长链非编码RNA肝癌高表达转录本促进人骨髓间充质干细胞向肝样细胞的分化

背景:骨髓间充质干细胞在体外可以被诱导分化为肝样细胞,但是细胞功能不成熟。研究表明,长链非编码RNA可以影响间充质干细胞的分化,但是关于长链非编码RNA肝癌高表达转录本是否能够参与骨髓间充质干细胞向肝细胞分化还未有报道。目的:探讨长链非编码RNA肝癌高表达转录本在人骨髓间充质干细胞向肝样细胞分化中的作用。方法:体外添加细胞因子诱导人骨髓间充质干细胞(购自上海中科院细胞库)向肝样细胞分化,诱导4周后倒置显微镜观察细胞的形态学变化,免疫荧光技术检测肝细胞特异性蛋白的表达,qRT-PCR检测分化过程中肝癌高表达转录本的表达;然后通过慢病毒转染构建稳定表达肝癌高表达转录本的人骨髓间充质干细胞株,以转染阴性对照病毒作为对照组,两组同时添加细胞因子进行肝向细胞诱导分化,qRT-PCR、Western blot检测过表达组与对照组肝细胞特异性基因、蛋白表达的差异。结果与结论:①人骨髓间充质干细胞在体外添加细胞因子下可以成功被诱导分化为肝样细胞,在分化过程中肝癌高表达转录本的表达逐渐增高;②过表达肝癌高表达转录本后促进了人骨髓间充质干细胞诱导分化后肝细胞特异性基因及蛋白的表达;③结果表明,肝癌高表达转录本在人骨髓间充质干细胞向肝样细胞分化中发挥着至关重要的作用,将为细胞治疗肝脏疾病奠定坚实的理论基础。

长链非编码RNA肝癌高表达转录本通过微小RNA-134-5p促进宫颈癌细胞恶性生物学行为的机制研究

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)肝癌高表达转录本(HULC)通过抑制微小RNA-134-5p促进宫颈癌细胞增殖、侵袭和迁移,促进凋亡的作用及其作用机制。方法2019年10月至2020年5月,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测体外培养的人正常宫颈上皮细胞和宫颈癌细胞中HULC的表达情况,在宫颈癌C-33A细胞中转染特异性HULC siRNA,qRT-PCR检测转染效果,细胞计数试剂盒(CCK-8)法分析C-33A细胞增殖情况,采用流式细胞术分析C-33A细胞凋亡情况,Transwell实验分析C-33A细胞侵袭和迁移能力,双荧光素酶报告基因实验检测HULC与miR-134-5p的相互作用。在抑制HULC表达的C-33A细胞中转染miR-134-5p抑制剂,以同样的方法检测对细胞增殖、侵袭和迁移的影响。结果HULC在宫颈癌细胞(HeLa、Cas‐ki、SiHa、C-33A)中的表达水平为(1.95±0.24、2.26±0.21、1.77±0.19、3.49±0.40),显著高于正常宫颈上皮细胞1.00±0.11,HULC在C-33A细胞中的表达量最高(P<0.05)。转染特异性HULC siRNA能够抑制C-33A细胞中HULC的表达(0.94±0.08比0.18±0.02)。抑制HULC表达后,C-33A细胞OD值降低(0.59±0.08比0.38±0.05),凋亡率明显升高[(3.01±0.34)%比(18.54±2.16)%],侵袭[112.54±13.86比46.28±10.16]和迁移(158.65±18.66比78.18±10.80)能力减弱。HULC能够与miR-134-5p特异性结合,负向调控miR-134-5p的表达。抑制miR-134-5p的表达能够逆转抑制HULC导致的C-33A细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移能力的抑制作用。结论HULC通过抑制miR-134-5p的表达促进宫颈癌细胞增殖、侵袭和迁移,并诱导细胞凋亡。

长链非编码RNA肝癌高表达转录本对骨肉瘤细胞放射敏感性的影响

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)肝癌高表达转录本(HULC)对骨肉瘤细胞放射敏感性的影响。方法shRNA HULC慢病毒感染骨肉瘤细胞,以qRT-PCR测定干扰效果。以8 Gy X射线照射处理感染shRNA HULC慢病毒的骨肉瘤细胞,MTT、PI单染、Annexin V-FITC/PI双染法分别测定细胞增殖、周期和凋亡变化。Western blot检测细胞中p21、Cyclin D1、C-Caspase-3蛋白水平和胞浆、线粒体中细胞色素C(Cyt-C)蛋白水平。平板克隆实验检测骨肉瘤细胞的放射敏感性。结果shRNA HULC慢病毒感染可以明显下调骨肉瘤细胞中HULC表达水平。下调HULC或放射处理均可以抑制骨肉瘤细胞增殖[(100.00±9.65)% vs.(71.36±5.27)%、(63.48±5.93)%, t=4.512、5.585,P<0.05]、阻滞细胞周期[(50.15±5.14)% vs.(62.35±4.22)%、(66.05±5.23)%, t=3.177、3.756,P<0.05]和诱导细胞凋亡[(2.98±0.23)% vs.(22.61±3.26)%、(26.14±2.81)%,t=8.898、10.498,P<0.05],促进细胞中p21、C-Caspase-3蛋白表达并下调Cyclin D1蛋白水平,提高胞浆中Cyt-C蛋白水平并下调线粒体中Cyt-C蛋白水平。下调HULC联合放射对骨肉瘤细胞增殖[(71.36±5.27)%、(63.48±5.93)% vs.(49.32±5.76)%,t=4.890、2.967,P<0.05]、周期[(62.35±4.22)%、(66.05±5.23)% vs.(77.17±7.54)%,t=2.983、2.106,P<0.05]、凋亡[(22.61±3.26)%、(26.14±2.81)% vs.(36.21±3.26)%,t=6.164、4.564,P<0.05]及Cyclin D1、C-Caspase-3、Cyt-C蛋白表达影响作用更大。下调HULC后骨肉瘤细胞放射增敏比为1.432。结论下调HULC提高骨肉瘤细胞放射敏感性,这可能与协同放射阻滞细胞周期并诱导细胞凋亡有关。

肝癌高表达转录本调控microRNA613促进肝癌细胞增殖的机制研究

目的:研究肝癌高表达转录本(highly up-regulated in liver cancer,HULC)调控微小RNA613(micro RNA613,mi R-613)促进肝癌细胞增殖的作用机制。方法 :1在Hep G2肝癌细胞株中,过量或抑制表达HULC,通过实时荧光定量聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)和荧光素酶报告基因系统检测mi R-613的表达量和活性,分析HULC与mi R-613之间的相互关系;2通过高通量表达芯片筛查mi R-613作用的靶基因,在Hep G2细胞株中应用化学合成的mi R-613模拟剂(mimic)和抑制剂(inhibitor),用实时荧光定量PCR和蛋白印迹法分别检测靶基因和靶蛋白的表达情况;3HULC和mi R-613协同作用于肝癌细胞后,用流式细胞仪和软琼脂克隆形成试验观察肝癌细胞周期变化和克隆形成能力。结果:1在肝癌细胞中,HULC可调控mi R-613的表达,随着HULC表达量的增加,mi R-613表达和活性均降低;2Src基因是mi R-613作用的下游靶基因之一;3高表达HULC或抑制mi R-613表达可促进肝癌细胞周期改变和克隆形成。结论:肝癌细胞中HULC可调控mi R-613表达,通过Src基因相关的细胞信号转导途径,改变肝癌细胞的细胞周期等生物学特性。

β-榄香烯调节HULC表达对肝癌细胞恶性生物学行为的影响

目的探讨肝癌高表达转录本(HULC)在β-榄香烯调控肝癌细胞恶性生物学行为中的作用。方法生物信息学分析TCGA数据库肝癌组织中HULC的表达,采用实时定量PCR检测肝癌细胞中HULC的表达,SMMC-7721细胞转染HULC过表达质粒pcDNA3.1-HULC或小干扰RNA si-HULC,利用CCK-8法评估β-榄香烯和HULC对肝癌细胞增殖的影响,划痕和Transwell实验分析细胞迁移和侵袭能力的变化情况,Western blot检测上皮间质转化(EMT)相关因子的表达。结果肝癌组织和细胞中HULC表达上调。β-榄香烯处理或敲低HULC均可抑制SMMC-7721细胞的增殖、迁移侵袭和EMT过程。此外,β-榄香烯处理可降低HULC表达,而HULC过表达可部分阻断β-榄香烯对细胞增殖、迁移侵袭和EMT过程的抑制作用。结论β-榄香烯可能通过下调HULC表达来调节肝癌细胞的恶性生物学行为,为β-榄香烯靶向HULC作为肝癌治疗的潜在应用提供了新见解。

肝癌患者血清lncRNA HULC表达水平与肿瘤分期、淋巴结转移的关系

目的:探究肝癌患者血清长链非编码RNA(lncRNA)肝癌高表达转录本(HULC)与肿瘤分期、淋巴结转移的关系。方法:选取肝癌患者92例作为研究组,另选取体检健康人员50例作为对照组,比较分析两组血清lncRNA HULC表达水平。结果:研究组的lncRNA HULC相对表达水平显著高于对照组,两组比较差异有统计学意义(P<0.05);研究组的肝癌不同分期、不同淋巴结转移程度患者lnRNA HULC相对表达水平差异均有统计学意义(P<0.05),且伴随着肝癌恶性分期程度的增加、转移范围的扩大,lnRNA HULC相对表达增加。结论:肝癌患者高水平lncRNA HULC表达提示较为严重的恶性变程度以及广泛的淋巴结转移。

LncRNA HULC在乳头状甲状腺癌组织中的表达及意义

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)肝癌高表达转录本(HULC)在乳头状甲状腺癌组织中的表达及意义。方法选取90例乳头状甲状腺癌(PTC)患者作为研究对象,手术过程中采集PTC组织和距肿瘤边缘2 cm以上的癌旁组织,通过实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测HULC相对表达量。将不同序列转染TPC-1细胞,依据转染序列分为Si-HULC组、Si-Con组、空白组,分别对三组的HULC表达量、细胞增殖活性和侵袭能力进行检测。结果PTC组织的HULC相对表达量明显高于癌旁组织(P<0.05)。肿瘤直径≤2 cm、TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、有淋巴结转移的PTC癌组织HULC相对表达量明显高于肿瘤直径>2 cm、TNM分期Ⅰ~Ⅱ期和无淋巴结转移者(P<0.05)。与Si-HULC组比较,Si-Con组和空白组24、48、72、96 h的A值明显更高(P<0.05)。与Si-HULC组比较,Si-Con组和空白组HULC相对表达量明显更高,侵袭细胞数量明显更多(P<0.05)。结论HULC在PTC组织中相对表达量较高,且与肿瘤大小、TNM分期、淋巴结转移存在密切关联,只有尽早调节HULC,才能有效降低TOC-1细胞的增殖活性和侵袭能力。

lncRNA HULC对肝癌细胞miRNA差异表达谱及ceRNA调控网络的影响

目的探究长链非编码RNA(lncRNA)肝癌高表达转录本(HULC)对肝癌细胞微小RNA(miRNA)差异表达谱及竞争内源性RNA(ceRNA)调控网络的影响。方法选取人肝癌细胞系BEL-7402,瞬时转染HULC siRNA以降低lncRNA HULC的表达。通过高通量测序选取表达具有差异的miRNA,并通过实时荧光定量PCR进行验证。基于参考基因组,预测新miRNA。通过基因富集分析及ceRNA调控网络,研究这些基因的潜在功能。结果经敲低lncRNA HULC表达后,通过高通量测序挑选出了9个表达差异显著的miRNA。5个miRNA表达下调,4个miRNA表达上调。通过miRDeep2打分,挑选出了15个分值较高的新miRNA。基因富集分析结果显示,表达下调的miRNA的靶基因的分子功能与丝氨酸tRNA连接酶活性、蛋白激酶活性、阳离子通道活性、钙转运ATP酶活性等有关;表达上调的miRNA的靶基因与硒代半胱氨酸裂解酶活性、过氧化物酶体机制靶向信号1结合、过氧化物酶体靶向序列结合、蛋白质N-末端结合、肿瘤坏死因子受体超家族结合等有关。miRNA-靶基因互作网络、显著富集功能-功能互作网络揭示靶基因与miRNA的关联性以及功能间的相关性。结论在肝癌细胞系BEL-7402中lncRNA HULC具有调节多个表达差异的miRNA的作用,通过ceRNA调控网络模式,影响肝癌的发生、发展。

lncRNA HULC在乳头状甲状腺癌组织中的表达及意义

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)肝癌高表达转录本(HULC)在乳头状甲状腺癌(PTC)组织中的表达,以及干扰其表达后对细胞增殖活性和侵袭能力的影响。方法选取行手术治疗的PTC患者105例,收集术中切除的PTC组织及距离肿瘤边缘2 cm以上的癌旁组织,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测HULC的相对表达量。将不同序列分别转染TPC-1细胞,根据转染序列分为si-HULC组(转染HULC的小分子干扰序列)、si-Con组(转染阴性对照序列)、空白组(不作任何处理),检测各组HULC的表达及细胞的增殖活性、侵袭能力。结果PTC组织中HULC的相对表达量显著高于癌旁组织(P<0.001)。不同肿瘤直径、不同TNM分期、有无淋巴结转移PTC患者癌组织HULC相对表达量差异均有统计学意义(P<0.05),不同年龄、性别、病灶数量和局部侵犯类型PTC患者癌组织HULC相对表达量差异均无统计学意义(P>0.05)。si-HULC组HULC相对表达量、细胞增殖活性及侵袭细胞数均低于si-Con组和空白组(P<0.05),si-Con组与空白组之间差异均无统计学意义(P>0.05)。结论PTC组织中HULC表达升高,且与肿瘤大小、TNM分期和淋巴结转移有关。干扰HULC表达可抑制TPC-1细胞的增殖活性和侵袭能力。

长链非编码RNA HULC在乳腺癌组织中表达及临床意义

目的探讨长链非编码RNA肝癌高表达转录本(HULC)在乳腺癌组织中表达及临床意义。方法选取2013年5月至2015年5月在南阳市中心医院乳腺科行手术治疗且资料完整的乳腺癌病人112例,实时荧光定量PCR术检测乳腺癌和正常乳腺组织中HULC表达,病人均于术后1 d开始随访,随访截止日期2020年5月31日,以死亡作为终点事件,记录病人生存时间,采用Kaplan-Meier法进行生存分析,采用Cox比例风险回归模型分析影响乳腺癌病人预后的风险因素。结果乳腺癌组织中HULC表达量为(2.27±0.18),高于正常乳腺组织的(1.02±0.08),差异有统计意义(t=67.38,P<0.001);不同组织学分级、TNM分期、淋巴结转移、ER和Ki-67的乳腺癌组织中HULC表达量差异有统计学意义(P<0.05);以乳腺癌组织中HULC表达量的P25值为界值,将病人分为低表达组(n=29)和高表达组(n=83),低表达组病人生存时间(52.72±3.06)个月,5年生存率为82.76%,高表达组病人则分别为(35.51±2.25)个月和36.14%,差异有统计学意义(χ^(2)=15.16,P<0.001);HULC表达是影响乳腺癌病人预后的独立风险因素[HR=5.249(95%CI:1.965~14.024),P<0.05]。结论乳腺癌组织中HULC表达量升高,可能发挥类似癌基因的作用而参与了乳腺癌进展,且是影响病人预后的风险因素。

HULC在人脑胶质瘤组织中表达变化及对肿瘤细胞增殖侵袭的调控机制

目的观察肝癌高表达转录本(HULC)在脑胶质瘤组织中的表达变化,探讨其对脑胶质瘤细胞增殖侵袭能力的调控机制。方法收集19例正常脑组织、13例低级别及39例高级别脑胶质瘤组织样本,采用RT-PCR技术检测组织中HULC表达。人脑胶质瘤细胞U87随机分为感染1、2组与对照组,细胞体外慢病毒转染构建U87si HULC 1(感染1组)、U87si HULC 2(感染2组)干扰细胞内HULC表达,RT-PCR技术检测干扰效率,MTT法检测细胞增殖活力(吸光度值),Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力(穿膜细胞数),Western blotting技术检测上皮间质转化(EMT)相关分子[E-钙黏蛋白(E-cadherin)、Snail、波形蛋白(Vimentin)]、肿瘤干性相关分子CD133及侵袭相关分子金属基质蛋白酶2(MMP-2)蛋白的表达。结果高级别脑胶质瘤组织中HULC mRNA的相对表达量高于低级别脑胶质瘤组织、正常脑组织者,P均<0.05。感染1、2组HULC mRNA相对表达量、增殖活力、穿膜细胞数及E-cadherin、Snail、Vimentin、MMP-2及CD133蛋白表达高于对照组,P均<0.05。结论 HULC在人脑胶质瘤组织中呈高表达;HULC可通过促进EMT进程及上调MMP-2、CD133的表达促进人脑胶质瘤细胞增殖、侵袭。

lncRNA Hulc和miR-9-5p在乳腺癌中的表达水平及临床意义

目的检测乳腺癌组织中长链非编码RNA肝癌高表达转录本(lncRNA Hulc)、微小RNA-9-5p(miR-9-5p)的表达情况,探讨两者对乳腺癌淋巴结转移的预测价值。方法收集2017年1月至2019年1月贺州市人民医院诊治的80例乳腺癌患者的乳腺癌组织及其癌旁组织,应用实时荧光定量PCR检测乳腺癌组织和癌旁组织中lncRNA Hulc、miR-9-5p的表达水平;分析lncRNA Hulc、miR-9-5p的表达与乳腺癌患者临床病理参数的关系;采用Pearson相关性分析lncRNA Hulc与miR-9-5p表达的相关性,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析lncRNA Hulc和miR-9-5p对乳腺癌淋巴结转移的预测价值。结果乳腺癌组织中的lncRNA Hulc表达水平高于癌旁组织,miR-9-5p表达水平低于癌旁组织,差异均有统计学意义(P<0.05);T3+T4期、Ⅲ+Ⅳ期及有淋巴结转移乳腺癌患者的lncRNA Hulc表达水平分别高于T1+T2、Ⅰ+Ⅱ期及无淋巴结转移者,Ⅲ+Ⅳ期、有淋巴结转移乳腺癌患者的miR-9-5p表达水平分别低于Ⅰ+Ⅱ期、无淋巴结转移者,差异均有统计学意义(P<0.05)。乳腺癌组织中lncRNA Hulc与miR-9-5p的表达呈负相关(r=-0.472,P=0.003)。lncRNA Hulc和miR-9-5p对乳腺癌淋巴结转移均有一定的预测价值,ROC曲线下面积均>0.7。二者联合应用的预测价值更高,敏感度和特异度分别为0.818、0.809。结论lncRNA Hulc在乳腺癌组织中表达增加,miR-9-5p在乳腺癌组织中表达下调,lncRNA Hulc和miR-9-5p的表达均与乳腺癌患者的不良病理参数相关,且对淋巴结转移有一定的预测价值。lncRNA Hulc、miR-9-5p可能是乳腺癌的治疗靶标。

长链非编码RNA HULC在肿瘤中作用的研究进展

近年来随着分子生物学研究的迅猛发展,长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)越来越受到高度重视,它在肿瘤发生、发展、治疗和预后等方面所发挥的作用也逐渐被深入认知.肝癌高表达转录本(highly up-reglated in liver cancer, HULC)是lncRNA的一种,最先在肝癌中被发现,近年研究揭示它与其他许多癌症,例如胃癌、结肠直肠癌、骨肉瘤和弥漫性大B细胞淋巴瘤等,也密切相关.本文主要对HULC在几种不同肿瘤组织中的表达情况及其作用机制的研究进展做一综述.

LncRNA HULC作为多种恶性肿瘤潜在预后因子的荟萃分析

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)肝癌高表达转录本(HULC)的表达情况与肿瘤临床预后的关系。方法根据制定的纳入和排除标准,检索Pub Med、Embase和Cochrane Library数据库,筛选符合标准的研究,采用Review Manager 5.3软件进行统计学分析。结果共检出292篇相关文献,根据纳入和排除标准及文献质量评估方法共筛选出8篇文献,样本量为772例患者。荟萃分析的合并效应量显示,与HULC低表达组患者相比,HULC高表达组患者的总生存期较短(HR=2.10,95%CI:1.55~2.86,P﹤0.001)。根据肿瘤种类、患者国籍、样本类型进行分层亚组分析,在非肝癌组、胃肠道肿瘤组、非胃肠道肿瘤组、中国人群组、组织样本组中得到了相似的结果。OR值的合并效应量显示,过表达的HULC与多种临床病理特征有关。结论 LncRNA HULC在多种人类肿瘤中呈现过表达,这预示着较短的总生存期和较差的临床病理分期。

lncRNAs在肿瘤中的研究进展

一直以来,人们一直在努力寻找肿瘤的治疗靶点,对长链非编码RNA(lnc RNAs)的研究可能为更好地研究肿瘤提供了良好的机遇。越来越多的研究证明lnc RNAs在肿瘤发生、发展、转移、基因调节中有重要作用。文章简单综述了几种lnc RNAs在肿瘤中的可能作用机制及临床应用,以期为肿瘤防治的研究提供理论基础。

LncRNA-HEIH和LncRNA-HULC与乙型肝炎相关性肝病的相关性

目的探究LncRNA-HEIH和LncRNA-HULC与乙型肝炎(简称乙肝)相关性肝病的相关性。方法选取本院2017年6月-2018年6月诊断及治疗的慢性乙肝患者51例、乙肝肝硬化患者39例、乙肝相关性肝癌31例,分别纳入肝炎组、肝硬化组及肝癌组,并选同时期同年龄段健康体检者50例作为健康对照组,比较4组外周血中LncRNA-HEIH和LncRNA-HULC水平,使用ROC曲线评估其预测肝硬化和肝癌的诊断效能。结果肝炎组与健康对照组LncRNA-HEIH和LncRNA-HULC水平差异无统计学意义(P>0.05),肝硬化组LncRNA-HEIH和LncRNA-HULC显著高于健康对照组(P<0.05),肝癌组LncRNA-HEIH和LncRNA-HULC显著高于肝硬化组(P<0.05)。ROC曲线显示单独诊断肝硬化的AUC面积分别为0.784、0.794,联合诊断的AUC面积为0.899;单独诊断肝硬化的AUC面积分别为0.814、0.836,2组联合诊断的AUC面积为0.937,联合诊断效能显著优于单独诊断(P<0.05),且能显著提高诊断敏感度(P<0.05)。结论 LncRNA-HEIH和LncRNA-HULC在乙肝相关肝硬化及肝癌中具有重要意义,两者联合可有效预测HBV相关肝硬化和肝癌的发生。