猪肌内脂肪前体细胞分离培养和成脂诱导分化研究

为建立猪肌内脂肪前体细胞分离培养方法,为后续进行猪肌内脂肪沉积相关基因功能研究提供细胞模型,本研究采用胰酶消化法结合细胞差速贴壁法分离猪肌内脂肪前体细胞,通过诱导分化成功诱导出脂肪细胞,并进行油红O染色和甘油三酯含量检测。结果表明:采用胰酶消化结合细胞差速贴壁法能够成功分离出猪肌内脂肪前体细胞并稳定传代,获得的细胞纯度高,增殖和分化能力旺盛,具有典型特征的肌内脂肪前体细胞,冻存活率达90%以上;油红染色及甘油三酯含量检测结果显示,诱导分化第3天细胞内开始形成脂滴,第9天脂质沉积达高峰,继续培养至12 d甘油三酯含量增加不明显。综上,采用胰酶消化法结合细胞差速贴壁法能够获得稳定的猪肌内脂肪前体细胞,可为后续的基因功能分析提供实验素材。

基于山羊肌内前体脂肪细胞RNA-seq数据的新基因发掘与分析

为挖掘山羊(Capra hircus)肌内前体脂肪细胞分化前后的新基因并对其进行GO功能和KEGG通路富集分析.利用转录组测序(Transcriptome sequencing,RNA-seq)技术对山羊肌内前体脂肪细胞分化前后的两组细胞cDNA样品(n=3)进行高通量测序,有效数据与山羊参考基因组比对后利用StringTie软件组装新基因.基于|log2foldchange|>0和P-adj<0.05筛选获得差异表达新基因,并利用clusterProfiler R包针对GO和KEGG数据库对新基因进行GO功能及KEGG通路注释.结果表明,组装获得的201个新基因可定位在山羊29对常染色体上,且在染色体2、3、5、11、18和29上定位富集.山羊肌内脂肪细胞分化前后表达上调的新基因共28个,表达下调的新基因共57个.在GO功能富集方面,共21个新基因注释到277个GO功能亚类中,其中GO功能条目中参与生物过程、细胞组成和分子功能的基因分别占73.65%、3.97%和22.38%,且3个条目中显著富集的GO功能亚类分别与代谢功能、病毒组装和分子结合相关.此外,共21个新基因富集到16条KEGG通路中,其中氨基酸生物合成通路富集的新基因最多,为3个.研究结果挖掘了山羊肌内脂肪细胞分化前后的新基因201个,为揭示山羊肌内前体脂肪细胞分化相关的新基因并进一步完善山羊功能基因组提供基础数据.

鲜味受体TAS1R1/TAS1R3对从江香猪肌内前体脂肪细胞自噬及脂质代谢的调控研究

实验旨在研究鲜味受体(Taste Receptor Family 1 Subunit 1/Taste Receptor Family 1 Subunit 3,TAS1R1/TAS1R3)对从江香猪肌内前体脂肪细胞自噬及脂质代谢的影响,为发掘从江香猪肉质优良性状的形成机制提供思路。实验通过构建TAS1R3 shRNA干扰载体,并转染至从江香猪前体脂肪细胞以干扰TAS1R1/TAS1R3的表达水平;通过添加低浓度(2.5 mmol/L)、中浓度(5 mmol/L)、高浓度(10 mmol/L)L-谷氨酸作用于细胞不同时间以激活鲜味受体TAS1R1/TAS1R3,用qRT-PCR检测自噬相关基因以及脂质代谢相关基因的表达水平。结果表明:构建的干扰载体可有效干扰细胞内TAS1R1/TAS1R3的mRNA表达水平(P<0.01);哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)表达水平下降(P<0.01),自噬关键因子微管相关蛋白1轻链3B (MAP1LC3B)和Beclin 1表达水平上升(P<0.01);脂质代谢相关基因神经肽Y (NPY)、乙酰辅酶A羧化酶α(ACACA)表达水平均下降(P<0.01),脂蛋白脂肪酶(LPL)表达水平上升(P<0.01);10 mmol/L L-谷氨酸处理细胞6 h后,细胞内TAS1R1/TAS1R3的mRNA表达水平升高(P <0.01),mTOR表达水平上调(P<0.05),MAP1LC3B和Beclin1的表达水平下降(P<0.01),NPY、ACACA的表达水平升高(P<0.05),LPL表达水平下降(P<0.01)。本研究表明TAS1R1/TAS1R3调节从江香猪肌内前体脂肪细胞自噬和脂质代谢过程,但这两个过程是否相关仍需后续研究。