三氧化二砷对人肺腺癌Anip973细胞内[Ca^(2+)]i的影响

目的 研究三氧化二砷 (As2 O3)对人肺腺癌Anip973细胞内游离 [Ca2 + ]i的影响。方法 培养人肺腺癌Anip973细胞 ,用激光扫描共聚焦显微镜 (LSCM)观察As2 O3对人肺腺癌Anip973细胞内游离 [Ca2 + ]i的影响 ;用生长曲线法测药物对肿瘤细胞增殖的影响。结果 ①LSCM显示As2 O3作用后的人肺腺癌细胞Anip973细胞内 [Ca2 + ]i显著升高 (P <0 .0 0 1 )。②As2 O3对人肺腺癌细胞株Anip973细胞内 [Ca2 + ]i升高作用具有剂量依赖性。③As2 O3能明显抑制人肺腺癌Anip973细胞的增殖。结论 As2 O3可能是通过升高人肺腺癌细胞内 [Ca2 + ]i来启动细胞凋亡机制 ,诱导肺癌细胞凋亡 。

大黄素对人肺腺癌细胞Anip973增殖周期及凋亡基因的影响

目的探讨大黄素对人肺腺癌Anip973细胞生长的抑制作用及其对细胞增殖周期和凋亡基因的影响。方法采用甲基噻唑(MTT)比色法和生长曲线测定不同浓度大黄素在不同作用时间内对在体外培养的Anip973细胞增殖的影响,同时应用流式细胞术检测细胞增殖周期及凋亡率的变化,用免疫印迹法检测Caspase-3蛋白表达。结果大黄素可在G0/G1期阻滞人肺腺癌Anip973细胞的增殖,使S期细胞比率降低,并激活Caspase-3蛋白;在一定范围内,大黄素的浓度越高、作用时间越长,对肿瘤细胞生长的抑制作用越强,凋亡率也越高。结论大黄素能抑制人肺腺癌Anip973细胞生长,其抗肿瘤机制是通过激活Caspase-3,诱导细胞凋亡而阻止细胞周期。

肺腺癌患者胸水肿瘤细胞PD-L1/TTF-1表达及应用分析

目的探讨肺腺癌患者胸水肿瘤细胞程序性细胞死亡配体1(PD-L1)/甲状腺转录因子1(TTF-1)、PD-L1免疫组化染色的表达及与组织标本PD-L1表达一致性及其应用研究。方法选取2021年1月至2023年4月间首都医科大学附属北京朝阳医院收治的符合入组条件的50例肺腺癌患者为研究对象,比较同一病例组织标本中肿瘤细胞的PD-L1表达和胸水细胞蜡块中肿瘤细胞的PD-L1、PD-L1/TTF-1表达情况,评估它们之间表达的一致性。结果50例肺腺癌组织标本PD-L1的表达与患者性别、年龄、标本类型、病灶性质、标本来源和EGFR突变对比差异无统计学意义(P>0.05);胸水细胞蜡块中肿瘤细胞PD-L1/TTF-1免疫组化双染的表达与组织标本PD-L1表达的一致性较好(κ=0.846,P<0.05),明显高于PD-L1免疫组化单染(κ=0.754,P<0.05),与手术或活检切除标本一致性较好(κ=0.90,P<0.05),高于胸腔镜或穿刺小标本(κ=0.82,P<0.05),与原发病灶标本的一致性适中(κ=0.689,P<0.05),与转移病灶标本的一致性较好(κ=0.779,P<0.05)。结论胸水细胞学标本采用PD-L1/TTF-1免疫组化双染与组织标本PD-L1表达一致性较高,细胞蜡块PD-L1/TTF-1双染可在组织不易获取时作为一种有益补充,供临床制定免疫治疗方案参考。

区分肺腺癌和肺鳞状细胞癌的潜在基因分析

目的对非小细胞肺癌(NSCLC)潜在基因进行分析,寻找区分肺腺癌(LUAD)和肺鳞状细胞癌(LUSC)的相关基因,探索NSCLC诊断与治疗的更有效方法。方法利用3个基因表达综合(GEO)数据库(GSE4882、GSE7339和GSE40275)分析LUAD和LUSC组织样本中的差异表达基因(DEGs),对DEGs进行基因本体(GO)富集分析并构建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络来寻找关键枢纽基因。最后在临床样本中验证关键枢纽基因的差异表达。结果在GSE4882、GSE7339和GSE40275数据集中发现22个LUAD和LUSC的DEGs,通过构建PPI网络发现了6个关键枢纽基因(KRT18、RAN、NME1、NME2、MIF和CFB),进一步在肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库中分析枢纽基因表达与生存之间的关系,发现KRT18可能是区分LUAD和LUSC的潜在基因,同时构建了KRT18基因突变与LUAD和LUSC患者预后的风险预测模型。最后采用新乡医学院第一附属医院临床组织样本对KRT18表达进行验证。结论KRT18可能是区分LUAD和LUSC潜在基因。

莫诺苯宗对肺腺癌细胞自噬和凋亡的分子机制研究

目的:探究莫诺苯宗和自然杀伤细胞激活受体基因(KLRC3)对肺腺癌(LUAD)细胞凋亡和自噬的影响,为LUAD的治疗提供理论基础。方法:分别使用不同浓度莫诺苯宗处理LUAD细胞,并采用CCK-8法检测莫诺苯宗对LUAD细胞活力的影响;随后,使用80μmol/L的莫诺苯宗、50 nmol/L的KLRC3干扰质粒(si-KLRC3)、和100 nmol/L自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)1.5μg/ml KLRC3过表达载体(pcDNA-KLRC3)处理细胞后采用流式细胞术和Western blotting检测细胞凋亡以及凋亡相关蛋白和自噬相关蛋白的表达量。结果:莫诺苯宗浓度大于20μmol/L时可有效减弱LUAD细胞活力,且以剂量依赖性地促进了LUAD细胞的凋亡和自噬(均P<0.05)。KLRC3在LUAD细胞中低表达,干扰KLRC3减弱了莫诺苯宗对LUAD细胞自噬和凋亡的促进作用,比较差异有统计学意义(均P<0.05)。此外,过表达KLRC3也促进了LUAD细胞的凋亡和自噬,而KLRC3和莫诺苯宗对LUAD细胞凋亡和自噬的促进作用均可被3-MA所抵消,比较差异有统计学意义(均P<0.05)。结论:莫诺苯宗可能通过促进KLRC3的表达诱导自噬进而促进LUAD细胞的凋亡。

程序性细胞死亡蛋白-1抑制剂联合化疗治疗晚期肺腺癌的疗效

目的探究程序性细胞死亡蛋白-1(programmed cell death receptor 1,PD-1)抑制剂联合化疗治疗晚期肺腺癌(lung adenocarcinoma,LUAD)的临床疗效。方法回顾性分析98例晚期LUAD患者的临床资料,随机从予以化疗治疗(培美曲赛联合顺铂)的患者中抽取51例纳入对照组,从接受PD-1抑制剂(卡瑞利珠单抗)联合培美曲赛和顺铂治疗的患者中抽取47例纳入观察组,将2组患者按照倾向性匹配法进行匹配。记录2组患者的近期和远期临床疗效;比较2组治疗前及治疗后6个月时的肿瘤标志物[血清癌胚抗原(serum carcinoembryonic antigen,CEA)、组织多肽特异性抗原(tissue polypeptide specific antigen,TPS)、细胞角蛋白19片段抗原(cytokeratin 19 fragment antigen,CY-FRA21-1)]水平、免疫功能指标、肺功能差异;记录治疗期间2组患者不良反应的发生情况。结果治疗6个月后,2组疾病控制率比较差异无统计学意义(P>0.05),观察组的客观缓解率显著高于对照组(P<0.05);随访2年,观察组的生存率、无进展生存期、总生存时间均显著长于对照组(P<0.05);2组患者血清肿瘤标志物水平均显著降低,且观察组均低于对照组(P<0.05);2组的免疫功能指标、肺功能指标水平均显著升高,且观察组均高于对照组(P<0.05);2组不良反应发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论对于晚期LUAD患者,进行PD-1抑制剂联合化疗治疗能够获得更高的近远期临床疗效,且安全性较好。

肺腺癌患者癌组织人内源性逆转录病毒-H长末端重复关联蛋白2、淋巴细胞活化基因3、整合连接激酶表达情况及与临床病理特点的关系

目的 探究肺腺癌(LUAD)患者癌组织人内源性逆转录病毒-H长末端重复关联蛋白2(HHLA2)、淋巴细胞活化基因3(LAG-3)、整合连接激酶(ILK)表达情况及与临床病理特点的关系。方法 检测106例LUAD患者癌组织及癌旁组织HHLA2、LAG-3、ILK表达情况,根据3项指标在癌组织中的表达情况将所有患者分别分为HHLA2高表达组(85例)和HHLA2低表达组(21例)、LAG-3高表达组(65例)和LAG-3低表达组(41例)、ILK高表达组(78例)和ILK低表达组(28例)。收集所有患者一般资料、临床病理资料及3年生存率并进行组间比较。结果 LUAD患者癌组织中HHLA2、LAG-3、ILK高表达患者比例均高于同指标低表达患者比例,癌旁组织中上述3项指标低表达患者比例均高于同指标高表达患者比例。HHLA2高表达组年龄≥60岁、淋巴结转移患者比例均高于HHLA2低表达组;LAG-3高表达组TNMⅢ、Ⅳ期、淋巴结转移、远处转移患者比例均高于LAG-3低表达组;ILK高表达组组织低分化、TNMⅢ、Ⅳ期、淋巴结转移、远处转移患者比例均高于ILK低表达组(P<0.05)。HHLA2低表达组、LAG-3低表达组及ILK低表达组3年生存率均高于同指标高表达组(P<0.05)。结论 HHLA2、LAG-3、ILK在LUAD患者癌组织中大部分呈高表达,且与临床病理特点、预后存在一定关系。

中性粒细胞源性外泌体促进肺腺癌细胞的迁移和侵袭

目的研究中性粒细胞源性外泌体对肺腺癌细胞迁移和侵袭的影响。方法采用1μmol/L全反式维甲酸(ATRA)诱导人早幼粒细胞白血病NB4细胞分化成中性粒细胞,MGG染色分析其形态学的改变,流式细胞技术检测其表面标志物CD11b及CD18的表达。采用总外泌体试剂盒分离提取NB4细胞和中性粒细胞来源的外泌体,利用透射电镜技术鉴定外泌体的形态与大小。通过细胞划痕和Transwell迁移实验分析NB4细胞和中性粒细胞来源的外泌体对A549细胞迁移能力的影响。采用Transwell侵袭实验研究NB4细胞和中性粒细胞来源的外泌体对A549细胞侵袭能力的影响。结果MGG染色结果显示NB4细胞经ATRA诱导后分化成中性粒细胞,且流式细胞检测结果表明中性粒细胞表面标志物CD11b及CD18表达明显升高。电镜下观察到NB4细胞和中性粒细胞来源的外泌体大小为40~100 nm,形态呈双层膜,中空,圆形或椭圆形。细胞划痕和Transwell实验证实,中性粒细胞源性外泌体比NB4细胞源性外泌体能更明显地增强肺腺癌细胞的迁移和侵袭能力。结论中性粒细胞源性外泌体能明显促进肺腺癌细胞的迁移和侵袭,参与肺腺癌的发生发展。

芝麻素对长春瑞滨诱导人肺腺癌A549细胞凋亡的影响

[目的]探讨芝麻素对长春瑞滨诱导人肺腺癌A549细胞株凋亡的影响.[方法]选择人肺腺癌A549细胞株进行体外传代培养,制备成浓度为1.0×105个/mL的细胞悬浮液并接种于96孔板中.实验设空白组(加入DMEM培养液)、对照组(加入DMEM培养液及人肺腺癌A549细胞株)、芝麻素组(芝麻素10、20、30、40、50、60、70、80、90、100μg/mL)、长春瑞滨组(长春瑞滨5、10、15、20、25、30、35μg/mL)及联合用药组(加入IC50浓度的芝麻素和长春瑞滨,IC50为后续联合用药组实验药物浓度).空白组加入160μL的DMEM培养液,对照组及实验组各加入160μL已制备好的人肺腺癌A549细胞株悬浮液,待细胞株贴壁后,空白组、对照组及实验组分别加入20μL的生理盐水和20μL各相关浓度的药物.采用MTT法检测细胞增殖能力,利用倒置显微镜及HE染色法观察细胞形态学变化,采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况.[结果]在10~100μg/mL质量浓度范围内,低质量浓度的芝麻素具有抑制A549细胞株增殖的作用,IC50质量浓度为40μg/mL;在5~35μg/mL质量浓度范围内,长春瑞滨具有抑制A549细胞株增殖的作用,且随着药物质量浓度升高细胞抑制率升高,IC50质量浓度为20μg/mL;芝麻素与长春瑞滨联合用药对A549细胞株的抑制率明显高于单药用药(P<0.01).倒置显微镜及HE染色法观察结果显示,与对照组比较,芝麻素(40μg/mL)、长春瑞滨(20μg/mL)及联合用药(芝麻素40μg/mL+长春瑞滨20μg/mL)作用于A549细胞株48 h后贴壁细胞数量均明显减少,细胞间连接疏松,贴壁能力减弱,部分细胞体积变小、变圆或呈不规则形,核染色质凝集,细胞膜起泡形成凋亡小体,失去原有肿瘤细胞多角形或梭形形态,且联合用药组较单药组上述变化更为明显.流式细胞仪检测结果显示,药物作用48 h后,芝麻素组(40μg/mL)、长春瑞滨组(20μg/mL)及联合用药组(芝麻素40μg/mL+长春瑞滨20μg/mL)细胞凋亡率均明显高于对照组(P<0.01),且联合用药组早期凋亡率明显高于单独用药组(P<0.01).[结论]芝麻素可增强长春瑞滨诱导人肺腺癌A549细胞凋亡的作用.

T淋巴细胞及EGFR与肺腺癌临床特征及预后的关系分析

目的:探讨T淋巴细胞亚群及表皮生长因子受体(Epidermal growth factor receptor,EGFR)与肺腺癌临床特征及预后的关系。方法:选取本院2019年10月至2022年10月收治的72例肺腺癌患者作为研究对象。比较两组患者肺腺癌病理组织与癌旁组织的CD4^(+)、CD8^(+)和EGFR表达水平,分析其与临床特征的关系。采用受试者工作特征曲线(Receiver Operating Characteristic,ROC)评估CD4^(+)、CD8^(+)和EGFR表达水平对肺腺癌的诊断价值。采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,探讨T细胞亚群和EGFR表达水平与肺腺癌患者预后的关系。结果:肺腺癌病理组织的CD8^(+)含量及EGFR表达水平均明显高于癌旁组织,而CD4^(+)含量明显低于癌旁组织(P<0.05)。CD4^(+)、CD8^(+)含量及EGFR表达水平与淋巴结是否转移和不同TNM分期及分化程度有关(P<0.05)。ROC曲线结果显示:CD4^(+)、CD8^(+)和EGFR的AUC值分别为0.547、0.723、0.757,对肺腺癌患者具有一定的诊断价值。高CD4^(+)含量的生存时间比低CD4^(+)含量长,高CD8^(+)含量的生存时间比低CD8^(+)含量短,EGFR阳性的生存时间比阴性短。结论:肺腺癌患者的CD8^(+)和EGFR在机体内呈现高表达水平,而CD4^(+)呈现低表达水平,均与患者临床特征和预后密切相关。

伴印戒细胞样形态肺腺癌9例临床病理特征分析

目的 分析9例伴印戒细胞样形态肺腺癌的临床病理特征。方法 回顾性分析2013年1月至2019年12月川北医学院附属医院及南充市中心医院收治的9例伴印戒细胞样形态肺腺癌患者的临床资料,分析其病理、影像学和临床特征以及治疗方案和生存预后。结果 9例患者中男3例,女6例;年龄34~74岁,中位年龄53岁。TNM分期为Ⅰ期1例,Ⅱ期1例,Ⅲ期5例,Ⅳ期2例。印戒细胞组分的比例为10%~100%,4例为单纯印戒细胞成分肺腺癌。9例均表现为甲状腺转录因子-1(TTF-1)(+)和细胞角蛋白7(CK7)(+)/细胞角蛋白20(CK20)(-)免疫表型。5例患者行手术切除,3例患者接受非手术治疗,1例患者因肿瘤侵犯主支气管、肺动脉、上腔静脉和心包而失去手术机会。总体生存时间6~61个月。结论 伴印戒细胞样形态肺腺癌是一种罕见的腺癌类型,可表现出TTF-1(+)和CK7(+)/CK20(-)免疫表型,其诊断主要依靠病理学检查。该病目前尚无标准治疗方案,患者生存预后不佳,靶向治疗或有机会改善其预后。

CDC20在肺腺癌组织中的表达及对肺腺癌细胞增殖和侵袭的影响研究

背景与目的:肺腺癌具有早期发现难、肿瘤进展快及晚期手术切除率低等特点。尽管单药免疫治疗和免疫治疗联合化疗的相关研究在改善预后、克服耐药方面已初显成效,但是大部分肺腺癌患者从中获益仍有限。因此,迫切需要寻找具有相对较高灵敏度和特异度的新型生物标志物,以改善肺腺癌患者的预后。细胞分裂周期蛋白20(cell division cycle protein 20,CDC20)参与多种肿瘤的发生、发展,但在肺腺癌中的生物学作用及机制尚未明确。本研究旨在探究CDC20在肺腺癌中的表达情况及其对肺腺癌患者预后的预测价值,并分析CDC20对肺腺癌细胞增殖和侵袭能力的影响。方法:采用免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)检测CDC20在肺腺癌中的表达情况并结合生物信息学和临床病理学参数分析其与预后不良的相关性。采用Kaplan-Meier生存曲线描述CDC20对肺腺癌患者术后生存率的影响,采用COX多因素回归分析影响肺腺癌患者术后生存率的独立预后因素。通过受试者工作特征曲线分析CDC20表达在肺腺癌患者中的诊断价值。采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测人正常肺上皮细胞系BEAS-2B、人肺腺癌细胞系A549和H1299中CDC20的表达水平。细胞实验中,通过敲低肺腺癌细胞中的CDC20,分为si-NC(对照组)、si-CDC20#1(敲低组1)和si-CDC20#2(敲低组2)3个组。采用细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)、克隆形成、transwell和划痕实验检测细胞增殖、迁移和侵袭能力。通过基因本体论(Gene Ontology,GO)功能和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)通路富集分析CDC20在肺腺癌中的生物学作用。通过基因集富集分析(gene set enrichment analysis,GSEA)CDC20在肺腺癌中可能的调控通路。本研究经河北省胸科医院伦理委员会批准(编号:2022051)。结果:生物信息学及IHC结果均显示,CDC20在肺腺癌组织中显著高表达(P<0.05)。生物信息学与临床参数分析结果均显示,CDC20高表达与患者预后不良相关。Kaplan-Meier生存分析和COX回归分析均显示,CDC20表达情况与患者术后生存率呈显著负相关(P<0.05)。敲低CDC20能抑制肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭(P<0.05)。GO功能、KEGG通路和GSEA结果均显示,CDC20与细胞周期相关。结论:CDC20在肺腺癌中高表达,CDC20高表达是肺腺癌患者不良预后的独立危险因素。CDC20能促进肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭。

超声影像组学模型鉴别周围型肺腺癌与肺鳞状细胞癌

目的观察基于灰阶超声声像图的影像组学模型鉴别周围型肺腺癌与肺鳞状细胞癌(简称肺鳞癌)的效能。方法回顾性分析经穿刺活检病理确诊且肺超声清晰显示的88例单发周围型肺腺癌及58例单发周围型肺鳞癌患者资料,按照7∶3比例将患者分为训练集(n=103)与测试集(n=43)。基于训练集灰阶超声声像图提取、筛选可用于鉴别诊断的影像组学特征;分别以支持向量机(SVM)、线性判别分析(LDA)、logistic回归(LR)及最小绝对收缩和选择算子结合logistic回归(LASSO-LR)4种分类器建立模型,并以10折交叉验证下表现最佳者作为相应类型影像组学模型;绘制受试者工作特征曲线,计算曲线下面积(AUC),评估各模型鉴别诊断效能,并以DeLong检验进行比较,获取最大约登指数下最佳截断值的鉴别诊断准确率。结果SVM、LDA、LR及LASSO-LR最佳影像组学模型鉴别测试集周围型肺腺癌与肺鳞癌的AUC分别为0.864、0.867、0.880及0.844,差异均无统计学意义(P均>0.05);各模型在相应最佳截断值下鉴别诊断的准确率分别为86.05%、83.72%、88.37%及86.05%。结论基于灰阶超声影像组学模型可用于鉴别周围型肺腺癌与肺鳞癌。

肺腺癌合并血管内大B细胞淋巴瘤1例并文献复习

血管内大B细胞淋巴瘤(intravascular large B-cell lymphoma,IVLBCL)是一种侵袭性结外大B细胞淋巴瘤,在同一器官与其他恶性肿瘤同时发生非常罕见,尤其是肺。本文报道1例肺腺癌合并IVLBCL的罕见病例。患者因腹泻伴发热、咳嗽入院。胸部计算机断层扫描(computed tomography,CT)示右肺上叶不规则斑片状高密度影,边缘有磨玻璃影。入院后给予患者抗感染等治疗,但仍有间断低热(最高37.5 ℃)。经皮肺穿刺活检(percutaneous lung biopsy,PLB)病理诊断为贴壁生长为主的腺癌,局部考虑浸润。手术后病理诊断为肺浸润性非黏液性腺癌合并IVLBCL。本文通过分析其临床病理特征,并复习相关文献,以提高临床和病理医师对该肿瘤的认识,避免漏诊或误诊。

维生素D受体在肺腺癌高表达及其对肺腺癌细胞活力和转移能力影响的研究

目的:探究维生素D受体(vitamin D receptor,VDR)在肺腺癌中的表达及其对肺腺癌细胞生物学功能的影响。方法:本研究通过6个肺腺癌数据集(共792例肺腺癌组织和230例相邻非肿瘤组织)分析了VDR的mRNA在肺腺癌中的表达水平及其与预后的关系,免疫组化检测30例肺腺癌患者肿瘤组织和癌旁组织中VDR蛋白表达。以肺腺癌细胞A549和H1650为研究对象,分别转染阴性对照和两条VDR短发夹RNA(shRNA)。CCK-8实验比较各实验分组的细胞活力,Transwell实验和划痕实验比较各实验分组细胞的侵袭及迁移能力。基因集富分析肺腺癌VDR高表达的组织富集的相关信号通路。结果:VDR的mRNA在肺腺癌组织中的表达显著增加(P<0.01)。免疫组化实验进一步证实了VDR在肺腺癌中显著高表达(P<0.01)。生存分析结果显示VDR的表达对肺腺癌患者的整体生存率没有显著影响(P>0.05)。敲减VDR可以显著抑制肺腺癌的细胞活力、侵袭及迁移能力(P<0.05)。基因集富集分析结果显示VDR高表达的肺腺癌组织显著富集在上皮-间充质转化等信号通路(P<0.05)。结论:VDR在肺腺癌中高表达,敲减VDR可以抑制肺腺癌细胞活力、侵袭及迁移能力。

组蛋白乙酰转移酶Tip60降表达的肺腺癌细胞侵袭迁移能力变化及其机制

目的观察组蛋白乙酰转移酶Tip60降表达的肺腺癌细胞侵袭迁移能力变化并探讨其机制。方法肺腺癌细胞系A549分为Tip60降表达组、降表达阴性对照组及对照组,Tip60降表达组、降表达阴性对照组分别转染Tip60干扰siRNA及阴性对照siRNA,对照组不进行转染。采用Western blotting法检测细胞SETDB1蛋白,实时荧光定量PCR法检测细胞SETDB1 mRNA。采用CCK-8法观察细胞增殖能力,Transwell小室实验观察细胞侵袭能力,划痕修复实验观察细胞迁移能力。使用Cistrome DB数据库的UCSC Browser功能搜索发现肺腺癌细胞A549中SETDB1启动子区H3组蛋白第9位赖氨酸(H3K9)和第27位赖氨酸(H3K27)残基存在明显富集峰,采用染色质免疫沉淀检测细胞SETDB1基因启动子区H3组蛋白H3K9、H3K27的乙酰化水平。结果Tip60降表达组SETDB1蛋白及mRNA表达均小于对照组、降表达阴性对照组(P均<0.05)。培养24、48、72 h时,Tip60降表达组细胞增殖能力均小于对照组、降表达阴性对照组;Tip60降表达组侵袭细胞数少于对照组、降表达阴性对照组;培养24、48 h时Tip60降表达组划痕愈合率均小于对照组、降表达阴性对照组(P均<0.05)。Tip60降表达组SETDB1启动子区组蛋白H3K9及H3K27乙酰化水平均小于对照组、降表达阴性对照组(P均<0.05)。结论Tip60降表达可抑制肺腺癌细胞的侵袭迁移能力,其机制可能与调控SETDB1启动子区H3组蛋白乙酰化水平有关。

miR-33a-5p靶基因分析验证及对人肺腺癌A549细胞增殖的影响

目的研究miR-33a-5p过表达对人肺腺癌A549细胞增殖的影响及探索其可能的机制。方法在A549细胞中瞬时转染miR-33a-5p mimics,CCK-8和BrdU实验检测细胞增殖能力,转录组测序(RNA-seq)检测mRNA表达水平,targetscan(8.0)、miRDB(2020)、miRWalk(release_2022_01)和ENCORI(starbase,v2.0)联合筛选miR-33a-5p的潜在靶基因,并与RNA-seq的下调表达的基因取交集,RT-qPCR进行基因表达验证。结果RT-qPCR结果显示,miR-33a-5p在A549细胞中高表达(P<0.05);CCK-8实验和BrdU实验结果显示,细胞增殖能力受到抑制(P均<0.05);RNA-seq结果显示,差异基因共494个,其中上调266个,下调228个;GO功能富集主要在细胞外区组成、质膜的组成、受体复合物、细胞外泌体、细胞外基质结构组成、钙离子结合等,KEGG富集主要在补体和凝血途径、胰岛素抵抗、ABC转运途径、IL-17途径、NOD样受体途径和NF-κB信号通路等;靶基因预测分析和RT-qPCR表达验证显示,MTHFD2、OSBPL6、HADHB、HMGCLL1、GUCY1A2和DEPTOR是miR-33a-5p的潜在靶基因(P均<0.05)。结论miR-33a-5p可能通过调控MTHFD2、OSBPL6、HADHB、HMGCLL1、GUCY1A2和DEPTOR基因转录后表达水平来抑制A549细胞的增殖。

靶向SECTM1抑制低浓度帕博西尼诱导的肺腺癌细胞恶性表型

目的:探讨敲低分泌及跨膜蛋白1(secreted and transmembrane 1,SECTM1)对低浓度细胞周期选择性抑制剂帕博西尼(Palbociclib,Pb)诱导的肺腺癌细胞恶性表型的逆转作用。方法:CCK8法检测不同浓度Pb对肺腺癌细胞系H1650的杀伤作用;Transwell小室实验检测2μmol/L Pb处理H1650细胞后侵袭、迁移能力的变化;生物信息学分析2μmol/L Pb处理H1650细胞后转录组表达变化并筛选差异基因;验证Pb对H1650细胞SECTM1表达量的影响,检测敲降SECTM1对低浓度Pb诱导的恶性表型及上皮间质转化标志物的逆转作用。结果:Pb可抑制H1650细胞生长,但2μmol/L Pb处理显著促进其侵袭能力、迁移能力;测序结果显示,2μmol/L Pb处理后抑制H1650细胞细胞周期相关信号通路,但促进了细胞因子-细胞因子受体相关通路的激活;敲降SECTM1显著逆转了低浓度Pb诱导的细胞侵袭、迁移能力及上皮间质转化标志物的增加。结论:低浓度Pb可能诱导肺腺癌细胞侵袭、迁移能力增加,靶向敲低SECTM1可抑制其副作用。

间隙连接蛋白在肺腺癌细胞中的表达及其意义

目的探讨间隙连接蛋白B3(GJB3)对肺腺癌细胞H1299增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法利用RT-qPCR和Western blot实验分别检测人正常肺上皮细胞(BEAS-2B)和肺腺癌细胞系(H441、A549、H1299)中GJB3的mRNA和蛋白水平的表达;筛选出GJB3表达量最高的H1299细胞系作为后续实验研究对象;对H1299细胞进行小干扰RNA(siRNA)转染,分为对照组(si-NC)和实验组(si-GJB3),在孵育0、24、48、72、96 h后采用CCK-8法检测H1299细胞活力,使用平板克隆检测细胞增殖能力,细胞划痕实验检测细胞的迁移能力,Transwell实验检测细胞的侵袭能力。结果与人正常肺上皮细胞相比,在肺腺癌细胞中GJB3的mRNA和蛋白的表达量均较高(P<0.05),其中H1299细胞的表达量最为显著(P<0.05);在H1299细胞中敲低GJB3后,明显抑制了该细胞的活力、增殖能力和迁移及侵袭能力(P<0.05)。结论GJB3在肺腺癌细胞中高表达,可能促进肺腺癌细胞的发生和发展。

黏蛋白13在肺腺癌组织中的表达及其对A549细胞恶性生物学行为的影响与可能的机制

目的:探讨黏蛋白13(MUC13)在肺腺癌组织中的表达及其对A549细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭及EMT的影响与可能的机制。方法:通过癌症基因组图谱(TCGA)和高通量基因表达(GEO)数据库分析MUC13在肺腺癌组织与正常肺组织、癌旁组织中的差异表达。qPCR法和WB法检测人肺腺癌细胞NCI-H1395、NCI-H1975、H1299、A549和人正常肺上皮细胞BEAS-2B中MUC13 mRNA和蛋白的表达水平。利用si RNA技术敲低A549细胞中MUC13表达,实验分为si-MUC13组、NC组和si-MUC13+IGF-1组。通过克隆形成实验、流式细胞术和Transwell实验分别检测敲低MUC13对A549细胞增殖、细胞周期、凋亡、迁移和侵袭的影响,WB法检测敲低MUC13对A549细胞上皮钙黏素(E-cadherin)、神经钙黏素(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、EGFR、p-EGFR、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT等蛋白表达的影响。结果:MUC13 mRNA和蛋白在肺腺癌组织和细胞中均呈高表达(均P<0.01),选取表达水平较高的A549细胞进行后续实验。敲低MUC13后,A549细胞的增殖能力显著降低,G0/G1期的细胞数量显著增多、G2/M期及S期的细胞数量显著减少,细胞凋亡率显著升高,细胞迁移及侵袭能力均显著降低(均P<0.01);A549细胞中E-cadherin表达显著上调,N-cadherin、vimentin表达显著下调,p-EGFR/EGFR、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT比值均显著降低(均P<0.01);再加入IGF-1处理后,A549细胞中p-EGFR/EGFR、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT比值均显著升高(均P<0.01)。结论:MUC13在肺腺癌组织和细胞中均呈高表达,其可能通过激活EGFR/PI3K/AKT信号通路促进A549细胞增殖、迁移、侵袭和EMT。