附子水提物及附子多糖通过抑制TGF-β1/Smads信号通路发挥抗肾脏纤维化作用机制研究

目的:基于TGF-β1/Smads通路探讨附子水提物及附子多糖对肾脏纤维化的影响及可能作用机制。方法:体外培养肾小球内皮细胞(HRGECs),采用TGF-β1刺激诱导HRGECs纤维化样模型。造模成功后将细胞分为正常组、TGF-β1模型组(30 ng/mL)、附子水提物组(10 mg/mL)、附子多糖组(5 mg/mL)。光学显微镜、扫描电镜观察细胞形态的变化;细胞划痕实验、Transwell实验观察细胞迁移和侵袭能力;RT-qPCR法检测α-SMA、FSP-1、ZO-1、CD31 mRNA表达水平;Western-blot法检测α-SMA、FSP-1、ZO-1、CD31、p-Smad3、Smad7蛋白表达水平。结果:与正常组比较,TGF-β1刺激72 h后HRGECs形态出现纤维化样变,迁移和侵袭能力增强(P<0.01),α-SMA、FSP-1蛋白及mRNA表达升高,ZO-1、CD31蛋白及mRNA表达下调(P<0.05,P<0.01)。与TGF-β1模型组比较,附子水提物组、附子多糖组细胞形态改善,迁移和侵袭能力降低(P<0.01),α-SMA、FSP-1、p-Smad3蛋白及mRNA表达下降;ZO-1、CD31、Smad7蛋白及mRNA表达升高(P<0.05,P<0.01)。结论:TGF-β1可明显诱导肾小球内皮细胞发生纤维化改变。附子水提物及附子多糖对TGF-β1诱导的HRGECs纤维化改变有明显的改善作用,其机制可能与调节TGF-β1/Smads信号通路有关。

桃红四物汤加味颗粒对糖尿病肾病模型大鼠足细胞上皮-间充质转化及肾脏纤维化的影响

目的 探讨桃红四物汤加味颗粒对糖尿病肾病(DKD)模型大鼠足细胞上皮-间充质转化(EMT)及肾脏纤维化的影响。方法随机选取8只大鼠为正常组(予普通饲料),其余大鼠采用高糖高脂饲料联合腹腔注射链脲佐菌素(35 mg/kg)建立DKD模型。将模型大鼠分为模型组、厄贝沙坦组[阳性对照,13.5 mg/(kg·d)]、桃红四物汤加味组[6.48 g/(kg·d)],每组最终纳入8只。各组大鼠灌胃相应药物,每日1次,连续干预16周。干预第4、8、12、16周末检测各组大鼠24 h尿蛋白(24 h UTP),末次给药后检测各组大鼠体重、饮水量、饮食量、尿量、空腹血糖、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)和肾组织中P-钙黏素(P-cadherin)、足细胞裂孔膜蛋白(nephrin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、肾母细胞瘤蛋白1(WT1)、转化生长因子β1(TGF-β1)、Ⅳ型胶原蛋白(Col-Ⅳ)m RNA及蛋白的表达情况,观察肾组织病理形态学变化并测量肾小球基底膜厚度。结果 与模型组比较,桃红四物汤加味组大鼠从第8周末开始24 h UTP显著降低,体重显著增长,饮水量、尿量均显著减少,Scr、BUN水平和α-SMA mRNA以及TGF-β1、Col-ⅣmRNA及蛋白表达水平均显著降低,P-cadherin、nephrin、WT1 mRNA表达水平均显著升高(P<0.05);α-SMA蛋白沉积减少,P-cadherin、nephrin、WT1蛋白沉积均增多;大鼠肾组织病理损伤及纤维化程度减轻,肾小球基底膜厚度显著减小(P<0.05)。结论 桃红四物汤加味颗粒可通过抑制DKD模型大鼠足细胞EMT,减轻肾组织病理损伤及足细胞损伤,从而保护肾功能、延缓肾脏纤维化进展。

基于糖原合成酶激酶-3β及内质网应激探讨Renalase抗肾脏纤维化的作用机制

目的 探讨糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)在Renalase抗肾脏纤维化过程中的作用及其可能的机制。方法 选用C57BL/6小鼠,予以下分组:(1)Sham+Ad-β-gal组;(2)Sham+Ad-Renalase组;(3)UUO+Ad-β-gal组;(4)UUO+Ad-Renalas组。观察GSK-3β表达的变化,其中UUO组为单侧输尿管结扎致肾脏纤维化模型组,Sham组为假手术对照组,Ad-Renalase为过表达Renalase腺病毒,Ad-β-gal为对照腺病毒。然后应用病毒转染技术上调(UUO+Ad-Renalase+AAV-GSK-3β组)及下调(UUO+Ad-Renalase+Ad-GSK-3β-RNAi组)GSK-3β后观察Renalase抗纤维化作用的变化。结果 与假手术(Sham)组相比,UUO组GSK-3β表达增加;与UUO+Ad-β-gal组相比,UUO+Ad-Renalase组纤维组织沉积减少、纤维化标志蛋白Col-Ⅰ和FN表达下降的同时GSK-3β表达下调;当上调GSK-3β后,Renalase抗纤维化作用被抵消,而当下调GSK-3β后,与UUO+Ad-Renalase组相比,UUO+Ad-Renalase+Ad-GSK-3β-RNAi组纤维化没有进一步改善。同时观察到与Sham组相比,UUO组内质网应激激活明显,过表达Renalase后,内质网应激被抑制。当加入内质网应激激动剂TM后,与UUO+Ad-Renalase组相比,UUO+Ad-Renalase+TM组纤维化加重,GSK-3β表达升高;但无论GSK-3β升高或者降低,内质网应激均无明显变化。结论 本研究证实在单侧输尿管结扎致肾脏纤维化过程中,Renalase通过抑制内质网应激下调GSK-3β表达从而延缓肾脏纤维化。

糖萼参与肾脏纤维化的机制

肾脏纤维化是慢性肾脏病(CKD)进展至终末期肾病的共同病理特征,明确肾脏纤维化发生的分子机制对CKD的防治至关重要。内皮细胞表层的多糖蛋白复合物——糖萼组成了血液和血管壁之间最基本的屏障。最新研究显示,糖萼在肾脏纤维化过程中发挥重要作用。本文就糖萼参与肾脏纤维化发生的相关研究进展作一综述,为其防治提供新的治疗策略。

中医药治疗糖尿病肾病肾脏纤维化的研究进展

糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)是糖尿病(diabetes mellitu,DM)最常见、最严重的并发症之一。根据国际糖尿病联合会的统计数据,2021年全球约有5.37亿糖尿病患者,且还将以一定速度持续增长^([1,2])。随着糖尿病患者的增加,预计DN的患病率也将持续增加。

铜稳态失衡与肾脏纤维化的研究进展

肾脏纤维化是各种慢性肾脏病进展至终末期肾病的共同病理表现及病理生理基础。其主要特征包括细胞外基质的异常合成和堆积,伴随着炎性细胞渗透、肾小管萎缩以及周围毛细血管网络的减少等病理改变。这些变化导致肾实质逐渐减少,最终引发肾功能衰竭。肾脏纤维化的机制复杂,目前缺乏特异性治疗靶点,难以延缓或阻止其进展。铜离子是人体中不可或缺的微量元素,作为多种蛋白和酶的催化结构或辅助因子,参与多个生物学过程,如能量生成、皮肤色素生成、自由基清除和细胞增殖等。既往研究已证实铜离子与肝脏纤维化和肺纤维化相关,近期研究发现铜离子也可能参与肾脏纤维化的发生。本文将从铜离子在机体和细胞代谢中的角色入手,总结铜及相关蛋白在肾脏纤维化中的作用机制,为深入探讨肾脏纤维化的发生和发展提供新的研究视角。

肾脏纤维化的诊断、治疗与分子机制研究进展

肾脏纤维化是慢性肾脏病(CKD)进展至终末期肾病的关键病理生理过程,严重危害人类健康,其诊断、治疗和分子机制研究一直备受关注。肾脏纤维化作为多数慢性肾脏病的终末期表现,以肾功能单位受损、肾足细胞凋亡、肾小管坏死、间质成纤维细胞增殖、细胞外基质(ECM)堆积为主要病理特征,一般结合患者的临床病史、实验室检查和影像学表现等多途径诊断肾脏纤维化并施以药物治疗。多种信号通路参与肾脏纤维化的发生和发展,包括炎症反应、细胞凋亡和细胞间相互作用等。深入了解这些分子机制,有助于更有效地治疗肾脏纤维化。本研究通过对近年来肾脏纤维化诊断治疗方法及分子机制研究进行综述,以期为寻找治疗肾脏纤维化的新靶点提供依据。

真武汤合五皮饮加减对糖尿病肾病患者肾脏纤维化、肾小管氧化损伤和PI3K/Akt/NF-κB信号通路的影响

目的:观察真武汤合五皮饮加减对糖尿病肾病患者肾脏纤维化、肾小管氧化损伤和磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/核因子κB(NF-κB)信号通路的影响。方法:选择2021年2月至2023年2月该院收治的糖尿病肾病患者100例,所有患者均采用随机数字表法分组。基础干预组50例患者(脱落3例,最终纳入47例)给予常规西医治疗,观察组50例患者(脱落2例,最终纳入48例)在基础干预组的基础上给予真武汤合五皮饮加减治疗。治疗前后对两组患者进行中医证候评价,检测谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、结缔组织生长因子(CTGF)、活性氧(ROS)、糖化血红蛋白(HbA1c)、透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、尿白蛋白排泄率(UAE)、尿β2-微球蛋白(β2-MG)水平及24 h尿蛋白定量,PI3K、Akt和NF-κB的mRNA表达水平,比较两组患者的临床疗效。结果:观察组患者的总有效率较基础干预组明显升高[97.92%(47/48)vs. 82.98%(39/47)],差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,观察组患者神疲畏寒、尿浊、腰膝酸冷、肢体浮肿、下肢尤甚、小便清长或短少、面色白光白、夜尿增多及五更泄泻的评分较基础干预组明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗后,观察组患者的HbA1c、UAE和24 h尿蛋白定量较基础干预组明显降低,GSH-Px水平较基础干预组明显升高,ROS、β2-MG水平较基础干预组明显降低,NF-κB mRNA表达水平较基础干预组明显降低,PI3K、Akt mRNA表达水平较基础干预组明显升高,CTGF、HA和LN水平较基础干预组明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:真武汤合五皮饮加减用于糖尿病肾病患者,可调节PI3K/Akt/NF-κB信号通路,减少肾小管氧化损伤,改善肾脏纤维化病情,调节HbA1c、UAE和24 h尿蛋白定量,提高临床疗效。

恩格列净联合贝那普利治疗早期糖尿病肾病的效果及对炎症反应、肾脏纤维化指标的影响

目的 探讨恩格列净联合贝那普利治疗早期糖尿病肾病的效果及对炎症反应、肾脏纤维化指标的影响。方法 选取2021年2月至2022年2月收治的150例早期糖尿病肾病患者作为研究对象,随机将其分为对照组与观察组,各75例。对照组采用常规治疗联合贝那普利治疗,观察组在对照组基础上采用恩格列净治疗。比较两组的治疗效果。结果 观察组的治疗总有效率高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗前,两组的白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);治疗后,观察组的IL-6、TNF-α及MCP-1水平低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗前,两组的胱抑素C(Cys C)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)、转化生长因子-β1(TGF-β1)及Ⅳ型胶原(CⅣ)水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);治疗后,观察组的Cys C、TIMP-1、TGF-β1及CⅣ水平低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 恩格列净联合贝那普利治疗早期糖尿病肾病的效果显著,可有效调控机体炎症反应,抑制肾脏纤维化,延缓病情进展。

达格列净拮抗糖尿病肾脏纤维化作用研究

目的探讨达格列净对糖尿病小鼠肾脏以及棕榈酸诱导的小鼠肾小球系膜细胞(SV40)的保护作用。方法将36只SPF级C57BL/6小鼠随机分为正常组、糖尿病组、达格列净组,体外培养SV40并分为正常组、棕榈酸组、正常对照组、棕榈酸+达格列净组。Masson染色检测小鼠肾脏组织中肌纤维与胶原纤维表达情况,Western blot检测小鼠肾脏组织与SV40中Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和转化生长因子β1(TGF-β1)蛋白表达,qPCR检测小鼠肾脏组织与SV40中Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA含量变化,CCK-8法检测SV40增殖水平。结果达格列净可明显改善糖尿病小鼠肾脏纤维化,抑制SV40细胞增殖,降低糖尿病小鼠肾脏组织与SV40中Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、TGF-β1与α-SMA表达。结论达格列净通过减少胶原沉积,下调TGF-β1与α-SMA,发挥对糖尿病肾脏纤维化的保护机制。

方药联合温针灸治疗脾肾气虚兼血瘀型糖尿病肾病的疗效及对肾脏纤维化指标的影响

目的:观察和分析自拟方药联合温针灸治疗脾肾气虚兼血瘀型糖尿病肾病患者的临床疗效以及对肾脏纤维化指标的影响。方法:选取脾肾气虚兼血瘀型糖尿病肾病患者60例,采取随机数字表法分为对照组和治疗组各30例。对照组予以西医基础治疗加用厄贝沙坦口服;治疗组在对照组基础上予以中药汤剂自拟健脾益肾活血方联合温针灸治疗。两组均以4周为1个疗程,连续治疗2个疗程。比较两组患者经过两个疗程治疗之后的血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、24小时尿蛋白定量、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、空腹血糖(FBG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、胱抑素C(CysC)、金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、Ⅳ型胶原(CIV)的变化情况。结果:两组SCr、BUN、24小时尿蛋白定量、TC、TG、FBG、HbA1c、CysC、TIMP-1、TGF-β1、CIV水平均降低(P<0.05),且治疗组指标更低于对照组(P<0.05)。治疗组中医证候疗效评价总有效率明显高于对照组(P<0.05)。结论:自拟健脾益肾活血方联合温针灸治疗可减轻糖尿病肾病肾脏损伤,减轻尿蛋白,延缓肾脏纤维化进展,从而提高患者生存质量。

有氧运动干预慢性肾功能衰竭模型大鼠的肾脏纤维化

背景:肾脏纤维化是慢性肾功能衰竭的主要特征与基本病理生理学变化,其中局部肾素-血管紧张素系统稳态失衡造成的胶原代谢异常可能起关键作用。有氧运动是防治各种类型组织纤维化的重要非药物手段,但其对肾脏纤维化的作用及机制尚未明确。目的:阐明规律有氧运动对慢性肾功能衰竭大鼠肾脏纤维化的影响,并探讨胶原代谢通路及肾素-血管紧张素系统在其间的作用机制。方法:45只6周龄雄性SD大鼠,随机分为假手术组、模型安静组和模型运动组(n=15),后两组利用5/6肾切除术制作慢性肾功能衰竭模型,假手术组和模型安静组于鼠笼内安静饲养,模型运动组进行18周跑台有氧运动训练(60 min/d,5 d/周)。运动训练结束后,利用无创血压仪测定尾动脉血压,代谢笼收集尿液测定24 h蛋白尿,心脏取血检测血清尿素氮和血清肌酐水平,采用PAS染色和Masson染色进行肾脏组织病理学观察并获取肾小球硬化指数和纤维化指数,取肾组织采用免疫印迹法测定Ⅰ型胶原、转化生长因子β1、基质金属蛋白酶2、基质金属蛋白酶9、金属蛋白酶组织抑制物1以及血管紧张素原、肾素、肾素受体、血管紧张素转换酶、血管紧张素转换酶2、血管紧张素Ⅱ1型受体、血管紧张素Ⅱ2型受体和Mas受体蛋白表达量,明胶酶谱法检测肾脏基质金属蛋白酶2和基质金属蛋白酶9活性。结果与结论:(1)与模型安静组比较,模型运动组血压降低、肾功能提高(P<0.05);肾小球硬化指数和肾脏纤维化指数降低(P<0.05);肾脏Ⅰ型胶原、转化生长因子β1、金属蛋白酶组织抑制物1、血管紧张素原、肾素、血管紧张素转换酶和血管紧张素Ⅱ1型受体蛋白表达量降低(P<0.05);基质金属蛋白酶2、基质金属蛋白酶9、血管紧张素转换酶2、血管紧张素Ⅱ2型受体和Mas受体蛋白表达量上调(P<0.05);基质金属蛋白酶2/金属蛋白酶组织抑制物1比值、基质金属蛋白酶9/金属蛋白酶组织抑制物1比值和基质金属蛋白酶2活性升高(P<0.05);(2)提示长期有氧运动能够减轻5/6肾切除所致的大鼠肾脏纤维化并延缓肾功能衰竭进程,其机制可能与恢复肾素-血管紧张素系统稳态失衡、进而改善胶原代谢有关。

Smad3基因敲除对5/6肾切除慢性肾脏纤维化小鼠模型的影响

目的观察Smad3基因敲除对5/6肾切除慢性肾纤维化小鼠模型的影响。方法清洁级WT-C57及Smad3-KO(以下简写S3-KO)小鼠各24只,分为假手术野生组(SWT)、假手术Smad3-KO组(SS3-KO)和模型野生组(MWT)、模型Smad3-KO组(MS3-KO)4组,模型组以platt法建立慢性肾脏纤维化模型,造模后4周,检测各组小鼠血中肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、24h尿蛋白(U-Pro/24h)含量、病理形态学变化;免疫荧光染色法观察肾组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA),I型胶原蛋白(CollageI),纤维连接蛋白(FN)的表达面积变化;蛋白免疫印迹法(WB)和实时荧光定量PCR(RT-PCR)法检测各组小鼠肾组织TGF-β1、p-Smad3、α-SMA、CollageI、FN蛋白及mRNA的表达水平;免疫组化法观察肾组织内中性粒细胞阳性表达个数的变化。结果与假手术组比较,MWT组P-smad3蛋白,Smad3mRNA明显增高(P<0.01),MS3-KO组虽有增高,但无显著性差异(P>0.05)。HE染色SWT,SS3-KO组肾小球形态基本正常,天狼星染色肾组织间质无或有少许红色胶原纤维沉积。MWT,MS3-KO组肾小球明显异常,天狼星染色MWT,MS3-KO组间质能够见到明显的胶原纤维,MS3-KO组病理改变总体轻于MWT组。经过图像处理分析可见,胶原纤维面积MS3-KO组面积小于MWT组,组间比较均有显著性差异(P<0.05)。指标方面,SWT与SS3-KO组比较,α-SMA、CollageI、FN免疫荧光面积,Scr、Bun、U-Pro/24h水平,TGF-β1、α-SMA、CollageI、FN蛋白和mRNA相对表达水平,中性粒细胞阳性表达个数均无显著性差异(P>0.05),M组与其S组比较上述指标含量明显增高(P<0.01或P<0.05),而MS3-KO与MWT比较,MWT组上述指标上升更为明显,组间差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。结论Smad3-KO能够减少模型组小鼠肾组织TGF-β1、α-SMA、FN、CollageI蛋白和mRNA的表达,改善肾功能,减少中性粒细胞的表达,能够减轻模型所致的肾脏纤维化病理损害,对肾脏损害有一定的保护作用。

lncRNA和miRNA在肾脏纤维化中的作用

肾脏纤维化(renal fibrosis,RF)是导致慢性肾脏病终末期肾功能衰竭的一般病理过程,其分子机制复杂。长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)及微小RNA(microRNA,miRNA)是主要的非编码RNA,可通过多种机制影响疾病进程、细胞内稳态和发育等。越来越多的研究显示lncRNA及miRNA对RF具有较高的应用价值,包括基于其开发RF的治疗方案,以及作为生物标志物用于RF的早期检测等。本文就lncRNA、miRNA及二者相互作用在RF中的研究进展进行综述。

长链非编码RNA-GAS5靶向miR-29下调铜转运蛋白CTR1抑制肾脏纤维化的机制研究

目的研究长链非编码RNA-生长阻滞特异转录物5(GAS5)对肾脏纤维化的作用及机制。方法收集临床肾穿刺患者的组织标本,用原位免疫荧光方法检测GAS5在组织上的定位和表达情况;构建小鼠单侧输尿管梗阻肾脏纤维化模型,用原位免疫荧光方法检测GAS5在肾组织上的定位以及表达情况;用转化生长因子-β(TGF-β)刺激肾小管上皮细胞后,用Real-time PCR方法检测GAS5的表达水平;在肾小管上皮细胞中转染GAS5过表达质粒后,用Western印迹法检测细胞外基质蛋白胶原蛋白3(Col3)、纤连蛋白1(FN1)、铜转运蛋白1(CTR1)和铜离子转运ATP酶α肽(ATP7a)的表达水平,用Real-time PCR方法检测miR-21、miR-29、CTR1和ATP7a的表达。在肾小管上皮细胞中过表达miR-29后,用Western印迹法检测CTR1的表达;在肾小管上皮细胞中过表达miR-21后,用Western印迹法检测ATP7a的表达。结果在不同肾脏纤维化模型中,GAS5均较对照组表达下调。在肾小管上皮细胞中,过表达GAS5抑制Col3和FN1的合成(P<0.05);过表达GAS5可上调miR-29的表达,并下调miR-21的表达(P<0.05)。miR-29在转录后水平抑制CTR1的蛋白表达(P<0.05),且过表达GAS5能够降低CTR1的蛋白表达(P<0.05);miR-21在转录后水平抑制ATP7a的蛋白表达(P<0.05),但过表达GAS5不影响ATP7a的表达。结论长链非编码RNA-GAS5通过上调miR-29,在转录后水平抑制铜转运蛋白CTR1,进而抑制肾脏纤维化。

肾病Ⅲ号方治疗慢性肾脏病大鼠肾脏纤维化的作用机制:基于网络药理学和分子对接技术

目的观察肾病Ⅲ号方对5/6肾切除大鼠肾功能、肾脏病理的改善作用及联合网络药理学和分子对接技术分析肾病Ⅲ号方抗慢性肾脏病肾脏纤维化的作用机制。方法SPF级雄性SD大鼠40只,从中随机选取10只作为假手术组,30只制作5/6肾切除模型,造模2周后测血清肌酐,并将造模组随机分为肾病Ⅲ号方组、氯沙坦组、模型组。肾病Ⅲ号方组予肾病Ⅲ号方灌胃,氯沙坦组予氯沙坦钾灌胃,模型组与假手术组予生理盐水灌胃,给药16周后测定血清肌酐、尿素氮,HE染色及免疫印迹法观察肾脏病理学改变和纤维化相关因子。网络药理学联合分子对接技术探索肾病Ⅲ号方抗慢性肾脏病肾脏纤维化的作用机制,免疫印迹法验证核心靶点表达。结果与模型组比较,肾病Ⅲ号方治疗后,5/6肾切除大鼠的血清肌酐、尿素氮降低(P<0.05),肾组织的病理损害减轻,且肾组织中上皮间充质转化相关蛋白经治疗后也得到相应改善。进一步通过网络药理学分析,发现肾病Ⅲ号方主要活性成分有金合欢素、芹菜素、异泽兰黄素、槲皮素、山奈酚、木樨草素等,关键靶点为STAT3、SRC、CTNNB1、PIK3R1、AKT1等。分子对接结果显示,肾病Ⅲ号方的活性成分与STAT3、SRC、CTNNB1、PIK3R1、AKT1靶点都有良好的结合活性。免疫印迹法验证发现肾病Ⅲ号方能恢复5/6肾切除大鼠肾组织中STAT3、PI3K、AKT的蛋白表达(P<0.05)。结论肾病Ⅲ号方能减轻5/6肾切除大鼠所致的肾脏损伤,其主要的药效成分可能通过调控STAT3、PIK3R1、AKT1等多靶点发挥抗慢性肾脏病肾脏纤维化的作用。

甲基转移酶3调控pri-miR-21甲基化修饰在糖尿病肾病肾脏纤维化中的作用

目的·探讨甲基转移酶3(methyltransferase like 3,METTL3)调控pri-miR-21的N^(6)-甲基腺苷(N^(6)-methyladenosine,m^(6)A)甲基化修饰在糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)小鼠肾脏纤维化发病机制中的作用。方法·采用8周龄雄性db/db小鼠作为DN模型小鼠,db/m小鼠作为对照,同时按照是否经尾静脉注射S-腺苷高半胱氨酸水解酶抑制剂3-脱氮腺苷(3-deazaadenosine,DAA),共随机分为4组(5只/组),分别为db/m组、db/db组、db/m+DAA组和db/db+DAA组;8周龄开始注射DAA,注射1次/5 d,共注射8次。DAA干预结束后继续饲养小鼠至19周龄,收取各组小鼠血、尿、肾脏组织标本。检测血糖、血肌酐、尿白蛋白肌酐比(albumin-to-creatinine ratio,ACR),肾脏行苏木精-伊红(H-E)染色、Masson染色及天狼星红染色观察病理变化;试剂盒检测肾脏总RNA中m^(6)A的甲基化水平;Western blotting检测肾脏METTL3及纤维化相关蛋白表达;实时定量PCR检测肾脏总pri-miR-21和成熟miR-21;使用免疫磁珠富集肾脏组织中m^(6)A甲基化RNA,并通过PCR检测其中m^(6)A甲基化的pri-miR-21。结果·相较于db/m组,db/db组小鼠血糖,血肌酐,ACR,肾脏METTL3、m^(6)A甲基化修饰水平、纤维化相关蛋白、总pri-miR-21、m^(6)A甲基化pri-miR-21和成熟miR-21表达水平均显著增加(均P<0.05),小鼠肾脏系膜基质增多、肾小球基底膜增厚、胶原纤维累积显著增加。相较于db/db组,db/db+DAA组血糖,血肌酐,ACR,肾脏m^(6)A甲基化修饰水平、纤维化相关蛋白、m^(6)A甲基化pri-miR-21和成熟miR-21表达水平均显著下降(均P<0.05),总pri-miR-21表达水平显著升高(P=0.000),METTL3蛋白表达水平未见显著变化,小鼠肾脏损伤及纤维化程度显著减轻。结论·pri-miR-21的m^(6)A甲基化修饰促进miR-21成熟,进而促进DN小鼠肾脏纤维化的发生发展;抑制METTL3可通过调控pri-miR-21的m^(6)A甲基化修饰抑制DN小鼠肾脏纤维化。

血清人附睾蛋白4及β_(2)微球蛋白在肾脏纤维化中的作用分析

目的 探讨血清人附睾蛋白4(HE4)及β_(2)微球蛋白(β_(2)-MG)在慢性肾衰竭患者肾纤维化进程中的作用。方法选取2020年1月至2021年8月我院收治的慢性肾衰竭患者210例为观察组,按照临床诊断将患者分为慢性肾衰竭3期组70例、慢性肾衰竭4期组70例、慢性肾衰竭5期组70例,并选取同期于我院进行体检的健康体检者70例为对照组。血清HE4利用罗氏e601电化学发光法检测;血清β_(2)微球蛋白利用日立7600免疫比浊法检测。比较四组研究对象的HE4、β_(2)-MG水平。结果 观察组的HE4、β_(2)-MG表达水平显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。慢性肾衰竭各组间血清HE4及β_(2)-MG水平表达比较,差异有统计学意义(P<0.05)。血清HE4与β_(2)-MG的表达在慢性肾衰竭患者肾纤维化进程中呈正相关(P<0.05)。结论 HE4及β_(2)-MG在慢性肾衰竭患者血清中表达明显升高,且随着慢性肾衰竭进展而逐渐上升。用HE4及β_(2)-MG辅助诊断慢性肾脏病进程和肾脏纤维化发生和发展有重要意义,可作为肾纤维化诊断早期的预测指标,可在临床中推广应用。

老年糖尿病肾病Ⅳ期患者经补肾活血法治疗后肾脏纤维化指标及Nrf2变化

目的探讨老年糖尿病肾病Ⅳ期患者经补肾活血法治疗后肾脏纤维化指标及核因子E2相关因子(Nrf2)变化情况。方法110例老年糖尿病肾病Ⅳ期患者随机分为治疗组和对照组,每组55例。对照组给予口服氯沙坦钾片在内的糖尿病肾病基础治疗,观察组在此基础上加用补肾活血法加减治疗。检测两组治疗前后血糖、肾功能指标、肾脏纤维化指标;分离外周血单个核细胞,RT-PCR和Western印迹检测Nrf2、血红素氧合酶(HO)-1、醌氧化还原酶(NQO)1 mRNA和蛋白表达水平;观察治疗期间恶心呕吐、口干、腹泻的发生情况,治疗后评估疗效。结果治疗后两组空腹血糖(FBG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、血肌酐(Scr)、尿白蛋白肌酐比值(UACR)、24 h尿蛋白定量(UTP)水平明显低于治疗前,肾小球滤过率(eGFR)水平明显高于治疗前(P<0.05);且观察组FBG、HbA1c、Scr、UACR、24 h UTP水平明显低于对照组,eGFR水平明显高于对照组(P<0.05)。治疗后两组转化生长因子(TGF)-β、血清胱抑素(Cys)C、透明质酸(HA)水平明显低于治疗前(P<0.01);且观察组明显低于对照组(P<0.05)。观察组治疗总有效率明显高于对照组(P<0.01)。两组总不良反应发生率差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后两组外周血单个核细胞中Nrf2、HO-1、NQO1 mRNA和蛋白表达水平明显高于治疗前(P<0.01);且观察组明显高于对照组(P<0.05)。结论糖尿病肾病基础治疗联合补肾活血法加减能够明显提高老年糖尿病肾病Ⅳ期患者的临床疗效,改善肾功能,其作用机制可能与抑制肾脏纤维化和激活Nrf2信号通路有关。

糖通饮对糖尿病肾病大鼠肾脏纤维化的延缓作用

目的探讨糖通饮延缓糖尿病肾病大鼠肾脏纤维化的作用机制。方法随机抽取10只大鼠为正常组,其余50只采用高脂高糖饮食联合STZ多次注射进行糖尿病肾病造模,造模成功后随机分为模型组,厄贝沙坦组,糖通饮低、中、高剂量组,每组10只。各组大鼠给予对应药物干预8周后,代谢笼收集大鼠24 h尿液,股动脉取血,处死大鼠并取双侧肾组织。检测各组大鼠肾脏肥大指数、空腹血糖、24 h尿微量白蛋白、血尿素氮、血肌酐;HE、Masson染色观察各组大鼠肾组织形态学变化;RT-qPCR法检测miRNA-21、TGF-β_(1)、Col-Ⅲ、FN mRNA表达;Western blot法及免疫组化染色法检测肾组织TGF-β_(1)、Col-Ⅲ、FN蛋白表达。结果与模型组比较,糖通饮各剂量组大鼠肾脏肥大指数、空腹血糖、24 h尿微量白蛋白、血尿素氮、血肌酐水平降低(P<0.05),糖通饮中、高剂量组改善效果优于糖通饮低剂量组(P<0.05);光镜下厄贝沙坦组与糖通饮各剂量组大鼠肾组织病理形态得到不同程度改善;糖通饮中、高剂量组与厄贝沙坦组miRNA-21表达及TGF-β_(1)、Col-Ⅲ、FN mRNA和蛋白表达降低(P<0.05)。结论糖通饮能够延缓糖尿病肾病大鼠肾脏纤维化,其机制可能是通过对miRNA-21、TGF-β_(1)调控产生的。