血清长链非编码RNA肌动蛋白纤维相关蛋白1-反义RNA1水平与钙化性主动脉瓣狭窄病人左心室功能的相关性研究

目的 分析血清长链非编码RNA(lncRNA)肌动蛋白纤维相关蛋白1-反义RNA1(AFAP1-AS1)表达水平与钙化性主动脉瓣狭窄(CAS)病人左心室收缩及舒张功能的相关性。方法 于2020年1月至2021年12月,选取中国中医科学院广安门医院就诊的CAS病人129例作为CAS组[左心室射血分数(LVEF)≥50%],同期该院健康志愿者130例作为对照组。收集病人人口学资料、超声及实验室生化指标,检测血清lncRNA AFAP1-AS1表达。受试者操作特征曲线(ROC曲线)分析血清lncRNA AFAP1-AS1诊断CAS效能。结果 对照组血清lncRNA AFAP1-AS1表达水平(1.15±0.18)低于CAS组(1.58±0.30)(P<0.001)。轻度狭窄者血清lncRNA AFAP1-AS1表达水平(1.37±0.26)低于中、重度狭窄者,而中度狭窄者lncRNA AFAP1-AS1表达水平(1.59±0.30)低于重度狭窄者(1.79±0.34)(P<0.001)。ROC结果显示,血清lncRNA AFAP1-AS1诊断CAS、重度狭窄的曲线下面积分别为0.86[95%CI:(0.82,0.91)]、0.88[95%CI:(0.82,0.94)]。CAS组AVA水平低于对照组(P<0.001),左室舒张末期内径(LVEDD)、左室舒张末期容积(LVEDV)、室间隔厚度(IVST)、左室后壁厚度(LVPWT)、左房前后径(LAD)、主动脉瓣平均压差(PGmean)、主动脉瓣峰值流速(Vmax)水平高于对照组(均P<0.001)。相关性分析显示,血清lncRNA AFAP1-AS1与LVEDD、Vmax、二尖瓣口舒张早期血流速度峰值(E峰)、二尖瓣口舒张晚期血流速度峰值(A峰)、LVEDV、PGmean、LVESD呈正相关(r=0.60、0.66、0.72、0.68、0.56、0.57、0.50,均P<0.001),与LVEF、AVA呈负相关(r=-0.78、-0.62,均P<0.001)。结论 CAS病人血清lncRNA AFAP1-AS1表达水平升高,与CAS病情严重程度以及左心室舒张、收缩功能有关,并可作为无创血清标志物辅助临床诊断CAS。

长链非编码RNA肌动蛋白纤维相关蛋白1-反义RNA1对人绒毛膜癌细胞增殖、迁移和凋亡的影响

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)肌动蛋白纤维相关蛋白1-反义RNA1(AFAP1-AS1)对人绒毛膜癌细胞增殖、迁移和凋亡的影响。方法将人绒毛膜癌细胞JEG-3随机分为空白对照组、空白载体组和LncRNA AFAP1-AS1过表达组。空白对照组细胞未做任何处理,空白载体组细胞转染空白载体,LncRNA AFAP1-AS1过表达组细胞转染LncRNA AFAP1-AS1过表达载体。分别采用实时荧光定量聚合酶链反应和Western blot法检测JEG-3细胞中Caspase-3、Caspase-9 mRNA和蛋白的表达,采用细胞计数试剂盒-8实验、Transwell小室实验及流式细胞术检测JEG-3细胞的增殖、迁移和凋亡情况。结果 LncRNA AFAP1-AS1过表达组JEG-3细胞中Caspase-3、Caspase-9 mRNA和蛋白相对表达量均高于空白对照组和空白载体组(P <0. 05);空白对照组和空白载体组JEG-3细胞中Caspase-3、Caspase-9 mRNA及蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P> 0. 05)。LncRNA AFAP1-AS1过表达组细胞增殖能力、透过分子筛的细胞数显著低于空白对照组和空白载体组,细胞凋亡率显著高于空白对照组和空白载体组(P <0. 05);空白对照组与空白载体组细胞增殖能力、透过分子筛的细胞数及细胞凋亡率比较差异均无统计学意义(P>0. 05)。结论 LncRNA AFAP1-AS1可上调人绒毛膜癌JEG-3细胞中Caspase-3、Caspase-9 mRNA及蛋白水平,对JEG-3细胞的增殖及迁移有抑制作用,同时可诱导其凋亡。

肌动蛋白纤维相关蛋白1-反义RNA 1:一种新的致癌长链非编码RNA

肌动蛋白纤维相关蛋白1-反义RNA 1(AFAP1-AS1)为一个新发现的促癌长链非编码RNA(lnc RNA)。AFAP1-AS1定位于人类4号染色体4p16.1区域,被证实在食管癌、胰腺癌、鼻咽癌、肺癌、卵巢癌、结直肠癌、胆道癌、胃癌、肝细胞癌、乳腺癌、舌鳞状细胞癌、视网膜母细胞瘤、胶质瘤和骨肉瘤等多种肿瘤组织中表达上调。AFAP1-AS1过表达与肿瘤大小、淋巴转移、远处转移、TNM分期及不良预后等恶性肿瘤临床病理特征密切相关。此外,AFAP1-AS1可通过调控AFAP1和EMT相关基因、Rho/Rac代谢通路、PTEN/p-AKT通路等促进肿瘤细胞增殖、迁移和侵袭,影响细胞周期进程及抑制细胞凋亡等。

长链非编码RNA肌动蛋白纤维相关蛋白1-反义RNA1在口腔鳞状细胞癌中的表达及其相关功能

目的分析长链非编码RNA(lncRNA)肌动蛋白纤维相关蛋白1-反义RNA1(AFAP1-AS1)在口腔鳞状细胞癌(OSCC)中的表达及其对OSCC细胞生物行为学的影响,初步探讨其可能的作用机制。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测OSCC患者(55例)癌组织、癌旁正常黏膜组织及人口腔鳞状细胞癌SCC25、人正常口腔角质细胞株(NOK)细胞中lncRNA AFAP1-AS1的表达,分析AFAP1-AS1与OSCC患者病理特征的相关性,通过Kaplan-Meier生存曲线分析AFAP1-AS1与患者预后的关系。AFAP1-AS1 siRNA转染SCC25细胞,细胞计数(CCK-8)及Transwell实验分别检测细胞增殖、迁移和侵袭的变化,蛋白质印迹(Western blot)检测侵袭相关蛋白、肌动蛋白纤维相关蛋白1(AFAP1)及Rho GTP酶家族成员蛋白的表达情况,免疫荧光染色检测细胞骨架肌动蛋白微丝结构的变化。结果OSCC组织中AFAP1-AS1的表达高于癌旁正常黏膜组织,SCC25细胞中AFAP1-AS1的表达高于NOK细胞(P<0.001)。AFAP1-AS1的表达与OSCC的分化程度、TNM分期及淋巴结转移密切相关(P<0.05),AFAP1-AS1高表达患者的生存率低于AFAP1-AS1低表达者(P<0.05)。AFAP1-AS1 siRNA转染后AFAP1-AS1的表达水平下调,SCC25细胞的增殖、迁移和侵袭能力降低,AFAP1、RhoA、Rac2、Rab10、RhoGDI和Pfn1的表达上调,RhoC的表达下调,细胞骨架中应力纤维丝减少,肌动蛋白完整性丢失。结论lncRNA AFAP1-AS1在OSCC组织及SCC25细胞中高表达,与OSCC的发生进展及预后相关。下调AFAP1-AS1能够抑制OSCC的增殖、迁移和侵袭能力,其可能是通过调控肌动蛋白纤维丝的完整性实现的。

长链非编码RNA AFAP1-AS1靶向miR-195-5p对肝癌细胞生物学行为的影响

目的探讨长链非编码核糖核酸(lncRNA)AFAP1-AS1及微小核糖核酸-195-5p(miR-195-5p)对肝细胞癌(HCC)细胞生物学行为的影响。方法常规培养人HCC细胞系(HepG2、Hep3B、SMMC-7721、Bel7402、SK-hep1细胞)和正常人肝细胞(HL-7702细胞),用实时荧光定量PCR法检测AFAP1-AS1、miR-195-5p并筛选实验细胞。将对数生长期实验细胞随机分为si-AFAP1-AS1组、si-NC组,miR-195-5pmimics组、mimics-NC组,miR-195-5pinhibitor+si-NC组、miR-195-5p inhibitor+si-AFAP1-AS1组、inhibitor-NC+si-AFAP1-AS1组、inhibitor-NC+si-NC组,用Lipofectamine 2000试剂将相应质粒按照分组转染入细胞。用CCK-8实验、菌落形成实验检测细胞增殖能力,用流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期,用Transwell实验检测细胞迁移及侵袭能力,用双荧光素酶报告基因实验验证AFAP1-AS1与miR-195-5p的靶向关系。结果HCC细胞中AFAP1-AS1表达高于正常人肝细胞(P均<0.05),HCC细胞中miR-195-5p表达低于正常人肝细胞(P均<0.05)。由于SK-hep1细胞中AFAP1-AS1表达最高、miR-195-5p表达最低,因此,后续研究均采用SK-hep1细胞进行实验。与si-NC组比较,si-AFAP1-AS1组中AFAP1-AS1表达低、细胞增殖能力低、迁移和侵袭细胞少、G0/G1期细胞比例高、细胞凋亡率高(P均<0.05)。通过Starbase v3.0在线数据库预测发现,AFAP1-AS1与miR-195-5p有互补的结合位点。双荧光素酶报告基因实验结果显示,miR-NC组、miR-195-5p组共转染WT-AFAP1-AS1后相对荧光素酶活性比较差异有统计学意义(P<0.05),共转染MUT-AFAP1-AS1后相对荧光素酶活性比较差异无统计学意义(P>0.05)。与inhibitor-NC+si-NC组比较,si-NC+miR-195-5p inhibitor组细胞增殖能力高、迁移和侵袭细胞多、G_(0)/G_(1)期细胞比例低、细胞凋亡率低(P均<0.05),而si-AFAP1-AS1+miR-195-5p inhibitor组上述细胞生物学行为则相反。结论lncRNA AFAP1-AS1可能通过竞争性结合miR-195-5p参与调控HCC细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡等生物学行为。

LncRNA、AFAP1-AS1表达与重症肌无力发病相关性研究

目的探讨lncRNA肌动蛋白丝相关蛋1-反义RNA1(AFAP1-AS1)在重症肌无力(MG)患者中的表达水平及其临床意义。方法收集2020年1月至2021年12月期间收治的35例MG患者和35例健康体检者的外周静脉血,提取外周血单个核细胞(PBMCs)中的总RNA,应用RT-PCR方法检测AFAP1 AS1的表达水平,并进一步分析在MG各亚组中AFAP1 AS1的表达水平,并分析AFAP1-AS1与定量MG评分(QMGS)之间的相关性。结果MG患者PBMCs中AFAP1-AS1的表达水平(1.498±1.136)显著高于健康对照组(0.619±0.707),差异有统计学意义(Z=-3.46,P=0.001)。AFAP1-AS1的表达水平在胸腺增生亚组(2.212±0.314)中明显高于胸腺正常组(1.076±0.197),差异有统计学意义(t=3.228,P=0.0028),在性别亚组及早发晚发亚组中差异无统计学意义。且AFAP1-AS1与QMGS评分之间不具有相关性。结论AFAP1-AS1在MG患者的PBMCs中表达水平明显上调,可视为MG新的分子诊断标志物。

超声弹性成像联合细针抽吸洗脱液中肌动蛋白丝相关蛋白1反义RNA1检测对甲状腺结节的诊断价值

目的探讨超声弹性成像(ultrasound elastography,USE)联合细针抽吸(fine-needle aspiration,FNA)洗脱液中长链非编码RNA肌动蛋白丝相关蛋白1反义RNA1(actin filament associated protein 1 anti-sense RNA1,AFAP1-AS1)检测对甲状腺结节良恶性的诊断价值。方法回顾性收集2020年1月至2022年6月期间在深圳市福田区第二人民医院接受诊治且符合本研究纳入标准的甲状腺结节患者,患者术前均行甲状腺结节USE评分并检测FNA洗脱液中AFAP1-AS1 mRNA表达,以手术切除标本的病理检查结果为金标准,分析并评估USE评分联合FNA洗脱液中AFAP1-AS1 mRNA检测对甲状腺结节良恶性的诊断价值。结果本研究共纳入124例患者(174枚甲状腺结节),术后组织病理学诊断62枚(45例)甲状腺结节为恶性。良性和恶性甲状腺结节的USE评分分级构成比总体比较差异有统计学意义(Z=8.82,P<0.001);良性甲状腺结节的USE评分明显低于恶性甲状腺结节[2.28±1.16比4.26±1.01,均数差(mean difference,MD)及其95%可信区间(95%confidence interval,95%CI)=2.98(2.76,3.20),t=30.85,P<0.001]。恶性甲状腺结节的FNA洗脱液中AFAP1-AS1 mRNA表达高于良性甲状腺结节[1.45±0.27比1.13±0.16,MD(95%CI)=1.45(1.39,1.50),t=10.69,P<0.001]。Pearson相关性分析结果显示,甲状腺结节USE评分和FNA洗脱液中AFAP1-AS1 mRNA表达之间呈正相关(r=0.58,P<0.001)。受试者操作特征曲线评估USE评分联合FNA洗脱液中AFAP1-AS1 mRNA表达对甲状腺结节良恶性判断的敏感度为93.5%、特异度为88.4%,曲线下面积(95%CI)为0.91(0.86,0.96)。结论从本研究结果提示,USE评分联合FNA洗脱液中AFAP1-AS1 mRNA检测较单独USE评分或AFAP1-AS1 mRNA表达检测对区分甲状腺结节良恶性更为敏感,显示出潜在的诊断效能。

肌动蛋白纤维相关蛋白1-反义RNA1在胃癌中异常表达的意义及相关功能

目的 探讨长链非编码RNA（lncRNA）肌动蛋白纤维相关蛋白1-反义RNA1（AFAP1-AS1）在胃癌中的表达及其临床意义,并在胃癌细胞株中验证其细胞学功能.方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测我院60例胃癌患者的癌及对应癌旁组织中AFAP1-AS1的水平,分析AFAP1-AS1的表达与临床病理特征的关系;进一步使用RT-qPCR检测5个不同的胃癌细胞株中AFAP1-AS1的表达水平.对于高表达AFAP1-AS1的细胞株使用慢病毒载体下调基础表达.进而检测下调AFAP1-AS1后对细胞增殖、凋亡和侵袭能力的影响.结果 胃癌组织中AFAP1-AS1的相对表达量△Ct水平显著高于癌旁组织水平（6.349±1.966比3.065±1.015,P＜0.01）,且其表达与组织学分级、TNM分期、淋巴结转移水平有关（P＜0.05）;胃癌细胞株MGC-803及SGC-7901高表达（2.239±0.020及2.488±0.021）,有效干扰AFAP1-AS1的表达后可以显著抑制MGC-803及SGC-7901细胞的增殖、侵袭能力并促进凋亡（P＜0.01）.结论 AFAP1-AS1在胃癌组织中高表达.沉默AFAP1-AS1后可以显著抑制胃癌细胞的增殖、侵袭能力并促进凋亡。

肌动蛋白纤维相关蛋白1-反义RNA1靶向微小RNA-545-3p调控口腔鳞状细胞癌增殖、侵袭和转移的分子机制研究

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)肌动蛋白纤维相关蛋白1?反义RNA1 (AFAP1?AS1)通过靶向微小RNA?545?3p(miR?545?3p)调控口腔鳞状细胞癌增殖、侵袭和转移的机制.方法 收集2017年3月至2018年5月在本院行手术切除的口腔鳞癌患者组织30例,同时收集相应癌旁正常组织,实时荧光定量PCR(qRT?PCR)检测口腔鳞癌组织及癌旁正常组织中AFAP1?AS1和miR?545?3p表达;以口腔鳞癌SCC15细胞为研究对象,荧光素酶报告基因实验检测miR?545?3p对AFAP1?AS1活性的影响;构建AFAP1?AS1抑制表达和miR?545?3p过表达的人口腔鳞癌SCC15细胞, CCK?8实验、划痕实验和Transwell实验分别检测细胞增殖、迁移和侵袭能力.结果 与癌旁正常组织比较,口腔鳞癌组织中AFAP1?AS1表达升高(5.5±1.79比1.00±0.16,P<0.01),miR?545?3p表达降低(0.35±0.07比1.00±0.11,P<0. 05);双荧光素酶报告基因检测结果显示AFAP1?AS1可靶向负调控miR?545?3p表达;敲减AFAP1?AS1能明显抑制SCC15细胞增殖、迁移和侵袭能力,促进miR?545?3p的表达;过表达miR?545?3p后,明显抑制SCC15细胞增殖、迁移和侵袭能力;同时敲减AFAP1?AS1和抑制miR?545?3p表达,SCC15细胞增殖、迁移和侵袭能力明显增强.结论 lncRNA AFAP1?AS1在口腔鳞癌中高表达,通过靶向抑制miR?545?3p可调控口腔鳞癌细胞增殖、迁移和侵袭能力.

长链非编码RNA肌动蛋白纤维相关蛋白1-反义RNA在子宫内膜癌中的表达及临床意义

目的探讨长链非编码RNA肌动蛋白纤维相关蛋白1-反义RNA(lncRNA AFAP1-AS)在子宫内膜癌中的表达并分析其临床意义。方法收集2017年2月—2019年10月该院收集的子宫内膜癌患者112例为观察组,在子宫切除术中采集子宫内膜癌变组织样品,另因阴道异常出血而进行宫腔镜刮宫活检或因子宫肌瘤需要摘除子宫的同期患者50例为对照组,术中收集正常子宫内膜组织样品,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测lncRNA AFAP1-AS表达情况,分析lncRNA AFAP1-AS表达水平与子宫内膜癌患者临床病理特征及预后的关系。结果观察组lncRNA AFAP1-AS在子宫内膜组织中的表达明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);lncRNA AFAP1-AS在子宫内膜癌患者子宫内膜组织中表达与患者的年龄、淋巴结转移、合并高血压疾病及合并糖尿病无相关性(P>0.05),与FIGO分期、病理分级及肌层浸润有相关性(P<0.05);lncRNA AFAP1-AS高表达组5年存活率为41.94%,显著低于低表达组存活率(71.67%),差异有统计学意义(χ^(2)=10.41,P<0.05);多因素分析显示,lncRNA AFAP1-AS表达和手术分期是影响子宫内膜癌患者预后的独立危险因素(HR=2.569,95%CI:1.727~3.812;HR=2.628,95%CI:1.386~4.983,均P<0.05)。结论 lncRNA AFAP1-AS与子宫内膜癌的发生、发展及预后密切相关,可以作为临床诊断和预后判断的一个重要参考指标。

敲低长链非编码RNA AFAP1-AS1抑制TPC-1甲状腺乳头状癌细胞上皮间质转化及其侵袭和迁移

目的检测甲状腺乳头状癌组织长链非编码RNA(lncRNA)肌动蛋白丝相关蛋白1反义RNA1(AFAP1-AS1)的表达,敲低TPC-1甲状腺乳头状癌细胞AFAP1-AS1,研究其对TPC-1细胞上皮间质转化(EMT)的影响及相关分子机制。方法采用实时定量PCR检测60例甲状腺乳头状癌组织lncRNA AFAP1-AS1表达;利用RNA干扰技术(RNAi)敲低TPC-1甲状腺乳头状癌细胞AFAP1-AS1,设置AFAP1-AS1敲低(shAFAP1-AS1)组和阴性对照RNA(shNC)组及未转染的TPC-1细胞为对照组。通过集落形成实验检测TPC-1细胞集落形成能力、 TranswellTM侵袭实验检测细胞侵袭能力,划痕愈合实验检测细胞的迁移能力;通过实时定量PCR检测敲低AFAP1-AS1后,细胞上皮钙黏素(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、β联蛋白(β-catenin)、锌指转录因子snail2的mRNA水平, Western blot法检测其蛋白水平。结果与癌旁组比较,甲状腺乳头状癌组中AFAP1-AS1 mRNA表达水平显著增加;敲低AFAP1-AS1后, TPC-1细胞的集落形成能力、侵袭和迁移能力均显著降低;与shNC组和对照组相比,敲低AFAP1-AS1后,细胞snail2、 vimentin和β-catenin的mRNA和蛋白表达显著降低,而E-cadherin的mRNA和蛋白表达显著增加。结论 lncRNA AFAP1-AS1在甲状腺乳头状癌组织高表达,敲低TPC-1细胞AFAP1-AS1后,癌细胞的集落形成能力、侵袭和迁移能力显著下调,可能与抑制细胞EMT过程有关。

长链非编码RNA AFAP1-AS1在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的:探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)肌动蛋白纤维相关蛋白-1反义RNA1(actin filamentassociated protein 1-antisense RNA1,AFAP1-AS1 RNA1)在胃癌组织中的表达情况及其临床意义。方法:采用Real-time PCR方法检测2010年1月至2014年12月宜昌市第二人民医院及三峡大学仁和医院手术切除的274例胃癌组织及相应癌旁正常胃组织中AFAP1-AS1的表达,并分析AFAP1-AS1表达量与临床及病理特征的关系。结果:AFAP1-AS1在胃癌组织比癌旁正常组织显著高表达(P<0.01)。AFAP1-AS1在早期胃癌组织中平均表达量明显低于进展期胃癌(P<0.01)。在不同病理类型胃癌中,AFAP1-AS1的表达量没有差异(P>0.05)。AFAP1-AS1表达量和胃癌淋巴侵袭或远处转移密切相关,在伴有淋巴结侵袭或远处转移的胃癌组织中,AFAP1-AS1明显高表达(P<0.01)。结论:AFAP1-AS1可能是胃癌发生发展的一个重要因素;有望成为新的胃癌预后标志物,用于胃癌的临床诊断和预后判断。

长链非编码RNA AFAP1-AS1在口腔鳞状细胞癌中的表达及临床意义

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)肌动蛋白纤维相关蛋白1-反义RNA1(AFAP1-AS1)在口腔鳞癌及癌旁组织中的表达及其临床意义。方法:利用实时定量PCR(RT-qPCR)法检测75例口腔鳞癌组织及其配对癌旁正常组织中lncRNA AFAP1-AS1的表达情况,并分析其与口腔鳞癌临床病理学特征之间的联系;应用小干扰RNA(siRNA)干扰lncRNA AFAP1-AS1表达,CCK-8实验检测lncRNA AFAP1-AS1对口腔鳞癌细胞株Tca8113细胞增殖能力的影响。结果:RT-qPCR检测结果显示lncRNA AFAP1-AS1在癌组织中的相对表达水平是癌旁组织的5.16倍,差异有统计学意义(P<0.01)。lncRNA AFAP1-AS1的表达与临床分期、分化程度及淋巴结转移显著相关(P<0.05)。CCK-8实验结果显示,转染48h、72h实验组A450值较对照组显著降低(P<0.01),表明siRNA沉默AFAP1-AS1表达后,抑制了Tca8113细胞的增殖。结论:lncRNA AFAP1-AS1在口腔鳞癌中的表达上调可能与口腔鳞癌的发生发展有关。

AFAP1-AS1靶向调控微小RNA-139-5p及对胰腺癌细胞迁移侵袭的影响

目的探讨长链非编码RNA肌动蛋白纤维相关蛋白1-反义RNA 1(AFAP1-AS1)对胰腺癌细胞增殖和侵袭迁移的影响。方法使用GEPIA分析来自TCGA数据库和GTEx项目中胰腺癌和正常组织的AFAP1-AS1水平,Kaplan-Meier Plotter数据库分析AFAP1-AS1与胰腺癌患者临床预后的关系。采用实时定量PCR(qPCR)检测人胰腺导管细胞(hTERT-HPNE)和胰腺癌细胞(AsPC-1、PANC-1、CFPAC-1、BxPC-3和SW1990)的AFAP1-AS1水平,脂质体介导AFAP1-AS1特异性小干扰RNA(si-AFAP1-AS1)转染SW1990细胞(si-AFAP1-AS1组)并设转染阴性对照无关序列的si-NC组和仅经脂质体处理而未行转染的对照组;MTT比色法、划痕实验和Transwell小室实验检测SW1990细胞增殖、迁移和侵袭情况,双荧光素酶报告基因实验验证AFAP1-AS1与微小RNA-139-5p(miR-139-5p)的靶向关系。结果胰腺癌组织的AFAP1-AS1水平高于正常组织(P<0.05);Kaplan-Meier Plotter数据库分析结果显示,AFAP1-AS1水平与胰腺癌的总生存期无关(HR=1.53,95%CI:0.98~2.39,P=0.057),而与无复发生存期有关(HR=10.08,95%CI:1.35~75.19,P=0.006),其中AFAP1-AS1高水平者的复发风险升高。胰腺癌细胞的AFAP1-AS1水平均高于hTERT-HPNE细胞(P<0.05),选取AFAP1-AS1水平最高的SW1990细胞进行后续的干扰实验。与对照组和si-NC组相比,si-AFAP1-AS1组SW1990细胞的增殖活性在处理72 h后降低而miR-139-5p水平升高(P<0.05);si-AFAP1-AS1组的穿膜细胞数和划痕愈合率分别为(61.818±5.036)个和(21.542±2.310)%,低于对照组的(182.851±11.027)个和(81.849±4.473)%及si-NC组的(190.352±11.228)个和(78.764±3.291)%,差异有统计学意义(P<0.05)。对照组和si-NC组上述指标的差异无统计学意义(P>0.05)。野生型AFAP1-AS1序列和miR-139-5p模拟物共转染细胞较突变型AFAP1-AS1和miR-139-5p模拟物共转染的荧光素酶活性降低(P<0.05)。结论胰腺癌组织和细胞中AFAP1-AS1高表达且可能通过靶向miR-139-5p来促进胰腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,进而加速癌症进程,AFAP1-AS1/miR-139-5p轴有望成为胰腺癌诊治的潜在靶点。

AFAP1-AS1与恶性肿瘤发生发展关系的研究进展

长链非编码RNA(lncRNA)在多种恶性肿瘤类型中异常表达,在癌症诊断和预后方面有积极的意义。肌动蛋白纤维相关蛋白1-反义RNA1(AFAP1-AS1)是lncRNA的一种,研究表明其与多种类型的恶性肿瘤相关。深入了解AFAP1-AS1在肿瘤中的作用可以为恶性肿瘤的早期筛查、诊断及治疗提供理论指导。

干扰长链非编码RNA AFAP1-AS1抑制人鼻咽癌HNE2细胞增殖、侵袭及体内移植瘤形成的研究

目的:探讨短发卡RNA(shRNA)干扰长链非编码RNA肌动蛋白纤维相关蛋白1-反义RNA1(lncRNA AFAP1-AS1)对人鼻咽癌(NPC)细胞增殖、侵袭及体内移植瘤形成的影响。方法:将HNE2细胞培养制成细胞悬液后分为空白对照组(Control)、阴性对照组(shRNA-NC)与lncRNA AFAP1-AS1干扰组(sh-AFAP1-AS1),通过试剂盒转入对应目的片段,进行RT-PCR验证;结晶紫染色法检测细胞增殖,FCM检测细胞凋亡,Transwell检测细胞侵袭能力,Western blot检测细胞中血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达水平,免疫组织化学法检测VEGF表达TUNEL检测肿瘤组凋亡,将转染sh-AFAP1-AS1成功的HNE2细胞及其阴性对照细胞悬浮液分别于右腋下静脉注入裸鼠体内,以成瘤直径超过5 mm为抑制成功。2周后比较2组裸鼠肿瘤重量、AFAP1-AS1表达量、肿瘤组织细胞凋亡、VEGF表达变化。结果:sh-AFAP1-AS1细胞AFAP1-AS1表达水平和细胞增殖率低于Control组(P<0.05);sh-AFAP1-AS1细胞凋亡率高于Control组(P<0.05);sh-AFAP1-AS1细胞的侵袭率低于Control组(P<0.05),sh-AFAP1-AS1细胞中VEGF和MMP-9蛋白表达水平较Control组显著降低(P<0.05);sh-AFAP1-AS1组裸鼠肿瘤质量、AFAP1-AS1表达量均较Control组降低(P<0.05);sh-AFAP1-AS1组裸鼠肿瘤组织的细胞凋亡率高于Control组(P<0.05),肿瘤组织中VEGF表达量低于Control组(P<0.05)。结论:AFAP1-AS1可能通过调控癌细胞增殖、转移及侵袭相关蛋白表达参与NPC HNE2细胞的增殖、侵袭及转移过程。

AFAP1-AS1对结肠癌细胞增殖、凋亡和PI3K/Akt信号通路的影响

目的探讨长非编码RNA肌动蛋白纤维相关蛋白1-反义RNA 1(AFAP1-AS1)对结肠癌细胞增殖、凋亡和磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路的影响。方法采用实时定量PCR(qPCR)检测本院手术切除的30例结肠癌组织相对于癌旁组织及结肠癌细胞(SW620、HT-29、HCT116、Caco-2和SW480)相对于人正常结肠上皮细胞NCM460的AFAP1-AS1水平。脂质体介导AFAP1-AS1特异性干扰RNA(siRNA)转染SW480细胞(si-AFAP1-AS1组)并设转染无关siRNA的SW480细胞为si-NC组和未行转染的SW480细胞为对照组,qPCR、MTT比色法和Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测AFAP1-AS1水平、增殖活力和凋亡率,qPCR和Western blotting检测Bcl-2、Bax、caspase-3、p-PI3K和p-Akt水平。结果结肠癌组织的AFAP1-AS1水平为2.669±0.171,高于对应癌旁组织的1.381±0.085(P<0.05)。结肠癌细胞的AFAP1-AS1水平均高于NCM460细胞(P<0.05),选取AFAP1-AS1水平最高的SW480细胞进行后续功能实验。si-AFAP1-AS1组SW480细胞的AFAP1-AS1水平和增殖活力均低于si-NC组和对照组(P<0.05)。si-AFAP1-AS1组SW480细胞的凋亡率为(19.486±0.674)%,高于对照组的(10.671±1.025)%和si-NC组的(10.224±0.683)%(P<0.05)。与对照组和si-NC组相比,si-AFAP1-AS1组的p-Akt、p-PI3K和Bcl-2水平降低,而Bax和caspase-3水平升高(P<0.05)。对照组和si-NC组上述指标的差异无统计学意义(P>0.05)。结论结肠癌中高表达的AFAP1-AS1可能通过激活PI3K/Akt通路来促进结肠癌细胞增殖并抑制凋亡,发挥促癌功效,AFAP1-AS1有可能成为结肠癌治疗的新靶点。

lncRNA AFAP1-AS在子宫内膜癌中的表达及意义

目的研究长链非编码RNA肌动蛋白纤维相关蛋白1-反义RNA(lncRNA AFAP1-AS)在子宫内膜癌中的表达并分析其临床意义。方法收集2011年2月至2013年10月子宫内膜癌患者112例(观察组),在子宫切除术中采集子宫内膜癌变组织样品,另因阴道异常出血而进行宫腔镜刮宫活检或因子宫肌瘤需要摘除子宫的同期患者50例(对照组),术中收集正常子宫内膜组织样品,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测lncRNA AFAP1-AS表达情况,分析lncRNA AFAP1-AS表达水平与子宫内膜癌患者临床病理特征及预后的关系。结果观察组lncRNA AFAP1-AS在子宫内膜组织中的表达明显高于对照组(P<0.05);lncRNA AFAP1-AS在子宫内膜癌患者子宫内膜组织中表达与患者的年龄、淋巴结转移、合并高血压以及合并糖尿病无关(P>0.05),与FIGO分期、病理分级、肌层浸润有关(P<0.05);lncRNA AFAP1-AS高表达组5年存活率为41.94%,显著低于低表达组存活率(71.67%),差异有统计学意义(χ2=10.41,P<0.05);多因素分析显示,lncRNA AFAP1-AS表达和手术分期是影响子宫内膜癌患者预后的独立危险因素(HR=2.569,95%CI为1.727~3.812;HR=2.628,95%CI为1.386~4.983,P均<0.05)。结论lncRNA AFAP1-AS与子宫内膜癌的发生发展以及预后密切相关,可以作为临床诊断及预后判断的重要参考指标。

lncRNA AFAP1-AS1在视网膜母细胞瘤组织中的表达及其临床意义

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)肌动蛋白纤维相关蛋白1-反义RNA1(AFAP1-AS1)在视网膜母细胞瘤(RB)组织中表达的临床意义及相关机制。方法:收集2015年12月至2019年12月于本院行眼球摘除术的RB患儿36例,取患儿RB组织以及癌旁组织作为研究样本,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测组织中AFAP1-AS1表达情况。体外培养人视网膜母细胞瘤株HXO-RB44,分为对照组(不进行转染)、si-NC组(转染siRNA-NC)和si-AFAP1-AS1组(转染siRNA-AFAP1-AS1),qRT-PCR法检测HXO-RB44细胞中AFAP1-AS1表达情况,Transwell法检测HXO-RB44细胞迁移、侵袭情况,蛋白免疫印迹(Western blot)法检测HXO-RB44细胞中肌动蛋白纤维相关蛋白1(AFAP1)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9蛋白表达水平。结果:与癌旁组织相比,RB组织中AFAP1-AS1表达水平显著升高(P<0.05);RB组织中AFAP1-AS1表达水平与视神经是否浸润、分化程度、有无淋巴结转移有关(P<0.05)。对照组、si-NC组HXO-RB44细胞迁移细胞数、侵袭细胞数及细胞中AFAP1-AS1表达水平、AFAP1、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05);与si-NC组相比,si-AFAP1-AS1组HXO-RB44细胞迁移细胞数、侵袭细胞数及细胞中AFAP1-AS1表达水平、AFAP1、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。结论:AFAP1-AS1在RB组织中高表达,与视神经浸润、分化程度、淋巴结转移相关,抑制其表达可降低AFAP1、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平,进而抑制RB细胞HXO-RB44的迁移、侵袭过程,可为减少RB细胞转移提供治疗靶点。

肺腺癌ceRNA调控网络构建及AFAP1-AS1功能验证

目的基于生物信息学方法构建肺腺癌(lung adenocarcinoma,LUAD)特异性长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)相关的竞争性内源RNA(competing endogenous RNA,ceRNA)调控网络,并分析肌动蛋白纤维相关蛋白1-反义RNA1(actinfilament-associated protein 1-antisense RNA1,AFAP1-AS1)在LUAD中的功能机制,以期为LUAD治疗靶点研究提供新的方向。方法从基因表达综合性基因库(GEO)中下载LUAD的基因芯片,并使用GEO2R在线软件筛选LUAD与正常组织之间具有差异表达的lncRNA和mRNA,并通过在线数据库预测其靶基因,构建ceRNA网络,并进行富集分析。在细胞实验中,对AFAP1-AS1进行基因敲除并构建siRNA,通过细胞转染法转染LUAD细胞A549。用CCK8、Transwell、划痕实验和流式细胞术实验检测细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的能力。结果在LUAD的芯片中共鉴定出6个差异表达lncRNA和494个差异表达的mRNA。ceRNA网络共涉及6个lncRNA、22个miRNA和55个mRNA。富集分析发现mRNA与癌症相关通路有关。在细胞实验中,敲除AFAP1-AS1可抑制细胞增殖、侵袭和迁移,且AFAP1-AS1促进细胞凋亡。结论本研究构建了一个lncRNA介导的ceRNA网络,这可能有助于进一步研究LUAD的作用机制。此外,通过细胞实验,本研究发现AFAP1-AS1有潜力作为LUAD的治疗靶点。