下调肌动蛋白丝相关蛋白1相似蛋白2表达对人肝癌Hep3B细胞增殖及凋亡的影响

目的观察肌动蛋白丝相关蛋白1相似蛋白2在人肝细胞癌细胞中的表达及下调后对增殖生存的影响并探讨其机制。方法以蛋白免疫印迹法(Western blot)及实时定量逆转录聚合酶链反应法(q RT-PCR)检测肝细胞癌细胞株中肌动蛋白丝相关蛋白1相似蛋白2表达,并采用小干扰RNA转染Hep3B细胞株对肌动蛋白丝相关蛋白1相似蛋白2表达进行下调,Western blot和q RT-PCR检测转染效率、增殖凋亡相关基因表达;甲基噻唑基四唑检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期及凋亡。结果肌动蛋白丝相关蛋白1相似蛋白2蛋白及m RNA在肝癌细胞株Hep3B、Huh7、Hep G2、MHCC97H中均有表达,在Hep3B细胞株中表达量最高(F=5.742,P<0.01;F=3.452,P<0.05);与空白对照(si NC)组比较,si肌动蛋白丝相关蛋白1相似蛋白2组中P-P21及磷酸化的蛋白激酶B蛋白表达下调(t=8.462,P<0.01;t=9.742,P<0.01),P21、蛋白激酶B及Cleaved Capase-9蛋白表达上调(t=12.247,P<0.001;t=6.452,P<0.01;t=11.634,P<0.001;t=12.273,P<0.001);与si NC组比较,在72 h和96 h,si肌动蛋白丝相关蛋白1相似蛋白2表达下调后Hep3B细胞增殖能力下降(t=8.176,P<0.01;t=2.246,P<0.05),Hep3B停留在G1期比例增高,G_2及S期比例减少(t=4.23,P<0.05;t=2.13,P<0.05;t=5.72,P<0.05),凋亡率升高(t=8.633,P<0.01)。结论下调肌动蛋白丝相关蛋白1相似蛋白2表达通过P21磷酸化及磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路抑制肝细胞癌细胞增值及生存,可作为肝细胞癌治疗的靶向候选基因。

肌动蛋白相关蛋白2/3复合体的结构、功能与调节

微丝参与了细胞形态维持及细胞运动等多种重要的细胞过程。微丝由肌动蛋白单体组装而成 ,肌动蛋白相关蛋白 2 / 3(Arp2 /Arp3,Arp2 / 3)复合体在微丝形成过程中起重要作用。Arp2 / 3复合体由 7个亚单位组成 ,在细胞内受到多种核化促进因子的调节 ,并与这些因子协同作用来调节肌动蛋白的核化。Arp2 / 3复合体结构、功能及调节的研究对于阐明微丝形成机制及细胞骨架与某些信号分子的关系有重要意义。

跨膜丝氨酸蛋白酶2-成红细胞特异性转化基因相关基因、成红细胞特异性转化基因变异体1及成红细胞特异性转化基因变异体4在前列腺癌中的表达及临床意义

目的分析跨膜丝氨酸蛋白酶2(TMPRSS2)-成红细胞特异性转化基因相关基因(ERG)、TMPRSS2-成红细胞特异性转化基因变异体1(ETV1)、TMPRSS2-成红细胞特异性转化基因变异体4(ETV4)在前列腺癌中的表达及临床意义。方法2018年4月至2020年9月我院收治的82例前列腺癌患者,采用免疫组化法检测癌组织及癌旁正常组织中TMPRSS2-ERG、TMPRSS2-ETV1、TMPRSS2-ETV4表达。分析上述因子表达与前列腺癌临床病理特征的关系及诊断前列腺癌的价值。结果前列腺癌组织中TMPRSS2-ERG、TMPRSS2-ETV1、TMPRSS2-ETV4阳性表达率均高于癌旁正常组织(P<0.05)。临床分期C+D、Gleason评分≥5分者TMPRSS2-ERG、TMPRSS2-ETV1、TMPRSS2-ETV4阳性表达率高于临床分期A+B、Gleason评分<5分(P<0.05)。RTMPRSS2-ERG、TMPRSS2-ETV1、TMPRSS2-ETV4联合检测曲线下面积(AUC)、敏感度、特异度分别为0.814、0.925、0.865,均高于各项指标单独检测(P<0.05)。结论TMPRSS2-ERG、TMPRSS2-ETV1、TMPRSS2-ETV4在前列腺癌患者中呈过度表达,通过联合检测上述因子对前列腺癌的诊断与鉴别诊断有良好的应用价值。

OSBPL2介导RhoA/ROCK2信号通路调控听觉细胞肌动蛋白细胞骨架

目的:探索氧化固醇结合蛋白样蛋白2(oxysterol binding protein-like 2,OSBPL2)对听觉细胞肌动蛋白骨架形态和功能的影响及其相关分子机制。方法:采用OSBPL2基因敲除(Osbpl2-KO)HEI-OC1细胞探讨OSBPL2缺陷对听觉细胞肌动蛋白细胞骨架形态和功能的影响;扫描电镜观察Osbpl2-KO小鼠毛细胞静纤毛形态;Western blot实验检测HEI-OC1细胞和耳蜗内Rho/ROCK信号通路关键效应因子Rho激酶2(Rho-associated coiled-coil-containing protein kinase 2,ROCK2)、Lim激酶1(LIM domain kinase 1,LIMK1)、肌动蛋白解聚因子/丝切蛋白1(actin depolymerizing factor/cofilin 1,ADF/CFL-1)的表达水平。结果:Osbpl2-KO HEI-OC1细胞微丝骨架中纤维肌动蛋白(F-actin)的分布明显减少,细胞外周微刺突和丝状伪足明显减少,细胞迁移能力明显减弱;扫描电镜下观察发现Osbpl2敲除导致小鼠耳蜗内毛细胞静纤毛变短且排列紊乱;Western blot检测结果表明,在HEI-OC1细胞和小鼠耳蜗中OSBPL2-KO均导致RhoA/ROCK2信号通路的抑制。结论:在听觉细胞中OSBPL2介导的RhoA/ROCK2信号通路在维持肌动蛋白细胞骨架形态和功能的过程中发挥重要的调控作用。

皮层肌动蛋白结合蛋白Cortactin研究进展

皮层肌动蛋白结合蛋白Cortactin参与细胞的多种细胞活动,其中包括细胞的板状伪足突起形成、突触形成、囊泡运输、胞吐、胞吞、细胞间黏附、侵袭性、细胞迁移、运动以及细胞分裂等作用,上诉细胞过程都是通过调控各微丝的聚合而发挥相应作用,Cortactin在皮层微丝肌动蛋白的组装上发挥着不可替代的作用。Cortactin是酪氨酸激酶Scr主要底物,酪氨酸磷酸化对Cortactin功能起调节作用。Cortactin在细胞活动中的作用,表明Cortactin不仅在癌细胞运动及侵袭上发挥重要作用,在炎性反应及人体气道分泌和收缩机制上也有着重要作用。所以对Cortactin在微丝肌动蛋白的组装及磷酸化等的研究,将阐明Cortactin具体作用的机制。

丝切蛋白在脑卒中后认知障碍中的研究进展

脑卒中后认知障碍(PSCI)不仅严重影响患者生存质量,还给患者家庭带来沉重负担。10%的患者在第1次脑卒中后出现痴呆,>1/3的患者在脑卒中复发后出现痴呆。38%的患者在脑卒中后1年内出现不符合痴呆症标准的认知障碍[1]。PSCI发病机制涉及广泛,其中,因丝切蛋白(cofilin)在神经系统发育中具有神经形成、神经突伸长、树突棘形成以及神经传递等功能,对学习和记忆至关重要[2-3]。越来越多的研究探讨cofilin在PSCI中的作用,试图寻找防治PSCI的干预靶点,本文就这方面的研究进展进行综述如下。

BAD、p-BAD及p-AKT蛋白在乳腺癌癌变过程中的表达及意义

用免疫组织化学S-P法检测131例乳腺石蜡包埋组织、Western Blotting法检测27例乳腺浸润性导管癌及癌旁乳腺组织中Bcl-xl/Bcl-2相关死亡启动子(BAD)、磷酸化Bcl-xl/Bcl-2相关死亡启动子(p-BAD)、磷酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶B(p-AKT)的表达情况,分析三种蛋白在乳腺癌组织中表达的意义及其与临床病理特征间的关系。结果免疫组化结果显示在乳腺癌癌变过程中三种蛋白表达阳性率呈递增趋势,三种蛋白在乳腺普通导管增生和重度不典型增生及原位癌间阳性表达率差异有统计学意义(P值分别为0.022、0.023、0.001);p-BAD蛋白在重度不典型增生及原位癌组与浸润性导管癌组间差异有明显统计学意义(P=0.004)。三种蛋白与乳腺浸润性导管癌患者的年龄、临床分期、肿瘤大小无明显关系,但均与组织学分级相关(P值分别为0.026、0.038、0.026)。p-AKT蛋白表达与腋窝淋巴结转移有关(P值为0.016)。Western Blotting结果显示乳腺癌组织中三种蛋白含量明显高于癌旁组织(P值分别为0.002、0.002、0.003)。在乳腺癌组织中BAD与p-BAD及p-BAD与p-AKT蛋白表达量呈正相关性(P值分别为0.011、0.032)。认为这三种蛋白表达水平可提示乳腺导管非典型增生向乳腺癌的转化潜能;PI3-K/Akt传导路径在乳腺癌癌变过程中具有重要作用。

类风湿性关节炎患者血清MBL MASP-2和DKK-1水平变化与患者预后相关性

目的:研究类风湿性关节炎(RA)患者血清甘露糖结合凝集素(MBL)、MBL相关的丝氨酸蛋白酶-2(MASP-2)和Dickkopf-1蛋白(DKK-1)水平变化及其与患者预后相关性。方法:选取2017年8月至2020年8月我院194例RA患者和102例健康体检者分别为研究组和对照组,检测入院时血清MBL、MASP-2和DKK-1水平,同时根据28个关节疾病活动评分(DAS28)将患者分为轻度组83例、中度组62例和重度组49例,按指南对RA患者给予达标治疗并根据疗效将患者分为达标组129例和未达标组65例,比较各组血清MBL、MASP-2和DKK-1水平,同时分析其对DAS28评分的影响和对疗效的预测价值。结果:研究组血清MBL和MASP-2水平低于对照组,血清DKK-1水平高于对照组;轻度组、中度组和重度组血清MBL和MASP-2逐渐降低,血清DKK-1水平和DAS28评分逐渐升高;达标组血清MBL和MASP-2水平高于未达标组,血清DKK-1水平低于未达标组,差异有统计学意义(P<0.05)。多元线性回归分析显示,血清MBL和MASP-2水平为影响DAS28评分的重要因素(P<0.05)。血清MBL和MASP-2水平与RA治疗效果存在密切联系,RA治疗未达标的logistics回归模型为Y=12.573-0.722×血清MBL-0.090×血清MASP-2+0.792×血清DKK-1。血清MBL、MASP-2、DKK-1及三者联合检测预测RA疗效的AUC分别为0.896、0.825、0.693和0.958,敏感度分别为72.09%、67.44%、80.62%和89.15%,特异度分别为90.77%、81.54%、52.31%和90.77%。结论:RA患者血清MBL和MASP-2水平明显降低,血清DKK-1水平明显升高,且与病情变化密切相关,可为评估疗效和预后提供参考。

微丝相关蛋白1L2对胶质瘤细胞株LN229侵袭和迁移能力的影响

目的 观察下调胶质瘤细胞株LN229中微丝相关蛋白1L2 （AFAP1L2）的表达对细胞侵袭和迁移能力的影响.方法 将LN229细胞分为空白对照组、无义序列小于扰RNA （siRNA）转染组和AFAP1 L2 siRNA转染组进行细胞培养,细胞转染siRNA后,采用Transwell、划痕实验检测细胞侵袭和迁移能力;采用Western blot检测AFAP1L2、基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9的表达水平.结果 转染siRNA后,Western blot检测结果显示：空白对照组、无义序列siRNA转染组、AFAP1L2 siRNA转染组AFAP1L2蛋白相对表达量分别为1.00±0.10、1.00±0.13、0.52±0.06,差异有统计学意义（P＜0.05）;MMP-2蛋白相对表达量分别为1.00±0.12、0.92±0.08、0.21±0.02,MMP-9蛋白相对表达量分别为1.00±0.13、1.12±0.07、0.17±0.01,表明AFAP1 L2 siRNA转染组MMP-2和MMP-9蛋白表达降低（P＜0.05）.侵袭和迁移实验结果显示：空白对照组、无义序列siRNA转染组、AFAP1 L2 siRNA转染组Transwell侵袭实验穿膜细胞数分别为（246.74±10.52）、（236.85±11.74）、（40.14±8.32）个,Transwell迁移实验穿膜细胞数分别为（258.36±11.46）、（230.52±9.87）、（56.43±7.16）个,细胞划痕实验48 h迁移到空白处的细胞数分别为（296.60±27.14）、（113.80±25.43）、（51.20±13.25）个,说明转染AFAP1L2 siRNA组细胞侵袭和迁移能力明显低于其他两组（P＜0.05）.结论 沉默胶质瘤细胞中AFAP1L2的表达能显著抑制肿瘤细胞的侵袭和迁移能力.

AFAP-1L2在胰腺导管腺癌组织中的表达变化及意义

目的观察胰腺导管腺癌(PDAC)组织中肌动蛋白丝相关蛋白1相似蛋白2(AFAP-1L2)的表达变化,并探讨其临床意义。方法采用免疫组化SP法检测73对配对的PDAC及癌旁正常胰腺组织石蜡标本中的AFAP-1L2蛋白,分析其与PDAC临床病理特征的关系;采用qRT-PCR法检测21对配对新鲜PDAC及癌旁正常胰腺组织中的AFAP-1L2 mRNA。结果 AFAP-1L2蛋白在PDAC及癌旁正常胰腺组织石蜡标本中的高表达率分别为67.1%及28.8%,P<0.01;AFAP-1L2蛋白高表达与肿瘤直径、TNM分期、血管浸润、淋巴转移及术后肝转移有关(P均<0.05)。新鲜PDAC组织及癌旁正常胰腺组织AFAP-1L2 mRNA相对表达量分别为1.429±0.317及0.672±0.298,P均<0.01。结论 AFAP-1L2蛋白及基因在PDAC组织中高表达,在PDAC的发生发展中起重要作用。

超声弹性成像联合细针抽吸洗脱液中肌动蛋白丝相关蛋白1反义RNA1检测对甲状腺结节的诊断价值

目的探讨超声弹性成像(ultrasound elastography,USE)联合细针抽吸(fine-needle aspiration,FNA)洗脱液中长链非编码RNA肌动蛋白丝相关蛋白1反义RNA1(actin filament associated protein 1 anti-sense RNA1,AFAP1-AS1)检测对甲状腺结节良恶性的诊断价值。方法回顾性收集2020年1月至2022年6月期间在深圳市福田区第二人民医院接受诊治且符合本研究纳入标准的甲状腺结节患者,患者术前均行甲状腺结节USE评分并检测FNA洗脱液中AFAP1-AS1 mRNA表达,以手术切除标本的病理检查结果为金标准,分析并评估USE评分联合FNA洗脱液中AFAP1-AS1 mRNA检测对甲状腺结节良恶性的诊断价值。结果本研究共纳入124例患者(174枚甲状腺结节),术后组织病理学诊断62枚(45例)甲状腺结节为恶性。良性和恶性甲状腺结节的USE评分分级构成比总体比较差异有统计学意义(Z=8.82,P<0.001);良性甲状腺结节的USE评分明显低于恶性甲状腺结节[2.28±1.16比4.26±1.01,均数差(mean difference,MD)及其95%可信区间(95%confidence interval,95%CI)=2.98(2.76,3.20),t=30.85,P<0.001]。恶性甲状腺结节的FNA洗脱液中AFAP1-AS1 mRNA表达高于良性甲状腺结节[1.45±0.27比1.13±0.16,MD(95%CI)=1.45(1.39,1.50),t=10.69,P<0.001]。Pearson相关性分析结果显示,甲状腺结节USE评分和FNA洗脱液中AFAP1-AS1 mRNA表达之间呈正相关(r=0.58,P<0.001)。受试者操作特征曲线评估USE评分联合FNA洗脱液中AFAP1-AS1 mRNA表达对甲状腺结节良恶性判断的敏感度为93.5%、特异度为88.4%,曲线下面积(95%CI)为0.91(0.86,0.96)。结论从本研究结果提示,USE评分联合FNA洗脱液中AFAP1-AS1 mRNA检测较单独USE评分或AFAP1-AS1 mRNA表达检测对区分甲状腺结节良恶性更为敏感,显示出潜在的诊断效能。

MicroRNA-219a-5p和AFAP1L2对胰腺癌细胞的作用研究

目的探讨microRNA-219a-5p(miR-219a-5p)和肌动蛋白丝相关蛋白1相似蛋白2(AFAP1L2)对胰腺癌细胞的作用。方法分别采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western blotting法检测胰腺癌细胞株(PANC-1、BXPC-3、SW1990、Capan-1)及正常胰腺导管上皮细胞(HPDE)miR-219a-5p、AFAP1L2的表达,采用siRNA及过表达质粒下调或上调AFAP1L2表达,CCK-8法观察胰腺癌细胞株增殖变化。采用mimics或inhibitor上调或下调miR-219a-5p表达,CCK-8法观察胰腺癌细胞株增殖变化。流式细胞术检测不同干预条件下细胞凋亡和细胞周期。生物信息学预测两者可能具有靶向调控关系。qRT-PCR和Western blotting法检测AFAP1L2 mRNA及蛋白表达,荧光素酶实验观察二者碱基配对关系,进一步验证miR-219a-5p对AFAP1L2具有靶向调控作用。结果与HPDE细胞比较,胰腺癌细胞株中miR-219a-5p表达较低(P<0.05)。AFAP1L2 mRNA及蛋白在胰腺癌细胞株中的表达高于在HPDE细胞中的表达(P<0.05)。Capan-1或SW1990细胞培养48 h后,与空白对照组(NC组)比较,pCMV-EGFP-AFAP1L2组光密度(OD)值升高(P<0.05),siAFAP1L2组OD值下降(P<0.05),AFAP1L2对胰腺癌细胞增殖具有正向调控作用。Capan-1及SW1990细胞培养48 h后,与miR-NC组比较,miR-219a-5p mimics组OD值下降(P<0.05),miR-219a-5p inhibitor组OD值升高(P<0.05),miR-219a-5p表达对胰腺癌细胞增殖具有负向调控作用;上调miR-219a-5p表达,可诱导细胞S期阻滞,导致细胞凋亡增加。miR-219a-5p负向调控AFAP1L2表达;荧光素酶实验显示,miR-219a-5p与AFAP1L2的3'-URT互补结合,miR-219a-5p与AFAP1L2存在靶向调控关系。结论miR-219a-5p通过靶向调控AFAP1L2表达负向介导胰腺癌细胞增殖及凋亡。

AFAP-1L2通过PI3K/Akt通路影响胰腺癌细胞增殖及凋亡

目的:检测肌动蛋白丝相关蛋白1相似蛋白(actin filament-associated protein 1-like 2,A FA P-1L2)在不同分化程度胰腺癌细胞株中的表达,并观察其对下游磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶(phosphatidylinositol 3 kinase/protein kinase B,PI3K/Akt)通路调控作用及对胰腺癌细胞的增殖、周期及凋亡的影响.方法:以Western blot及实时定量PCR检测(real-time quantitative PCR,q RT-PCR)法对不同分化程度胰腺癌细胞系PANC-1、Mia Pa Ca-2、Colo-357、BXPC-3、SW1990及CFPAC-1中AFAP-1L2表达进行检测;构建靶向AFAP-1L2的干扰质粒si AFAP-1L2,转染Mia Pa Ca-2细胞,以Western blot及q RTPCR法检测AFAP-1L2下调后PI3K/Akt通路蛋白及m RNA变化;四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(methyl-thiazolyl-tetrazolium,MTT)法检测转染后Mia Pa Ca-2细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期及凋亡.结果:Western blot及q RT-PCR法显示,AFAP-1L2蛋白及m R N A表达水平在低分化胰腺癌细胞系中表达水平高于中分化及高分化细胞系.si AFAP-1L2转染后磷脂酰肌醇3激酶a亚单位(P I3K C A)蛋白在s i A FA P-1L2组的表达量明显低于A FA P-1L2组及小干扰RNA(small interfering RNA,si RNA)control组(F=9.280,P=0.0139),a蛋白激酶(a-Akt)在si AFAP-1L2细胞的表达量高于MOCK细胞及si RNA control细胞(F=7.719,P=0.0219),磷酸化a蛋白激酶(a-p A k t)在si AFAP-1L2细胞的表达量低于MOCK细胞及si RNA control细胞(F=5.507,P=0.0439).PI3KCAm RNA在si AFAP-1L2组的表达量明显低于AFAP-1L2组及si RNA control组(F=20.16,P=0.0022),a-Akt m RNA在si AFAP-1L2细胞的表达量高于MOCK细胞及siRNA control细胞(F=6.068,P=0.0362),a-p Akt m R N A在s i A FA P-1L2细胞的表达量低于MOCK细胞及si RNA control细胞(F=10.33,P=0.0114).MTT检测显示,在48、72及96h siAFAP-1L2干扰后Mia PaCa-2细胞增殖能力下降(F=3.924,P<0.05;F=6.812,P<0.01;F=7.003,P<0.01).流式细胞检测显示,si AFAP-1L2干扰后G1期细胞比例增高,G2及S期比例减少(F=4.87,F=5.26,F=4.94,均P<0.05),si AFAP-1L2干扰后Mia Pa Ca-2细胞凋亡率增高(F=7.231,P<0.01).结论:在分化程度低的胰腺癌细胞中AFAP-1L2表达较高,AFAP-1L2通过PI3K/Akt通路影响胰腺癌细胞增殖、细胞周期及凋亡,可作为胰腺癌治疗新的靶向候选基因.

沉默AFAP-1L2对胃癌MKN-28细胞的生物学影响

目的:探讨AFAP-1L2对胃癌MKN-28细胞的生物学影响。方法:siRNA干扰AFAP-1L2;CCK-8检测沉默AFAP-1L2后细胞的增殖情况;免疫荧光分析各组细胞的凋亡率;Transwell小室观察细胞的侵袭情况;Real time-PCR检测细胞中基因的表达情况。结果:siRNA有效干扰了AFAP-1L2的表达;沉默AFAP-1L2细胞组的细胞增殖明显受到抑制(P<0.05);siRNA-AFAP-1L2组细胞的凋亡率与其他组比较,凋亡率增高;细胞的侵袭情况,沉默AFAP-1L2明显抑制了细胞的侵袭,与其他两组比较差异显著(P<0.05);ERK1/2、p-ERK1/2和Bcl-2的表达水平,均是siRNA-AFAP-1L2细胞组低于其他两组(P<0.05)。结论:沉默AFAP-1L2抑制了胃癌MKN-28细胞的增殖,诱导细胞的凋亡,抑制了细胞的侵袭和抗凋亡基因的表达,AFAP-1L2可以通过ERK1/2途径发挥作用,为肿瘤的靶向治疗提供一定的理论依据。

人MASP1和MASP2 C端片段的原核表达

目的在大肠杆菌中表达人甘露聚糖结合凝集素(MBL)相关丝氨酸蛋白酶1、2(MASP1、MASP2)C端片段。方法采用PCR技术从分别含人MASP1、MASP2cDNA的质粒pGEM-MASP1、pGEM-MASP2中扩增MASP1、MASP2C端基因片段,将其插入原核表达载体pET17b,转化感受态大肠杆菌BL21(DE3),诱导表达MASP1、MASP2C端蛋白,通过Ni2+-NTA亲和层析柱纯化目的蛋白,以SDS-PAGE、Western blot和ELISA进行鉴定。结果分别从pGEM-MASP1和pGEM-MASP2中扩增到约1300bp的基因片段,构建成重组表达载体,经酶切出现约3300bp和1300bp片段,测序结果与预期的完全一致。纯化蛋白经SDS-PAGE可见Mr40000蛋白带,该蛋白可与抗His抗体反应。结论获得了重组人MASP1和MASP2C端片段蛋白及其表达菌株,为MASP分子的进一步研究提供了条件。

MASP-2、MACC1联合miR-17对结肠癌腹腔镜全结肠系膜切除术患者的预后评估价值

目的探讨甘露糖结合凝集素相关的丝氨酸蛋白酶2(MASP-2)、结肠癌转移相关基因1(MACC1)联合微小RNA-17(miR-17)对结肠癌腹腔镜全结肠系膜切除术(CME)患者的预后评估价值。方法选取2018年3月至2020年3月郑州市第七人民医院收治的80例结肠癌患者,均接受CME治疗。随访3 a,根据预后情况分组,对比不同预后患者血清MASP-2、MACC1、miR-17水平。分析影响预后的因素及MASP-2、MACC1、miR-17预测结肠癌CME患者的预后评估价值。结果结肠癌患者术后血清MACC1、miR-17水平低于术前,MASP-2水平高于术前(P<0.05)。随访3 a,80例结肠癌CME患者中19例被纳入预后不良组,60例被纳入预后良好组。预后不良组临床分期Ⅲ期占比及血清MACC1、miR-17水平均高于预后良好组,MASP-2水平低于预后良好组(P<0.05)。血清MACC1、miR-17是影响结肠癌CME预后的独立危险因素,MASP-2为保护因素(P<0.05)。血清MASP-2、MACC1、miR-17均可预测结肠癌CME患者的预后,三者联合预测价值最高(P<0.05)。结论结肠癌CME后患者血清MACC1、miR-17水平降低,MASP-2水平升高,上述指标均可作为结肠癌CME预后的预测指标,且三者联合的预后评估价值最高。

系统性红斑狼疮患者血清PS-PLA1、DNase1L3和Lp-PLA2水平检测及临床意义

目的探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者血清磷脂酰丝氨酸特异性磷脂酶A1(PS-PLA1)、脱氧核糖核酸酶1 like 3(DNase1L3)、脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)水平及其与疾病活动、血脂指标、肾功能指标的关系。方法选择2018年1月至2020年4月该院风湿免疫科收治的79例SLE患者为SLE组,另选择年龄、性别比例相匹配的50例体检健康志愿者为对照组。根据SLE疾病活动度评分(SLEDAI评分)将SLE患者分为轻度组(21例)、中度组(32例)和重度组(26例)。比较不同疾病活动度患者血清PS-PLA1、DNase1L3、Lp-PLA2水平差异和分布趋势,分析SLE患者血清PS-PLA1、DNase1L3、Lp-PLA2与SLEDAI评分、血脂指标、肾功能指标的相关性。结果SLE组血清PS-PLA1、Lp-PLA2、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、血清尿素(Urea)、血清肌酐(Scr)水平高于对照组,DNase1L3、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平低于对照组(P<0.05)。血清PS-PLA1、Lp-PLA2水平随着疾病活动度的增加而升高,DNase1L3水平则降低(P<0.05)。相关性分析结果显示,PS-PLA1与SLEDAI评分、TC呈正相关,与HDL-C呈负相关(P<0.05);Lp-PLA2与LDL-C、SLEDAI评分、Urea、Scr呈正相关,与HDL-C呈负相关(P<0.05);DNase1L3与SLEDAI评分呈负相关(P<0.05)。结论SLE患者血清PS-PLA1、Lp-PLA2水平升高,DNase1L3水平降低,三者均与SLE疾病活动度有关,Lp-PLA2与SLE血脂异常和肾损伤有关,PS-PLA1与SLE血脂异常有关。

干扰长链非编码RNA AFAP1-AS1抑制人鼻咽癌HNE2细胞增殖、侵袭及体内移植瘤形成的研究

目的:探讨短发卡RNA(shRNA)干扰长链非编码RNA肌动蛋白纤维相关蛋白1-反义RNA1(lncRNA AFAP1-AS1)对人鼻咽癌(NPC)细胞增殖、侵袭及体内移植瘤形成的影响。方法:将HNE2细胞培养制成细胞悬液后分为空白对照组(Control)、阴性对照组(shRNA-NC)与lncRNA AFAP1-AS1干扰组(sh-AFAP1-AS1),通过试剂盒转入对应目的片段,进行RT-PCR验证;结晶紫染色法检测细胞增殖,FCM检测细胞凋亡,Transwell检测细胞侵袭能力,Western blot检测细胞中血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达水平,免疫组织化学法检测VEGF表达TUNEL检测肿瘤组凋亡,将转染sh-AFAP1-AS1成功的HNE2细胞及其阴性对照细胞悬浮液分别于右腋下静脉注入裸鼠体内,以成瘤直径超过5 mm为抑制成功。2周后比较2组裸鼠肿瘤重量、AFAP1-AS1表达量、肿瘤组织细胞凋亡、VEGF表达变化。结果:sh-AFAP1-AS1细胞AFAP1-AS1表达水平和细胞增殖率低于Control组(P<0.05);sh-AFAP1-AS1细胞凋亡率高于Control组(P<0.05);sh-AFAP1-AS1细胞的侵袭率低于Control组(P<0.05),sh-AFAP1-AS1细胞中VEGF和MMP-9蛋白表达水平较Control组显著降低(P<0.05);sh-AFAP1-AS1组裸鼠肿瘤质量、AFAP1-AS1表达量均较Control组降低(P<0.05);sh-AFAP1-AS1组裸鼠肿瘤组织的细胞凋亡率高于Control组(P<0.05),肿瘤组织中VEGF表达量低于Control组(P<0.05)。结论:AFAP1-AS1可能通过调控癌细胞增殖、转移及侵袭相关蛋白表达参与NPC HNE2细胞的增殖、侵袭及转移过程。

儿童原发性肾病综合征血清PLCE1、TRPC6、CD2AP、ACTN4检测的意义

目的探讨检测外周血磷脂酶CE1(PLCE1)、瞬时受体电位阳离子通道蛋白6(TRPC6)、CD2相关蛋白(CD2AP)、α-辅肌动蛋白4(ACTN4)在儿童原发性肾病综合征(PNS)、激素敏感型肾病综合征(SSNS)、激素耐药型肾病综合征(SRNS)、激素依耐型肾病综合(SDNS)及不同病理类型表达的临床意义。方法采集原发性肾病综合征外周血清标本,采用双抗体夹心ELISA法检测样本中目PLCE1、TRPC6、CD2AP、ACTN4表达浓度。结果PNS组、SSNS组、SRNS组、SDNS组PLCE1、TRPC6、CD2AP、ACTN4表达与健康组比较降低,差异均有统计学意义(P<0.05),SRNS组、SDNS组表达与SSNS组比较降低,差异均有统计学意义(P均<0.05),SRNS组与SDNS组比较差异均无统计学意义(P>0.05);FSGS组、IgAN组血清PLCE1、TRPC6、CD2AP、ACTN4表达与MCD组比较降低,差异均有统计学意义(P<0.05),FSGS组、IgAN组分别与MsPGN组、MPGN组比较降低,差异均有统计学意义(P<0.05),MsPGN组与MPGN组比较差异无统计学意义(P>0.05),FSGS组与IgAN组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论①血清中PLCE1、TRPC6、CD2AP、ACTN4作为足细胞裂孔隔膜分子、足细胞信号分子、骨架分子等正常表达,对维系肾小球滤过膜的功能完整性起关键作用,一旦表达异常降低,可能导致肾病综合征发生、对激素治疗耐药或依耐;②血清中PLCE1、TRPC6、CD2AP、ACTN4表达与肾病综合征病理类型有关;③临床上检测血清中PLCE1、TRPC6、CD2AP、ACTN4表达水平对判断是否为难治性肾病、病理类型、指导用药及预测预后具有重大意义。

结直肠癌组织中LAMβ1、ARPC4、Cx26的表达及对肿瘤侵袭、转移的影响

目的探究结直肠癌组织中层粘连蛋白β1(LAMβ1)、肌动蛋白相关蛋白2/3复合体4(ARPC4)及间隙连接蛋白26(Cx26)的表达及与肿瘤侵袭、转移的关系。方法选取2018年6月至2019年12月如皋市人民医院病理科收集的100例结直肠癌手术切除的肿瘤组织及相应的癌旁正常组织,应用实时荧光定量PCR检测肿瘤组织及癌旁正常组织LAMβ1、ARPC4、Cx26的mRNA表达;Western blot检测肿瘤组织及癌旁正常组织LAMβ1、ARPC4、Cx26蛋白表达,免疫组织化学法检测LAMβ1、ARPC4、Cx26蛋白在结直肠癌组织及癌旁组织中的表达阳性率,并分析LAMβ1、ARPC4、Cx26蛋白表达与患者临床病理特征的关系。结果RT-PCR结果显示,结直肠癌组织中LAMβ1、ARPC4、Cx2的mRNA表达相较于癌旁组织上调。Western blot检测结果显示,结直肠癌组织中LAMβ1、ARPC4、Cx26蛋白表达高于癌旁组织(P<0.05)。免疫组化结果显示,LAMβ1、ARPC4、Cx26着色主要分布于肿瘤细胞的细胞膜和细胞质中。不同性别、年龄、肿瘤大小结直肠癌患者LAMβ1、ARPC4、Cx26表达比较,差异无统计学意义(P>0.05);不同分化程度、临床分期、浸润深度、淋巴结转移、远处转移结直肠癌患者LAMβ1、ARPC4、Cx2表达比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,结直肠癌肿瘤组织中LAMβ1、ARPC4、Cx26的mRNA表达量存在正相关性(P<0.05),其蛋白表达之间同样存在正相关性(P<0.05)。结论LAMβ1、ARPC4、Cx26表达升高与结直肠癌的侵袭、转移有关。