槐耳清膏对耐顺铂人肺腺癌细胞系A_(549)^(DDP)逆转的实验研究

目的:探讨槐耳清膏对耐顺铂的人肺腺癌细胞A_(549)^(DDP)化疗敏感性的逆转作用及其效能。方法:以体外培养的对耐顺铂的人肺腺癌细胞A_(549)^(DDP)为实验模型,运用MTT法研究经不同浓度的槐耳清膏作用后,该模型所需顺铂IC_(50)的变化,并运用流式细胞仪研究相同作用条件下A_(549)及A_(549)^(DDP)的凋亡发生率。结果:槐耳清膏对A_(549)和A_(549)^(DDP)的细胞毒性作用相似,并可致凋亡,其IC_(50)分别为(1.84±0.52)mg·ml^(-1)和(2.01±0.44)mg·ml^(-1)两者无显著性差异(P>0.05)。经槐耳清膏作用后A_(549)及A_(549)^(DDP)的顺铂IC_(50)均呈下降趋势,并与槐耳清膏有剂量依赖性。给予1mg·ml^(-1)槐耳清膏作用40h后再经相应的顺铂作用的A_(549)及A_(549)^(DDP)细胞凋亡的发生率无显著性差异(P>0.05);但较同剂量的顺铂单独作用于A_(549)及A_(549)^(DDP)凋亡率有极显著差异(P<0.01)。结论:槐耳清膏除自身有凋亡作用外,亦可以逆转人肺腺癌细胞对顺铂的耐药作用,提高顺铂对A_(549)^(DDP)化疗的敏感性。

人肺腺癌细胞系A549细胞双向电泳-飞行时间质谱研究

目的初步分析人肺腺癌细胞系A549细胞蛋白质表达情况,从蛋白组水平探讨肺腺癌发病的分子机制。方法应用2-DE技术对人肺腺癌细胞系A549细胞总蛋白进行分离,获得蛋白质表达谱;应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)结合生物信息学进行蛋白质鉴定。结果3块胶平均蛋白斑点数为1 138±49,平均匹配点数为986±32,匹配率为85.8%。随机选取背景清晰、分辨清楚、蛋白含量较高的20个斑点进行MALDI-TOF-MS分析,共获得了18个肽质量指纹图谱(PMF)。将PMFs质量数据通过Aldente软件查询SWISS-PROT数据库,根据匹配片段及氨基酸序列覆盖率等,初步鉴定出15种蛋白质。根据功能,这些蛋白质可分为:①基本代谢相关的酶类:果糖2-磷酸醛缩酶、视网醛脱氢酶1(RALDH1)、吡多醛激酶;②细胞骨架类:蛋白细胞角蛋白8(CK8)、-β2链微管蛋白;③应激相关蛋白:蛋白二硫化物异构酶A3(PDIA3);④信号转导分子:膜联蛋白1(ANX1)、膜联蛋白4(ANX4);⑤分子伴侣:热休克蛋白60(HSP60)、热休克蛋白-β1、抑制素(PHB);⑥转录及翻译相关蛋白:不均一性核糖核蛋白H(hnRNP H);⑦杂类:Rgr protein、NPM、PCBP1。结论应用2-DE/MALDI-MS方法获得了较为理想的人肺腺癌细胞系A549细胞2-DE蛋白质表达谱,初步鉴定了15种蛋白质。

不同培养方式中肺腺癌细胞系A549表达E-钙粘素的差异及其意义

目的 初步探讨E 钙粘素在肿瘤群集耐药中的可能机制。方法 采用旋转培养瓶结合台式水浴恒温振荡器旋转培养的方法 ,进行肺腺癌细胞A5 49体外立体培养 ,同时进行普通平面培养 ,通过流式细胞技术、Westernblot、原位细胞凋亡检测试剂盒、四唑盐 (MTT)比色法及血球计数器计数法检测细胞周期 ,E 钙粘素的表达 ,细胞凋亡率及对阿霉素(ADM)敏感性。结果 ①立体培养细胞存在E 钙粘素的高表达 ;②同平面培养比较 ,立体培养细胞出现细胞周期G1 期阻滞、细胞凋亡率低、对ADM敏感性低等表现 ,给予E 钙粘素阻滞剂SHE78 7后 ,两者差异明显缩小。结论 E 钙粘素介导的细胞 细胞粘附作用可通过调控细胞周期以及细胞凋亡 ,影响肺腺癌A5 49细胞对ADM的敏感性 ,在肿瘤群集耐药中发挥作用。

RAB5A对人肺腺癌细胞系侵袭转移作用的研究

目的 探讨RAB5A基因在人肺腺癌细胞系侵袭和转移中的作用。方法 采用体外重建基底膜侵袭实验和癌细胞粘附能力、癌细胞趋化性运动能力、癌细胞分泌明胶酶的能力及活性的测定 ,分析RAB5A正义真核表达载体转染后的AGZY83 a和反义RNA转染后的Anip973细胞的侵袭、转移能力的改变。结果 RAB5A正义表达载体PcDNA3.1 RAB5A转染的AGZY83 a重建基底膜侵袭能力明显增强 ,统计学意义显著 (P <0 .0 0 0 5 ) ,细胞趋化性运动能力显著增高 (P <0 .0 0 0 5 ) ,对基底膜成分的粘附能力增大 (P <0 .0 5 ) ,以及明胶酶分泌及活性增强等一系列趋向Anip973的变化。PcDNA3 AntiRAB5A反义RNA表达载体对Anip973重建基底膜侵袭力明显下降 (P <0 .0 0 2 5 ) ,趋化性运动能力显著降低 (P <0 .0 0 5 ) ,对基底膜成分粘附能力降低 (P <0 .0 5 ) ,以及明胶酶分泌减少等一系列趋向AGZY83 a的变化。结论 RAB5A在肺腺癌侵袭转移表型形成中发挥重要的作用。

桔梗总皂苷对人肺腺癌细胞系A549移植裸鼠瘤生长和STAT2的影响

目的探讨桔梗总皂苷体内抑制人肺腺癌细胞系A549裸鼠移植瘤生长及其对肿瘤细胞信号传导与转录激活因子2(signal transducer and activatorot transcription2,STAT2)的影响。方法将荷人A549移植瘤BALB/c裸小鼠随机分为模型组、环磷酰胺组、桔梗总皂苷组1(5 mg/kg·d)、桔梗总皂苷组2(10 mg/kg·d)、桔梗总皂苷组3(20 mg/kg·d)、桔梗总皂苷组4(25 mg/kg·d),分别治疗观察30 d,测量瘤体积与质量,并用HE染色观察各组移植瘤组织的病理形态结构,用免疫组化法检测瘤体细胞STAT2蛋白的表达。结果模型组与桔梗总皂苷各组对人肺癌细胞系A549移植瘤抑制作用比较,差异均有统计学意义(P<0.05);桔梗总皂苷对移植瘤体积与抑瘤率均显示出较好作用,桔梗总皂苷组4移植瘤的体积明显小于模型组、桔梗总皂苷其它各组,差异均有统计学意义(P<0.05);桔梗总皂苷各组移植瘤体积大于环磷酰胺组,差异有统计学意义(P<0.05);桔梗总皂苷各组STAT2表达由强到弱随浓度的增加而减弱,成剂量依赖关系,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论桔梗总皂苷对A549肺移植瘤组织生长有较好抑制作用,可能通过下调移植瘤组织STAT2蛋白表达来抑制瘤组织的生长。

一个在肺腺癌细胞系中差异表达cDNA片段的定位及表达分析

为了研究和克隆肺癌转移相关候选基因 ,探讨肺癌发生及转移的分子基础 ,应用细胞培养、cDNA克隆、North ern印记杂交和生物信息学技术分析了在细胞来源相同 ,但转移能力不同的肺腺癌细胞系AGZY83 a和Anip973中差异表达片段OPB7 1在人不同组织中和不同人肺癌细胞系中的表达情况 ,并应用RH定位技术对该片段进行了基因定位。表明OPB7 1与已知基因同源性差 ,该基因在正常人多种组织中有表达 ,心肌和骨骼肌中高表达 ,转录本均为 3 0kb左右。在不同人肺癌细胞系中存在该基因的表达差异 ,高转移潜能、低分化及高浸润的细胞系中呈高表达趋势 ,且表达的片段大小略有差别。提示OPB7 1是一个具有广泛表达谱的基因 。

RAB5A基因表达改变对人肺腺癌细胞系GLC-82和SPC-a1的分化和侵袭特性影响

为探讨RAB5A基因对两种人肺腺癌细胞系GLC 82和SPC al分化及侵袭特性的影响 ,利用细胞转染技术将构建的RAB5A反义RNA重组质粒 (pcDNA3 AntiRAB5A)和RAB5A正义真核表达载体分别转染入低分化人肺腺癌细胞系GLC 82和低转移人肺腺癌细胞系SPC al中 ,在稳定筛选后 ,通过裸鼠体内实验和体外人工基底膜侵袭和细胞趋化运动实验 ,观察转染后细胞分化和转移特性的改变。观察转染前后细胞 ,发现转染后GLC 82细胞体外侵袭重组基底膜能力及趋化运动能力降低 (t检验P <0 .0 2 ) ;裸鼠体内成瘤实验 ,瘤块切片病理观察转染后GLC 82细胞出现腺腔样及基底模样结构 ,分化程度增高。转染后SPC al细胞体外趋化运动能力、侵袭重组基底膜能力均增强 (t检验P <0 .0 2 )。RAB5A基因通过影响细胞的体外趋化运动能力、侵袭重组基底膜能力等对GLC 82和SPC al细胞的侵袭转移表型形成及GLC 82细胞的分化性发挥重要作用。

尿刊酸修饰的壳聚糖介导野生型p53基因转染对人肺腺癌细胞系H1299增殖和凋亡的影响

目的:研究尿刊酸修饰的壳聚糖(UAC)介导野生型p53(wt-p53)基因转染对人肺腺癌细胞系H1299(p53基因缺失)的增殖抑制和凋亡诱导作用。方法:UAC介导wt-p53基因转染H1299细胞后,采用荧光显微术、RT-PCR法和West-ernblot法分别检测细胞内绿色荧光蛋白(GFP)、wt-p53mRNA和蛋白的表达,并通过MTT法分析基因转染对细胞的生长抑制作用,DAPI染色法和琼脂糖凝胶电泳法评价其对细胞的诱导凋亡作用。结果:UAC介导wt-p53基因转染H1299细胞后,大量细胞表达GFP,细胞内wt-p53mRNA和蛋白表达水平明显上调,细胞生长受到显著地抑制,凋亡细胞数量明显增加,并有清晰的DNA梯状条带出现。结论:UAC介导wt-p53基因转染能够显著地抑制人肺腺癌细胞系H1299的增殖,并诱导其凋亡。

体外探究脱落酸对肺腺癌细胞系Spc-A1自噬的影响

目的观察脱落酸(ABA)作用于肺腺癌细胞株Spc-A1引起自噬方面的变化,研究ABA对Spc-A1细胞自噬的影响。方法以人肺腺癌细胞系Spc-A1为研究对象,ABA给药浓度分别为0.8、20、100μmol/L,采用MTT法检测ABA作用后Spc-A1细胞的活力;激光共聚焦显微镜观察ABA作用于Spc-A1细胞后自噬现象;提取培养细胞mRNA及蛋白质,分别采用荧光实时定量PCR、蛋白印迹法检测自噬相关基因Beclin-1及LC3-Ⅱ的表达。结果 ABA作用后,肺腺癌细胞Spc-A1活力随着ABA浓度的增高而下降,各处理组之间差异具有统计学意义(P<0.001);ABA可诱导Spc-A1细胞自噬,自噬现象随药物浓度增高而增加;ABA处理后Bec-lin-1及LC3-Ⅱ的mRNA表达量随着ABA浓度的增加而增高,各处理组表达量差异具有统计学意义(P<0.05);蛋白表达结果显示ABA 100μmol/L处理组与对照组Beclin-1表达量差异具有显著性(P=0.04);ABA 100μmol/L处理组与对照组LC3-Ⅱ表达量差异具有显著性(P=0.005),ABA 0.8μmol/L组与ABA 100μmol/L组之间LC3-Ⅱ表达量差异具有显著性(P=0.039),余处理组表达量两两之间未见显著性差异。结论 ABA可通过调节自噬信号转导通路中相关基因的表达诱导肺腺癌细胞Spc-A1自噬,随着自噬的增加,可能抑制肿瘤的生长。

人呼吸道合胞病毒转录调节基因转染肺腺癌细胞系的研究

目的 获得稳定表达人呼吸道合胞病毒(h RSV) M2 - 1基因的人肺腺癌细胞系。方法 通过基因重组法构建h RSV M2 - 1基因真核表达载体,用脂质体将其转染人肺腺癌PAa和A5 4 9细胞,经G4 18筛选获得阳性表达细胞株,并用逆转录-聚合酶链反应(RT- PCR)和Western Blot进行验证。结果 得到了约6 5 0 bp的基因插入片段,DNA测序表明该基因高度保守。筛选出了稳定高量表达M2 - 1基因的PAa和A5 4 9细胞,并被证实有M2 - 1蛋白表达。结论 获得了稳定表达h RSV M2 - 1蛋白的PAa和A5 4

雌激素对肺腺癌细胞系A549中NOK表达量的影响

目的:探讨雌激素对肺腺癌细胞系A549中NOK基因表达的影响,为研究雌激素与NOK基因在非小细胞肺癌转移中的作用提供参考依据。方法:用MTT法绘制肺腺癌细胞系A549的生长曲线,确定A549的指数增长期;用浓度梯度为1×10^(-10)-1×10^(-6)mol/L的雌激素在指数增长期刺激细胞,12 h后换液,24 h后提取总RNA及总蛋白,用q-RT-PCR及Western-blot检测各组细胞中NOK表达量。结果:A549细胞系的指数增长期为第3天;雌激素刺激细胞之后,NOK表达量普遍增高,低浓度时,NOK表达量随雌激素浓度增高而增高,高浓度时,NOK表达量随雌激素浓度增高而降低,但依然高于正常水平,组间有统计学差异,其中,当浓度为1×10^(-8)mol/L时,NOK表达量最高。结论:雌激素在一定浓度范围内可以促进肺腺癌细胞系A549中NOK基因的表达。

C-erbB-2基因在人肺腺癌细胞表达与药物治疗关系的研究

目的 观察紫杉醇、阿霉素和α 干扰素对不同C erbB 2表达水平的人肺腺癌细胞系增殖能力的影响 ,探讨C erbB 2基因和抗癌药物敏感性的关系。方法 采用免疫组化方法检测C erbB 2基因在肺癌细胞株 (SPC A 1、LTEP α 2和A5 49)中的表达 ,观察紫杉醇、阿霉素及α 干扰素干预前后 3株肺腺癌细胞系中C erbB 2基因表达率的变化 ;采用四氮唑盐 (MTT)比色法检测抗癌药物对人肺腺癌细胞体外增殖能力的影响 ,计算相应IC50 值 ;应用集落形成试验检测药物对肺腺癌细胞集落形成能力的影响 ;结合流式细胞术定量分析药物干预前后各细胞系DNA含量的变化。结果 SPC A 1、LTEP α 2和A5 493株肺腺癌细胞系均有不同水平C erbB 2基因的表达。紫杉醇对低表达C erbB 2基因的SPC A 1肺腺癌细胞系的抗增殖作用明显强于高表达C erbB 2基因的A5 49和LTEP α 2肺腺癌细胞系 ,阿霉素对具有不同C erbB 2表达水平的 3株人肺腺癌细胞系均较敏感 ,α 干扰素对 3株肺腺癌细胞均有一定的抑制作用 ,但较弱。在SPC A 1细胞株应用阿霉素和紫杉醇后、LTEP α 2细胞株应用阿霉素后 ,其C erbB 2基因的表达率明显减低 ,但A5 49肺腺癌细胞系C erbB 2表达率的变化无统计学差异。阿霉素和紫杉醇治疗后SPC A 1和LTEP α 2肺腺癌细胞系的G2 M期百分?

人肺腺癌细胞系A549线粒体差异蛋白质组学研究

目的 研究人肺腺癌细胞系A549与人正常支气管上皮细胞系16HBE线粒体蛋白质组的差异表达.方法 传代培养细胞系A549及16HBE,用线粒体提取试剂盒获取细胞线粒体蛋白质,进行双向凝胶电泳,运用液相色谱串联质谱分析技术筛选出A549和16HBE细胞系线粒体间表达水平显著差异的蛋白,所得结果通过Data Analysis软件标峰,用MASCOT进行结果搜索和数据分析.结果 双向电泳结果显示A549、16HBE细胞系线粒体存在差异的蛋白质点共41个,3倍以上差异的16个,A549细胞系中表达上调的15个,表达下调的26个,其中3倍以上差异表达上调的7个,表达下调的9个.运用液相色谱串联质谱技术鉴定出A549细胞系线粒体表达上调的蛋白质2个：AAA＋ ATP酶家族结构域蛋白3B、tRNA鸟嘌呤糖基转移酶,表达下调的蛋白质7个：热休克蛋白75、复合物Ⅲ亚基1、复合物Ⅲ亚基2、鸟氨酸氨基转移酶、异柠檬酸脱氢酶亚基α、SLP-2、抗增殖蛋白.结论 应用亚细胞蛋白质组学方法,鉴定出肺腺癌细胞系线粒体差异表达蛋白,为阐明肺腺癌发生的分子机制、筛选早期诊断标志物提供了有益的线索.

关于撤销《中华外科杂志》2009年第17期“PTC1体外转染肺腺癌细胞系A549对细胞生长和凋亡的影响”一文的公告

根据读者举报、本刊编辑部调查核实，《中华外科杂志》2009年第17期刊登的“PTC1体外转染肺腺癌细胞系A549对细胞生长和凋亡的影响”一文，系挪用华中科技大学2007级博士学位论文第三部分“胰腺癌细胞系体外转染PTC1对EGFR表达的影响”的结果及数据之作。

羟基喜树碱联合放射对人肺腺癌细胞协同杀伤作用的实验研究

目的 研究羟基喜树碱联合放射对人肺腺癌细胞的协同杀伤作用。方法 应用四唑盐比色试验 (MTT)检测细胞抑制百分比 ,DNA琼脂糖电泳检测DNA“Ladder”及流式细胞术检测细胞周期及凋亡峰的比例。结果 羟基喜树碱对该细胞的抑制呈剂量及时间依赖关系 ,且明显阻滞细胞于S期 ,低浓度的羟基喜树碱 (1μg/ml)作用 48小时 ,细胞开始出现凋亡小峰 ,高浓度的羟基喜树碱 (5 0 μg/ml)作用 2 4小时就出现明显的凋亡小峰。单纯放射 (6Gy)后 48小时细胞出现DNA“Ladder”条带 ,单纯羟基喜树碱 (1μg/ml)作用后 2 4～ 72小时 ,细胞出现DNA“Ladder”条带及凋亡小峰 ,细胞经羟基喜树碱联合放射作用后的 0～ 72小时均出现DNA“Ladder”条带及凋亡小峰。

紫杉醇诱导人肺腺癌多药耐药细胞系的建立及DNA polβ、mdr1、mrp1、GST-πl、rp和topo Ⅱ基因的表达

目的体外建立人肺腺癌细胞多药耐药细胞系,观察其生物学特性并探讨其细胞内DNA polβ和多药耐药基因mdr1、mrp1、GST-πl、rp和topo Ⅱ的表达及意义。方法以紫杉醇为诱导药,采用间歇逐步增加剂量法建立人肺腺癌多药耐药细胞系A549/TXL20;MTT法检测A549/TXL20对紫杉醇、顺铂、长春新碱、5-氟尿嘧啶和丝裂霉素的耐药指数(RF);细胞克隆形成法测定A549/TXL20对紫杉醇的敏感性;高效液相色谱测定细胞内紫杉醇的浓度;RT-PCR法测定人肺腺癌多药耐药细胞系A549/TXL20中DNA polβ、mdr1、GST-π、mrp1l、rp和topo Ⅱ的基因表达。结果①A549/TXL20形态不规则,较亲本细胞略小,核/浆比增加,倍增时间没有明显变化;②A549/TXL20对紫杉醇的RF为19.3,对顺铂的RF为67.4,对长春新碱、5-氟尿嘧啶、丝裂霉素和顺铂等抗癌药物有不同程度的耐药性;③A549/TXL20对紫杉醇的敏感性降低,其紫杉醇的含量较亲本细胞下降;④A549/TXL20细胞中DNA polβ、mdr1、GST-π、mrp1l、rp的基因表达量分别较A549细胞中的表达量明显增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论建立了相对稳定的人肺腺癌多药耐药细胞系A549/TXL20,其耐药机制可能与mdr1、GST-π、mrp1l、rp和DNA polβ基因的高表达有关。

维甲酸诱导人肺腺癌细胞基因表达和分化作用的研究

应用１０－５ｍｏｌ／Ｌ全反式维甲酸（ＲＡ）诱导人肺腺癌细胞系ＧＬＣ－８２，观察到：①细胞体外生长速度减慢、堆叠性生长消失、胞浆内出现空泡、细胞逐渐衰老和死亡；②双层软琼脂中细胞集落形成受到明显抑制；③细胞ＤＮＡ合成能力降低；④细胞周期出现向Ｇ１／Ｇ０期移行的特征性动力学改变；⑤细胞分化和凋亡的效应器因子－谷氨酰胺转移酶（ＴＧａｓｅ）基因早期即被激活并持续表达。研究结果表明，ＲＡ通过激活人肺腺癌细胞ＧＬＣ－８２分化相关基因表达进而启动细胞分化。

反应停对人肺腺癌亲代及耐顺铂细胞系碱性成纤维细胞生长因子表达影响

目的 探讨反应停对亲代与耐顺铂人肺腺癌细胞系A549DDP碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)表达的影响及克服肺腺癌顺铂耐药的作用。方法 采用逆转录 PCR和免疫细胞化学方法分别检测反应停处理前、后A549与A549DDP细胞bFGFmRNA与蛋白表达水平。结果 治疗浓度(6μg/ml) 反应停处理A549与A549DDP细胞后bFGFmRNA表达水平较处理前显著降低 ,蛋白表达显著减弱 ,蛋白表达与其相应mRNA表达呈显著正相关 ;不同浓度反应停处理后第 5d ,A549与A549DDP细胞bFGFmRNA表达水平存在显著性差异 ,蛋白表达均为阴性。结论 反应停呈剂量依赖性显著下调A549与A549DDP细胞bFGFmRNA表达 。

肺腺癌高、低转移细胞系Anip973、AGZY83-a中野生型p53基因过表达研究

目的探讨野生型ｐ５３基因及其表达产物ｐ５３蛋白在恶性肿瘤基因治疗中的作用。方法应用腺病毒为载体将野生型ｐ５３基因转入高、低转移的肺癌细胞系Ａｎｉｐ９７３、ＡＧＺＹ８３－ａ，并且对各组转染细胞进行生长曲线、原位末端标记、Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔｔｉｎｇ等技术检测分析。结果野生型ｐ５３蛋白的过表达对上述肺腺癌细胞系均呈现出较强的生长抑制作用，野生型ｐ５３蛋白的过表达对高转移肺癌细胞系Ａｎｉｐ９７３的抑制作用明显高于低转移细胞系ＡＧＺＹ８３－ａ。结论外源性野生型ｐ５３基因的过表达，可以有效抑制上述肿瘤细胞的增殖，同时对高转移肺腺癌细胞系的抑制作用更加显著。