方法灵敏。

聚合酶链反应检测石蜡包埋组织中TORCH感染

本文应用聚合酶链反应检测９８例福尔马林固定、石蜡包埋组织中ＴＯＸ、ＣＭＶ、ＨＳＶ－ⅡＤＮＡ，阳性率分别为１７．２４％、２３．４７％、１０．２０％。提示ＴＯＸ、ＣＭＶ、ＨＳＶ－Ⅱ感染与胎儿畸形、死亡密切相关。本文指出该方法简便、快速，可有效地用于临床陈旧标本的回顾性研究。

实时荧光定量聚合酶链反应检测泌尿生殖道感染病原体结果分析

沙眼衣原体（CT）、解脲脲原体（Uu）、淋球菌（NG）是性传播疾病（STD）的重要病原体，可引起尿道（宫颈）炎，输卵管炎、男女不孕不育、胎儿宫内发育迟缓和先兆流产等。CT、Uu、NG混合感染使临床症状更为复杂，难以诊断。我们对2967例就诊者检测结果进行了统计研究，了解秦皇岛地区CT、Uu、NG的感染情况，为本地区STD的防治提供参考，现将结果报告如下。

应用聚合酶链反应检测真菌性角膜炎

目的:探讨应用聚合酶链反应(PCR)快速检测临床疑似真菌性角膜炎(FK)的方法。方法:以源于医学机会性致病性真菌18srDNA保守区的一对寡核苷酸序列B2F(5'-ACTTTCGTAGGATAG-3')和B4R(5'-TGATCGTCTTCGATAAATA-3')为通用引物,对临床疑似FK的标本进行PCR,并与培养进行对比。结果:在687bp处出现DNA扩增带者为阳性。30份临床标本的真菌培养率为23.3%,而经扩增阳性率为50%。结论:真菌通用引物PCR反应检测真菌性角膜溃疡有较好的敏感性和特异性。

龋病的致龋性变形链球菌聚合酶链反应检测

龋病是一种由口腔中多种因素复合作用所导致的牙齿硬组织进行性病损，表现为无机质的脱矿和有机质的分解，随着病程的发展形成实质性病损。

荧光定量聚合酶链反应检测多种泌尿生殖道病原体感染分析

性传播疾病（sexually transmitted diseases,STD）是一类以性接触为主要传播方式的泌尿生殖道感染疾病。STD病原体主要有以下几种：沙眼衣原体（CT）、解脲支原体（Uu）、淋球菌（NG）、人乳头瘤病毒（HPV）、单纯疱疹病毒Ⅱ型（HSV-Ⅱ）、部分真菌等。其中CT、Uu、NG是3种最常见的性传播疾病的病原体,我们将此3种病原体作为主要研究对象,

用Nested聚合酶链反应检测嗜肺军团菌的实验研究

用Nested聚合酶链反应(Nested PCR)法检测嗜肺军团菌种。Nested PCR法所用的两对寡核苷酸引物按编码24 kDa嗜肺军团菌表面抗原的基团片段序列设计的。用此两对引物对实验的军团菌种和非军团菌种细菌DNA进行扩增,只有嗜肺军团菌种DNA被扩增,而其他军团菌种和非军团菌属细菌没有被扩增。第1步和第2步PCR分别检测到最小量为10pg和10 fg的靶DNA。对不同量的嗜肺军团菌配制成的痰标本进行检测,能检测到0.1cfu/ml的嗜肺军团菌,只需12h。这些结果显示Nested PCR法检测嗜肺军团菌特异性强,敏感性高。此方法为从临床标本和环境材料中早期、快速检测到嗜肺军团菌提供了有效的工具。

聚合酶链反应检测首次排空尿诊断男性泌尿生殖道解脲支原体感染的研究

目的 评估聚合酶链反应 (PCR)检测首次排空尿 (FVU)诊断男性泌尿生殖道解脲支原体 (Uu)感染的实用性。方法 对 172例男性非淋菌性尿道炎患者的FVU进行PCR检测和培养 ,作为对比同时取尿道拭子做PCR及培养 ,以拭子培养为金标准判断各种方法的检测效果。结果 FVU PCR法和FVU培养法的敏感性分别为10 0 0 %和 98 3% ,特异性分别为 95 6 %和 98 2 % ,阳性预测值 (PPV)分别为 92 1%和 96 6 % ,阴性预测值 (NPV)分别为 10 0 0 %和 99 1% ,总一致性分别为 97 1%和 98 3%。结论 PCR检测FVU法是具高度敏感性和特异性的非创伤性男性泌尿生殖道解脲支原体实验室诊断方法 ,FVU可代替拭子标本进行PCR以诊断男性泌尿生殖道Uu感染。

实时荧光定量聚合酶链反应检测在乙型肝炎诊断中的应用

我国是乙型肝炎病毒（HBV）高流行区，50％～70％的人受到感染，8％～10％是HBV携带者，肝炎患者中60％是慢性肝炎患者，HBV又与肝硬化和原发性肝癌密切相关。

荧光聚合酶链反应检测急性早幼粒细胞白血病PML／RARα的临床价值

实时定量逆转录聚合酶链反应是目前最精确地检测急性白血病微小残留病的方法,对急性早幼粒细胞PML／RARα融合基因表达量的测定及动态变化监测,取得PML／RARα融合基因的表达拷贝数,对临床治疗、预防复发、延长患者生存期,最终治愈白血病具有重要的指导意义。

聚合酶链反应检测淋菌的结果分析

本文应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术对３８５３例疑为淋菌感染患者进行了检测，检出阳性者９６１例，阳性率２４．９％，对照培养法５７６例，检出阳性者３８例，阳性率６．６％。结果表明ＰＣＲ法具有高度特异性、敏感性和选择性，且快速。简便，是临床处理大批标本的一种最理想的方法，适于临床推广。

荧光定量聚合酶链反应检测在婴儿人巨细胞病毒感染中的临床意义

人巨细胞病毒（human cytomegalovirus ,HCMV）是巨细胞包涵体病的病原体 ,由于感染的细胞肿大并具有巨大的核内包涵体而命名.HCMV 在人群中感染极为普遍 ,多为隐性或潜伏期感染 ,初次感染在2 岁以下 ,通常呈隐性感染 ,少数人有临床症状.病毒长期潜伏于体内 ,当机体免疫功能低下时 ,如怀孕、多次输血或器官移植等条件时病毒被激活 ,发生显性感染;HCMV 感染是新生儿先天性感染最常见的病原微生物之一 ,HCMV 的母婴传播有3 种途径： 通过胎盘的垂直传播、通过产道的传播及通过母乳传播.母乳传播是新生儿感染HCMV 的一个重要途径.

聚合酶链反应检测实验动物弓形虫核酸的研究

建立弓形虫动物模型，常规方法提取肝、脾、肾、肺等组织DNA，应用聚合酶链反应（PCR）扩增，产物经电泳检测显示199bp的弓形虫特异带谱。并以γ－32p标记克隆的弓形虫特异DNA片段为探针，对扩增产物行Southern印迹分析，结果上述4种标本均出现阳性杂交带，进一步证实扩增条带是弓形虫特异DNA顺序。同时用酶标法检测显示鼠血清弓形虫抗体IgG；阳性。组织病理学检查结果，肝组织损伤较严重，肝细胞肿大，肝窦消失，脾、肾、肺组织可见轻微的病理改变。另外本文介绍一种简单PCR方法[1]，取鼠尾静脉血2μl直接进行扩增，结果与酚-氯仿法提取的DNA扩增结果一致。