免疫组化在肝细胞肿瘤诊断中的应用

肝细胞癌 (HCC)与肝内胆管癌 (ICC)及转移性腺癌 (MAC)的鉴别诊断是外科病理诊断中常遇到的难题 ,HepPar 1是目前肝细胞分化标记物中最敏感且具特异性的一种阳性标记物 ,可结合其他抗体 ,如CD3 4、pCEA、AFP、CK19和MOC3 1等用于日常HCC。

环氧化酶-2通过影响髓源抑制性细胞增殖及活化参与肝细胞肿瘤进展

目的:以COX2-PGE2通路为靶标,探讨其调控髓源抑制性细胞(myeloid-derived suppressor cell,MDSC)增殖及活化,进而影响肝细胞肿瘤(hepatocelluar carcinoma,HCC)进展的可能机制。方法:建立小鼠肝细胞肿瘤模型,利用流式细胞术分析外周血及脾脏组织中的MDSC比例,CFSE标记法分析肿瘤浸润MDSCs对T淋巴细胞增殖的影响,ELISA检测肿瘤组织体外培养上清中PGE2水平,Western blot检测肿瘤组织中COX-2表达,最终腹腔注射COX2-PGE2通路的小分子抑制剂吲哚美辛,证实该通路在调控MDSCs增殖活化,进而影响肿瘤进展过程中具有重要作用。结果:随着HCC的进展,小鼠外周血及脾脏中MDSC比例逐渐升高,其对T淋巴细胞增殖的抑制作用,即免疫抑制功能显著增加;肿瘤组织COX-2及PGE2表达水平较正常肝脏显著升高,腹腔注射吲哚美辛能够有效抑制肿瘤生长;过继回输MDSC则在一定程度上降低吲哚美辛的肿瘤抑制作用。结论:HCC发展过程中,肿瘤细胞通过COX2-PGE2通路活化MDSC,促进肿瘤进展。COX2-PGE2通路抑制剂吲哚美辛可通过抑制MDSC介导的免疫抑制作用,减缓肿瘤进程。

TNF相关凋亡诱导配体基因治疗小鼠肝细胞肿瘤

目的:探讨经化疗药物作用后的H22细胞对TRAIL诱导凋亡的敏感性,观察TRAIL、纤黏连蛋白及内皮抑素的真核表达质粒pTRAIL,pCH510,pES联合化疗抑制小鼠肿瘤生长的作用。方法:pTRAIL转染BHK细胞后,加入分别经MMC,ADM,5-FU处理的H22细胞,MTT法检测pTRAIL对H22细胞的生长抑制作用,流式细胞仪分析H22细胞凋亡。在小鼠种植瘤体内注射MMC与pTRAIL,pCH510,pES,观察其对肿瘤生长的抑制作用。结果:pTRAIL能抑制H22生长并诱导细胞凋亡,与MMC,ADM及5-FU联合,H22的凋亡百分数分别为28.1%(P<0.01),22.5%(P<0.01)及47%(P>0.05)。体内,MMC+pTRAIL+pES+pCH510联合能有效抑制肝细胞肿瘤生长,肿瘤生成率为37.5%。结论:MMC或ADM作用后的残存H22肿瘤细胞对pTRAIL敏感,MMC+pTRAIL+pES+pCH510具有协同抑瘤效应,能将小鼠肝细胞肿瘤抑制在组织学水平。

磁共振功能成像在肝细胞肿瘤中的应用进展

磁共振（M R）常规T1WI、T2WI序列联合3期增强对大部分肝肿瘤诊断已有较高敏感性，但对于部分小于2 mm小肝肿瘤敏感性和特异性较低，肝脏其他局灶性病变会对小肝肿瘤病灶检出造成干扰。磁共振功能成像（fMRI）可通过不同成像技术对病灶水分子运动、微循环、化合物成分及能量代谢、含氧量进行定量分析；fM RI和肝脏特异性对比剂的运用会提高肝肿瘤诊断的敏感性，并在预后及指导临床治疗上有巨大应用前景。

大黄鱼肝细胞肿瘤相关抗原-127基因克隆及分子特征分析

在构建大黄鱼肌肉组织cDNA文库的基础上,克隆了肝细胞肿瘤相关抗原-127基因。克隆到的基因全长1 439bp,其中5'-UTR 124 bp,3'-UTR 640 bp,编码序列675 bp,编码224个氨基酸。生物信息学分析显示,大黄鱼HCA127基因存在多个功能位点,即N端糖基化位点、蛋白激酶C磷酸化位点、酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点和亮氨酸拉链结构位点。大黄鱼HCA127氨基酸序列具有较高的保守性,与斑马鱼、胡瓜鱼、大西洋鲑等多种鱼类的相似性在80%以上。在检测的9种组织中,肝细胞肿瘤相关抗原-127基因在肝、肾、肠、鳃、眼、脑组织中表达,其中在脑组织中表达最强,肝和鳃组织中次之,肾和眼组织中表达较微弱。

利用共表达网络分析寻找肝细胞肿瘤术后复发分子标记物

目的 结合肝细胞肿瘤（hepatocellular carcinoma,HCC）患者的表达谱数据和基因共表达网络分析,寻找HCC术后复发相关的分子标记物.方法 筛选35/41例术后复发/未复发患者的表达谱数据的差异表达基因,然后建立基因共表达网络;利用MCODE软件寻找网络中基因共表达模块以及核心基因;最后,利用三种交叉验证方法[留一交叉验证（LOOCV）、十折交叉验证（10 fold CV）以及蒙特卡罗交叉验证（MCCV）]证明核心基因的分类能力.结果 差异表达基因筛选得到316个差异基因,共表达网络分析得到了包括84个基因的网络,MCODE软件分析得到两个基因模块及其核心基因：RACGAP1和ETS2.三种交叉验证实验发现,这两个基因对HCC样本的分类结果,LOOCV：87％（86％ ～ 89％）、10 fold CV：88％（87％ ～89％）,MCCV：85％（85％ ～86％）.结论 以上结果提示,RACGAP1和ETS2基因可作为HCC术后复发的分子标记物.

层粘蛋白及其受体、增殖细胞核抗原与肝细胞癌肿瘤生物学特性的关系

目的：探讨层粘蛋白（ＬＮ）、层粘蛋白受体（ＬＮ－Ｒ）及增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）与原发性肝细胞癌（ＨＣＣ）恶性程度的关系。方法：采用ＳＡＢＣ法分别检测４２例肝细胞癌及癌旁组织中ＬＮ、ＬＮ－Ｒ及ＰＣＮＡ的表达情况。结果：ＬＮ、ＬＮ－Ｒ及ＰＣＮＡ在肝细胞癌中的表达均显著高于癌旁组织（Ｐ＜０．０５），且与肝细胞癌Ｅｄｍｏｎｄｓｏｎ分级呈正相关；浸润型（ＩＨＣＣ）生长、有转移、肿瘤直径＞３ｃｍ者ＬＮ、ＬＮ－Ｒ及ＰＣＮＡ的表达高，而膨胀型（ＥＨＣＣ）生长、无转移、肿瘤直径≤３ｃｍ者多表达较低；在高增殖指数组ＬＮ、ＬＮ－Ｒ表达高于低增殖指数组（Ｐ＜０．０５）。结论：细胞内ＬＮ、ＬＮ－Ｒ及ＰＣＮＡ可作为评判肝细胞癌恶性程度及临床预后的良好指标。

儿童过渡型肝细胞肿瘤体外切除一例

1 临床资料 患儿男,13岁.因右上腹巨大包块1个月余于2010年7月18日入院.2010年6月27日,患儿家长偶然触及其右上腹一直径约15 c包块,无触痛,不伴腹痛、腹胀,无畏寒、发热,无潮热、盗汗,无头昏、头痛,无反酸、嗳气,无心慌、心累,无皮肤、巩膜黄染,无尿频、尿急、尿痛,无腹泻、便血、陶土便等.2010年7月12日,当地医院CT检查提示肝左叶巨大包块,AFP 742.7μg/L,ALT 54 U/L,AST 57 U/L,ALP 270 U/L,TBil 20.2 μmol/L,DBil 8.6μmol/L,IBil 11.6 μmol/L.诊断为肝母细胞瘤,未做其他处理.随后包块进行性增大,为进一步治疗入住我院.患儿精神、睡眠、饮食良好,大小便正常,体质量无明显下降.

原发性肝细胞肝癌伴肝外恶性肿瘤9例临床分析

探讨肝细胞癌（ＨＣＣ）伴肝外恶性肿瘤（Ｅｘｔｒａｈｅｐａｔｉｃ Ｍａｌｉｇｎａｎｔ Ｃａｒｃｉｎｏｍａ、ＥＨＭ）患者的临床特征。１９８６～１９９８年经手术切除病理证实的ＨＣＣ共１８１例，其中９例在ＨＣＣ诊断前后发现ＥＨＭ。结果：ＨＣＣ伴ＥＨＭ发生率５％（９／１８１），其中伴大肠癌４例、甲状腺癌２例、肾透明细胞癌、胰腺癌、肺癌各１例。ＥＨＭ组病例血清ＨＢｓＡｇ阳性率４４％（４／９）、ＡＦＰ＞２０ｎｇ／ｍｌ ３３％（３／９）、切除标本伴肝炎后肝硬化３３％（３／９）均明显低于同期单纯ＨＣＣ病例（Ｐ＜００２５—０００５），三者分别为８８％（１０３／１１７）、７６％（１１７／１５５）、７７％（１２４／１６１）。本组中除２例第二原发癌仅行活检术外，余病例经两次手术后均存活１年以上，最长已达７年以上。结论：ＨＣＣ伴ＥＨＭ病例在病因上可能与单纯ＨＣＣ不同；肿瘤预后取决于患者病期的早晚及治疗措施的彻底性，重复癌经根治手术预后并不劣于单纯ＨＣＣ。

肝细胞癌肝切除术后肺部转移研究进展

肝切除术是原发性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)的主要治愈性治疗手段,但术后肿瘤复发及转移率较高。HCC行肝切除术后发生的肝外转移以肺部转移(pulmonary metastasis, PM)最为常见。近年来对于HCC肝切除术后PM的研究仍在不断深入,微血管侵犯及肿瘤直径等因素被认为是影响HCC肝切除术后PM的风险因素,手术可能是治疗肝切除术后PM的有效手段。本文对HCC肝切除术后PM的风险因素及治疗方法的研究进展作相关综述。

IL-4诱导M2型巨噬细胞极化在慢性肝病中的研究进展

肝脏在血容量调节、营养素代谢、免疫系统和生长信号通路的调控等生理过程中起关键作用,多种因素导致肝脏功能异常,形成急性肝损伤(ALI)、病毒性肝炎、酒精性肝病(ALD)、代谢相关脂肪性肝病、肝纤维化(LF)、肝细胞癌(HCC)等疾病。我国是肝病发生率较高的国家,肝癌在我国的死亡率占第2位,我国肝癌的普遍发展模式为乙型肝炎-肝硬化-肝癌[1-4]。肝癌在早期不易发现,但可以通过早期对慢性肝病治疗,延缓或控制肝癌发展进程,提高患者生存率。巨噬细胞是一种髓系免疫细胞,在机体组织中占据重要位置,它们摄取和降解死亡细胞、碎片和异物,并参与协调炎症发生的过程[5]。巨噬细胞在不同的微环境刺激下可极化为M1型和M2型。M1型巨噬细胞通过分泌促炎因子,推进炎症反应;M2型巨噬细胞通过分泌抗炎因子,参与炎症消退和组织修复。白细胞介素-4(IL-4)的表达在巨噬细胞分化过程中起到了重要作用。本文通过探讨IL-4调节巨噬细胞极化在肝脏疾病中作用,为巨噬细胞分化治疗肝脏疾病提供方向和科学依据。

PLGA纳米载体介导的端粒酶反义核酸体外转染率及对肝肿瘤细胞的影响

目的通过以PLGA纳米粒作为端粒酶hTERT反义核酸的载体,促进反义核酸对肝肿瘤细胞的抑制作用。方法用绿色荧光蛋白报道基因pEGFP-N1表达质粒DNA转染细胞;观测不同转染方法的转染率,TRAP-ELISA法检测端粒酶活性;噻唑蓝(MTT)法测定端粒酶反义核酸对肝肿瘤细胞HepG2的抑制;过氧化物酶的抗荧光素抗体法检测肿瘤细胞凋亡指数。结果裸DNA和磷酸钙的转染效率均不高,分别为18%和24%;脂质体的转染效率为42%,纳米粒的转染效率最高,达61%;以脂质体或PLGA纳米粒为载体介导端粒酶反义核酸处理的肿瘤细胞,其端粒酶活性和生长与空白对照相比明显下降(P<0.05),两种载体之间的差异也非常显著(P<0.05);处理72h后,纳米粒介导组的肿瘤细胞凋亡率显著高于脂质体介导组,分别为23.1%和16.4%。结论PLGA纳米粒是一种非常有前途的非病毒基因治疗载体。

氯化饮水中有机提取物对大鼠和人肝肿瘤细胞(HepG2)的遗传毒性及脂质过氧化作用

The genotoxic effects of chlorinated drinking water(CDW) extracts were examined in human HepG2 hepatoma cells, liver cells and polychromatic erythrocytes (PCEs) of bone marrow of Wistar rats by using in vivo and in vitro micronucleus(MN) test and single cell gel electrophoresis(comet assay). The influence of CDW on the lipidperoxidation (LPO) in blood and tissue of rats was also studied. The results indicated a significant increase of the frequencies of MN in PCEs at the low concentration of CDW and in HepG2 at the high concentration of CDW. The increased DNA breakage caused by CDW was observed in rat liver cells and in HepG2 cells by using comet assay. The levels of malon dialdehyde(MDA) were significantly increased almost in all animals and in all organs tested. A dose dependent increases of MDA were observed in rat liver. It was demonstrated that CDW extracts caused genotoxic and oxidative damage on animals.

杨梅素抗肝肿瘤细胞HepG2作用及其机制的研究

目的探讨杨梅素对肝癌细胞HepG2的生长抑制和诱导凋亡作用及其作用机制。方法应用甲基噻唑蓝(MTT)比色法,测定杨梅素对HepG2细胞株活性的影响,检测其抑制HepG2细胞株的时间效应和剂量效应;应用形态学观察、HE染色和Annexin V-PI流式检测,测定杨梅素对HepG2细胞的凋亡作用,并进行细胞周期的分析,最后对杨梅素对细胞凋亡相关的蛋白p34cdc-2、Cyclin B1、Bcl-2和PARP的影响进行了研究。结果杨梅素对HepG2细胞具有生长抑制及诱导凋亡作用,且呈时间依赖和剂量依赖性,表现为:细胞G2/M期阻滞,出现明显的凋亡峰;Bliss法测定杨梅素对HepG2细胞的IC50值为(32.18±2.31)μmol/L,30、50μmol/L杨梅素对G2/M期细胞比率分别为(41.32±0.90)%和(80.07±0.90)%,差异有统计学意义(P<0.05);p34cdc-2蛋白的表达量未见变化,而CyclinB1蛋白的表达量明显上升,Bcl-2蛋白的表达量锐减,并诱导半胱氨酸蛋白酶Caspase-3的底物PARP蛋白(113 kD)水解为89 kD的特异性水解产物。结论杨梅素通过激活Caspase家族蛋白实现对肝癌细胞HepG2细胞株的增殖抑制及诱导凋亡作用。

人肝肿瘤细胞HepG2最佳培养条件探讨

人肝肿瘤细胞株 Hep G2可应用于体外遗传毒理学试验等多种研究。但其培养难度较大 ,通过对 Hep G2细胞在不同培养条件下生长状态的对比 ,探讨了 Hep G2细胞培养增殖的最佳条件。结果表明在下列情况下细胞能顺利传代生长 :复苏时需 2 0 %胎牛血清 ,接种密度为 1× 10 4/ cm2 ,需在含 5 % CO2 环境下 ;培养时需 10 %胎牛血清 ,可在无 5 %

壳聚糖纳米载体介导的端粒酶反义核苷酸对肝肿瘤细胞的抑制作用

目的探讨纳米载体对端粒酶反义寡核苷酸抑制肝脏肿瘤细胞生长的影响。方法制备壳聚糖纳米载体,并装载端粒酶反义寡核苷酸,用TRAP-ELASA法检测端粒酶反义核苷酸寡对肿瘤细胞端粒酶活性的影响,以MTT法测定端粒酶反义寡核苷酸对肝脏肿瘤细胞(HepG2)生长的抑制作用。结果壳聚糖纳米载体能显著增强端粒酶反义寡核苷酸对端粒酶活性和肿瘤细胞生长的抑制作用。结论壳聚糖纳米粒可作为反义技术治疗的有效载体。

肝肿瘤干细胞的研究进展

肿瘤干细胞是一群存在于某些肿瘤组织中的干细胞样细胞。笔者就肝肿瘤干细胞的来源、与肝癌的关系、分离鉴别等问题的研究进展作一综述。

有机污染物对人肝肿瘤细胞的遗传毒性

目的 用人肝肿瘤细胞HepG2／体外微核试验检测3种持久性有机污染物（POPs）Aroclor1254、毒杀芬和滴滴涕的遗传毒性。方法 人肝肿瘤细胞HepG2经Aroclor1254、毒杀芬和滴滴涕染毒24h，继续在补充细胞松弛素B（3μg/ml）的培养液中培养24h后，计数1000个双核细胞中的微核。结果 20，40μmol／L毒杀芬处理HepG2细胞的微核率与溶剂对照相比显著增加（P〈0.01，P〈0．01）；经Aroclor1254（23～184μmol／L）和滴滴涕（17．8～60μmol／L）处理的HepG2细胞的微核率与溶剂对照相比，差异无统计学意义。结论 Arodor1254和滴滴涕未显示对HepG2细胞明显的遗传毒性；毒杀芬可诱导HepG2细胞遗传损伤，有必要进一步评价其对人类健康的潜在危害。