丹红注射液对大鼠肝微粒体5种CYP亚型酶活性的影响

目的研究丹红注射液对5种细胞色素P450亚型酶活性的影响,为临床合理用药提供参考。方法采用大鼠体外肝微粒体孵育法,分别以非那西丁、甲苯磺丁脲、右美沙芬、氯唑沙宗、睾酮为CYP1A2、CYP2C9、CYP2D6、CYP2E1、CYP3A4的探针药物,在大鼠肝微粒体孵育体系中孵育,用高效液相色谱(HPLC)法测定相应的代谢产物,比较空白对照组和丹红注射液低、中、高剂量组之间探针药物代谢率的差异,评价丹红注射液对各亚型酶活性的影响。结果在体外肝微粒体孵育体系中,丹红注射液低剂量组中CYP1A2和CYP2C9活性与空白对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05);中和高剂量组中CYP1A2和CYP2C9活性与空白对照组相比降低,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);丹红注射液低、中、高剂量组中CYP2D6、CYP2E1、CYP3A4的活性与空白对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。丹红注射液对大鼠肝微粒体CYP1A2酶活性的半数抑制浓度(IC50)和抑制常数(Ki)分别为0.54%和0.226%。结论丹红注射液对大鼠肝微粒体CYP1A2酶活性有抑制作用,且为混合型抑制;对CYP2C9有弱抑制作用;对CYP2D6、CYP2E1、CYP3A4酶活性无明显影响。

刺五加注射液对大鼠肝微粒体四种CYP450亚型酶活性的影响

目的:研究刺五加注射液在大鼠体外肝微粒体中对CYP2C9、CYP2D6、CYP2E1和CYP3A4活性的影响,为临床合理联合用药提供参考。方法:在大鼠体外肝微粒体中分别加入四种亚型酶的探针药物甲苯磺丁脲(TB)、右美沙芬(DM)、氯唑沙宗(CLZ)、睾酮(TS)和低、中、高剂量的刺五加注射液,温孵后用HPLC法测定各空白对照组和不同剂量刺五加注射液给药组中各探针药物代谢产物的浓度并比较代谢率的差异,以评价刺五加注射液对各亚型酶活性的影响;中剂量组活性显著降低的亚型酶进一步考察抑制作用的强弱(即IC50和Ki值)。结果:与空白对照组比较,刺五加注射液低、中、高剂量给药组对CYP3A4活性的影响均有统计学意义(P<0.01),抑制率分别为10.22%、19.00%、30.29%,其IC50和Ki值分别为3.96%和2.74%(V/V);低、中、高剂量给药组对CYP2D6活性的影响均无统计学差异(P>0.05);低剂量给药组对CYP2C9、CYP2E1活性的影响无统计学差异(P>0.05),中、高剂量给药组对两个亚型的抑制作用有统计学差异(P<0.05),但中剂量给药组抑制率均小于8.50%,高剂量给药组抑制率均小于12.00%。结论:刺五加注射液对大鼠体外肝微粒体CYP3A4有抑制作用,且符合混合型抑制模型;对CYP2C9、CYP2E1抑制作用较弱;对CYP2D6活性无影响。

药物体外肝代谢的研究方法

目的:为药物体外肝代谢研究方法在新药研发中的应用提供参考。方法:以"药物代谢""体外肝代谢""肝微粒体体外温孵法""肝细胞体外温孵法""肝灌流技术""肝组织切片技术""基因重组P_(450)酶系""Drug metabolism""Liver metabolism in vitro""Metabolism of liver microsome in vitro""Liver perfusion technique""Liver biopsy technique""Recombination genetic cytochrome P_(450)"等为关键词,组合查询1996年10月-2017年4月在Pub Med、Web of Science、中国知网、中国生物医学等数据库中的相关文献,对体外肝代谢研究方法进行综述。结果与结论:共检索到相关英文文献220余篇、中文文献750余篇,其中有效文献30篇。常见的体外肝代谢研究方法有肝微粒体体外温孵法、肝细胞体外温孵法、肝灌流技术、肝组织切片技术、基因重组P_(450)酶系等。药物体外肝代谢不能全面反映体内药物的综合代谢情况,与体内的真实代谢情况存在差异,今后需结合体内实验等方法来完善药物在体内外的药物代谢转运研究;目前肝灌流技术和基因重组P_(450)酶系等体外肝代谢研究方法对设备、实验操作成本、数据处理技术等要求较高,其运用和推广仍然受到一定的约束和限制,今后需建立简单、快速、经济、高效的科学技术方法和手段。

药物体外肝代谢研究方法

体外代谢研究对阐明药效物质基础及作用机制有重要意义。常见的体外肝代谢研究方法有肝微粒体体外温孵法、肝细胞体外温孵法、肝灌流技术、肝组织切片技术、基因重组P450酶系等。药物体外肝代谢不能全面反映体内药物的综合代谢情况,与体内的真实代谢情况存在差异,今后需结合体内实验等方法来完善药物在体内外的药物代谢转运的研究。目前肝灌流技术和基因重组P450酶系等体外肝代谢研究方法对设备、实验操作成本、数据处理技术等要求较高,其运用和推广仍然受到一定的约束和限制,今后需建立简单、快速、经济、高效的科学技术方法和手段。由于药物体外肝代谢对新药研究与开发、正确指导临床合并用药有着巨大的推动作用,因此该文将对其进行重点论述。

药物体外肝代谢研究进展

目的介绍药物体外肝代谢方法的最新研究进展。方法根据近几年的文献资料进行分析、综合、归纳。分别按照肝微粒体体外温孵法及基因重组P450酶系法、肝细胞体外温孵法、离体肝灌流法及器官组织切片法进行介绍。结果药物体外代谢酶系的研究是药物体外肝代谢的研究热点。结论药物体外肝代谢的研究对新药研究与开发、正确指导临床合理用药具有巨大的推动作用。

羟基喜树碱的代谢与CYP450的相关性研究

目的：研究羟基喜树碱（HCPT）在体外小鼠肝微粒体中对 CYP450活性的影响，为临床合理联合用药提供参考。方法：在小鼠体外肝微粒体中分别加入六种亚型酶的探针药物对乙酰氨基酚、非那西丁、双氯芬酸钠、睾酮、酒石酸美托洛尔、奥美拉唑和羟基喜树碱溶液，在优化的孵育体系下温孵。用 HPLC 法测定各空白对照组和羟基喜树碱溶液中各探针药物代谢产物的浓度并比较代谢率的差异，以评价羟基喜树碱对各亚型酶活性的影响。结果：在代谢反应过程中，在50~200μmol＆#183;L-1内，羟基喜树碱的浓度与孵育体系中 CYP3A4的特异性底物睾酮、CYP2E1的特异性底物对乙酰氨基酚的剩余药量呈正比例关系，且具显著性差异（P＜0.05），与其他四种探针药物的剩余药量无明显的浓度依存关系（P＞0.05）。结论：HCPT 在肝微粒体的代谢反应过程中受代谢酶 CYP3A4和 CYP2E1的作用，竞争性地抑制了睾酮和对乙酰氨基酚在肝微粒体中的代谢。

羟基法舒地尔前药衍生物的设计合成及初步体外药动学评价

目的设计合成系列羟基法舒地尔前药并测试其体外水解代谢率。方法以异喹啉-5-磺酸为起始原料,经过磺酰化、亲核取代、氨基保护、氧化反应,在相转移催化剂的存在下,于二氯甲烷和水的两相体系中与苯甲酰氯和水反应,合成关键中间体4,4与不同的卤代物反应、脱保护得到目标化合物。体外水解代谢率以肝微粒体体外温孵法进行初步评价。结果与结论共合成了19个羟基法舒地尔前药,其中16个是未见报道的新化合物,其结构均经~1H-NM R,^(13)C-NM R及HRM S谱确证。其中,目标化合物Ⅰa、Ⅰh、Ⅰi、Ⅱd的24 h大鼠肝微粒体体外水解率分别为87%、93%、98%、95%。

A rapid and simple ultraperformance liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry(UPLC-MS/MS) method for the detection of glucuronic acid-conjugated steroid metabolites

In the present study, we effectively detected 10 steroids and glucuronic acid-conjugated steroid metabolites in 12 min by ultraperformance liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry （UPLC-MS/MS）. Steroids testosterone （T）, 5ct-dihydrotestosterone （DHT）, androsterone （ADT）, etiocholanolone （ETIO）, estradiol （E2） and their glucuronide conjugates were well-separated on an Eclipse Plus C18 column （2.1 mm×50 ram, RRHD 1.8μm）. The mobile phase consisted of a mixture of methanol and ultrapure water （containing I mM ammonium formate） at a ratio of 60：40 （v/v）, and the flow rate was set at 0.25 mL/min. The LC eluate was detected by electrospray ionization （ESI） source in both positive and negative ion modes. Neutral loss （NL of 176, 194, 211 and 229 Da in positive mode） and precursor ion （PI ofm/z 141,159 and 177 in positive mode and 75, 85 and 133 in negative mode） methods were applied for the detection of steroid glucuronides. The multiple reaction monitoring （MRM） transitions were m/z 289.3→97.1,291.3→105, 291.3→199.2, 273.2→145.4 and 255.2→159.1 for T, DHT, ADT, ETIO and E2 in positive mode, respectively; as well as m/z 463.3→85 for T glucuronide （T-G）, m/z 465.3→75 for DHT glucuronide （DHT-G）, ADT glucuronide （ADT-G）, ETIO glucuronide （ETIO-G） and m/z 447.3→271 for E2 glucuronide （Ez-G） in negative mode. In addition, the analytical method was also applied for the detection of steroid glucuronides in pooled human liver microsomes （HLM）, which might serve as a basis for further investigation of steroid metabolism in vivo and in vitro.