抑制内质网应激关键信号通路蛋白eIF2α去磷酸化与肝细胞增殖及c-Met表达的关系

目的探讨抑制内质网应激(ERS)关键信号通路蛋白真核细胞起始因子2α(eIF2α)去磷酸化与肝细胞增殖及促肝细胞生长因子受体(c-Met)表达的关系。方法将人肝细胞株L02分为对照组和胡萝卜素(TG)组,TG组加入含内质网钙平衡抑制剂毒胡萝卜素(TG)的RPMI1640培养基,诱导构建细胞ERS模型;对照组仅加入RPMI1640培养基,培养48 h。采用CCK-8检测细胞活力,Western blotting法检测细胞ESR相关蛋白p-eIF2α、ERAD通路相关蛋白HRD1、XBP1以及c-Met蛋白表达。另取L02细胞,分为TG组和Salubrinal+TG组,Salubrinal+TG组给予eIF2α去磷酸化抑制剂Salubrinal预处理2 h,然后加入1μmol/L TG培养48 h;TG组加入1μmol/L TG培养48 h。采用CCK-8检测细胞活力,Western blotting法检测细胞eIF2α、p-eIF2α、HRD1、XBP1、c-Met蛋白表达。结果与对照组相比,TG组p-eIF2α、HRD1表达水平升高,TG组ERS相关蛋白p-eIF2α表达上调,ERAD通路激活,表明ERS细胞模型构建成功。TG组细胞增殖活力和c-Met蛋白表达水平均低于对照组(P均<0.05)。与TG组相比,Salubrinal+TG组细胞XBP1、HRD1蛋白表达降低,细胞增殖活力和c-Met蛋白表达升高(P均<0.05)。结论在肝细胞ERS中,抑制eIF2α去磷酸化能够部分恢复肝细胞细胞增殖活力及c-Met表达,促进细胞存活。

饲粮能氮限饲与补偿对蒙古羔羊肝脏重量、肝细胞增殖和增肥及生长激素受体、类胰岛素生长因子基因表达量的影响

本文旨在研究饲粮能氮限饲与补偿对蒙古羔羊肝脏重量、肝细胞增殖和增肥及生长激素受体(GHR)、类胰岛素生长因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)、类胰岛素生长因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)基因表达量的影响。选用体重相近的蒙古羔羊80只,随机分为4组,分别为对照组、蛋白质限饲组(PR组)、能量限饲组(ER组)、蛋白质能量双重限饲组(BR组),限饲期(60 d)内各组分别饲喂粗蛋白质(CP)为15.08%、9.24%、15.01%和6.27%,对应代谢能(ME)为10.61、10.49、8.36和8.10 M J/kg的饲粮。之后的90 d补偿期,各组均饲喂相同营养水平(CP为12.48%、M E为9.77 M J/kg)的饲粮。分别于限饲期和补偿期结束时屠宰,采集肝脏组织,称重,测定肝脏DNA含量、肝细胞DNA和蛋白质浓度,并应用实时定量PCR技术检测GHR、IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ基因表达量的变化。结果表明:限饲60 d后,ER组(P<0.05)、BR组(P<0.01)羔羊肝脏重量显著或极显著低于对照组;PR组、ER组和BR组肝细胞数量均低于对照组,肝细胞体积变化不大;各限饲组羔羊肝脏IGF-Ⅰ基因表达量显著低于对照组(P<0.05);PR组(P<0.01)、ER组(P<0.01)和BR组(P<0.05)羔羊肝脏IG F-Ⅱ基因表达量显著或极显著低于对照组。补偿90 d后,各限饲组羔羊肝脏重量、肝细胞数量、肝细胞体积以及GHR、IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ基因表达量与对照组均无显著差异(P>0.05)。结果提示,3月龄开始限饲的蒙古羔羊,限饲能量对肝脏生长发育的抑制强于比限饲蛋白质,而蛋白质能量双重限饲造成的负面影响最大;单独限饲能量或蛋白质羔羊肝脏中GHR、IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ基因表达量的下降幅度大于蛋白质能量双重限饲;经过饲粮能氮补偿,限饲影响的指标均恢复到与未限饲相同水平。

扶正化瘀方影响肝硬化大鼠肝细胞增殖的病理及免疫组化研究

目的 :研究扶正化瘀方对肝硬化大鼠肝细胞增殖的影响及其作用机理。方法 :以 DMN诱导大鼠肝硬化、肝癌的动物模型 ,检测用药后血清及肝组织指标的变化。结果 :DMN可诱导大鼠肝硬化、肝癌的发生 ,表现为 ALT、AKP、γ- GT、AFP的增加 ,Alb含量下降 ,肝细胞异常增生 ,肝癌结节形成 ,肝癌组织 TGF-β1、TGF-β R的表达减少 ;扶正化瘀方具有保护肝细胞 ,抗肝纤维化 ,抑制肝细胞异常增生的作用 ,并能使癌组织周围表达低下的 TGF-β1、TGF-β R含量显著增加 ,古典名方——人参鳖甲丸也具有上述作用 ,其总体疗效略低于扶正化瘀方。结论 :扶正化瘀方的保护肝细胞、抗肝纤维化 ,抑制肝细胞异常增生及提高 TGF-β1、TGF- β R表达可能是该方治疗慢性肝病、预防肝癌发生的主要机理。

肝细胞增殖因子促进受损肝细胞增殖的可能机制

目的:探讨肝细胞增殖因子(ALR)促进受损肝细胞增殖的可能机制。方法:采用细胞增殖试验(MTT法)观察经ALR刺激的大鼠肝枯否细胞(KC)的条件培养液(KCCM+)对受损肝细胞增殖的影响,同时用免疫组织化学方法检测正常大鼠肝脏组织中ALR的分布、大鼠枯否细胞膜表面结合的ALR以及ALR对枯否细胞IL-6表达的影响。结果:受损肝细胞经枯否细胞条件培养液刺激后增殖明显。正常大鼠肝细胞内可表达合成ALR,枯否细胞膜表面可见ALR免疫反应颗粒,经ALR刺激后枯否细胞IL-6免疫反应信号增强。结论:ALR可能通过首先刺激枯否细胞,从而促进受损肝细胞增殖。

神经递质对肝细胞增殖的影响

目的 探讨自主神经控制对人肝细胞增殖的影响及其机理 ,并对增殖相关受体定位。方法 用去甲肾上腺素 (NE)及其拮抗剂及激动剂和乙酰胆碱 (Ach)及其阻滞剂作用于人传代正常肝L0 2细胞及肝癌Bel 740 2细胞 ,分别于 4h、2 4h、48h及 72h用改良MTT法检测上述药物对细胞增殖的影响 ;免疫组织化学染色法对肝L0 2细胞的肾上腺素受体 (α1B AR及 β2 AR)和表皮生长因子受体 (EGFR)定位。结果 NE对人正常肝细胞及肝癌细胞具有促增殖作用 ,且随浓度增加其促增殖作用也增加 ,4h的增殖率较其它时间点显著增高 (P<0 .0 5 ) ;NE +心得安组的作用与NE组间差异无显著性意义 ;二羟苯基异丙氨基乙醇的作用不明显 ;Ach对人正常肝细胞的增殖具有抑制作用 ,且随浓度增加其抑制作用也增加 ,加用阿托品在 2 4h及 48h与Ach比抑制率显著降低 (P<0 .0 5 ) ;琥珀胆碱组在 2 4h、48h及 72h对细胞的增殖也具有抑制作用 (P<0 .0 5 ,P<0 .0 1)。所有人肝L0 2细胞都呈α1B AR、β2 AR及EGFR免疫反应阳性 ,主要定位于胞膜及胞浆。结论 血清存在下 ,交感神经递质NE早期对人正常肝细胞L0 2及人肝癌细胞Bel 740 2具有促增殖作用 ,其作用是通过激动α AR实现的 ,β AR对人肝细胞增殖无影响。副交感神经递质Ach对人正常肝细胞L0 2的增殖?

鲨鱼肝刺激物的促肝细胞增殖和抗小鼠急性肝损伤作用

肝刺激物(hepatic stimulator substance,HSS)是从初断乳大鼠肝和部分肝切除后的再生肝中发现的一种肝脏刺激因子,它存在于新生肝和再生肝的肝细胞胞液中,能刺激肝细胞有丝分裂,促进肝细胞再生和肝细胞DNA的合成.与其他肝细胞因子不同,HSS的作用只有组织特异性,而没有种属特异性,目前已从猪、狗、兔等多种动物的乳肝组织及人胎肝组织提取出HSS.大量研究证明,从哺乳动物提取的HSS对CCl4、D-(+)-氨基半乳糖、硫代乙酰胺(TAA)、乙醇造成的大鼠急性肝损伤有明显的保护作用[1,2].研究表明鲨鱼组织提取物有可能用于提高和改善人类机体免疫状况[3].本文探讨了其对小鼠急性肝损伤的影响.

康强硒、硒多糖对染砷大鼠肝细胞增殖周期的影响

选用Wistar大鼠随机分为对照组 (蒸馏水 )、砷组(4 6mg/kgAs2 O3)、砷 +康强硒①组 (4 6mg/kg +0 1mgSe3+/kg)、砷 +康强硒②组 (4 6mg/kg + 0 2mgSe3+/kg)、砷 +硒多糖组 (4 6mg/kg+ 40mg/kg) 5组。流式细胞仪测定肝细胞周期 ,病理组织切片观察病理改变。结果染砷组大鼠肝细胞比对照组G0 /G1期细胞数显著减少 ,S和G2 +M期细胞数显著增多 ,细胞DNA相对含量 (DNARC)及细胞增殖指数 (PI)均显著增加 ,显示DNA合成增加 ,同时 ,部分细胞在G2+M期阻滞。康强硒、硒多糖等硒制剂可有效拮抗砷对肝脏细胞增殖周期的影响。含硒 0 2mgSe3+/kg体重的康强硒效果优于含硒 0 1mgSe3+/kg体重的康强硒 ,与硒多糖相当。表明一定剂量的砷可引起肝脏细胞DNA合成增加 ,G2 +M期阻滞 ,导致细胞增殖周期紊乱 ,与砷中毒引起的肝脏损伤及肝肿瘤的发生有关。康强硒及硒多糖可有效拮抗砷的这种毒作用。

扶正化瘀方对原代培养肝细胞增殖及胶原生成率影响的血清药理学研究

肝纤维化是各种慢性肝病发展的渐进过程,目前对肝纤维化的防治尚无疗效确切的药物。既往的研究表明,扶正化瘀方(由桃仁、丹参、虫草等组成)能抑制胶原合成,促进胶原降解,恢复肝脏结构及功能,有良好的抗肝纤维化作用。为进一步探讨其抗肝纤维化的作用及机理,本研究采用正常大鼠灌胃给药,分离血清作用于培养细胞的血清药理学方法,探讨该方对原代培养大鼠肝细胞增殖及胶原生成率的影响。1

生长激素对大鼠重症肝炎肝细胞增殖动力学的影响

目的 探讨生长激素对重症肝炎肝细胞增殖动力学的影响。方法 用四氯化碳诱导重症肝炎大鼠动物模型共 12 0只 ,随机分成 2组 :生理盐水对照组、生长激素 (GH)实验组 ,每组各 60只。观察两组大鼠肝功能变化和细胞增殖情况。结果 从第3天起 ,GH组ALT、AST、TBil均下降 ,与对照组相比明显下降 (P <0 0 5 ) ;而GH组前白蛋白明显升高 ,与对照组相比有显著差异 (P<0 0 5 ) ;GH组SPF(S期分数 )较对照组明显升高 (P <0 0 5 ) :CyclinD1表达 ,随时间的延长均有增高趋势 ,GH组CyclinD1蛋白表达阳性率较对照组明显升高 (P <0 0 5 )。结论 在重症肝炎条件下 ,生长激素具有维持肝细胞膜的完整性、促进蛋白合成、促进细胞增殖作用 。

大鼠肝大部切除与D-氨基半乳糖肝中毒后肝细胞增殖及甲胎蛋白和白蛋白免疫细胞化学研究

大鼠肝大部切除后和D-氨基半乳糖肝中毒后第1～7天,逐日取肝组织及血液样本,观察两种类型损伤后肝再生中肝细胞的增殖分化,以及血清甲胎蛋白(AFP)与白蛋白(ALB)浓度变化及其免疫细胞化学变化。结果表明:1.肝大部切除后肝细胞分裂高峰(1.5％)出现于术后第2天,半乳糖肝中毒组的高峰在第3天,且峰值仅为前者的一半(0.8％)。2.半乳糖肝中毒后,门管区和小叶周边带出现许多小型细胞,而大部切除后的肝内无此种小型细胞。3.AFP与ALB免疫细胞化学观察表明,两种损伤后肝再生中均有AFP阳性肝细胞,于第2～3天增多,第4天后渐少。部分小型细胞呈AFP阳性。电镜下见粗面内质网、滑面内质网、高尔基复合体及核周隙等处显示AFP阳性。ALB阳性细胞第1～3天较少,于第4天起渐增多。4.血清AFP含量于第1天开始升高,第4天达高峰,此后下降,ALB含量变化恰与AFP相反,第3天下降至最低点,此后回升。

肝细胞增殖因子测定的临床意义

人体肝脏的再生是一个十分复杂的过程。肝再生过程中已知的肝细胞增殖促进因子有肝细胞生长因子(HGF)、表皮生长因子(EGF)及转化生长因子α(TGF-α)等；已知增殖抑制因子有TGF-β及其超级族中的一员—激活素A。建立这些具有生理活性的增殖因子的简便的检测方法，有望阐明各种病理变化时这些因子在机体内的动态表达。

乙醇抑制肝细胞增殖的机理探讨

目的探讨乙醇对肝细胞增殖、去分化过程、细胞周期以及细胞凋亡的影响 ,进一步阐明乙醇抑制肝再生的机理。方法SMMC_7721人肝癌细胞株染毒25～200mmol/L乙醇后 ,采用MTT法 ,图象分析仪 ,流式细胞仪等进行测定。结果50mmol/L以上浓度乙醇作用24h后 ,SMMC_7721人肝癌细胞的增殖明显降低 ,与乙醇剂量有依赖关系。乙醇显著抑制细胞伸展 ,作用2h后 ,25mmol/L乙醇组的平均细胞面积为266.31μm2 ,是对照组的70 % ,而200mmol/L乙醇组的平均细胞面积仅为对照的22 %。此外 ,乙醇处理组G0/G1 期细胞比例显著高于对照组。流式细胞仪以及荧光镜检法均显示 ,乙醇组的细胞凋亡率显著高于对照组。结论乙醇通过抑制或延迟SMMC_7721细胞的伸展 ,造成细胞去分化的延迟 ,使细胞不能及时启动进入增殖阶段 ,在G0/G1 期堆积 ,不能顺利进入DNA合成阶段S期和G2/M期 。

表皮生长因子受体对肝细胞增殖的调控作用

表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）属于受体酪氨酸激酶超家族成员，广泛表达于哺乳动物的各种组织细胞，是一多功能的膜蛋白。它能与多种配体结合而发生二聚化，从而调节细胞的生长、增殖和分化。在包括肺癌、膀胱癌和乳腺癌等多种组织中，存在EGFR信号通路的高度激活。近年来的研究表明，EGFR信号转导网络在肿瘤的发生和发展过程中发挥了重要的作用。最新的研究表明，EGFR与肝细胞的增殖密切相关。

丹参、黄芪及野菊花注射液对正常人肝细胞增殖的影响

目的:比较不同中药注射剂对正常人肝细胞株L02增殖的影响。方法:将丹参、黄芪、野菊花注射液,采用不同浓度直接加入培养液的给药方式,以MTT法测定三种注射液对正常人肝细胞株L02的增殖情况。结果:丹参注射剂对人肝细胞株增殖有明显的促进作用,且随用药剂量的增大,呈一定的量效关系;黄芪、野菊花注射液对L02细胞株增殖作用不明显。结论:丹参注射液对人肝细胞株L02增殖具有促进作用,同时提示不同的中药注射液各有其特点,中医临床辨证论治应存在不同的机理。

Tmub1沉默提高Akt蛋白活性促进肝细胞增殖

目的探讨Tmub1沉默对Akt磷酸化和肝细胞增殖及生长能力的影响。方法应用RNAi技术对BRL-3A细胞株Tmub1基因进行沉默,采用qRT-PCR和Western blot分别检测Tmub1、Akt、p-Akt、Cyclin D1、c-myc等基因的mRNA和蛋白表达水平;采用平板集落形成实验和CCK-8检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞周期。结果与对照组相比,Tmub1基因沉默后,Cyclin D1和c-myc基因mRNA表达增强(P<0.05),p-Akt磷酸化水平以及Cyclin D1和c-myc蛋白的表达增高(P<0.05);BRL-3A细胞的增殖及生长能力增强(P<0.05);且处于细胞周期S+G2/M期的细胞比例明显增加(P<0.05)。通过MK2206抑制Akt磷酸化后,可显著抑制上述基因的mRNA及蛋白的表达水平,细胞的增殖及生长能力明显降低(P<0.05),且处于S+G2/M期的细胞比例下降(P<0.05)。结论 Tmub1沉默通过增加Akt蛋白的磷酸化及Cyclin D1、c-myc的表达水平从而促进BRL-3A细胞的增殖和生长。

层粘连蛋白片段对体外培养成纤维细胞及肝细胞增殖的影响

层粘连蛋白片段对体外培养成纤维细胞及肝细胞增殖的影响上海长征医院（上海２００００３）王杰军，孔宪涛，李石，连兆瑞，张玲珍层粘连蛋白（ｌａｍｉｎｉｎ，ＬＮ）作为细胞外间质中（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｍａｔｒｉｘ，ＥＣＭ）一种重要的非胶原性糖蛋白成分，...

Ca^(2+)与肝细胞增殖

本文综述了Ca^(2+)作为第二信使在肝细胞增殖中的信息传递作用。细胞内Ca^(2+)([Ca^(2+)]i)浓度升高是通过生长因子和癌蛋白等与细胞膜的相应受体结合,启动磷酯酰肌醇系统,进一步作用于细胞内钙库使其释放,或通过激活细胞膜Ca^(2+)通道使Ca^(2+)内流增加。[Ca^(2+)]i升高后,激活一些酶,使底物蛋白磷酸化,最后将信息传到核内,促进DNA复制使细胞增殖分裂。本文并对Ca^(2+)与肝再生、肝纤维化和肝癌的发生、发展的关系进行介绍。

层粘连蛋白和纤维连接蛋白对体外培养纤维母细胞及肝细胞增殖的影响

层粘连蛋白(LN)及纤维连接蛋白(FN)是细胞外间质(ECM)中的两种重要成分，它们发挥许多重要的作用。在肝纤维化研究中，人们已注意到ECM成分间、ECM成分与肝细胞之间的相互作用具有重要的病理生理学意义。本研究以LN及FN为研究对象，观察它们在体外对肝细胞及纤维母细胞增殖的影响，以探讨它们在肝纤维化发生机制中的可能作用。

肝细胞增殖与肝癌发生研究进展

肝癌的发生与肝细胞的凋亡和增殖调节失控有关。近年来的研究显示 ,肝癌的发生与肝细胞的增殖活性增强关系更大 ,肝细胞增殖活性的持续升高成为各种原因导致肝脏损害并最终发生肝癌的重要危险因素之一。对慢性肝病患者 ,肝组织细胞增殖情况的分析有助于肝癌高危人群的发现。