血清长链非编码RNA肌动蛋白纤维相关蛋白1-反义RNA1水平与钙化性主动脉瓣狭窄病人左心室功能的相关性研究

目的 分析血清长链非编码RNA(lncRNA)肌动蛋白纤维相关蛋白1-反义RNA1(AFAP1-AS1)表达水平与钙化性主动脉瓣狭窄(CAS)病人左心室收缩及舒张功能的相关性。方法 于2020年1月至2021年12月,选取中国中医科学院广安门医院就诊的CAS病人129例作为CAS组[左心室射血分数(LVEF)≥50%],同期该院健康志愿者130例作为对照组。收集病人人口学资料、超声及实验室生化指标,检测血清lncRNA AFAP1-AS1表达。受试者操作特征曲线(ROC曲线)分析血清lncRNA AFAP1-AS1诊断CAS效能。结果 对照组血清lncRNA AFAP1-AS1表达水平(1.15±0.18)低于CAS组(1.58±0.30)(P<0.001)。轻度狭窄者血清lncRNA AFAP1-AS1表达水平(1.37±0.26)低于中、重度狭窄者,而中度狭窄者lncRNA AFAP1-AS1表达水平(1.59±0.30)低于重度狭窄者(1.79±0.34)(P<0.001)。ROC结果显示,血清lncRNA AFAP1-AS1诊断CAS、重度狭窄的曲线下面积分别为0.86[95%CI:(0.82,0.91)]、0.88[95%CI:(0.82,0.94)]。CAS组AVA水平低于对照组(P<0.001),左室舒张末期内径(LVEDD)、左室舒张末期容积(LVEDV)、室间隔厚度(IVST)、左室后壁厚度(LVPWT)、左房前后径(LAD)、主动脉瓣平均压差(PGmean)、主动脉瓣峰值流速(Vmax)水平高于对照组(均P<0.001)。相关性分析显示,血清lncRNA AFAP1-AS1与LVEDD、Vmax、二尖瓣口舒张早期血流速度峰值(E峰)、二尖瓣口舒张晚期血流速度峰值(A峰)、LVEDV、PGmean、LVESD呈正相关(r=0.60、0.66、0.72、0.68、0.56、0.57、0.50,均P<0.001),与LVEF、AVA呈负相关(r=-0.78、-0.62,均P<0.001)。结论 CAS病人血清lncRNA AFAP1-AS1表达水平升高,与CAS病情严重程度以及左心室舒张、收缩功能有关,并可作为无创血清标志物辅助临床诊断CAS。

超声弹性成像联合细针抽吸洗脱液中肌动蛋白丝相关蛋白1反义RNA1检测对甲状腺结节的诊断价值

目的探讨超声弹性成像(ultrasound elastography,USE)联合细针抽吸(fine-needle aspiration,FNA)洗脱液中长链非编码RNA肌动蛋白丝相关蛋白1反义RNA1(actin filament associated protein 1 anti-sense RNA1,AFAP1-AS1)检测对甲状腺结节良恶性的诊断价值。方法回顾性收集2020年1月至2022年6月期间在深圳市福田区第二人民医院接受诊治且符合本研究纳入标准的甲状腺结节患者,患者术前均行甲状腺结节USE评分并检测FNA洗脱液中AFAP1-AS1 mRNA表达,以手术切除标本的病理检查结果为金标准,分析并评估USE评分联合FNA洗脱液中AFAP1-AS1 mRNA检测对甲状腺结节良恶性的诊断价值。结果本研究共纳入124例患者(174枚甲状腺结节),术后组织病理学诊断62枚(45例)甲状腺结节为恶性。良性和恶性甲状腺结节的USE评分分级构成比总体比较差异有统计学意义(Z=8.82,P<0.001);良性甲状腺结节的USE评分明显低于恶性甲状腺结节[2.28±1.16比4.26±1.01,均数差(mean difference,MD)及其95%可信区间(95%confidence interval,95%CI)=2.98(2.76,3.20),t=30.85,P<0.001]。恶性甲状腺结节的FNA洗脱液中AFAP1-AS1 mRNA表达高于良性甲状腺结节[1.45±0.27比1.13±0.16,MD(95%CI)=1.45(1.39,1.50),t=10.69,P<0.001]。Pearson相关性分析结果显示,甲状腺结节USE评分和FNA洗脱液中AFAP1-AS1 mRNA表达之间呈正相关(r=0.58,P<0.001)。受试者操作特征曲线评估USE评分联合FNA洗脱液中AFAP1-AS1 mRNA表达对甲状腺结节良恶性判断的敏感度为93.5%、特异度为88.4%,曲线下面积(95%CI)为0.91(0.86,0.96)。结论从本研究结果提示,USE评分联合FNA洗脱液中AFAP1-AS1 mRNA检测较单独USE评分或AFAP1-AS1 mRNA表达检测对区分甲状腺结节良恶性更为敏感,显示出潜在的诊断效能。

长链非编码RNA肌动蛋白纤维相关蛋白1-反义RNA1对人绒毛膜癌细胞增殖、迁移和凋亡的影响

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)肌动蛋白纤维相关蛋白1-反义RNA1(AFAP1-AS1)对人绒毛膜癌细胞增殖、迁移和凋亡的影响。方法将人绒毛膜癌细胞JEG-3随机分为空白对照组、空白载体组和LncRNA AFAP1-AS1过表达组。空白对照组细胞未做任何处理,空白载体组细胞转染空白载体,LncRNA AFAP1-AS1过表达组细胞转染LncRNA AFAP1-AS1过表达载体。分别采用实时荧光定量聚合酶链反应和Western blot法检测JEG-3细胞中Caspase-3、Caspase-9 mRNA和蛋白的表达,采用细胞计数试剂盒-8实验、Transwell小室实验及流式细胞术检测JEG-3细胞的增殖、迁移和凋亡情况。结果 LncRNA AFAP1-AS1过表达组JEG-3细胞中Caspase-3、Caspase-9 mRNA和蛋白相对表达量均高于空白对照组和空白载体组(P <0. 05);空白对照组和空白载体组JEG-3细胞中Caspase-3、Caspase-9 mRNA及蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P> 0. 05)。LncRNA AFAP1-AS1过表达组细胞增殖能力、透过分子筛的细胞数显著低于空白对照组和空白载体组,细胞凋亡率显著高于空白对照组和空白载体组(P <0. 05);空白对照组与空白载体组细胞增殖能力、透过分子筛的细胞数及细胞凋亡率比较差异均无统计学意义(P>0. 05)。结论 LncRNA AFAP1-AS1可上调人绒毛膜癌JEG-3细胞中Caspase-3、Caspase-9 mRNA及蛋白水平,对JEG-3细胞的增殖及迁移有抑制作用,同时可诱导其凋亡。

肌动蛋白纤维相关蛋白1-反义RNA 1:一种新的致癌长链非编码RNA

肌动蛋白纤维相关蛋白1-反义RNA 1(AFAP1-AS1)为一个新发现的促癌长链非编码RNA(lnc RNA)。AFAP1-AS1定位于人类4号染色体4p16.1区域,被证实在食管癌、胰腺癌、鼻咽癌、肺癌、卵巢癌、结直肠癌、胆道癌、胃癌、肝细胞癌、乳腺癌、舌鳞状细胞癌、视网膜母细胞瘤、胶质瘤和骨肉瘤等多种肿瘤组织中表达上调。AFAP1-AS1过表达与肿瘤大小、淋巴转移、远处转移、TNM分期及不良预后等恶性肿瘤临床病理特征密切相关。此外,AFAP1-AS1可通过调控AFAP1和EMT相关基因、Rho/Rac代谢通路、PTEN/p-AKT通路等促进肿瘤细胞增殖、迁移和侵袭,影响细胞周期进程及抑制细胞凋亡等。

长链非编码RNA肌动蛋白纤维相关蛋白1-反义RNA1在口腔鳞状细胞癌中的表达及其相关功能

目的分析长链非编码RNA(lncRNA)肌动蛋白纤维相关蛋白1-反义RNA1(AFAP1-AS1)在口腔鳞状细胞癌(OSCC)中的表达及其对OSCC细胞生物行为学的影响,初步探讨其可能的作用机制。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测OSCC患者(55例)癌组织、癌旁正常黏膜组织及人口腔鳞状细胞癌SCC25、人正常口腔角质细胞株(NOK)细胞中lncRNA AFAP1-AS1的表达,分析AFAP1-AS1与OSCC患者病理特征的相关性,通过Kaplan-Meier生存曲线分析AFAP1-AS1与患者预后的关系。AFAP1-AS1 siRNA转染SCC25细胞,细胞计数(CCK-8)及Transwell实验分别检测细胞增殖、迁移和侵袭的变化,蛋白质印迹(Western blot)检测侵袭相关蛋白、肌动蛋白纤维相关蛋白1(AFAP1)及Rho GTP酶家族成员蛋白的表达情况,免疫荧光染色检测细胞骨架肌动蛋白微丝结构的变化。结果OSCC组织中AFAP1-AS1的表达高于癌旁正常黏膜组织,SCC25细胞中AFAP1-AS1的表达高于NOK细胞(P<0.001)。AFAP1-AS1的表达与OSCC的分化程度、TNM分期及淋巴结转移密切相关(P<0.05),AFAP1-AS1高表达患者的生存率低于AFAP1-AS1低表达者(P<0.05)。AFAP1-AS1 siRNA转染后AFAP1-AS1的表达水平下调,SCC25细胞的增殖、迁移和侵袭能力降低,AFAP1、RhoA、Rac2、Rab10、RhoGDI和Pfn1的表达上调,RhoC的表达下调,细胞骨架中应力纤维丝减少,肌动蛋白完整性丢失。结论lncRNA AFAP1-AS1在OSCC组织及SCC25细胞中高表达,与OSCC的发生进展及预后相关。下调AFAP1-AS1能够抑制OSCC的增殖、迁移和侵袭能力,其可能是通过调控肌动蛋白纤维丝的完整性实现的。

LncRNA ZEB1-AS1和LncRNA SOX2OT在糖尿病肾病患者中的表达及与肾功能的相关性研究

目的探究长链非编码RNA锌指E盒结合同源盒蛋白1反义链1(LncRNA ZEB1-AS1)和长链非编码RNA性别决定相关基因簇2重叠转录本(LncRNA SOX2OT)在糖尿病肾病(DN)患者中的表达及与肾功能的相关性。方法选取于2021年11月—2023年12月在武汉大学人民医院肾内科收治的DN患者106例为DN组,并根据24 h尿蛋白定量(24 h Upro)水平分为正常蛋白尿亚组43例(<30 mg)、微量蛋白尿亚组39例(30~<300 mg)、大量蛋白尿亚组24例(≥300 mg),另选取同期医院单纯糖尿病患者106例作对照组,检测患者血清LncRNA ZEB1-AS1、LncRNA SOX2OT水平;Pearson法分析LncRNA ZEB1-AS1和LncRNA SOX2OT与肾功能指标的相关性;Logistic分析影响DN患者肾功能损伤的因素。结果DN组血清LncRNA ZEB1-AS1、LncRNA SOX2OT水平低于对照组(t=11.471、10.257,P均<0.001)。血清LncRNA ZEB1-AS1、LncRNA SOX2OT比较,正常尿蛋白亚组>微量尿蛋白亚组>大量尿蛋白亚组(F=58.720、117.722,P均<0.001),BUN、SCr、UA水平比较,正常尿蛋白亚组<微量尿蛋白亚组<大量尿蛋白亚组,差异均有统计学意义(F=122.493、595.589、53.178,P均<0.001);LncRNA ZEB1-AS1、LncRNA SOX2OT分别与BUN、SCr、UA呈负相关(r=-0.487、-0.498、-0.521,-0.527、-0.515、-0.534,P均<0.001);Logistic回归分析显示,糖尿病病程长及高BUN、SCr、UA水平是影响DN患者肾功能损伤的危险因素[OR(95%CI)=1.672(1.128~2.479)、2.839(1.534~5.253)、2.754(1.512~5.017)、2.693(1.464~4.954)],高LncRNA ZEB1-AS1、LncRNA SOX2OT是保护因素[OR(95%CI)=0.875(0.798~0.959)、0.898(0.832~0.969)]。结论血清LncRNA ZEB1-AS1、LncRNA SOX2OT水平与DN患者肾功能有关,可能是评估DN患者肾功能的潜在指标。

下调肌动蛋白丝相关蛋白1相似蛋白2表达对人肝癌Hep3B细胞增殖及凋亡的影响

目的观察肌动蛋白丝相关蛋白1相似蛋白2在人肝细胞癌细胞中的表达及下调后对增殖生存的影响并探讨其机制。方法以蛋白免疫印迹法(Western blot)及实时定量逆转录聚合酶链反应法(q RT-PCR)检测肝细胞癌细胞株中肌动蛋白丝相关蛋白1相似蛋白2表达,并采用小干扰RNA转染Hep3B细胞株对肌动蛋白丝相关蛋白1相似蛋白2表达进行下调,Western blot和q RT-PCR检测转染效率、增殖凋亡相关基因表达;甲基噻唑基四唑检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期及凋亡。结果肌动蛋白丝相关蛋白1相似蛋白2蛋白及m RNA在肝癌细胞株Hep3B、Huh7、Hep G2、MHCC97H中均有表达,在Hep3B细胞株中表达量最高(F=5.742,P<0.01;F=3.452,P<0.05);与空白对照(si NC)组比较,si肌动蛋白丝相关蛋白1相似蛋白2组中P-P21及磷酸化的蛋白激酶B蛋白表达下调(t=8.462,P<0.01;t=9.742,P<0.01),P21、蛋白激酶B及Cleaved Capase-9蛋白表达上调(t=12.247,P<0.001;t=6.452,P<0.01;t=11.634,P<0.001;t=12.273,P<0.001);与si NC组比较,在72 h和96 h,si肌动蛋白丝相关蛋白1相似蛋白2表达下调后Hep3B细胞增殖能力下降(t=8.176,P<0.01;t=2.246,P<0.05),Hep3B停留在G1期比例增高,G_2及S期比例减少(t=4.23,P<0.05;t=2.13,P<0.05;t=5.72,P<0.05),凋亡率升高(t=8.633,P<0.01)。结论下调肌动蛋白丝相关蛋白1相似蛋白2表达通过P21磷酸化及磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路抑制肝细胞癌细胞增值及生存,可作为肝细胞癌治疗的靶向候选基因。

长链非编码RNA AFAP1-AS1靶向miR-195-5p对肝癌细胞生物学行为的影响

目的探讨长链非编码核糖核酸(lncRNA)AFAP1-AS1及微小核糖核酸-195-5p(miR-195-5p)对肝细胞癌(HCC)细胞生物学行为的影响。方法常规培养人HCC细胞系(HepG2、Hep3B、SMMC-7721、Bel7402、SK-hep1细胞)和正常人肝细胞(HL-7702细胞),用实时荧光定量PCR法检测AFAP1-AS1、miR-195-5p并筛选实验细胞。将对数生长期实验细胞随机分为si-AFAP1-AS1组、si-NC组,miR-195-5pmimics组、mimics-NC组,miR-195-5pinhibitor+si-NC组、miR-195-5p inhibitor+si-AFAP1-AS1组、inhibitor-NC+si-AFAP1-AS1组、inhibitor-NC+si-NC组,用Lipofectamine 2000试剂将相应质粒按照分组转染入细胞。用CCK-8实验、菌落形成实验检测细胞增殖能力,用流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期,用Transwell实验检测细胞迁移及侵袭能力,用双荧光素酶报告基因实验验证AFAP1-AS1与miR-195-5p的靶向关系。结果HCC细胞中AFAP1-AS1表达高于正常人肝细胞(P均<0.05),HCC细胞中miR-195-5p表达低于正常人肝细胞(P均<0.05)。由于SK-hep1细胞中AFAP1-AS1表达最高、miR-195-5p表达最低,因此,后续研究均采用SK-hep1细胞进行实验。与si-NC组比较,si-AFAP1-AS1组中AFAP1-AS1表达低、细胞增殖能力低、迁移和侵袭细胞少、G0/G1期细胞比例高、细胞凋亡率高(P均<0.05)。通过Starbase v3.0在线数据库预测发现,AFAP1-AS1与miR-195-5p有互补的结合位点。双荧光素酶报告基因实验结果显示,miR-NC组、miR-195-5p组共转染WT-AFAP1-AS1后相对荧光素酶活性比较差异有统计学意义(P<0.05),共转染MUT-AFAP1-AS1后相对荧光素酶活性比较差异无统计学意义(P>0.05)。与inhibitor-NC+si-NC组比较,si-NC+miR-195-5p inhibitor组细胞增殖能力高、迁移和侵袭细胞多、G_(0)/G_(1)期细胞比例低、细胞凋亡率低(P均<0.05),而si-AFAP1-AS1+miR-195-5p inhibitor组上述细胞生物学行为则相反。结论lncRNA AFAP1-AS1可能通过竞争性结合miR-195-5p参与调控HCC细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡等生物学行为。

基于单细胞RNA测序及生物信息学分析AFAP1L1在胃癌中的临床意义

目的分析肌动蛋白丝相关蛋白1相似蛋白1(AFAP1L1)在胃癌(GC)中的预后价值和分子功能。方法基于癌症基因组图谱(TCGA)的大量RNA测序数据,以及来自基因表达综合(GEO)的单细胞RNA测序(scRNA-seq)数据。采用Kaplan-Meier生存分析验证AFAP1L1的预后价值。富集分析探讨AFAP1L1的潜在生物学功能。另外,本研究确定AFAP1L1和抗肿瘤药物敏感性的关系。在单细胞水平上分析AFAP1L1的表达特征。结果AFAP1L1在GC患者中过表达与预后不良相关并参与血管生成的调控。此外,AFAP1L1与达沙替尼和福瑞替尼等抗肿瘤药物的敏感性相关。单细胞RNA测序(scRNA-seq)数据分析显示,AFAP1L1主要表达于GC样本中的内皮细胞中。结论基于生物信息学分析研究结果,AFAP1L1可以作为GC的预后生物标志物。

LncRNA、AFAP1-AS1表达与重症肌无力发病相关性研究

目的探讨lncRNA肌动蛋白丝相关蛋1-反义RNA1(AFAP1-AS1)在重症肌无力(MG)患者中的表达水平及其临床意义。方法收集2020年1月至2021年12月期间收治的35例MG患者和35例健康体检者的外周静脉血,提取外周血单个核细胞(PBMCs)中的总RNA,应用RT-PCR方法检测AFAP1 AS1的表达水平,并进一步分析在MG各亚组中AFAP1 AS1的表达水平,并分析AFAP1-AS1与定量MG评分(QMGS)之间的相关性。结果MG患者PBMCs中AFAP1-AS1的表达水平(1.498±1.136)显著高于健康对照组(0.619±0.707),差异有统计学意义(Z=-3.46,P=0.001)。AFAP1-AS1的表达水平在胸腺增生亚组(2.212±0.314)中明显高于胸腺正常组(1.076±0.197),差异有统计学意义(t=3.228,P=0.0028),在性别亚组及早发晚发亚组中差异无统计学意义。且AFAP1-AS1与QMGS评分之间不具有相关性。结论AFAP1-AS1在MG患者的PBMCs中表达水平明显上调,可视为MG新的分子诊断标志物。

肺癌骨转移患者血清lncRNA MALAT1和lncRNA A2M-AS1表达水平及临床价值

目的探究肺癌骨转移患者血清非编码RNA转移相关肺腺癌转录本1(lncRNA MALAT1)和非编码RNAα-2-巨球蛋白反义RNA 1(lncRNA A2M-AS1)表达水平及临床价值。方法选取2021年9月至2022年9月在哈励逊国际和平医院经过病理学检查确诊为肺癌的164例患者为肺癌组,其中经骨骼ECT检查发现84例者骨转移为骨转移组,80例无骨转移者为无骨转移组。同期选取80例肺部良性疾病患者为对照组。采用qRT-PCR法检测血清lncRNA MALAT1和lncRNA A2M-AS1表达水平;Pearson法分析lncRNA MALAT1和lncRNA A2M-AS1表达的相关性;ROC曲线分析lncRNA MALAT1和lncRNA A2M-AS1对肺癌骨转移的诊断价值。结果与对照组相比,肺癌组血清中lncRNA MALAT1表达水平显著升高(P<0.001),lncRNA A2M-AS1表达水平显著降低(P<0.001)。与无骨转移组相比,骨转移组血清中lncRNA MALAT1表达水平显著升高(P<0.001),lncRNA A2M-AS1表达水平显著降低(P<0.001)。相关性分析显示,肺癌骨转移患者血清中lncRNA MALAT1和lncRNA A2M-AS1表达水平呈负相关(r=-0.369,P<0.001)。lncRNA MALAT1和lncRNA A2M-AS1联合诊断肺癌骨转移的AUC高于两者单独诊断(P<0.05)。结论肺癌骨转移患者血清中lncRNA MALAT1表达水平显著升高,lncRNA A2M-AS1表达水平显著降低,两者联合对肺癌骨转移具有一定的诊断价值。

GAS6-AS1调节miR-370-3p/SPATA2轴对卵巢癌细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡和EMT的影响

目的:探讨长链非编码RNA GAS6反义RNA1(long non-coding RNA GAS6 antisense RNA1, lncRNA GAS6-AS1)调节miR-370-3p/精子发生相关蛋白2 (spermatogenesis-associated protein 2, SPATA2)轴对卵巢癌细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡和上皮间质转化(epithelial mesenchymal transformation, EMT)的影响。方法:qRT-PCR、Western blot分别检测癌旁组织、卵巢癌组织、人正常卵巢上皮细胞IOSE80及卵巢癌细胞系HO-8910、SKOV3、A2780中GAS6-AS1、miR-370-3p及SPATA2蛋白表达。将SKOV3细胞分为:对照组(NC组)、 si-NC组、si-GAS6-AS1组、mimic NC组、miR-370-3p mimic组、si-GAS6-AS1+inhibitor NC组、si-GAS6-AS1+miR-370-3p inhibitor组,qRT-PCR检测细胞中GAS6-AS1、miR-370-3p表达;CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;划痕愈合实验检测细胞迁移;Transwell实验检测细胞侵袭;Western blot检测SPATA2、细胞周期素D1(CyclinD1)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2-associated X,Bax)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、神经钙黏蛋白(N-cadherin)表达;双荧光素酶报告基因实验检测GAS6-AS1与miR-370-3p、 miR-370-3p与SPATA2的关系。结果:在卵巢癌组织和细胞中GAS6-AS1、SPATA2蛋白高表达,miR-370-3p低表达,且在SKOV3细胞中GAS6-AS1、SPATA2蛋白表达量最高,miR-370-3p表达水平最低,因此,选择SKOV3细胞为后续研究对象。与NC组、si-NC组比较,si-GAS6-AS1组GAS6-AS1、OD450值(24 h、48 h、72 h)、划痕愈合率、侵袭细胞数、SPATA2、CyclinD1、Vimentin、N-cadherin蛋白表达降低,miR-370-3p表达、细胞凋亡率、Bax、E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05);与NC组、mimic NC组比较,miR-370-3p mimic组OD450值(24 h、48 h、72 h)、划痕愈合率、侵袭细胞数、SPATA2、CyclinD1、Vimentin、N-cadherin蛋白表达降低,miR-370-3p表达、细胞凋亡率、Bax、E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05);miR-370-3p inhibitor减弱了沉默GAS6-AS1对SKOV3细胞增殖、迁移、侵袭及EMT的抑制及对细胞凋亡的促进作用。GAS6-AS1与miR-370-3p、miR-370-3p与SPATA2存在靶向调控关系。结论:沉默GAS6-AS1通过上调miR-370-3p来抑制SPATA2表达,从而抑制SKOV3细胞增殖、迁移、侵袭及EMT,并促进细胞凋亡。

MTT比色法检测苦瓜MAP30蛋白对5637细胞增殖、MALAT1、HOTAIR及UCA1的影响

目的探讨噻唑蓝(MTT)比色法检测苦瓜MAP30蛋白对5637细胞增殖、肺腺癌转移相关转录因子1(MALAT1)、长链非编码RNA HOX转录反义RNA(HOTAIR)基因及尿路上皮癌相关1(UCA1)的影响。方法按MTT法的相关操作原则与相关流程提取膀胱癌患者的苦瓜MAP30蛋白后进行克隆、表达及纯化处理,接着提取其处理膀胱癌5637细胞并进行MTT检测。探析苦瓜MAP30蛋白对5637细胞增殖和对MALAT1、HOTAIR及UCA1表达的相关性。结果抑制率:膀胱癌5637细胞增殖时所产生的抑制率越高时,MAP30蛋白浓度也越高,且时间越长,即MAP30蛋白浓度与膀胱癌5637细胞增殖呈正比(P<0.05)。凋亡率:膀胱癌5637细胞凋亡随MAP30浓度递增而逐渐上升,且MAP30浓度(培养48 h)为400μg/mL时,膀胱癌5637细胞凋亡率达到最高,MAP30浓度与膀胱癌5637细胞凋亡呈正比(P<0.05)。膀胱癌5637细胞lncRNA MALAT-1、HOTAIR、UCA1表达水平随苦瓜MAP30蛋白浓度的递增而逐渐降低,检测时间为48 h且苦瓜MAP30蛋白浓度为400μg/mL时上述三项指标的表达水平均显著低于48、24 h的其他苦瓜MAP30蛋白浓度(P<0.05)。结论苦瓜MAP30蛋白对膀胱癌5637细胞增殖的抑制和凋亡诱导方面有较好的效果,且可下调MALAT-1、HOTAIR、UCA1表达水平。

长链非编码RNA F-box富含亮氨酸的重复蛋白19反义RNA 1调节微小RNA-342-3p/自噬相关蛋白10轴对结直肠癌细胞增殖、迁移和奥沙利铂耐药性的影响实验研究

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA) F-box富含亮氨酸的重复蛋白19反义RNA 1(FBXL19-AS1)调节微小RNA(miR)-342-3p/自噬相关蛋白10(ATG10)轴对结直肠癌(CRC)细胞增殖、迁移和奥沙利铂耐药性的影响。方法:实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测组织及正常肠上皮细胞(NCM460)、人CRC细胞系RKO、HCT-8细胞及HCT-8/L-OHP细胞中FBXL19-AS1、miR-342-3p、ATG10 mRNA表达水平。将HCT-8细胞分为shFBXL19-AS1组、shRNA组、shFBXL19-AS1+inhibitor NC组和shFBXL19-AS1+miR-342-3p inhibitor组,并以未转染的细胞为空白组。将HCT-8/L-OHP细胞分为L-OHP+shFBXL19-AS1组、L-OHP+shRNA组、L-OHP+shFBXL19-AS1+inhibitor NC组和L-OHP+shFBXL19-AS1+miR-342-3p inhibitor组,并以未转染的细胞为空白组。细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测HCT-8、HCT-8/L-OHP细胞增殖及其耐药性。划痕实验检测细胞迁移能力。免疫印迹法(Western blot)检测P-糖蛋白(P-gp)、增殖蛋白(Ki-67)、迁移侵袭增强子因子1(MIEN1)、ATG10蛋白表达水平。双荧光素酶报告基因实验分析miR-342-3p与FBXL19-AS1、ATG10靶向关系。结果:FBXL19-AS1、ATG10 mRNA表达在HCT-8/L-OHP细胞及CRC组织中增加,miR-342-3p表达则降低(均P<0.05)。shFBXL19-AS1组细胞增殖、细胞迁移、FBXL19-AS1和ATG10 mRNA表达以及Ki-67、MIEN1、ATG10蛋白表达较shRNA组和空白组降低,miR-342-3p表达则增加(均P<0.05)。shFBXL19-AS1+miR-342-3p inhibitor组细胞增殖、细胞迁移、ATG10 mRNA以及Ki-67、MIEN1、ATG10蛋白表达较shFBXL19-AS1+inhibitor NC组增加,miR-342-3p表达则降低(均P<0.05)。L-OHP+shFBXL19-AS1组细胞增殖、细胞迁移、细胞耐药性及P-gp、Ki-67、MIEN1、ATG10蛋白表达较L-OHP+shRNA组和空白组降低(均P<0.05)。L-OHP+shFBXL19-AS1+miR-342-3p inhibitor组细胞增殖、细胞迁移、细胞耐药性及P-gp、Ki-67、MIEN1、ATG10蛋白表达较L-OHP+shFBXL19-AS1+inhibitor NC组增加(均P<0.05)。结论:干扰lncRNA FBXL19-AS1通过上调miR-342-3p/ATG10轴抑制CRC细胞的增殖、迁移,改善奥沙利铂耐药性。

敲低长链非编码RNA AFAP1-AS1抑制TPC-1甲状腺乳头状癌细胞上皮间质转化及其侵袭和迁移

目的检测甲状腺乳头状癌组织长链非编码RNA(lncRNA)肌动蛋白丝相关蛋白1反义RNA1(AFAP1-AS1)的表达,敲低TPC-1甲状腺乳头状癌细胞AFAP1-AS1,研究其对TPC-1细胞上皮间质转化(EMT)的影响及相关分子机制。方法采用实时定量PCR检测60例甲状腺乳头状癌组织lncRNA AFAP1-AS1表达;利用RNA干扰技术(RNAi)敲低TPC-1甲状腺乳头状癌细胞AFAP1-AS1,设置AFAP1-AS1敲低(shAFAP1-AS1)组和阴性对照RNA(shNC)组及未转染的TPC-1细胞为对照组。通过集落形成实验检测TPC-1细胞集落形成能力、 TranswellTM侵袭实验检测细胞侵袭能力,划痕愈合实验检测细胞的迁移能力;通过实时定量PCR检测敲低AFAP1-AS1后,细胞上皮钙黏素(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、β联蛋白(β-catenin)、锌指转录因子snail2的mRNA水平, Western blot法检测其蛋白水平。结果与癌旁组比较,甲状腺乳头状癌组中AFAP1-AS1 mRNA表达水平显著增加;敲低AFAP1-AS1后, TPC-1细胞的集落形成能力、侵袭和迁移能力均显著降低;与shNC组和对照组相比,敲低AFAP1-AS1后,细胞snail2、 vimentin和β-catenin的mRNA和蛋白表达显著降低,而E-cadherin的mRNA和蛋白表达显著增加。结论 lncRNA AFAP1-AS1在甲状腺乳头状癌组织高表达,敲低TPC-1细胞AFAP1-AS1后,癌细胞的集落形成能力、侵袭和迁移能力显著下调,可能与抑制细胞EMT过程有关。

肌动蛋白纤维相关蛋白1-反义RNA1在胃癌中异常表达的意义及相关功能

目的 探讨长链非编码RNA（lncRNA）肌动蛋白纤维相关蛋白1-反义RNA1（AFAP1-AS1）在胃癌中的表达及其临床意义,并在胃癌细胞株中验证其细胞学功能.方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测我院60例胃癌患者的癌及对应癌旁组织中AFAP1-AS1的水平,分析AFAP1-AS1的表达与临床病理特征的关系;进一步使用RT-qPCR检测5个不同的胃癌细胞株中AFAP1-AS1的表达水平.对于高表达AFAP1-AS1的细胞株使用慢病毒载体下调基础表达.进而检测下调AFAP1-AS1后对细胞增殖、凋亡和侵袭能力的影响.结果 胃癌组织中AFAP1-AS1的相对表达量△Ct水平显著高于癌旁组织水平（6.349±1.966比3.065±1.015,P＜0.01）,且其表达与组织学分级、TNM分期、淋巴结转移水平有关（P＜0.05）;胃癌细胞株MGC-803及SGC-7901高表达（2.239±0.020及2.488±0.021）,有效干扰AFAP1-AS1的表达后可以显著抑制MGC-803及SGC-7901细胞的增殖、侵袭能力并促进凋亡（P＜0.01）.结论 AFAP1-AS1在胃癌组织中高表达.沉默AFAP1-AS1后可以显著抑制胃癌细胞的增殖、侵袭能力并促进凋亡。

肌动蛋白纤维相关蛋白1-反义RNA1靶向微小RNA-545-3p调控口腔鳞状细胞癌增殖、侵袭和转移的分子机制研究

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)肌动蛋白纤维相关蛋白1?反义RNA1 (AFAP1?AS1)通过靶向微小RNA?545?3p(miR?545?3p)调控口腔鳞状细胞癌增殖、侵袭和转移的机制.方法 收集2017年3月至2018年5月在本院行手术切除的口腔鳞癌患者组织30例,同时收集相应癌旁正常组织,实时荧光定量PCR(qRT?PCR)检测口腔鳞癌组织及癌旁正常组织中AFAP1?AS1和miR?545?3p表达;以口腔鳞癌SCC15细胞为研究对象,荧光素酶报告基因实验检测miR?545?3p对AFAP1?AS1活性的影响;构建AFAP1?AS1抑制表达和miR?545?3p过表达的人口腔鳞癌SCC15细胞, CCK?8实验、划痕实验和Transwell实验分别检测细胞增殖、迁移和侵袭能力.结果 与癌旁正常组织比较,口腔鳞癌组织中AFAP1?AS1表达升高(5.5±1.79比1.00±0.16,P<0.01),miR?545?3p表达降低(0.35±0.07比1.00±0.11,P<0. 05);双荧光素酶报告基因检测结果显示AFAP1?AS1可靶向负调控miR?545?3p表达;敲减AFAP1?AS1能明显抑制SCC15细胞增殖、迁移和侵袭能力,促进miR?545?3p的表达;过表达miR?545?3p后,明显抑制SCC15细胞增殖、迁移和侵袭能力;同时敲减AFAP1?AS1和抑制miR?545?3p表达,SCC15细胞增殖、迁移和侵袭能力明显增强.结论 lncRNA AFAP1?AS1在口腔鳞癌中高表达,通过靶向抑制miR?545?3p可调控口腔鳞癌细胞增殖、迁移和侵袭能力.

长链非编码RNA肌动蛋白纤维相关蛋白1-反义RNA在子宫内膜癌中的表达及临床意义

目的探讨长链非编码RNA肌动蛋白纤维相关蛋白1-反义RNA(lncRNA AFAP1-AS)在子宫内膜癌中的表达并分析其临床意义。方法收集2017年2月—2019年10月该院收集的子宫内膜癌患者112例为观察组,在子宫切除术中采集子宫内膜癌变组织样品,另因阴道异常出血而进行宫腔镜刮宫活检或因子宫肌瘤需要摘除子宫的同期患者50例为对照组,术中收集正常子宫内膜组织样品,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测lncRNA AFAP1-AS表达情况,分析lncRNA AFAP1-AS表达水平与子宫内膜癌患者临床病理特征及预后的关系。结果观察组lncRNA AFAP1-AS在子宫内膜组织中的表达明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);lncRNA AFAP1-AS在子宫内膜癌患者子宫内膜组织中表达与患者的年龄、淋巴结转移、合并高血压疾病及合并糖尿病无相关性(P>0.05),与FIGO分期、病理分级及肌层浸润有相关性(P<0.05);lncRNA AFAP1-AS高表达组5年存活率为41.94%,显著低于低表达组存活率(71.67%),差异有统计学意义(χ^(2)=10.41,P<0.05);多因素分析显示,lncRNA AFAP1-AS表达和手术分期是影响子宫内膜癌患者预后的独立危险因素(HR=2.569,95%CI:1.727~3.812;HR=2.628,95%CI:1.386~4.983,均P<0.05)。结论 lncRNA AFAP1-AS与子宫内膜癌的发生、发展及预后密切相关,可以作为临床诊断和预后判断的一个重要参考指标。

环状RNA CDR1as与miR-7在癫痫患者血浆中的表达及与脑电图异常的关系分析

目的探讨环状RNA小脑变性相关蛋白1反义转录物(CDR1as)与微小RNA-7(miR-7)在癫痫患者血浆中的表达及与脑电图异常的关系。方法选取2016年12月—2019年12月在新乡医学院第二附属医院门诊及住院的癫痫患者87例为观察组,并根据脑电图结果分为正常组(6例)、轻度异常组(18例)、中度异常组(37例)及重度异常组(26例);选取同期健康体检者90例为对照组。实时荧光定量PCR(qPCR)法检测血浆CDR1as、miR-7水平,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测血浆白细胞介素(IL)-2、肿瘤坏死因子(TNF)-α和IL-1β水平;Pearson法分析癫痫患者血浆CDR1as、miR-7水平与IL-2、TNF-α和IL-1β水平的相关性。结果对照组、正常组、轻度异常组、中度异常组、重度异常组血浆CDR1as、IL-2、TNF-α和IL-1β水平总体呈升高变化,miR-7水平总体呈降低变化,差异均有统计学意义(P<0.05)。癫痫患者血浆CDR1as水平与IL-2、TNF-α和IL-1β水平呈正相关(P<0.05),miR-7水平与IL-2、TNF-α和IL-1β水平呈负相关(P<0.05)。结论CDR1as、miR-7在癫痫患者血浆中分别呈高表达、低表达,与炎症因子水平、脑电图异常程度密切相关,可能通过影响炎症反应引起脑部异常放电。

长链非编码RNA AFAP1-AS1在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的:探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)肌动蛋白纤维相关蛋白-1反义RNA1(actin filamentassociated protein 1-antisense RNA1,AFAP1-AS1 RNA1)在胃癌组织中的表达情况及其临床意义。方法:采用Real-time PCR方法检测2010年1月至2014年12月宜昌市第二人民医院及三峡大学仁和医院手术切除的274例胃癌组织及相应癌旁正常胃组织中AFAP1-AS1的表达,并分析AFAP1-AS1表达量与临床及病理特征的关系。结果:AFAP1-AS1在胃癌组织比癌旁正常组织显著高表达(P<0.01)。AFAP1-AS1在早期胃癌组织中平均表达量明显低于进展期胃癌(P<0.01)。在不同病理类型胃癌中,AFAP1-AS1的表达量没有差异(P>0.05)。AFAP1-AS1表达量和胃癌淋巴侵袭或远处转移密切相关,在伴有淋巴结侵袭或远处转移的胃癌组织中,AFAP1-AS1明显高表达(P<0.01)。结论:AFAP1-AS1可能是胃癌发生发展的一个重要因素;有望成为新的胃癌预后标志物,用于胃癌的临床诊断和预后判断。