复方苦参注射液通过调节小鼠肝癌H22细胞自噬抑制肿瘤生长的实验研究

目的 该实验旨在探究复方苦参注射液对小鼠肝癌H22细胞自噬的影响,为进一步探究可能发生机制奠定基础。方法 建立肝癌H22细胞荷瘤小鼠模型;将荷瘤小鼠模型随机分为模型对照组(生理盐水组)、复方苦参注射液组(低剂量7.5 g生药/kg、中剂量15 g生药/kg、高剂量30 g生药/kg),每组8只,建模48 h后开始给药,各组均为腹腔注射给药,连续给药12 d,对比观察各组小鼠生长情况,记录瘤体大小,绘制瘤体生长曲线;计算各组小鼠的平均瘤重及抑瘤百分率,通过透射电镜观察自噬体、自噬泡的形成(自噬金标准),Western blot检测自噬因子LC3-Ⅰ及LC3-Ⅱ的蛋白表达,并计算二者比值,以检验自噬水平。结果 与模型组相比,复方苦参注射液各组均能抑制小鼠瘤体增长,抑瘤率和复方苦参注射输液浓度之间呈正相关(P<0.05);复方苦参注射液各组自噬体、自噬泡明显增多,且自噬体、自噬泡和复方苦参注射输液剂量之间存在浓度依赖关系;复方苦参注射输液各组LC3-Ⅱ表达明显增高(P<0.05),复方苦参注射液各组肿瘤组织中LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ均明显增高(P<0.05),且复方苦参注射液各组间存在明显量效关系(P<0.05)。结论 复方苦参注射液可改善肝癌细胞H22荷瘤小鼠的生长情况,减缓瘤体生长速度,提高肿瘤抑瘤率,促进肝癌细胞H22自噬而抑制肿瘤生长,并且和复方苦参注射输液剂量之间存在一定的量效关系。

应用RAPD技术检测小鼠肝癌H22细胞克隆株的遗传学改变

目的：用RAPD技术检测小鼠肝癌H22细胞克隆株的遗传变异。方法：小鼠肝癌H22细胞的4个克隆株H22-H8D8、H22-H2G4、H22-H2E10、H22-H2C4，用47条随机引物经PCR扩增，对扩增产物进行电泳，凝胶分析系统观察结果并照相。结果：47条引物均能扩增出明显的条带，条带数多为4-10条，片段大小在200-2000bp之间。其中4条引物的扩增条带具有多态性，表现为带的有无、移动和强弱差异。结论：RAPD技术可以用来对小鼠肝癌H22细胞克隆株进行遗传检测。

牛膝多糖对小鼠肝癌H22细胞bcl-2和Fas基因表达的影响

目的:研究牛膝多糖(ABPS)对肝癌H22细胞bcl-2和Fas基因mRNA表达的影响。方法:用肝癌H22细胞进行体外培养,采用MTT法检测不同浓度ABPS对H22细胞的生长抑制作用;RT-PCR检测bcl-2和Fas基因mRNA表达的变化。结果:ABPS对肝癌H22细胞具有显著生长抑制作用,并呈量效关系;bcl-2基因mRNA表达水平随着ABPS浓度的增加而下降,Fas基因mRNA表达水平随着ABPS浓度的增加而上升。结论:ABPS可抑制H22细胞增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与下调bcl-2基因mRNA表达、上调Fas基因mRNA表达有关。

化积益肝煎对小鼠肝癌H22细胞β-catenin和cyclin D1表达的影响

目的:观察化积益肝煎对小鼠肝癌H22细胞抑制作用,并探讨其对肝癌WNT信号传导通路上β-catenin和cyclin D1表达的影响。方法:将接种肝癌H22细胞的小鼠随机分为对照组、化积益肝煎(中药组)、环磷酰胺(西药组)、化积益肝煎+环磷酰胺(中西药组),连续给药15d后处死,剥离瘤组织称重;用免疫组化方法检测β-catenin和cyclin D1表达。结果:中药、西药、中西药合用可明显抑制小鼠肝癌的生长,抑瘤率分别为38.35%、55.48%、70.93%,具有统计学差异(P<0.05);中西药组抑瘤率(70.93%)高于西药组抑瘤率(55.48%),具有统计学差异(P<0.05);各用药组β-catenin和cyclin D1表达与对照组相比下降(P<0.05)。结论:化积益肝煎对小鼠肝癌有抑制作用,并对化疗药物有一定的协同增效作用;化积益肝煎可通过影响小鼠肝癌细胞WNT传导通路信号的传导,从而抑制小鼠肝癌细胞的增殖。

芝麻素对肝癌H22细胞增殖及H22荷瘤小鼠肿瘤生长的影响

目的观察芝麻提取物芝麻素对小鼠肝癌H22细胞增殖的影响及其对H22荷瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用。方法用MTT法检测不同质量浓度的芝麻素对小鼠肝癌H22细胞体外增殖的影响;同时将移植H22瘤株的昆明种小鼠分成:模型组(生理盐水)、环磷酰胺(30 mg/kg)组、芝麻素高、低剂量(150、15 mg/kg)组、观察芝麻素对荷瘤小鼠的抑瘤作用。结果芝麻素在体外对H22肝癌细胞的增殖有显著的抑制作用,以8、16、32μg/mL组在48 h的抑制率最显著;芝麻素在体内对H22肿瘤细胞的生长有明显的抑制作用,芝麻素低剂量组的小鼠皮下瘤质量较模型组低(P<0.05),但仍比环磷酰胺组高(P<0.05),芝麻素高剂量组和模型组比较无显著差异(P>0.05)。结论芝麻素有明显抑制肝癌H22细胞增殖的作用。

半枝莲多糖SBP-2A对小鼠肝癌H22细胞增殖的抑制作用

目的探讨半枝莲多糖SBP-2A对小鼠肝癌H22细胞增殖及凋亡的影响。方法体外培养小鼠肝癌H22细胞分为阴性对照组(不加任何药物)、阳性对照组(黄芪多糖200μg/mL)、低剂量治疗组(半枝莲多糖SBP-2A 50μg/mL)、中剂量治疗组(半枝莲多糖SBP-2A 100μg/mL)、高剂量治疗组(半枝莲多糖SBP-2A 200μg/mL)。MTT比色法检测各组细胞增殖的抑制活性。HE染色观察各组细胞形态学变化。流式细胞术Annexin V/PI双染法检测各组细胞凋亡水平。蛋白质印迹法(Western blot,WB)检测各组细胞B细胞淋巴瘤2基因(B cell lymphoma 2 gene,Bcl-2)、BCL2关联X蛋白(BCL2-associated X protein,Bax)的蛋白表达水平。结果低、中、高剂量治疗组细胞增殖抑制率明显增加。低、中、高剂量治疗组均较阴性对照组出现一定程度的凋亡形态特征,且高剂量治疗组最为明显。高剂量治疗组细胞凋亡率显著高于阴性对照组及低、中剂量治疗组(P<0.05)。低、中、高剂量治疗组Bax蛋白表达水平均显著高于阴性对照组(P<0.05);中、高剂量治疗组Bcl-2蛋白表达水平均显著低于阴性对照组(P<0.05)。结论半枝莲多糖SBP-2A可显著抑制小鼠肝癌H22细胞增殖,其作用机制可能与调控Bax、Bcl-2蛋白表达水平从而促进细胞凋亡有关。

^(125)I-VIP与小鼠肝癌H22细胞受体结合特性研究

目的 探讨放射性碘标记血管活性肠肽(VIP)与肝癌细胞的体内、外结合特性。方法 氯胺 T法标记、Seph adexG 5 0柱层析分离纯化制备1 2 5I VIP。通过饱和结合实验与竞争结合实验,评价1 2 5I VIP与鼠H2 2肝癌细胞受体的体外介导结合特性;进行体内动态生物分布及非标记VIP竞争分布实验,观察1 2 5I VIP在荷H2 2小鼠体内尤其在移植瘤中的分布变化规律,评价其体内受体结合特性。结果 1 2 5I标记率为73 8% ,1 2 5I VIP比活度18 2TBq mmol,放射化学纯度(RCP)98%。1 2 5I VIP与H2 2细胞受体的结合具有饱和性,Scatchard作图显示为双位点系统,高、低亲和力结合位点的解离常数(Kd)分别为1 74nmol L与2 8 63nmol L ,最大结合容量(Bmax)分别为0 2 7pmol 10 6 细胞与5 75pmol 10 6 细胞,非标记VIP以剂量依赖方式抑制1 2 5I VIP与H2 2细胞结合。各时相肿瘤组织放射性均高于肌肉(P <0 0 5 ,P <0 0 0 1) ,2 0minT NT比值达最大为2 68,肺放射性高于血液与肝脏(P <0 0 5 ,P <0 0 1) ,体内放射性主要经肾脏排泄;10 μg和40 μg非标记VIP对T NT比值的抑制率分别为2 6 87%与3 5 82 %。结论 1 2 5I VIP在体内、外与鼠H2 2肝癌细胞的结合由受体介导。此结果为进一步应用放射性核素标记VIP靶向诊治肝细胞癌研究提供了理论依据。

沙冬青提取物(JA1)对小鼠肝癌H_(22)细胞体外增殖和皮下移植生长的抑制

采用噻唑蓝(MTT)还原法测定梯度浓度的沙冬青提取物(JA1)对体外培养小鼠肝癌细胞株H22增殖的影响;同时对皮下移植肿瘤H22小鼠灌服不同剂量的JA1以检测抑瘤率,进一步采用流式细胞术、光镜和透射电子显微镜技术,检测和观察JA1对小鼠移植性肿瘤H22的诱导凋亡作用。结果显示,JA1可显著抑制体外培养小鼠肝癌H22细胞的增殖,并且这种抑制存在浓度和时间关系。同时,JA1对小鼠皮下移植性肿瘤H22也有明显的抑制作用。流式细胞分析表明,JA1灌胃试验组瘤组织细胞DNA直方图上见有明显的凋亡峰;在光镜和电镜下,JA1灌胃试验组也见有明显的瘤细胞凋亡,表明JA1对体内、外H22细胞的增殖抑制是以诱导凋亡为基础的。

氨氯地平及5-氟尿嘧啶联合用药对小鼠肝癌H22细胞的抑制作用

目的探讨氨氯地平(amlodipine)及5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-Fu)联合用药对小鼠肝癌H22细胞的抑制作用。方法经不同终浓度的氨氯地平(3.125、6.25、12.25、25和50μmol/L)及不同终浓度的5-Fu(12.5、25、50、100和200μg/ml)单独及联合作用小鼠肝癌H22细胞,24、48、72 h后,采用MTT法检测药物对H22细胞生长的抑制作用;流式细胞术及免疫细胞化学法分别检测药物作用48 h后对H22细胞凋亡及细胞中Bcl-2、Bax表达水平的影响。将H22细胞(1.0×107个/ml)经小鼠右腋皮下注射,0.2 ml/只,于注射第2天,将小鼠分为空白对照组(经腹腔注射0.9%生理盐水,0.2 ml/d)、氨氯地平组[用氨氯地平片剂灌胃,10 mg/(0.1 ml·10 g体重·d)]、5-Fu组[分别于接种后第3、6、9天,经腹腔注射5-Fu溶液,10 mg/(1 ml·10 g体重·d)]及联合用药组(氨氯地平及5-Fu的给药方式与剂量同氨氯地平组及5-Fu组),每组10只(雌雄各半),连续给药10 d,次日断颈处死小鼠,称瘤重,并计算肿瘤生长抑制率。结果氨氯地平组、5-Fu组及联合用药组的细胞生长抑制率均随药物浓度增加逐渐上升,且呈剂量-时间依赖性。联合用药组与氨氯地平组及5-Fu组比较,H22细胞的凋亡率明显升高(P<0.05);Bcl-2表达水平明显降低,Bax的表达水平明显升高(P<0.05);小鼠体内瘤重明显降低(P<0.001),肿瘤生长抑制率明显升高(P<0.01)。结论氨氯地平与5-Fu联合用药对体内H22细胞的抑制作用明显强于各单独用药组,具有协同作用,为氨氯地平作为一种化疗增敏剂用于肿瘤的临床治疗提供了实验依据。

榄香烯对肝癌H22细胞荷瘤小鼠的抑瘤作用及其可能机制

目的研究榄香烯对肝癌H22细胞荷瘤小鼠的抑瘤作用及与c-Met磷酸化表达水平之间的关系。方法建立H22小鼠肝癌实体瘤模型。将60只H22肝癌实体瘤模型小鼠分为4组:100与50mg·kg^(-1)组、5-氟尿嘧啶组和生理盐水组各15只。药物注射30d后,通过测定荷瘤小鼠的瘤质量,计算抑瘤率;同时采用免疫组织化学和免疫荧光技术检测肿瘤组织和H22细胞中c-Met磷酸化的表达情况。结果 100mg·kg^(-1)榄香烯能使肝癌荷瘤小鼠的瘤质量减少,抑瘤率为41.6%。免疫组化结果显示100mg·kg^(-1)榄香烯组c-Met磷酸化表达显著增强,与生理盐水组相比差异有统计学意义(P<0.05);榄香烯组与5-Fu组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。体外免疫荧光结果显示c-Met磷酸化表达程度随榄香烯药物作用时间增加而增强。结论榄香烯具有抗肿瘤作用,作用机制可能与能增强c-Met磷酸化的表达有关。

低强度超声对小鼠肝癌H_(22)细胞抑制效应的初步研究

目的:观察低强度超声对小鼠肝癌H22细胞体外生长的影响。方法:以低强度超声辐照小鼠肝癌H22细胞,采用倒置显微镜观察和MTT法检测观察超声对小鼠肝癌H22细胞的抑制作用。结果:低强度超声波能够显著抑制小鼠肝癌H22细胞的增殖,并且跟辐照时间呈剂量依赖关系。辐照后24h其MTT光吸收值随着超声作用时间的延长而显著降低。结论:低频超声辐照对小鼠肝癌H22细胞体外生长具有明显的抑制作用。

软骨多糖抑制H22肝癌细胞生长的作用及机制研究

探讨软骨多糖(CA)在体内抑制H22肝癌细胞生长的作用及其机制。以H22细胞腹水瘤模型为研究对象,设对照组﹑CA组两组,分别考察CA对各组小鼠的生活状态的影响。并且应用苏木素伊红(HE)染色、原位末端脱氧核苷酸转移酶标记法(TUNEL)、流式细胞术(FCM)及免疫荧光法对肿瘤细胞的生长和凋亡进行研究。CA可以在一定程度上促进H22细胞的凋亡,抑制肿瘤细胞的生长,延长小鼠的生存时间。并且,随着用药时间的延长,CA组的P21表达增强,而CyclinD1表达水平降低。软骨多糖有促进肿瘤细胞凋亡的作用,是一种新型的抗癌药物,具有广泛的应用前景。

白花蛇舌草诱导HSP70表达对H22肝癌细胞移植瘤T淋巴细胞的影响

目的观察白花蛇舌草对H22肝癌细胞移植瘤鼠瘤体T淋巴细胞亚群的影响。方法将中药处理后的H22肝癌细胞,采用HSP70单抗封闭技术分为白花蛇舌草和党参未封闭、封闭及RPMI-1640空白对照共5组;观察各组CD4+、CD8+T淋巴细胞表达情况。结果与空白对照组比较,白花蛇舌草未封闭组CD8+、封闭组CD4+表达明显上调;党参封闭组CD4+表达也明显上调;与白花蛇舌草封闭组比较,白花蛇舌草未封闭组CD8+T淋巴细胞表达明显上调。结论白花蛇舌草诱导恶性肿瘤瘤体HSP70的高表达,增强机体对肿瘤的免疫作用,其机理可能与提高瘤体CD4+、CD8+CTL表达有关。

川牛膝多糖对小鼠肝癌细胞H_(22)抑制作用研究

观察川牛膝多糖对小鼠肝癌细胞H2 2 抑制作用。结果表明 :川牛膝多糖ig ,对小鼠肝癌细胞H2 2 (腹水型 )有一定的抑制作用趋势。

白藜芦醇对小鼠肝癌细胞H_(22)的抑制作用

目的 :研究白藜芦醇对体外培养的小鼠肝癌细胞 H2 2 生长的影响。方法 :应用MTT法、流式细胞仪来分析白藜芦醇对 H2 2 细胞生长的影响及细胞周期的变化。结果 :白藜芦醇对 H2 2 细胞的增殖具有抑制作用 ,IC5 0为 6.1 2 mg/L ,流式细胞术证实 ,白藜芦醇能引起 H2 2 细胞 S期阻滞。结论 :白藜芦醇通过改变 H2 2 细胞的细胞周期分布来抑制其生长。

树舌多糖GF对小鼠肝癌H_(22)细胞P53及RB基因的影响

目的:为探明树舌多糖GF对肝癌H22瘤细胞RB基因及P53基因的影响。方法:用ELISA法检测RB基因及P53基因用药前后表达的差异。结果:树舌多糖GF组中P53基因、RB基因的表达量均显著高于荷瘤组(P<0.01)。树舌多糖组、环磷酰胺组无显著差异。结论:树舌多糖GF能使肝癌H22细胞P53及RB基因的表达上调。

虎杖提取物白藜芦醇对鼠肝癌细胞H22生长及扩增的影响(英文)

目的 测定虎杖的有效成分白藜芦醇对体外培养的小鼠肝癌H2 2的抗癌活性。方法 肝癌细胞H2 2调节到 (1× 10 6)·ml-1,将适宜H2 2细胞数 (2× 10 4 /孔 )接种在 96孔培养板上 ,在 5 %CO2 、37℃培养箱中温育 12h后 ,用MTT法测定白藜芦醇对肝癌细胞的生长抑制率 ,并在显微镜和电镜下观察肝癌细胞的变化。结果 白藜芦醇终浓度为 5 .0 μg·ml-1、10 μg·ml-1及 2 0 μg·ml-1,在 8h、12h、2 4h和 48h及白藜芦醇终浓度为 2 .5 μg·ml-1的抑制率 ,较对照组有显著性差异 (P <0 .0 5 )。显微镜下观察经药物处理 48h的肝癌细胞可见细胞膜不规则、肿胀和染色质断裂 ,电镜下可见细胞出现细胞电子密度增加及出现凋亡小体。结论 白藜芦醇对体外培养的肝癌细胞H2 2的生长具有抑制作用 ,它的机制也许是诱导H2 2细胞凋亡。

培元抗癌汤联合替加氟对小鼠H22肝癌细胞生长的抑制作用

目的:观察培元抗癌汤联合替加氟对小鼠H22肝癌细胞生长抑制作用以及对癌相关成纤维细胞(CAFs)调节作用和对细胞因子CXCL1、CXCL2、CXCL8的影响。方法:制备H22肝癌细胞腹水型瘤株悬液,在健康小鼠腋下接种瘤细胞悬液造模,造模成功后随机分为模型组、替加氟组、中西结合组,分别予0.9%的氯化钠溶液、替加氟、培元抗癌汤联合替加氟进行药物干预。观察各组小鼠一般情况,连续用药两周后处死小鼠取瘤组织称重,并计算抑瘤率;Western blot法检测转移瘤中α-SMA、Vimentin、CXCL1、CXCL2、CXCL8蛋白表达水平。结果:干预后,中西结合组较其他两组比较,一般情况较好,小鼠进食、饮水状况良好,体重有所增加,对外部刺激反应敏感,活动无明显异常。替加氟组、中西结合组的瘤体重量明显低于模型组;中西结合组瘤体重量较替加氟组低,差异有统计学意义(P<0.05)。替加氟组、中西结合组小鼠α-SMA、Vimentin、CXCL1、CXCL2、CXCL8蛋白表达均低于模型组,差异有统计学意义(均P<0.05);中西结合组的上述指标均低于替加氟组,差异有统计学意义(均P<0.05)。结论:培元抗癌汤联合替加氟能调节肿瘤微环境中CAFs及细胞因子CXCL1、CXCL2、CXCL8,抑制小鼠H22肝癌细胞生长。

消癌解毒方对肝癌细胞株H22凋亡及Survivin表达的影响

目的:研究消癌解毒方对肝癌细胞株H22凋亡及Survivin表达的影响,探讨其可能的抗癌机制。方法:建立小鼠H22移植瘤模型,分对照组和XJR低、中、高剂量(10、30、90g/kg)组及顺铂(0.001g/kg)组进行治疗,流式细胞术检测各组移植瘤细胞周期及凋亡率,Western blot法检测H22移植瘤细胞Survivin蛋白表达。结果:消癌解毒方各剂量组和顺铂阳性对照组的小鼠平均凋亡率均高于模型组小鼠平均凋亡率。二者比较,差异均具有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。FCM细胞周期显示,与模型组比较,消癌解毒方中剂量组和顺铂阳性对照组细胞G0/G1期比例相对增加,P<0.05,差别具有统计学意义,S期及G2从期比例相对下降,细胞周期于G0/G1期发生阻滞,P<0.05,差别具有统计学意义。Western blot法检测各组Survivin蛋白表达结果与模型组相比,各组Survivin蛋白表达均有下降趋势,其中DDP阳性对照组Survivin蛋白表达降低最明显,消癌解毒方10mg/kg低剂组、90mg/kg高剂组和30mg/kg中剂组Survivin蛋白表达也依次降低。结论:消癌解毒方能促进肿瘤细胞凋亡,抑制Survivin蛋白表达,是其抗癌作用机制之一。