膀胱肿瘤抗原、尿核基质蛋白22、细胞角蛋白-19对膀胱癌的诊断价值分析

目的分析膀胱肿瘤抗原(BTA)、尿核基质蛋白22(NMP22)、细胞角蛋白-19(CK-19)对膀胱癌的诊断价值。方法选取53例膀胱癌患者作为膀胱癌组,49例泌尿系良性疾病患者作为对照组。比较两组患者CK-19、NMP22及BTA水平,分析三者水平与膀胱癌患者临床特征的关系,分析CK-19、NMP22及BTA单独及联合检测对膀胱癌的诊断价值。结果膀胱癌组患者尿液NMP22、BTA及血清CK-19水平均明显高于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。肿瘤分期为Ⅲ~Ⅳ期的膀胱癌患者尿液NMP22、BTA及血清CK-19水平均明显高于Ⅰ~Ⅱ期患者,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。CK-19、NMP22及BTA联合检测诊断膀胱癌的灵敏度和特异度分别为0.805和0.869,曲线下面积(AUC)为0.854(95%CI:0.774~0.934),均高于CK-19、NMP22及BTA单独检测。结论膀胱癌患者CK-19、NMP22及BTA水平显著升高,三者水平升高与肿瘤分期相关,密切监测三者水平变化可为临床诊断膀胱癌提供依据。

肿瘤抗原肽的HLA限制性确认和诱导反应性T细胞杀瘤能力评估

目的了解肿瘤抗原肽的HLA限制性以及其诱导的T细胞能否杀伤肿瘤细胞,探索无关供者来源细胞用于过继性抗肿瘤T细胞治疗。方法使用16个肿瘤抗原肽诱导18名无关供者外周血单个核细胞(PBMC)分化为反应性T细胞,并分析HLA型别;利用NetMHC数据库预测肽和HLA分子亲和力;选择HLA-A2限制性的肿瘤抗原肽诱导第二组17名无关供者的PBMC进行杀瘤实验,反应性T细胞作为效应细胞,T2细胞及肿瘤抗原肽同源的肿瘤细胞作为靶细胞,测量LDH(乳酸脱氢酶)释放量或者RTCA(实时无标记细胞分析仪)检测效应细胞杀瘤效率,比较HLA-A2+和A2-T细胞杀瘤效率。结果筛出和HLA-A2具有高亲和力的肿瘤抗原肽LM7,可诱导5/11 HLA-A2+为反应性T细胞,其中HLA-A2+纯合子则为3/3,而HLA-A2-者则为2/7。LM7诱导反应性T细胞杀伤肿瘤百分比A2+组明显强于A2-组(60.72±11.28 vs 47.2±4.46,P=0.03)。结论本研究显示NetMHC预测对于纯合子样品更有帮助,肿瘤抗原肽LM7具有HLA-A2限制性,可诱导部分HLAA2+PBMC分化为反应性T细胞,可杀伤肿瘤,应对供者进行HLA筛选并分析其细胞功能,其诱导的反应性T细胞可作为过继性T细胞抗肿瘤治疗的细胞来源。

转移性肿瘤抗原1与乳腺癌发生和转移的关系及其机制的研究进展

肿瘤转移相关基因家族是近年发现的由某些肿瘤转移相关基因及其编码产物组成的家族,而作为该家族中首个被发现的基因,转移性肿瘤抗原1(metastatic tumor antigen 1,MTA1)基因在多种恶性肿瘤中过度表达,并且与人类肿瘤的恶性特征密切相关。MTA1基因在乳腺的激素调控和乳腺癌的发生、发展中都起到了重要的作用,因此MTA1基因及其编码蛋白的检测可能成为乳腺癌新的临床预后指标和治疗靶点。

一种新的组学技术-肿瘤抗原组学

肿瘤相关抗原(tumor-associated antigens,TAA)的筛选是实现肿瘤早期诊断及生物治疗的基础与瓶颈。现有技术(SEREX、SERPA、蛋白芯片等)虽在TAA筛选中取得了一系列重要成果,但并不能满足有效筛选TAA的需要。因此,建立新的筛选策略和技术平台成为筛选TAA的重要挑战。近来,为快速筛选病原体全部抗原,一种被称为抗原组(antigenome)的新型组学技术被建立起来,多种细菌的抗原组已被确定。本研究组在抗原组、肿瘤免疫组学以及其它组学研究成果的基础上,尝试提出肿瘤抗原组(Cancer antigenome)与肿瘤抗原组学(Cancer antigenomics)的概念。认为:肿瘤抗原组是指肿瘤细胞内全部抗原(蛋白类抗原和非蛋白类抗原)的总合;肿瘤抗原组学是主要利用免疫学、抗原表位组学、抗体组学及多系统组学相关高通量技术有效筛选肿瘤相关抗原的一门新兴学科。该技术将候选抗原的免疫学筛选作为TAA筛选的首要条件,显著提高了病原体抗原的筛选效率和特异性。肿瘤抗原组学的技术方案是:采用异种疫苗免疫技术,先将包含全部肿瘤抗原的肿瘤组织裂解物作为疫苗免疫动物,制备特异性抗体,再通过免疫分离、鉴定技术(免疫亲和层析、免疫沉淀技术、质谱技术)分离、鉴定TAA。显然,肿瘤抗原组学的提出为TAA的筛选提供了新的技术方法,对于筛选、确定肝癌早期生物诊断和生物免疫治疗靶标具有一定意义。

黑色素肿瘤抗原基因-1、3在直肠癌肝转移组织的表达

目的探索黑色素肿瘤抗原基因-1、-3(MAGE-1、MAGE-3)在直肠癌肝转移组织中的表达与直肠癌肝转移的相关性。方法采用RT-PCR法,对30例直肠癌肝转移患者的癌组织和30例直肠癌非肝转移患者的癌组织的MAGE-1、MAGE-3的表达情况进行检测,并对RT-PCR扩增产物中的目的基因片段进行DNA测序验证。结果 30例直肠癌肝转移患者癌组织中,MAGE-1基因的表达阳性率为46.67%,MAGE-3基因的表达阳性率为56.67%,MAGE-1、MAGE-3都表达的阳性率为36.67%,至少表达其中一种的阳性率为66.67%;30例直肠癌非肝转移患者癌组织中,MAGE-1基因的表达阳性率为26.67%,MAGE-3基因的表达阳性率为40.00%,MAGE-1、MAGE-3都表达的阳性率为23.33%,至少表达其中一种的阳性率为43.33%。直肠癌肝转移患者癌组织中MAGE-1、MAGE-3基因表达阳性率均显著高于直肠癌非肝转移患者癌组织(P<0.05)。结论 MAGE-1,MAGE-3有望作为一种新的指标用于直肠癌的转移和预后监测。

CD4^+T细胞识别的肿瘤抗原的研究进展

在以往的肿瘤免疫研究中 ,人们往往关注肿瘤特异性CD8+ T细胞的抗肿瘤效应 ,并由此鉴定出许多CD8+ T细胞识别的肿瘤抗原。随着研究的深入 ,CD4 + T细胞在抗肿瘤免疫中的作用逐渐为人们所关注。联合应用MHCⅠ类和MHCⅡ类限制性抗原的肿瘤疫苗将有可能取得更好的抗肿瘤效果。本文就近年来鉴定的CD4 + T细胞识别的肿瘤特异性抗原进行了综述。

肿瘤抗原MAGE-12的表位及二级结构预测

目的预测肿瘤抗原 MAGE- 12的α-螺旋二级结构、B细胞表位和 MAGE- 12的 HL A- A2限制性 CTL表位。方法用 Garnier- Robson和 Chou- Fasman方案预测肿瘤抗原 MAGE- 12的α-螺旋二级结构 ;用 Kyte- Doolittle亲水方案预测肿瘤抗原 MAGE- 12的 B细胞表位 ;用简单基序 ( simple motifs)和延展基序 ( extended m otifs)对肿瘤抗原 MAGE- 12的 HL A-A2限制性 CTL 表位进行预测。结果 MAGE- 12可能含有较多的 α-螺旋 ;B细胞识别的表位可能在 82～ 93残基 ( QSDEGSS-NEEQE)或附近和 3～ 14残基 ( L EQRSQHCKPEE)或附近 ;发现 1个 HL A- A2限制性 CTL 表位为 FL WGPRAL V( 2 71～2 79)。结论用亲水性方案和基序法预测肿瘤抗原 MAGE- 12的 B细胞表位和 MAGE- 12的 HL A- A2限制性 CTL 表位 ,为实验方法探索 MAGE- 12的表位提供有用线索。

从卵巢癌cDNA表达文库筛选肿瘤抗原基因的研究

目的利用肿瘤患者自体血清筛选患者肿瘤cDNA表达文库SEREX,寻找肿瘤特异性抗原是肿瘤免疫学研究的新策略,由此方法所获B细胞抗原肽可为进一步寻找T细胞抗原肽,开展肿瘤免疫治疗和诊断提供线索。方法采用SEREX方法,筛选中国人卵巢癌cDNA表达文库。对获得的阳性克隆片段测序鉴定和进行BLAST同源性比较。采用RTPCR,分析正常组织和肿瘤组织及肿瘤细胞株中6个新的EST片段的表达。结果所获基因片段大多数为已知抗原基因20/27。根据其来源又可归类为结构基因、线粒体基因和调控基因。另外,获得6个未知的EST片段。RTPCR的结果表明,4个ESTEST8788、1750、1754和3533片段在肿瘤和正常组织中均有表达,2个EST在正常组织中未见表达,而在肿瘤组织中有表达,可能是与肿瘤相关或特异的EST片段。结论SEREX方法不失为一种有效筛选卵巢癌肿瘤抗原的新方法,所获肿瘤抗原候选基因,可进一步进行结构和功能的研究。

SEREX技术筛选及鉴定食管癌肿瘤抗原

背景与目的:正常细胞向癌细胞转化过程中,突变的基因或各种异常表达的蛋白可以成为肿瘤抗原诱导机体的免疫反应,因此肿瘤患者的血清中存在着与肿瘤相关的自身抗体。重组cDNA表达文库血清学分析法(serologicalanalysisofrecombinantcDNAexpressionlibraries,SEREX)是利用肿瘤患者血清中的自身抗体筛选、鉴定肿瘤抗原的技术。本研究拟采用SEREX的方法寻找食管癌自身抗体的相关肿瘤抗原,鉴定与食管癌发生、发展相关的基因和免疫治疗分子靶点,并为食管癌的诊断提供候选血清标志物。方法:用食管癌组织建立库容量达1.6×106pfu的cDNA表达文库,SEREX筛选获得21个不同cDNA序列的阳性克隆,进一步使用SADA法分析其中4个抗原在10例食管癌及10例正常人血清中的反应。结果:在Homosapiensdesmin(DES)等21个阳性克隆中,4个克隆与已知EST序列明显无同源性,另外17个克隆与已知基因高度同源。RibosomalproteinS4等4个抗原与食管癌患者和正常人血清反应阳性率分别为40%和0%、60%和10%、70%和20%、30%和20%。结论:RibosomalproteinS4等4个抗原普遍参与了食管癌患者的体液免疫反应,与食管癌患者血清的反应阳性率明显高于正常人的血清。本研究发现的21个食管癌抗原可作为食管癌治疗的潜在分子靶点和食管癌诊断新的候选血清学标志物。

IL-18基因增强肿瘤抗原致敏DC诱导的CTL特异性杀伤肝癌细胞

目的:探讨腺病毒介导的白细胞介素-18(IL-18)基因转染能否使肿瘤抗原冲击的树突状细胞(dentritic cell,DC)在体外诱导出更强的抗肝癌免疫反应。方法:携IL-18的重组腺病毒载体感染经肝癌细胞株HepG2冻融抗原致敏的DC(AdIL-18-HepG2/DC),FACS分析AdIL-18-HepG2/DC表面分子的表达,ELISA法检测IL-18的分泌水平,3H-TdR掺入法检测T淋巴细胞增殖能力,MTT法检测细胞毒性T淋巴细胞杀伤效应。结果:AdIL-18-HepG2/DC较未转染DC能高水平地表达CD1a、CD11c、CD80、CD86以及HLA-DR;较未经IL-18转染的DC分泌较高水平的IL-18。AdIL-18-HepG2/DC能非常有效地刺激自体T细胞增殖(CPM值为228 018±1 079),其刺激强度显著强于AdIL-18DC、HepG2/DC、AdlzcZ/DC及DC(均P<0.05)。当靶细胞为HepG2时,AdIL-18-HepG2/DC诱导的CTL杀伤活性显著高于其他各组(均P<0.05),并且其杀伤能力与效应细胞数量成正比。结论:IL-18基因转染且肝癌抗原致敏的DC可以显著增强DC的特异性抗肝癌效应。

应用血清蛋白组学技术筛选鼻咽癌肿瘤抗原

目的:应用血清蛋白组学技术优化肿瘤抗原筛选方法,筛选鼻咽癌肿瘤抗原。方法:以免疫印迹技术筛选出含有特异性抗体的鼻咽癌患者血清,运用免疫沉淀技术对血清与鼻咽癌细胞株(CNE1)的裂解物进行处理以富集肿瘤抗原,正常人血清做对照,经凝胶电泳找出差异条带,通过质谱分析、数据库搜索和信息学分析鉴定差异蛋白。结果:应用此方法找出存在于鼻咽癌样本中的明显差异条带1条,重复性较好,经鉴定该条带为膜结合IgM。结论:采用上述方法筛选肿瘤抗原行之有效,可能成为肿瘤抗原筛选的一种简单、便捷、灵敏的有效方法,得到鼻咽癌候选抗原膜结合IgM。

肿瘤抗原MAGE2HLAA2限制性CTL表位的预测

目的 预测黑色素瘤抗原MAGE 2的HLA A2限制性CTL表位。方法 采用超基序法与量化基序法的联合应用。结果 发现 8个HLA A2限制性CTL表位。

尿膀胱肿瘤抗原在膀胱癌中的表达及意义

目的探讨膀胱肿瘤抗原(BTA)的临床应用价值。方法收集46例膀胱癌、35例泌尿系良性疾病、10例健康者尿液,同时做尿脱落细胞学及BTA检测。结果 (1)BTA检测的敏感性为86.9%,特异性为82.2%,假阳性率为17.8%(95%CI:0.759,0.924);尿脱落细胞学检测的敏感性为34.7%,特异性为97.8%,假阳性率为2.2%(95%CI:0.550,0.775);(2)BTA表达水平和敏感性与肿瘤分级分期、有无肉眼血尿有关(P<0.05),与复发或初发无关(P>0.05);BTA对各级、各期的膀胱癌的敏感性均高于尿脱落细胞学检测(P<0.05);(3)BTA在早期膀胱癌(Ta^T1期)中表达水平高于良性疾病组、健康组(P<0.05)。结论 BTA对膀胱癌的诊断、早期筛查及跟踪随访有较高的临床应用价值,但应注意血尿影响BTA检测结果。

肿瘤抗原MAGE-12的B细胞表位4分支多重抗原肽的合成及鉴定

目的 设计合成肿瘤抗原MAGE 12的B细胞表位抗原肽并对其进行鉴定。方法 在预测MAGE 12的B细胞表位序列为QSDEGSSNEEQE(82 -93 )的基础上 ,采用 4分支多重抗原肽结构合成抗原肽 ,免疫C 5 7BL 6小鼠 ,产生多克隆抗体 ,应用ELISA实验及免疫组化实验检测多克隆抗体是否为人的抗原肽的特异性抗体。结果 免疫C 5 7BL 6小鼠后可产生MAGE 12的抗原特异性的多克隆抗体 ,抗体滴度可达 1∶64。结论 证明所预测的表位为MAGE 12的B细胞表位。

肿瘤抗原MAGE-A3新的HLA-A2限制性CTL表位的发现与鉴定

目的:鉴定肿瘤抗原MAGE－A3新的HLA-A2限制性CTL表位。方法:采用CTL表位预测的基序法与二级锚点相结合预测 MAGE-A3的 HLA-A2限制性CTL表位;用计算机分子模拟进行表位的初步筛选;以标准51Cr释放试验检测特异性CTLs诱导活性。结果:在所筛选的4个候选CTL表位中,MAGE-A3201-209可在体外有效诱导特异性CTLs的产生,杀伤靶细胞。结论:MAGE-A3201-209为肿瘤抗原MAGE-A3的新的HLA-A2限制性CTL表位。为基于MAGE-A3的肿瘤治疗性多肽疫苗的设计、研究奠定了基础。

IL-18基因修饰增强肿瘤抗原多肽致敏的树突状细胞体内诱导的抗肿瘤免疫反应

目的 :研究肿瘤抗原多肽致敏的白细胞介素 18(IL 18)基因修饰的树突状细胞体内诱导的抗肿瘤免疫反应。方法 :①以Lewis 3LL肺癌细胞特异性抗原肽mut1冲击致敏IL 18基因修饰的骨髓来源的树突状细胞 (DC IL 18 mut1) ,每次用其 1× 10 5 只皮下免疫小鼠 2次 ,然后测定脾细胞的NK活性及CTL杀伤活性 ;②以DC IL 18 mut1每次 2× 10 5 只皮下免疫 1次 ,然后再以 5× 10 53LL细胞攻击 ,在诱导及效应阶段分别以单抗阻断不同免疫成份 ,观察肿瘤的生长。结果 :以DC IL 18 mut1皮下免疫后可诱导出比DC mut1等免疫组更高水平的 3LL肺癌细胞特异性CTL ,并使NK活性明显增加 ;单抗体内阻断实验提示在DC IL 18 mut1免疫诱导阶段 ,CD4 + T细胞和抗原共刺激分子、IFN γ均起到重要作用 ,而效应阶段CD8+ T、IFN γ、NK起作用 ,而CD4 + T则是非必需的。结论 :DC IL 18 mut1皮下免疫后可诱导高水平的抗肿瘤免疫活性 ,其机理与抗原有效提呈、特异性CTL诱导、NK活性增加以及CD4 + 、CD8+ T、NK细胞、IFN γ参与密切相关。

自体肿瘤抗原负载DC-CIK细胞治疗胃癌的疗效分析

目的:探讨自体肿瘤抗原负载树突状细胞联合细胞因子诱导的杀伤细胞(DC-CIK)治疗胃癌的疗效及安全性。方法:回顾性分析2005年1月至2010年1月在福建省肿瘤医院行胃癌切除术患者270例,根据是否进行DC-CIK治疗,分为对照组(150例)和DC-CIK治疗组(120例)。应用流式细胞术分析DC-CIK细胞表型,比较两组患者的总生存期(OS),观察DC-CIK治疗的不良反应,Cox回归法分析胃癌预后影响因素。结果:成熟DC中HLA-DR^+、CD8^+、CD83^+和CD86^+的细胞比例分别为(96.16±1.51)%、(96.58±2.66)%、(96.44±2.20)%和(98.74±0.76)%。CIK中CD3^+、CD3^+CD4^+、CD3^+CD8^+和CD3^+CD16^+/CD56^+的细胞比例分别为(91.98±5.9)%、(25.19±10.5)%、(71.15±7.8)%和(18.73±7.4)%。DC-CIK治疗组中位OS为77个月,与对照组的51个月相比差异明显(χ2=4.431,P=0.035)。DC-CIK治疗、辅助化疗和TNM分期是胃癌预后的独立影响因素。DC-CIK治疗的常见不良反应为发热、寒战和乏力。结论:胃癌术后应用自体肿瘤抗原负载DC-CIK治疗可延长胃癌患者的OS,且不良反应轻,安全有效。

血清肿瘤抗原检测联合CT与PET-CT扫描对肺癌确诊率的比较

背景与目的:正电子发射计算机断层显像(positronemissiontomography-computedtomography,PET-CT)是一种新的、用于影像学诊断的、将人体生物学信息与解剖信息结合的分子影像设备,具有更好的空间分辨力和早期的肿瘤探测能力。本研究中我们比较肿瘤标志物检测联合螺旋CT扫描与PET-CT全身代谢显像对肺癌诊断及临床分期的准确率。方法:手术或穿刺活检确诊为肺癌的43例患者,术前行螺旋CT扫描并有血清学CA125、CA19-9、CEA检测结果,为明确诊断及临床分期同时行PET-CT扫描,比较两种方法对肺癌的检出率以及临床分期结果。结果:血清肿瘤抗原检测联合CT扫描与PET-CT显像对肺癌诊断符合率分别为67.44%和90.70%,肺癌局部病灶显示阳性率分别为86.05%和95.35%,对纵隔淋巴结检出的阳性率分别为65.12%和83.72%,同时PET-CT显像检出肿瘤标志物联合CT扫描未发现的6例远处转移。与CT扫描相比,PET-CT显像使43例患者中的5例(11.63%)临床分期提前,7例(16.28%)推后,使4例(9.3%)患者改变了治疗方式。结论:PET-CT比血清肿瘤抗原检测联合CT扫描对肺癌的诊断阳性率高,且对肺癌的临床分期更加准确,PET-CT全身代谢显像是诊断肺癌及进一步明确肺癌分期的一种良好方法。

Hsp70-肿瘤抗原肽复合物修饰的DC疫苗体内外特异性抗瘤作用

目的 :探讨树突状细胞 (DC)及Hsp70 肿瘤抗原肽复合物修饰后的体内外特异性抗瘤作用。方法 :采用一定的生化技术 ,从H2 2肝癌细胞中提取肿瘤抗原肽 ,并在体外与Hsp70进行结合 ;采用细胞培养技术 ,培养rmGM CSF、rmIL 4诱导的小鼠骨髓细胞 ,体外获取大量的DC ,后者经Hsp70 肿瘤抗原肽复合物修饰后刺激小鼠脾淋巴细胞 ,通过MTT法进行检测淋巴细胞的激活 ;收集上述刺激传代培养的淋巴细胞 ,检测其对H2 2瘤细胞和艾氏腹水癌细胞的杀伤功能 ;采用H2 2瘤细胞肌肉接种和H2 2瘤细胞、艾氏腹水癌细胞腹腔接种 ,对接种小鼠给予经体外修饰的DC回输 ,观察其抑制肿瘤的效果。结果 :Hsp70 肿瘤抗原肽复合物可使DC成熟 ,大量分泌IL 12、TNF α、IL 1β等细胞因子 ,并能够使DC激活小鼠脾淋巴细胞 ;激活后传代培养的淋巴细胞对H2 2瘤细胞能够特异性地杀伤 ,而对艾氏腹水癌细胞无效 ;经Hsp 70 肿瘤抗原肽复合物修饰后的DC可作为一种有效的瘤苗 ,体内能特异性地抑制小鼠H2 2肿瘤生长。结论 :Hsp70 肿瘤抗原肽复合物能够很好地修饰体外诱导获取的DC ,使后者成为一种有效的瘤苗 ,体外能够特异性地激活淋巴细胞 。

膀胱肿瘤抗原和尿细胞学检测诊断膀胱癌的Meta分析

目的系统评价膀胱肿瘤抗原(BTAstat)和尿细胞学检测对膀胱癌的诊断意义。方法制定原始文献的纳入、排除标准及检索策略,检索MEDLINE(1966.1～2008.6)、EMbas(e1988.1～2008.6)、Cochrane图书馆(2008年第1期)、CMCC(1979～2008.6)、CNK(I1979.1～2008.6),收集有关BTAstat和尿细胞学比较诊断膀胱癌的文献。采用QUADAS进行质量评价。用MetaDiSc1.4软件进行Meta分析。结果共检索到相关研究71篇,排除58篇,纳入符合标准的13篇文献进行Meta分析,共3733例。异质性检验提示无阈值效应,但存在其它原因导致的异质性。用随机效应模型进行Meta分析。BTAstat和尿细胞学诊断膀胱癌的敏感度、特异度、阳性似然比、阴性似然比及诊断优势比分别为0.68(0.65,0.70)、0.74(0.72,0.76)、2.51(2.04,3.09)、0.46(0.38,0.55)、5.66(3.87,8.29)和0.41(0.39,0.44)、0.97(0.97,0.98)、12.64(7.58,21.08)、0.62(0.55,0.71)、22.16(12.38,39.66)。两者的敏感性随肿瘤分级和分期的升高而增高,且对初发膀胱肿瘤的敏感性较复发高。两者的综合受试者工作特征曲线下面积分别为0.7535和0.7119,Q*指数分别为0.6963和0.6624。结论BTAstat对膀胱肿瘤的诊断准确度中等,尚不能取代传统的尿细胞学检查,更不能单独用于膀胱癌的诊断,但可作为膀胱镜检查的重要辅助手段,是诊断膀胱癌可选的无创性检查方法。