肿瘤坏死因子β基因多态性在中国汉族SLE病人中的分布特点及与不同人种的比较研究

目的 :探讨中国江苏地区汉族人群TNFβ基因多态性在SLE病人中分布特点 ,并与不同人种进行比较研究。 方法 :收集江苏地区 16 8名无血缘关系健康个体及 6 6例SLE病人的静脉血提取DNA ,应用聚合酶链反应限制性片段长度多态性(PCR RFLP) ,分析TNFβ基因的多态性。 结果 :中国汉族SLE病人与白种SLE病人TNFβ基因频率差异无统计学意义 ;中国汉族健康个体TNFβ 1等位基因频率明显高于白种健康个体 ;SLE病人TNFβ 2基因频率较正常人明显升高 (SLE病人 6 7 4% ,正常人 5 5 1% ,P <0 0 5 ,R =1 6 8) ;中国汉族SLE病人与白种SLE病人TNFβ基因频率差异无统计学意义。 结论 :TNFβ等位基因频率在正常人分布具有种族差异 ,但在SLE病人分布无种族差异。

肿瘤坏死因子β NcoI位点多态性与胃癌易感性

目的探讨江苏省南京市汉族人群肿瘤坏死因子β(TNF-β)等位基因多态性与癌易感性的关系,并分析与环境危险因素的交互作用。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术对294例胃癌患者及对照进行(TNF-β)基因的单核苷酸多态性(SNP)检测,分析TNF-β基因多态性与胃癌易感性的关系。结合环境危险因素分析,了解TNF-β基因多态性与环境危险因素在胃癌发生中的交互作用。结果TNF-βG/A杂合子是胃癌的危险因素,其在病例组与对照组中的频率分别为50.0%与44.2%,OR=1.6615,95%CI=1.0777～2.5617,P=0.0210),TNF-βA/A出现的频率在胃癌组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),未发现与环境因素存在交互作用。结论TNF-βG/A杂合子与胃癌的易感性有关。

肿瘤坏死因子β*2等位基因与狼疮性肾炎的相关性分析

目的:进一步探讨肿瘤坏死因子β(TNFβ)基因在系统性红斑狼疮(SLE)发病中的作用。方法:采用聚合酶链反应和限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)基因分型方法,检测98例SLE患者TNFβ等位基因,分析了TNFβ等位基因与SLE患者某些临床指标的相关性。结果:携带TNFβ2等位基因的SLE患者的肾炎发生率显著高于未携带TNFβ2等位基因的SLE患者(P<0.05)。结论:TNFβ2等位基因可能与狼疮性肾炎的发病相关。

肿瘤坏死因子β1069位点基因多态性与胃癌易感性的相关性研究

目的:探讨江苏汉族人群肿瘤坏死因子β(tumor necrosis fac- tor β,TNFβ)1069位点等位基因多态性与胃癌的关系. 方法:采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法对168名健康人和45例胃癌患者TNFβ基因的单碱基突变多态性进行了分析. 结果:胃癌患者的TNFβ★1/2等位基因频率(66.7%)较正常人(47.0%)明显升高(P=0.019<0.05). 结论:TNFβ★1/2等位基因频率与胃癌易患性相关.

中国多发性硬化患者肿瘤坏死因子β基因多态性的Meta分析

目的探讨肿瘤坏死因子β（TNF—β）基因多态性与中国多发性硬化（MS）患者遗传易感性能关系。方法通过PubMed、Elseiver、Ovid、中国期刊全文数据库（CNKI）和万方数据库，检索有关TNF—β基因多态性与中国MS患者的病例对照研究文献，并采用RVEMAN4．3统计软件对其结果进行分析。结果共纳入5篇以中国人群为研究对象的MS病例对照研究文献。各研究的基因型和等位基因频数结果未见明显发表偏倚。5项研究合并后，GG／（GA＋AA）、AA／（GG＋GA）和GA／（GG4-AA）合并的OR值分别为1．63（95％CI为0．78～3．43）、0．85（95％CI为0．41～1．76）和0．81（95％CI为0．60～1．10）。等位基因频数G／A的OR=1．21（95％CI为0．74～1．99，P=0．45）。结论TNF-β基因多态性与中国Ms患者的遗传易感性无相关性。

肿瘤坏死因子β基因A80C多态与原发性高血压

目的:研究肿瘤坏死因子β(tumor necrosis factor-β,TNF-β)基因外显子1中的A80C多态与汉族人群原发性高血压的相关性。方法:采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)检测方法,在122例原发性高血压患者和202名健康对照者中,对TNF-β基因外显子1的A80C多态进行基因分型。结果:A80C多态的基因型分布及其等位基因频率在2组间相比均无显著性差异(P>0.05)。但在女性高血压患者中,其CC、CA和AA基因型分布与对照组相比有明显差异(P<0.05),女性CC基因型高血压的发病危险是A等位基因携带者的2.27倍[95%可信区间(CI):1.111～4.656],其等位基因频率在2亚组间相比则无显著性差异(P>0.05)。女性CC基因型高血压患者的血清总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇浓度亦明显升高(P<0.01)。结论:TNF-β基因外显子1的A80C多态可能与女性原发性高血压的发生相关,尤其是携带CC基因型的女性。

肿瘤坏死因子β基因多态性与西方型、亚洲型多发性硬化的相关性

目的:研究肿瘤坏死因子β(TNFβ)基因多态性与西方型、亚洲型多发性硬化(MS)的相关性。方法:采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术对22例西方型MS患者、36例亚洲型MS患者和79名健康人进行TNFβ基因多态性分析。对两型MS组患者分别进行神经功能缺损程度的扩展病残状态(EDSS)评分、首发年龄、病程、发病次数等临床资料收集。结果:①亚洲型MS组TNFβ1等位基因频率为51.39%,较健康人(27.85%)明显升高(P<0.01)。②西方型MS组与亚洲型MS组基因型为TNFβ1/1、TNFβ1/2、TNFβ2/2的EDSS评分组间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。③两亚型在EDSS评分、首发年龄、性别、病程、发病次数诸方面均无统计学意义。结论:TNFβ1等位基因与亚洲型MS的易患性有关。TNFβ基因多态性与EDSS评分无明显相关性。

湖北地区老年冠心病患者肿瘤坏死因子β基因的多态性

为探讨湖北地区老年冠心病患者肿瘤坏死因子 β 80 4C A多态性分布、肿瘤坏死因子 β血清水平与冠心病的相关性 ,应用套式聚合酶链反应结合等位基因特异性聚合酶链反应 ,对 2 90例老年冠心病患者和 2 39例健康对照者的肿瘤坏死因子 β 80 4C A进行基因分型 ,用酶联免疫吸附法测定其血清水平。结果发现 ,CC、CA和AA型基因在冠心病组频率分别为 2 5 .9%、4 9.3%和 2 4 .8% ,在对照组分别为 37.2 %、4 5 .6 %和 17.2 % ,老年冠心病患者中的AA基因型显著高于对照组 (P <0 .0 5 )。基因型频率的相对风险分析发现 ,AA型和CA型患者冠心病的风险是CC型的 1.70 1倍 (OR =1.70 1,95 %CI为 1.173～ 2 .4 6 6 )。冠心病组肿瘤坏死因子 β血清水平 (47± 2 2ng L)明显高于对照组 (13± 11ng L) (P <0 .0 5 ) ,两组中AA基因型者肿瘤坏死因子 β血清水平均略高于CC型和CA型者 ,但差异无显著性 (P >0 .0 5 )。以上提示 ,肿瘤坏死因子 β 80 4C A基因多态性与冠心病的发病有相关性 ,80 4A等位基因可能是冠心病发生的重要易感基因。

肿瘤坏死因子β水平与多发性硬化临床表现的相关性

目的探讨肿瘤坏死因子（TNF）β水平与多发性硬化（MS）临床表现的相关性。方法应用双抗体夹心酶联免疫法测定58例MS患者（MS组）血清TNFβ水平;并与患者不同亚型、病期、神经功能缺损程度的扩展病残状态评分（EDSS）、病程、发病次数、发病年龄等临床情况进行相关性分析。结果（1）MS组急性期TNFβ水平较缓解期和正常对照组显著升高（P〈0.05-0.01）;MS缓解期与正常对照组间差异无统计学意义。（2）MS西方型急性期TNFβ水平较缓解期显著升高（P〈0.01）;MS亚洲型急性期与缓解期差异无统计学意义。（3）两亚型急性期、缓解期TNFβ水平与其EDSS、病程、发病次数及发病年龄均无相关性。结论（1）TNFβ水平与MS急性期存在相关,MS西方型急性期、缓解期变化更显著。（2）TNFβ水平与EDSS、病程、发病次数及发病年龄可能不相关。

聚合酶链反应-限制性片段长度多态性检测肿瘤坏死因子β基因多态性

目的 建立聚合酶链反应限制性片段长度多态性(PCR—RFLP)检测肿瘤坏死因β(TNFβ)多态性的方法。方法 采用PCR方法扩增TNFβ第一外显子到第二外显子包含G→A突变在内的DNA片段,扩增产物用限制性内切酶Nco I酶切后电泳,分析TNFβ的基因型。结果 TNFβ检测到3种基因型,分别为TNFβ*1/1、TNFβ*1/2和TNFβ*2/2。结论PCR—RFLP检测肿瘤坏死因子β多态性方法快速、简便、准确、可靠,适合普通实验室开展及大规模研究。

肿瘤坏死因子β1069位点等位基因多态性与创伤后严重脓毒血症的关系研究

目的 为了探讨江苏汉族人群中肿瘤坏死因子β(TNFβ)等位基因多态性与创伤后严重脓毒血症的关系。方法 采用聚合酶链反应一限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法对58例创伤后并发严重脓毒血症病人TNFβ基因的单碱基突变多态性进行分析。结果 创伤后并发严重脓毒血症病人的TNFβ*2基因频率较正常人明显升高(创伤后严重脓毒血症病人68.9％,正常人55.1％,P=0.015,RR=1.73)。结论 TNFβ*2基因频率与创伤后严重脓毒血症易患性相关。

人肿瘤坏死因子β(hTNFβ)在变铅青链霉菌中的表达研究(英文)

以变铅青链霉菌为宿主研究了人TNFβ(hTNFβ)的异源表达。应用链霉菌S .venezuelaeCBS76 2 70分泌产生的枯草杆菌蛋白酶抑制剂vsi基因的启动子、表达调控序列和分泌信号肽序列 ,分别对hTNFβ进行了直接分泌表达、分泌融合表达和胞内表达。将hTNFβ的cDNA分别直接融合于vsi信号肽序列下游 2个氨基酸处、vsi全长基因之后以及vsi起始密码子ATG的下游 ,获得的表达盒分别克隆至链霉菌高拷贝质粒pIJ486 ,转化StreptomyceslividansTK2 4,获得了重组菌株S .lividans(pIJ486 hTNFβ)、S .lividans(pIJ486 vsi hTNFβ)和S .lividans(pIVPA hTNFβ)。分别对不同的重组菌株进行摇瓶培养 ,对其培养的上清液和细胞裂解液进行SDS PAGE和Western杂交 ,结果表明 :hTNFβ在重组菌株中均获得了表达 ,且直接分泌产物和胞内表达产物均具有生物学活性。hTNFβ直接分泌表达产物的分子量约为 16kDa,NB培养基中培养 48h时表达水平约为 0 7mg L。胞内表达产物分子量与对照重组hTNFβ一致(18 7kDa) ,但随培养时间的延长逐步降解为 16kDa ,NB培养基中培养 48h时的表达水平 (2 5 1mg L)远高于其直接分泌表达水平。

中国江苏地区汉族人群肿瘤坏死因子β遗传多态性研究

目的 探讨中国江苏地区汉族人群肿瘤坏死因子 β遗传多态性分布。方法 收集江苏地区 16 8名无血缘关系健康个体的静脉血提取DNA ,应用聚合酶链反应限制性片段长度多态性 (PCR -RFLP) ,对TNFβ基因多态性进行分析。结果 TNFβ检测到三个等位基因 ,其基因型频率分别为TNFβ 1/ 1=2 1 4 % ,TNFβ 1/ 2 =4 7% ,TNFβ 2 / 2 =31 5 % ,基因型分布符合Hardy-Weinberg定律。统计分析显示 :江苏地区汉族人群TNFβ等位基因频率分布与欧美白种人均有显著性差异(P <0 0 5 )。

IgA肾病与肿瘤坏死因子β基因多态性的关联性研究

目的 探讨江苏汉族人群肿瘤坏死因子 β( tumor necrosis factorβ,TNFβ) 1 0 69位点等位基因多态性与 Ig A肾病的关系。方法 采用聚合酶链反应—限制性片段长度多态性方法对 84名健康人和 45例Ig A肾病患者 TNFβ基因的单碱基突变多态性进行了分析。结果 Ig A肾病患者的 TNFβ* 2等位基因频率 ( 67.4% )较正常人 ( 5 5 .1 % )明显升高 ( P=0 .0 1 5 ,RR=1 .68)。结论 TNFβ* 2等位基因频率与 Ig

靶向肿瘤坏死因子β小分子抑制剂的筛选及其功能鉴定

目的 通过计算机虚拟筛选和细胞活性筛选,获得能靶向抑制肿瘤坏死因子β（TNFβ）的细胞毒活性的小分子抑制剂。方法 根据TNFβ与肿瘤坏死因子Ⅰ型受体（TNFR1）结合的复合晶体结构,采用计算机虚拟筛选方法初步选择对接结果较好的105个小分子化合物（C1~C105）,并对其进行细胞活性筛选;MTT法检测小分子化合物抑制TNFβ对L929细胞的细胞毒性;流式细胞术测定小分子化合物对TNFβ引起的细胞凋亡的抑制作用;采用碘化丙啶（PI）单染和流式分析技术检测小分子化合物对L929细胞周期的影响;采用Western blot和双转盘激光共聚焦显微镜分析小分子化合物对TNFβ引起的下游Caspase 3活化的抑制作用。结果 C35能有效抑制TNFβ引起的细胞毒作用,且这种抑制作用呈现剂量依赖性（半数抑制浓度=8.19μmol/L）;C35具有较低的细胞毒性,且对L929细胞周期无影响;C35能阻断TNFβ与其受体结合后引起的细胞凋亡通路,显著抑制TNFβ引起的L929细胞凋亡。结论 成功筛选到一个TNFβ小分子抑制剂C35,其能阻断TNFβ引起的细胞凋亡通路,高效抑制TNFβ的细胞毒活性。

肿瘤坏死因子β基因多态性与多发性硬化的相关性研究

目的研究肿瘤坏死因子β(tumor necrosis factor β,TNFβ)基因多态性与多发性硬化(multiple sclero-sis,MS)的相关性。方法①采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术对58例MS患者和79名健康人进行TNFβ基因多态性分析。②对MS组患者分别进行临床EDSS评分等临床资料收集。结果①MS组TNFβ1等位基因频率(45·69%)较健康人(27·85%)明显升高(P<0·05);②基因型为TNFβ1/1、TNFβ1/2、TNFβ2/2的MS组患者EDSS评分、首次发病年龄、病程及发病次数各组间比较差异均无统计学意义(P>0·05)。结论TNFβ1等位基因多态性与MS的易患性有关,与EDSS评分、首次发病年龄、病程及发病次数无显著相关性。

肿瘤坏死因子β及其基因多态性与吉兰-巴雷综合征的相关性研究

目的研究肿瘤坏死因子β(TNFβ)水平及其基因多态性与吉兰-巴雷综合征(GBS)的相关性。方法①应用双抗体夹心酶联免疫(ELISA)方法测定48例GBS急性期患者和58名健康人血清TNFβ水平。②采用聚合酶链-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法进行TNFβ基因多态性分析。结果①GBS组TNFβ水平为(223.12±36.23)pg/mL较健康对照组(152.24±23.66)pg/mL明显升高,P<0.05。重型组TNFβ水平为(241.98±43.37)pg/mL较轻型组(208.44±20.37)pg/mL明显升高。②GBS组TNFβ1等位基因频率为39.58%,明显高于健康对照组基因频率(25.86%),P<0.05。③基因型为TNFβ1/1和TNFβ1/2的GBS患者TNFβ水平分别为(292.27±25.25)pg/mL和(220.93±14.09)pg/mL,都比基因型为TNFβ2/2的患者TNFβ水平高(195.06±5.56)pg/mL,P<0.05。结论TNFβ1等位基因与GBS的易感性相关。TNFβ基因多态性可能通过调节TNFβ的分泌,从而影响不同个体对GBS的易感性和免疫应答的过程。

肿瘤坏死因子β基因多态性与吉兰-巴雷综合征不同亚型的关联研究

目的：研究肿瘤坏死因子βTNFβ基因多态性与吉兰-巴雷综合征（ GBS ）的两种主要亚型-急性炎症性脱髓鞘性多发性神经病（AIDP）和急性运动性轴索型神经病（AMAN）的易感性和预后的关系。方法对我院在2008至2011年收治的吉兰-巴雷综合征患者进行电生理标准分型，在疾病高峰期和发病1年后随访时进行Hughes神经功能评分；采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性（ PCR-RFLP ）技术对41例AIDP患者、52例AMAN患者和98名健康人进行TNFβ基因多态性分析。结果 AIDP组TNFβ基因型分布与对照组没有差别，TNFβG等位基因频率明显高于对照组（37．8％，25％）；AMAN组TNFβ基因型分布与对照组相比有差别，TNFβG等位基因频率明显高于对照组（40．4％，25％），P＜0．05；GBS重症型患者（Hughes评分4～6分）TNFβG等位基因频率明显高于对照组（40．6％，25％），P＜0．05。 GBS预后较差患者（Hughes评分＞2分）TNFβG等位基因频率明显高于对照组（47．5％，25％），P＜0．05。结论 TNFβG等位基因与GBS两种亚型的易患性有关，携带有TNFβG等位基因患者更倾向有较严重的疾病病程且预后较差。

抗人重组肿瘤坏死因子β(rHTNF-β)单克隆抗体的研制及鉴定

肿瘤坏死因子β(TNF-β)是细胞毒性蛋白,与肿瘤坏死因子α(TNF-α)具有相似的生物学功能。为了进一步研究TNF-β的结构和功能,探讨TNF-β同TNF-α在生物学功能方面的相互关联,并且为纯化应用于临床的rHTNF-β提供技术手段。本实验应用脾内免疫杂交瘤技术制备了一株抗rHTNF-β单克隆抗体B5。Western blotting结果表明,B5特异地识别分子量为22kDa的TNF-β。B5和rHIL-1、rHIL-2、rHIL-6、rHIFN-γ、rHIFN-α、GM-CSF及E.Coli菌裂解液无交叉反应,B5培养上清与rHTNF-α有弱交叉,腹水在高浓度时有交叉反应。B5具有中和rHTNF-β细胞毒能力,亚类测定为小鼠IgG_1。

肿瘤坏死因子β基因多态性与膀胱移行细胞癌的相关性研究

目的:探讨肿瘤坏死因子β(tumor necrosis factor,TNF-β)基因多态性与膀胱移行细胞癌易感性的关系。方法:采用聚合酶链反应—限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术对膀胱移行细胞癌患者75例及正常对照52例的TNF-β基因的单碱基突变多态性进行分析。结果:膀胱移行细胞癌患者的TNF-β*2等位频率(40.7%)较正常人(24.0%)明显升高,存在显著性差异(P<0.05)。结论:TNF-β*2等位基因的频率升高与膀胱移行细胞癌的易患性有着一定的关系。