免疫缺陷动物在肿瘤细胞侵袭研究中的应用

近10余年来利用免疫缺陷动物从不同角度进行了人类瘤细胞侵袭性的观察。共进行了以下几个方面的工作:(1)侵袭模型的建立:共建立了6个体内侵袭模型(包括背侧皮下,肌肉内,腹腔内,肾包膜下,睾丸包膜下和爪垫皮下等移植侵袭模型),不同模型具有不同用途。这6种侵袭模型均可作侵袭力的比较研究。(2)侵袭和转移之间关系的观察;利用爪垫皮下和睾丸包膜下移植侵袭模型,以不同时间截肢(切除局部肿瘤),待动物存活到最终时间和不同时间处死动物,观察局部肿瘤侵袭程度和转移出现时间的关系。初步证明局部肿瘤侵袭发展到Ⅲ级侵袭以上时方出现转移,侵袭Ⅲ级是危险期,这个结果对临床肿瘤病人手术时机的选择有重要参考价值。(3)对瘤细胞侵袭程度的定量分析做了初步观察,为今后深入研究侵袭定量打下了基础。(4)瘤细胞侵袭性和器官微环境关系的观察,初步证明了肿瘤细胞侵袭性和转移一样,也具有器官特异性。(5)同时也证明了瘤细胞侵袭的表达与移植方式的关系,找出了对瘤细胞侵袭最敏感的部位和器官,如肾包膜下和腹腔内为敏感的部位;背侧部皮下为不敏感的部位。因此鉴定一个肿瘤是否具有侵袭性,其侵袭程度如何,就不能仅用一个部位和器官。本文总结了近10余年的初步结果,提出了一些待深入研究的问题,这为今后深入研究人类肿瘤细胞侵袭机制和实验治疗,建立了良好的基础和条件。

肿瘤环境下人类脂肪间充质干细胞的旁分泌特征变化与肿瘤细胞侵袭的关系分析

目的分析肿瘤环境下人类脂肪间充质干细胞(AMSCs)的旁分泌特征变化与肿瘤细胞侵袭的关系。方法体外培养AMSCs,收集其上清液制备培养基培养HCT116细胞。利用Transwell培养板共培养AMSCs与HCT116细胞。通过检测穿透人工基底胶的能力对比两种培养条件下HCT116细胞侵袭能力的差异,同时采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测共培养后AMSCs旁分泌因子表达变化情况。结果根据检测穿透人工基底胶的能力结果显示,共培养的HCT116细胞侵袭能力明显强于AMSCs培养液培养的HCT116细胞。共培养条件下肿瘤环境影响了AMSCs旁分泌因子的表达,共培养条件下AMSCs细胞血管内皮生长因子C(VEGFC)、成纤维细胞生长因子10(FGF10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)以及白细胞介素-10(IL-10)分泌量明显高于细胞培养,差异均具有统计学意义(t=8.692、7.593、7.298、8.356,P<0.05)。结论肿瘤环境下会影响AMSCs旁分泌因子的表达,增加HCT116细胞侵袭能力。

结肠癌转移相关基因1在胃癌组织中的高表达及与肿瘤细胞侵袭、转移的关系

目的探讨结肠癌转移相关基因1(MACC1)在胃癌组织中的表达情况及与肿瘤细胞侵袭、转移的关系。方法收集2017年7月-2020年2月在我院行胃癌切除术治疗的90例患者的临床资料以及胃癌组织标本,随机选取癌旁组织标本61例,采用免疫组织化学法检测MACC1表达情况,并分析与患者临床病理参数的关系。结果MACC1在胃癌组织中的阳性表达率68.89%显著高于癌旁组织阳性表达率16.39%,差异有统计学意义(P<0.05),且MACC1的高表达与患者浸润深度、组织分化程度、淋巴结转移、TNM分期有关(P<0.05)。结论在胃癌组织中,MACC1呈现异常高表达,与肿瘤细胞的侵袭、转移显著相关,可以作为患者病情以及预后的检测指标。

半胱天冬酶-8：肿瘤细胞侵袭转移抑制子[英]

半胱天冬酶（caspases）在细胞凋亡的过程中起关键性作用。caspase-8的表达缺失见于各种癌症中，但其功能一直没被确认。最近，研究人员发现在成神经细胞瘤中caspase-8表达的缺失导致肿瘤细胞转移增加。

组织张力影响肿瘤细胞原位侵袭和持续迁移的研究

目的癌症转移开始于早期的肿瘤细胞原位侵袭,即肿瘤细胞从原发肿瘤脱离,穿透细胞外基质(ECM),然后侵袭邻近组织。目前肿瘤细胞侵袭的机制还不清楚。本研究旨在研究肿瘤细胞脱离和穿透的机制,以及三维细胞外基质影响肿瘤细胞极化和迁移的生物力学机制。方法采建立双肿瘤细胞球模型,研究肿瘤细胞的侵袭机制。建立包含细胞与ECM纤维网络的粗粒化模型,预测纤维网络的张力变化,以及张力调控的肿瘤细胞极化、肿瘤细胞-ECM相互作用。结果研究结果表明,细胞和组织主动收缩形成的张力在侵袭过程中驱动ECM纤维重塑。纤维重塑导致纤维定向排列及增加刚度,促进细胞极化和迁移,引导细胞从一个肿瘤球向另一个肿瘤球迁移,促进肿瘤细胞的侵袭。抑制细胞主动收缩导致ECM纤维重塑消失,显著减少肿瘤细胞的侵袭。粗粒化细胞模型预测了肿瘤细胞侵袭过程中的张力变化。结论本研究揭示了细胞和组织主动收缩形成的张力在肿瘤细胞侵袭过程中的关键作用,为癌症治疗提供新的治疗策略。

CT45A1基因沉默抑制人前列腺癌细胞的迁移和侵袭

目的研究沉默CT45A1(cancer/testis antigen family 45 member A1)基因的表达对人前列腺癌细胞的体外增殖、迁移和侵袭能力的影响,并初步探讨分子作用机制。方法实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹(Western blot,WB)检测CT45A1在具有不同侵袭力的人前列腺癌细胞中的表达水平,利用慢病毒感染方式构建CT45A1基因沉默的前列腺癌细胞,MTT法、划痕愈合实验和Transwell小室法评估沉默CT45A1基因对细胞的增殖、迁移和侵袭能力的影响。实时荧光定量PCR和WB检测上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的重要标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)以及关键调控因子Twist和Zeb-1的表达情况。结果荧光定量PCR和WB实验结果表明,人前列腺癌PC-3细胞中CT45A1 mRNA的相对表达量(4.37±0.34)和CT45A1的蛋白相对表达水平(2.49±0.12),均明显高于LNCap细胞;shCT45A1#1、shCT45A1#2细胞中的CT45A1 mRNA和蛋白表达水平均低于shScram细胞,差异均有统计学意义(P<0.05)。CT45A1基因沉默后,PC-3细胞的增殖水平未发生明显变化(P>0.05),但迁移与侵袭能力及Vimentin、Zeb-1的表达均下降,E-cadherin的表达上调,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论CT45A1可以通过促进Zeb-1介导的EMT来增强PC-3细胞的迁移和侵袭能力。

微小RNA-127-3p对乳头状甲状腺癌细胞增殖、侵袭及迁移的影响

目的 探讨微小RNA-127-3p(miR-127-3p)对乳头状甲状腺癌细胞增殖、侵袭及迁移的影响,并明确miR-127-3p与肿瘤细胞侵袭抑制因子(SCAI)基因的靶向关系。方法 选取乳头状甲状腺癌细胞株TPC1、正常人甲状腺细胞株Nthy-ori 3-1为研究对象。将生长良好的TPC1细胞株根据转染方式的不同分为空白组(NC组,未进行任何处理)、miR-NC组(转染miR-127-3p过表达的空载体)、miR-127-3p组(转染miR-127-3p-mimics)、si-NC组(转染SCAI敲低空载体)和si-SCAI组(转染si-SCAI)。采用噻唑蓝(MTT)实验检测细胞增殖能力,Transwell小室实验检测细胞迁移、侵袭能力,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测细胞中miR-127-3p、SCAI mRNA的表达水平,蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞SCAI蛋白表达水平。采用生物信息预测miR-127-3p与SCAI的靶向作用关系,并使用荧光素酶报告实验进行验证。结果 TPC1细胞中的miR-127-3p表达水平低于Nthy-ori 3-1细胞,SCAI蛋白、SCAI mRNA表达水平高于Nthy-ori 3-1细胞,差异有统计学意义(P<0.01)。与NC组、miR-NC组比较,miR-127-3p组细胞48、72 h时的增殖能力、细胞迁移和侵袭能力降低,差异有统计学意义(P<0.01)。与NC组、si-NC组比较,si-SCAI组细胞48、72 h时的增殖能力、细胞迁移和侵袭能力升高,差异有统计学意义(P<0.01)。与NC组和miR-NC组比较,miR-127-3p组SCAI蛋白表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.01)。转载WT-SCAI的miR-127-3p组细胞荧光素酶活性高于转载WT-SCAI的NC组细胞,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 乳头状甲状腺癌细胞中的miR-127-3p、SCAI呈低表达,过表达miR-127-3p可能通过促进SCAI的表达抑制乳头状甲状腺癌细胞的增殖、侵袭和迁移。

放射影响肿瘤细胞侵袭及转移特性的研究进展

放疗作为肿瘤综合治疗主要手段之一，可显著延长肿瘤患者生存时间，主要是基于放疗作为局部治疗手段能有效改善局部控制率，且减少局部未控而导致的远处转移。然而，近年来研究发现放射还可能通过改变肿瘤细胞表型或肿瘤微环境、增加残存肿瘤侵袭性导致转移概率增加。

内皮细胞通过CXC趋化因子增强肿瘤侵袭作用的研究

最近,Warner等人用试验证明了内皮细胞通过由CXC趋化因子信号介导的交联对话增强肿瘤细胞的侵袭。所有的假设是建立在内皮细胞通过分泌趋化因子并为肿瘤细胞产生趋化性梯度来积极参与肿瘤细胞侵袭这一基础上的。试验证明,同与空白的载体对照(HDMEC-LXSN)共同培养相比,与稳定表达Bcl-2的人类皮肤毛细血管内皮细胞(HDMEC-Bcl-2)共同培养时,口腔鳞状细胞癌-3(OSCC3)和卡波西(氏)肉瘤(SLK)表现出侵袭力增强。同作为对照的HDMEC-LXSN血管化的OSCC3肿瘤相比,HDMEC-Bcl-2血管化的OSCC3肿瘤呈现出更高的局部侵袭力。在暴露于血管内皮生长因子(VEGF)的初级内皮细胞和HDMEC-Bcl-2中,CXCL1和CXCL8均起正调节作用。值得注意的是,阻碍CXCR2的信号传导而不阻碍CXCR1的信号传导,使得OSCC3和SLK向内皮细胞的侵袭受到抑制。这些资料证明内皮细胞分泌的CXC趋化因子诱导肿瘤细胞的侵袭,而且内皮细胞产生的趋化信号引导了区域性癌变中观察到的肿瘤细胞的向外扩散过程。

S100A10可促进肺腺癌细胞的增殖和侵袭:基于激活AktmTOR信号通路

目的探讨S100钙结合蛋白A10(S100A10)在肺腺癌(LUAD)的表达水平及对患者预后的影响,以及S100A10对肺癌细胞增殖和转移的调控作用和作用机制。方法采用免疫组化技术(IHC)检测S100A10在LUAD及癌旁组织中的表达水平。Western blot、CCK-8和EdU、Transwell实验分别测定S100A10蛋白的表达水平、细胞增殖和侵袭能力。通过基因集富集分析(GSEA)S100A10在肺腺癌中可能的调控通路。分别将A549-shS100A10和A549-shCtrl细胞,H1299-S100A10和H1299-GFP的细胞注射到裸鼠皮下,观察S100A10的表达水平对肿瘤增殖的影响。结果与癌旁组织相比,肿瘤组织中S100A10的表达水平显著上调,并且S100A10表达水平升高与淋巴结转移、肿瘤分期、远处器官转移有关(P<0.05),而与分化程度、年龄、性别无关(P>0.05)。生存分析显示,肿瘤组织中S100A10表达水平越高,患者的预后越差(P<0.001)。体外实验显示,上调S100A10的表达,促进了肿瘤细胞的增殖和侵袭能力(P<0.001)。GSEA分析显示S100A10高表达显著富集至糖代谢、糖酵解、mTOR信号通路等基因集。葡萄糖消耗及乳酸生成实验表明,上调S100A10促进葡萄糖消耗和乳酸的生成,相反,下调S100A10抑制葡萄糖消耗和乳酸的生成。Western blot实验显示,S100A10能够促进Akt-mTOR信号通路激活。裸鼠移植瘤实验结果表明,上调S100A10的表达促进肿瘤增殖,而下调S100A10的表达则抑制肿瘤增殖(P<0.001)。结论S100A10通过激活Akt-mTOR-糖酵解信号通路,进而促进肿瘤细胞的增殖和侵袭能力。

共轭亚油酸对鼠黑素瘤细胞侵袭和粘附的影响

目的 观察共轭亚油酸 (conjugatedlinoleicacid ,CLA)对B16 MB细胞系侵袭能力的影响 ,探讨CLA预防肿瘤转移的可能作用机制。方法 用CLA 0、2 5、10 0、2 0 0 μmol L处理小鼠黑色素瘤B16 MB细胞系 ,观察CLA对人工合成基底膜的侵袭能力 ,对小鼠肿瘤细胞分泌明胶酶 (IV胶原酶 )的能力及肿瘤细胞表面钙粘蛋白 (E cadherin ,E CD)表达的影响。结果 CLA 5 0、10 0、2 0 0 μmol L明显降低B16 MB细胞系向基底膜的侵袭能力 ;CLA 10 0、2 0 0μmol L可抑制肿瘤细胞明胶酶的分泌 ,促进肿瘤细胞E CD的表达。 结论 CLA抑制肿瘤细胞的侵袭能力 ,其抗肿瘤转移作用可能与明胶酶分泌和E

高侵袭性胰腺癌Panc-1细胞系中干细胞筛选结果分析

目的探讨高侵袭性胰腺癌细胞中是否有比例较高的胰腺癌干细胞。方法采用Transwell小室肿瘤侵袭模型筛选、分离出胰腺癌细胞系Panc-1中的高侵袭性癌细胞(Panc-1-H)和低侵袭性癌细胞(Panc-1-L),FCM检测上述两种细胞的胰腺癌干细胞表面标记物CD24、CD44、ESA。结果Panc-1-H、Panc-1-L中胰腺癌干细胞所占比例相近,随着侵袭时间延长,胰腺癌干细胞比例无改变,P均>0.05。结论高侵袭性胰腺癌细胞中不含有较高比例的胰腺癌干细胞。

肿瘤抑制基因RECK与恶性肿瘤侵袭转移机制的研究进展

恶性肿瘤侵袭及转移的机制研究已进入分子生物学的水平，细胞外基质（ECM）和血管基底膜的降解是恶性肿瘤浸润和转移的关键环节。研究表明，肿瘤细胞侵袭转移能力的强弱与其诱导产生的蛋白酶降解ECM及基底膜的能力密切相关．而基质金属蛋白酶（MMPs）则是其中最重要的一组蛋白酶。在肿瘤的侵袭和转移中起着重要的作用。RECK基因是一种新型基质金属蛋白酶抑制剂，可在转录后水平抑制多种MMPs的表达，进而有效地抑制肿瘤的侵袭与转移。

二磷酸腺苷核糖基化因子6与肿瘤侵袭和迁移关系的研究进展

临床上对于肿瘤侵袭和转移缺乏有效的治疗手段,导致了肿瘤疾病的高死亡率。研究显示超过90%肿瘤相关死亡是由肿瘤侵袭和转移引起[1]。肿瘤细胞实现远处侵袭和转移,必须具有降解细胞外基质、侵袭和迁移的运动能力。因此,研究肿瘤细胞获得侵袭和迁移能力的调控机制,将为研究转移性肿瘤治疗新策略提供实验依据和理论基础。

喉鳞状细胞癌患者血清及唾液中基质金属蛋白酶-2基质金属蛋白酶-9的水平与肿瘤恶性程度的相关性分析

喉鳞状细胞癌是喉癌的最常见类型,患者以声嘶、咳嗽、呼吸及吞咽困难为主要表现,部分患者易忽略早期症状而使病情拖延,故简便准确的检测指标是早期确诊喉鳞状细胞癌并采取积极干预措施的基础。基质金属蛋白酶(MMPs)是一种可降解多种细胞外基质的酶类,其中基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9是目前研究最多的亚型,其在多种恶性肿瘤组织中表达变化并破坏肿瘤细胞侵袭的组织学屏障[1]。

二种体外肿瘤侵袭模型的比较研究

本文采用双层培养板法和双套管悬浮培养法，分别以人羊膜和ＳＤ胚鼠心肌组织作为靶组织，以小鼠Ｂ１６细胞、人ＳＧｃ－７９０１和ＨＲ８３４８细胞作为侵袭细胞，研究观察了上述三种肿瘤细胞体外侵袭行为。实验表明Ｂ１６和ＳＧｃ－７９０１细胞对人羊膜以及ＨＲ８３４８和ＳＧｃ－７９０１细胞对ＳＤ胚鼠心肌都有不同程度的侵袭作用。本文还对二种不同的体外侵袭模型的特点作了分析比较。

扁蒴藤素抑制NCI-H1299细胞迁移侵袭的作用与机制研究

目的探讨扁蒴藤素对非小细胞肺癌NCI-H1299细胞迁移侵袭的抑制作用及其分子机制。方法采用不同浓度(0~80μmol/L)的扁蒴藤素处理NCI-H1299细胞,CCK-8法检测细胞增殖的情况,确定扁蒴藤素对NCI-H1299细胞的非毒剂量,并以此作为后续的药效与分子机制研究剂量。划痕实验评价扁蒴藤素对NCI-H1299细胞横向迁移能力的影响;transwell迁移与侵袭实验评价扁蒴藤素对NCI-H1299细胞纵向迁移能力与侵袭能力的影响;免疫印迹法与荧光定量PCR实验分别测定上皮-间充质相关标记物蛋白与mRNA的表达水平。结果扁蒴藤素浓度<2.5μmol/L时,对NCI-H1299细胞无明显的细胞毒性。与空白对照组比较,非毒剂量的扁蒴藤素(0.5μmol/L、1.0μmol/L和2.0μmol/L)可明显抑制NCI-H1299细胞的横向迁移以及纵向的迁移与侵袭能力(P<0.01)。扁蒴藤素处理后,上皮细胞标记物E-cadherin与ZO1的表达水平明显升高,间充质细胞标记物N-caherin与Vimentin的表达水平明显降低(P<0.01)。结论扁蒴藤素具有抑制NCI-H1299细胞迁移与侵袭的能力,且这一作用可能与其调控NCI-H1299细胞的上皮-间充质转化相关。

EP3受体各亚型对肝癌Huh-7细胞生长和侵袭的作用

目的 :探讨在肝细胞肝癌Huh-7细胞中前列腺素E2EP3各受体亚型对肿瘤细胞生长与侵袭的作用。方法:对常规培养的人肝细胞肝癌Huh-7细胞,瞬时转染EP3受体的4个亚型EP3-4R、EP3-5R、EP3-6R、EP3-7R,应用RT-PCR实验检测转染细胞EP3受体各亚型的m RNA表达水平;应用Western blot实验检测相关蛋白水平。对转染后的Huh-7细胞,分别给予不同浓度的EP3受体激动剂sulprostone作用24 h,用WST-8细胞增殖测定试剂检测细胞的增殖情况;应用划痕实验检测细胞的侵袭性;应用Western blot实验检测细胞内ERK蛋白磷酸化水平的变化。结果:RT-PCR及Western blot实验结果显示Huh-7细胞EP3受体表达水平明显增高。WST-8实验显示,经10μmol/L sulprostone处理24 h后,过表达EP3-4R、EP3-5R和EP3-7R亚型的细胞增殖率分别达到126.7%、124.0%、123.8%。划痕实验结果显示,过表达细胞的侵袭性分别增加到135.8%、123.5%、128.7%。Western blot显示,EP3-4R、EP3-5R和EP3-7R转染细胞内ERK磷酸化水平分别上调了54.8%、33.4%、44.3%。而过表达EP3-6受体亚型细胞的增殖率、侵袭率和胞内ERK磷酸化水平改变不明显。结论 :Huh-7肝癌细胞中,EP3-4R、EP3-5R及EP3-7R这3种受体亚型对细胞的生长及侵袭有显著促进作用,而EP3-6R亚型则无明显的促进作用。EP3受体促进肝癌细胞生长和侵袭的作用与ERK激活的现象一致。