基于UHPLC-Q-TOF/MS技术分析肿节风总黄酮提取物促进巨核细胞分化的效应成分

目的筛选肿节风总黄酮提取物促进巨核细胞分化的效应成分。方法(1)以人巨核细胞白血病细胞(Dami)与人骨髓基质细胞(HS-5)共培养的方式建立巨核细胞分化障碍模型作为评价体系,实验分组:Dami组(Dami)、对照组(Dami+HS-5)、PMA组[Dami+HS-5+5 ng·mL-1佛波醇12-十四酸酯13-乙酸酯(PMA)]、模型组[Dami+HS-5+1%兔抗大鼠血小板血清(APS)+5 ng·mL-1PMA],培养48 h。采用流式细胞术检测巨核细胞分化成熟表面标记分子CD41a、CD61的表达情况。(2)将49只SD雄性大鼠随机分为空白血浆组、15 min组、30 min组、60 min组、90 min组、120 min组、240 min组,每组7只。各给药组大鼠灌胃肿节风总黄酮提取物1.26 g·kg^(-1),在6个设定时间点(15、30、60、90、120、240 min)采血制备肿节风总黄酮提取物经时含药血浆。(3)采用超高效液相色谱-四极杆串联飞行时间质谱法(UHPLC-Q-TOF/MS)对肿节风总黄酮提取物经时含药血浆进行分析,以峰面积构建肿节风总黄酮提取物经时含药血浆中的化学成分随时间变化量矩阵(X矩阵)。将所采集的6个不同时间点的肿节风总黄酮经时含药血浆对巨核细胞分化成熟障碍模型进行干预,采用流式细胞术检测细胞表面分子CD41a、CD61的表达水平,构建肿节风总黄酮提取物经时含药血浆效应矩阵(Y矩阵)。(4)将X矩阵和Y矩阵数据标准化处理后,采用偏最小二乘法(Partial least squares,PLS)计算分析量效关系,以变量重要性投影(Variable importance for projection,VIP)>1为阈值,筛选与细胞表面分子CD41a、CD61变化相关的效应成分,并进行化学成分鉴定,作为肿节风总黄酮提取物中促进巨核细胞分化的潜在效应成分,最后回归评价体系验证其药效。结果(1)与Dami组比较,对照组Dami细胞表面的CD41a表达水平明显升高(P<0.05)。与对照组比较,PMA组Dami细胞表面的CD41a、CD61表达水平均显著升高(P<0.01)。与PMA组比较,模型组Dami细胞表面的CD41a、CD61表达水平均显著降低(P<0.01)。(2)与空白血浆组比较,15、30、60、90、120、240 min各时间点Dami细胞表面分子CD41a、CD61表达水平均显著升高(P<0.01),且CD41a、CD61均在30 min组表达水平最高。在正、负离子模式下筛选出VIP值>1的潜在效应成分,并选取540.3638@12.25与559.2991@11.53两个成分进行药效学验证。559.2991@11.53被鉴定为胡萝卜苷(Daucosterol,Dau),540.3638@12.25被鉴定为迷迭香酸-4-O-β-D-葡萄糖(Rosmarinic acid 4-O-β-Dglucoside,Ros)。Ros、Dau分别干预巨核细胞分化成熟障碍模型后,与模型组比较,Ros及Dau低、中、高剂量组(40、60、80μg·mL-1)的Dami细胞表面的CD41a、CD61表达水平均显著升高(P<0.05,P<0.01)。结论Ros、Dau可能是肿节风总黄酮提取物促进巨核细胞分化的效应成分。

肿节风提取物上调NKTR抑制小鼠肺癌生长实验研究

目的:探讨肿节风对肺癌的作用及其机制。方法:CCK8法检测肿节风对肺癌细胞LLC细胞活力的影响,LLC小鼠模型评价肿节风体内抗癌活性,蛋白质组学筛选肿节风处理的LLC细胞中的靶蛋白,蛋白质印迹实验验证靶蛋白的表达,流式细胞术检测小鼠外周血T细胞和NK细胞。结果:CCK8检测结果表明,肿节风抑制LLC细胞的增殖。肿节风治疗显著抑制LLC荷瘤小鼠的肿瘤生长。蛋白质组学分析表明,肿节风上调肺癌细胞中NKTR蛋白表达。Western Blot检测结果显示,肿节风干预的肺癌细胞及小鼠肿瘤组织中NKTR蛋白表达量升高。GEPIA数据库分析显示,NKTR在肺癌组织中表达量低于癌旁组织。肿节风治疗的荷瘤小鼠外周血NK细胞和T细胞比例显著升高。结论:肿节风通过上调NKTR表达增强抗肿瘤免疫。

正交优化肿节风的提取工艺

目的优选肿节风的提取工艺及喷干工艺。方法采用L9(34)正交设计试验法,以异嗪皮啶、迷迭香酸以及干膏得率为指标,对加水量、提取时间、提取次数进行考察,优化水提工艺,以结块强度、内聚力指数和粉体流动性指数为指标,对肿节风浸膏的密度进行考察,优选出最佳喷干工艺。结果最佳提取工艺为14倍量水、加热回流3次、每次1 h;最佳喷雾干燥工艺为浸膏密度为1.08时效果最优。结论优选的提取工艺简便稳定,提取效率高。

HPLC-MS/MS法同时测定肿节风中8种化学成分含量

目的:采用HPLC-MS/MS同时测定肿节风中的刺五加苷b1、咖啡酸、芦丁、迷迭香酸、绿原酸、隐绿原酸、新绿原酸和异嗪皮啶等8种化学成分含量。方法:采用Waters ACQUITY UPLC?BEH C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm);以乙腈-水(含0.04%的甲酸)为流动相,梯度洗脱,流速为0.25 mL/min,进样量5μL,柱温35℃;电喷雾离子化源(ESI);多反应监测模式(MRM)进行定性定量分析。结果:在该色谱条件下,肿节风中8种化学成分在各自范围内,峰面积和浓度呈良好的线性关系(r>0.995),平均加样回收率(n=9)为97.85%~102.89%,RSD为0.89~2.36,经过测定6个产地的肿节风中刺五加苷b1、咖啡酸、芦丁、迷迭香酸、绿原酸、隐绿原酸、新绿原酸、异嗪皮啶的含量依次为4.9~40.8μg/g、642.7~1096.5μg/g、5.4~100.6μg/g、908.8~2488.9μg/g、138.8~975.2μg/g、90.9~506.1μg/g、89.6~707.4μg/g、986.1~1840.8μg/g。结论:该方法准确,重现性好,专属性高,可用于肿节风的质量控制。

野生和栽培鲜肿节风挥发油成分分析

目的鉴定野生和栽培鲜肿节风挥发油中的成分。方法应用气相色谱-质谱联用技术和NIST-98、WILEY275检索库对两种挥发油的化学成分进行分析和鉴定。结果从分离出的115种物质中野生和栽培鲜肿节风挥发油分别鉴定了65和64种化学成分,其相对含量占挥发油总量分别为76.3%和77.8%,其中两者共有化学成分为48个,其相对含量总和占各自总检出成分分别为74.38%和79.32%。结论野生品与栽培品的挥发油成分、共有成分的相对百分含量有差异,有些相差很多倍;共有成分所占比例较大,且共有成分总含量接近。该研究为肿节风的开发利用提供了理论依据。

肿节风治疗猪肺疫的临床疗效观察

1993年4月下旬,南宁市郊某个体养猪专业户饲养的肉用仔猪相继发病,我们应邀诊治。

肿节风防治化疗后血小板减少症的研究

目的 :探讨肿节风对大剂量化疗后小鼠血小板减少的防治作用。方法 :本研究以Babl/c纯系清洁级小鼠为实验对象 ,通过大剂量 5 氟尿嘧啶腹腔注射复制血小板减少的动物模型 ,用肿节风稀释液从实验开始连续进行灌胃干预 ,分别在预处理前、化疗前、化疗后第 2、第 4及第 7天测定小鼠血常规 ;并在化疗后第 7天处死小鼠 ,行骨髓病理活检 ,观察骨髓造血情况。结果 :经过肿节风预处理后 ,化疗前单药干预组及联合干预组小鼠外周血小板数量显著高于同期对照组 (P <0 0 5 ) ,化疗后两个实验组小鼠的血小板数量与对照组相比无显著下降 (P <0 0 5 ) ,而两实验组间无显著性差异 (P >0 0 5 )。骨髓病理检查结果提示 ,两实验组小鼠骨髓增生活跃 ,骨髓腔内可见巨核细胞 ,对照组小鼠骨髓增生低下 ,未发现巨核细胞。结论 :肿节风具有对抗大剂量 5 FU所造成的血小板减少的作用 ,从而预防并治疗化疗后血小板减少症的发生。

肿节风中黄酮苷类成分研究

目的:研究中药肿节风的化学成分,为阐明其有效成分提供依据。方法:利用聚酰胺、Sephadex LH- 20,Lipophilie sephadex LH-20柱色谱进行分离,根据化合物的理化性质和波谱数据(IR,UV,MS,~1H-NMR,^(13)C- NMR)鉴定其结构。结果:从肿节风水提取物中分离得到5个黄酮苷类和3个其他类化合物,分别鉴定为:山柰酚- 3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷(1),槲皮素-3-O-a-D-葡萄糖醛酸苷(2),槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯(3),5,7,4′-三羟基-8-C-β-D-葡萄糖二氢黄酮碳苷(4),新落新妇苷(5),5-O-咖啡酰基-奎宁酸甲酯(6),3,4-二羟基苯甲酸(7),异秦皮啶(8)。结论:化合物1～6为首次从本属植物中得到,其中1～3为该属中首次发现的葡萄糖醛酸类化合物。

肿节风的化学成分及其制剂质量控制研究进展

肿节风为常用中药 ,也是许多药典及部颁成方制剂的处方药物 ,具有显著的抗菌、消炎、止痛及一定的肿瘤抑制作用 ,其主要化学成分为倍半萜、黄酮及香豆素类化合物。现综述肿节风化学成分及其制剂质量控制等方面的研究现状 ,以期为深入研究肿节风 。

不同种源肿节风反丁烯二酸和异秦皮啶含量研究

目的:揭示肿节风反丁烯二酸和异秦皮啶质量分数的变异规律,为肿节风资源利用与药材质量优化提供依据。方法:分别建立异秦皮啶与反丁烯二酸的HPLC测定方法,并测定全国21个不同种源肿节风药材中异秦皮啶与反丁烯二酸的质量分数。结果:不同种源肿节风反丁烯二酸和异秦皮啶质量分数存在显著差异,海拔从低到高,两者质量分数都逐渐减少;与经度、纬度关系密切,其中异秦皮啶质量分数在肿节风自然分布中心区最高;肿节风反丁烯二酸和异秦皮啶质量分数地理变异规律不同药材部位表现不一,茎比叶密切。结论:本研究建立的肿节风反丁烯二酸和异秦皮啶质量分数测定方法简便、准确、重现性好,可用于肿节风药材中此2种成分的质量控制。研究结果基本代表了我国肿节风药材质量及其差异的现状,与传统观点认为"江西、福建、浙江所产肿节风药材质量较佳"一致,建议上述区域列为今后肿节风药材良种选育与基地建设的重点。

肿节风药材中反丁烯二酸和异秦皮啶的含量测定

目的 建立肿节风药材中反丁烯二酸和异秦皮啶的含量测定方法。方法 采用RP -HPLC外标法 ,AgilentZorbaxE clipseXDB -C18色谱柱 (4.6mm× 15. 0mm ,5 μm) ,以 2 %乙腈和 0 .1%磷酸溶液为流动相A ,以乙腈为流动相B ,梯度洗脱 ,检测波长 2 .10nm。结果 反丁烯二酸在 11.6 6～ 1 .17× 10. 3 μg范围内线性关系良好 ,平均回收率为 10 1.5 % ,RSD =2 .5 % ;异秦皮啶在 4 0 .10～ 96 2 .4 0 μg范围内线性关系良好 ,异秦皮啶平均回收率为 98.9% ,RSD =3.3%。 结论 所用方法简便、准确 ,重复性好 ,在同一色谱条件下可同时测定反丁烯二酸和异秦皮啶的含量。

肿节风浸膏对氧自由基作用的研究

目的研究肿节风浸膏对羟自由基(HO.)和超氧阴离子自由基(O2.-)的作用。方法采用邻二氮菲-Fe2+氧化法检测不同浓度肿节风浸膏水溶液对H202/Fe2+体系产生的HO.的清除作用;邻苯三酚自氧化法测定肿节风浸膏溶液对O2.-的作用。结果肿节风浸膏溶液浓度分别为0.2,0.4,0.6,1.2 mg.ml-1时的HO.清除率分别为0.89%,17.52%,49.35%,89.89%,组间有量效关系;肿节风浸膏溶液浓度为0.01 mg.ml-1时对O2.-抑制率为-76.84%。结论肿节风浸膏溶液在体外有显著清除HO.的作用,促进O2.-生成。

肿节风提取物对鼻咽癌裸鼠移植瘤细胞凋亡的影响

目的:探讨肿节风提取物对人鼻咽癌细胞株CNE1、CNE2裸鼠移植瘤的抑瘤作用及与瘤细胞凋亡的关系。方法:采用CNE1、CNE2细胞接种于裸鼠腋下,1周后成瘤,建立肿瘤模型,灌胃给药30 d;TUNEL法检测细胞凋亡;流式细胞仪进行细胞凋亡的分析;透射电镜观察瘤组织细胞超微结构的改变;免疫组化法检测瘤组织Bc l-2,Bax的表达。结果:肿节风治疗组的裸鼠瘤重、肿瘤相对体积明显低于对照组(P<0.01);TUNEL法检测肿节风组凋亡指数高于对照组(P<0.01);流式细胞技术显示肿节风组凋亡率分别为58.34%和63.76%,与对照组相比有统计学意义(P<0.01);电镜下用药组瘤组织中可见较多典型的细胞凋亡的形态学表现;免疫组化结果显示Bc l-2蛋白的表达明显低于对照组(P<0.01),而Bax蛋白的表达明显高于对照组(P<0.01)。结论:肿节风在体内具有抑制CNE1、CNE2移植瘤生长的作用,其机制与下调Bc l-2蛋白、上调Bax蛋白的表达进而促进肿瘤细胞的凋亡有关。

肿节风化学成分研究

目的研究中药肿节风化学成分,为阐明其抗肿瘤有效成分提供依据。方法利用聚酰胺、Sephadex LH-20,Lipophilic sephadex LH-20柱色谱进行分离,根据化合物的理化性质和光谱数据(IR,UV,1H-NMR,13C-NMR)鉴定其结构。结果从肿节风中分离得到7个化合物,分别鉴定为:迷迭香酸甲酯(Ⅰ),迷迭香酸(Ⅱ),丹参素甲甲酯(Ⅲ),咖啡酸(Ⅳ),3,4-二羟基苯甲酸(Ⅴ),异秦皮啶(Ⅵ),邻苯二甲酸二丁酯(Ⅶ)。结论化合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅶ为首次从本属植物中得到。

肿节风颗粒对小型猪腮腺放射损伤所致活性氧簇的清除作用

目的探讨肿节风对小型猪腮腺经15 Gyγ射线照射后所致活性氧簇(ROS)的清除作用。方法 45只雄性小型猪随机分成空白组、单照组、药照组3个大组,每组分成a、b、c三个平行组。药照组在照射前1周开始持续给药至取出腮腺标本,空白组和单照组给予等量的生理盐水。在麻醉条件下单照组和药照组均给予15 Gyγ射线照射双侧腮腺,空白组给予0 Gyγ射线照射。a、b、c三个平行组分别于照射后10、40、90 d取双侧腮腺,称重后分装,以猪活性氧簇(ROS)酶联免疫分析试剂盒检测其ROS的含量。结果药照组ROS的含量在各个时点均低于单照组,差异均有统计学意义(P<0.01),药照a组和药照b组、药照c组的差异均无统计学意义(P>0.01),药照b组和药照c组差异有统计学意义(P<0.01);在放射后10 d时肿节风对ROS的清除作用较强,药照组和与空白组的差异无统计学意义(P>0.01);放射后40和90 d肿节风对ROS均有有一定的清除作用,药照组与空白组的差异有统计学意义(P<0.01)。结论肿节风对小型猪腮腺放射损伤所致ROS有一定的清除作用,尤其对放射后10 d腮腺ROS的清除作用明显;清除放射所产生的ROS可能是肿节风防护腮腺放射损伤的主要机制。

肿节风注射液抗小鼠肝癌Hep-A-22的作用及毒性

目的 :研究肿节风注射液 (ZJF)抗小鼠肝癌Hep A 2 2的作用及毒性。方法 :建立在体荷瘤小鼠肝癌Hep A 2 2模型 ,测定ZJF的抑瘤率和体重、胸腺指数、脾指数和给药前后外周血白细胞的影响 ,同时研究ZJF对人肝癌Hep A 2 2细胞株生长的抑制作用。结果 :ZJF具有明显的抗肿瘤作用 ,结论 :ZJF体内、外对小鼠肝癌Hep A 2 2均具有抗肿瘤作用 。

肿节风片对恶性肿瘤和免疫功能的影响

目的 :研究肿节风片对恶性肿瘤和免疫功能的影响。方法 :观察肿节风在体内、体外对 S1 80 肉瘤和肝癌 Hep A腹水瘤的抑制作用及对巨噬细胞和特异性免疫功能的影响。结果 :肿节风片对小鼠 S1 80 肉瘤有明显抑制作用 ,并能明显延长 Hep A腹水瘤小鼠的存活期 ,在体外还能直接灭活 Hep A和 S1 80 瘤细胞。此外 ,能明显增强巨噬细胞的廓清指数。结论

肿节风抗肿瘤活性部位的化学成分

目的：研究肿节风（Sarcandra glabra（Thunb．）Nakai）抗肿瘤活性部位及其化学成分。方法：用DA201大孔树脂柱分离部位，从体内动物瘤实验确定抗肿瘤活性部位；采用各种色谱方法对活性部位的化学成分进行分离，根据理化常数和波谱数据鉴定化合物结构。结果：95％乙醇洗脱部位具有显著的抗肿瘤活性，从此活性部位共分离得到13个化舍物，分别鉴定为：3，3＇-双异秦皮定（3，3＇-biisofraxidin，1），球松素（pinostrobin，2），异秦皮定（isofraxidin，3），棕榈酸（palmitic acid，4），白术内酯Ⅲ（atractylenolideⅢ，5），金粟兰内酯E（chloranthalactone E，6），正十五烷酸（pentadecanoic acid，7），5-羟基-7，4’-二甲氧基二氢黄酮（5-hydroxy-7，4＇-dimethoxyflavanone，8），伊斯坦布林A（istanbulin A，9），2’，4＇-二羟基-6’-甲氧基二氢查尔酮（uvangoletin，10），6，7-二甲氧基香豆素（scoparone，11），β-谷甾醇（β-sitosterol，12），胡萝卜苷（daucosterol，13）。结论：化合物1为新化合物，化合物5，7，11为首次从该植物中得到，化合物1—7、9—11对抑制肿瘤细胞生长有弱效。

肿节风水提物减轻放射性口干的临床疗效观察

目的:观察肿节风水提物对鼻咽癌(NPC)患者放疗急性反应和放射性口干的临床疗效。方法:选择Ⅲ和Ⅳa期NPC患者46例随机分为对照组和研究组,其中对照组25例,研究组21例。所有患者均采用放化综合治疗的方法,研究组配合单剂中药肿节风水提物20g/d口服。观察两组治疗后肿瘤消褪情况和急性放化疗副反应以及放射性口干的严重程度。结果:所有患者均完成治疗。放疗后两组肿瘤局部控制率无显著差异(P>0.05)。研究组的急性放化疗副反应出现的频率和严重度均轻于对照组,放射性口干的严重程度研究组明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:肿节风水提物有抗氧化损伤的作用,与放化疗结合能明显减轻急性放化疗毒副反应,降低放射性口干的严重程度,对放化疗所致的副反应有一定减毒作用。