胃动蛋白2调控JAK2/STAT3通路在胃癌迁移和侵袭中的作用

目的 阐明胃动蛋白2(gastrokine 2,GKN2)在人胃癌中的作用及相关分子机制。方法 采用免疫组织化学技术检测90例胃癌(gastric cancer,GC)组织、48例癌旁胃组织(adjacent tissue,PT)和22例远端胃黏膜组织(distal gastric mucosa,DGM)中GKN2和TFF1的表达;构建GKN2基因高表达载体,转染人胃癌细胞MKN28和SGC7901,qRT-PCR和Western blot验证转染效率,实验分为3组:GKN2组、NC组、空白组。采用CCK-8、Transwell迁移和侵袭实验测定细胞增殖、迁移和侵袭能力;Western blot观察GKN2转染后JAK2、STAT3、p-JAK2、p-STAT3蛋白表达变化。结果 与癌旁胃组织(GKN2,43.75%;TFF1,62.50%)和远端胃黏膜组织(GKN2,86.36%;TFF1,81.82%)相比,胃癌组织中GKN2(6.67%)、TFF1(21.11%)表达下调(P<0.05);但胃癌组织中GKN2与TFF1的表达无相关性(r≈0.23,P=0.074)。与NC组(0.25±0.03)和空白组(0.24±0.03)相比,GKN2转染MKN28细胞24 h后OD570下降至(0.15±0.02),GKN2转染48 h后的OD570(0.22±0.06)也低于相应的NC组(0.49±0.06)和空白组(0.44±0.02),72 h后的OD570(0.25±0.05)比相应的NC组(0.65±0.21)和空白组(0.63±0.03)减少(P<0.05);SGC7901细胞中GKN2转染24 h后OD570(0.721±0.014)低于NC组(1.352±0.168)和空白组(1.381±0.168),48 h后的OD570(0.674±0.028)也低于相应的NC组(1.459±0.211)和空白组(1.565±0.351),72 h后GKN2的OD570(0.400±0.028)比NC组(1.745±0.194)和空白组(1.792±0.385)减少(P<0.05)。Transwell迁移实验发现,MKN28细胞中GKN2转染组穿过膜的癌细胞数(26±5.01)明显低于NC组(109±7.10)和空白组(110±4.04)(P<0.05);与NC组(94±6.00)和空白组(75+7.05)相比,SGC7901中GKN2高表达显著降低了穿过膜的细胞数(37±3.11)(P<0.05)。Transwell侵袭实验证实,与NC组(67±5.02)和空白组(66±5.16)相比,GKN2高表达显著降低了穿过基质胶的MKN28细胞数(28±4.10)(P<0.05);SGC7901细胞中GKN2转染组穿过基质胶的癌细胞数(10±2.06)远低于NC组(58±5.13)和空白组(55±3.17)(P<0.05)。Western blot结果显示,GKN2高表达显著下调MKN28和SGC7901细胞中总JAK2、STAT3蛋白表达以及磷酸化形式p-JAK2和p-STAT3的表达水平(P<0.05)。结论 GKN2高表达可通过阻断JAK2/STAT3通路抑制胃癌细胞迁移和侵袭。

转染胃动蛋白2基因抑制人胃癌细胞系MKN28增殖、迁移和侵袭

目的检测胃癌、癌旁组织和胃癌远端胃黏膜组织中胃动蛋白2(GKN2)的表达;分析GKN2转染人胃癌MKN28细胞系后对增殖、迁移和侵袭的影响。方法免疫组织化学技术检测胃癌、癌旁组织和胃癌远端胃黏膜中GKN2蛋白的表达;将GKN2基因真核表达载体(Xhol_GKN3SP-h GKN2-TEV-SBP_Xhol)转入人胃癌MKN28细胞,经G418筛选后获得稳转细胞株,Western blot确定GKN2在MKN28细胞中表达;MTT法测定MKN28细胞增殖;Transwell迁移实验和侵袭实验检测细胞迁移和侵袭。结果 GKN2在胃癌组织中的表达少于胃癌远端胃黏膜和癌旁胃组织(P<0.05)。GKN2转染人胃癌MKN28细胞后吸光度值(A值)显著低于未转染组和空载体组(P<0.05)。与未转染组及空载体组相比,GKN2过表达致使迁移细胞数(P<0.05)和侵袭细胞数均明显下调(P<0.05)。结论 GKN2表达减低与胃癌的发生有关;GKN2过表达显然可阻抑人胃癌MKN28细胞的增殖、迁移和侵袭。

血清卷曲螺旋蛋白49及胃动蛋白2诊断胃癌的临床价值

目的 ：探讨血清卷曲螺旋蛋白49（CCDC49）及胃动蛋白2（GKN2）对胃癌诊断的临床价值。方法 ：应用ELISA检测205例胃癌组、96例癌前病变组及94例正常对照组共395例血清样本中CCDC49及GKN2的表达水平,结果以中位数和四分位数间距表示,并对结果进行统计学分析,以ROC曲线下面积（ROC-AUC）评价诊断的准确性。结果：胃癌组血清CCDC49表达水平高于正常对照组及癌前病变组（P〈0.05）。血清CCDC49的AUC为0.69,95%CI：0.64-0.74。血清CCDC49取临界值为83.0 pg/m L时,CCDC49诊断胃癌的灵敏度和特异度分别为81.5%（167/205）和51.6%（98/190）。胃癌组血清GKN2表达水平低于正常对照组及癌前病变组（P均〈0.05）。血清GKN2的AUC为0.77,95%CI：0.72-0.82。血清GKN2取临界值为93.2 pg/m L时,GKN2诊断胃癌的灵敏度和特异度分别为77.1%（158/205）和65.8%（125/190）。用Logistic回归方程求出CCDC49和GKN2联合预测因子Y,Y的AUC为0.88,95%CI：0.85-0.92,当Y取临界值为2.4时,其诊断胃癌的灵敏度和特异度为84.9%（174/205）和65.8%（125/190）。结论 ：血清CCDC49的高表达水平及GKN2的低表达水平对胃癌具有一定的诊断价值,CCDC49和GKN2联合预测因子Y可作为一种新的、较好的胃癌诊断参考指标。

过表达胃动蛋白对胃癌细胞生物行为学的影响

目的探讨过表达胃动蛋白(gastrokine-2,GKN2)对胃癌细胞生物行为学的影响。方法体外培养SGC-7901、AGS胃癌细胞,构建GKN2过表达质粒,利用Lipofectamine 2000进行GKN2过表达质粒与胃癌细胞的转染。获得GKN2过表达的SGC-7901、AGS胃癌细胞为CKN2组,空载转染上述胃癌细胞为vector组。采用分别采用细胞黏附实验、细胞侵袭实验和四甲基偶氮唑盐(MTT)法,观察GKN2对胃癌细胞黏附作用、侵袭力和细胞活性的影响。结果与vector组相比,GKN2组GKN2的表达量明显增加(P<0.001);与vector组相比,GKN2组胃癌细胞黏附能力降低(P<0.05),胃癌细胞侵袭力明显减慢(P<0.05),胃癌细胞活性明显降低(P<0.05)。结论 GKN2能够抑制胃癌细胞黏附能力,迁移能力和细胞活性。

GKN2在胃癌细胞增殖、转移中的作用及机制

目的探讨胃动蛋白2(gastrokine 2, GKN2)对胃癌细胞的生长增殖、侵袭、转移的影响及分子机制。方法利用qRT-pCR和Western blot法检测GKN2在胃癌组织中的表达;构建对照细胞株AGS-CON、SGC-7901-CON与GKN2过表达细胞株AGS-GKN2、SGC-7901-GKN2,应用qRT-pCR和Western blot法检测GKN2在各细胞株中的表达变化,RTCA系统和克隆形成实验检测细胞增殖功能,Transwell及划痕实验检测细胞迁移和侵袭功能,并通过Western blot观察GKN2表达变化对PI3K/AKT/PTEN/mTOR信号通路相关蛋白的作用。结果 GKN2在胃癌组织及多株胃癌细胞株中的表达明显低于癌旁组织和正常胃上皮细胞;RTCA系统显示GKN2过表达组的增殖活性明显低于对照组;克隆形成实验结果显示,GKN2过表达组的细胞克隆数和大小明显低于对照组;Transwell及划痕实验结果表明,GKN2过表达组纵向迁移/侵袭数和横向迁移数明显低于对照组。Western blot结果显示,GKN2过表达下调增殖相关蛋白PCNA、Survivin,抗凋亡蛋白BCL-2及转移相关蛋白MMP-7、MMP-9和MMP-2表达水平,而上调Timp2表达水平。Western blot结果亦显示,GKN2影响PI3K/AKT/PTEN/mTOR通路的激活水平,特别是明显上调PTEN的表达。结论 GKN2在胃癌组织及多株胃癌细胞株中呈低表达或表达丢失。GKN2影响胃癌细胞的增殖和转移,可能通过PI3K/AKT/PTEN/mTOR通路促进胃癌的发生、发展。

Hp感染及胃黏膜TFF1/GKN2表达与慢性胃炎OLGA/OLGIM分期的关系

目的 分析幽门螺杆菌(Hp)感染及胃黏膜三叶草因子1/胃动蛋白2(TFF1/GKN2)表达与慢性胃炎可操作的与胃癌风险联系的胃炎评估/可操作的与胃癌风险联系的肠化生评估(OLGA/OLGIM)分期的关系.方法 收集2020年1月-2021年9月海南西部中心医院收治的156例慢性胃炎患者的临床资料,根据OLGA/OLGIM分期及病变严重程度,将患者分为高分期组(Ⅲ~Ⅳ期组,74例)与低分期组(0~Ⅱ期组,82例),比较两组Hp感染及胃黏膜TFF1、GKN2表达情况,分析高分期组Hp感染与TFF1、GKN2表达的一致性,并记录两组Hp细胞毒素相关基因A(CagA)及TFF1、GKN2表达量,分析OLGA/OLGIM分期与Hp CagA、TFF1、GKN2表达量的相关性;对随访时间≥12个月的Hp感染阳性者作进一步分析,比较其随访期间Hp感染及TFF1、GKN2表达、OLGA/OLGIM分期变化.结果 高分期组Hp感染阳性率高于低分期组(P<0.05),胃黏膜TFF1及GKN2表达阳性率均低于低分期组(P<0.05);高分期组患者Hp感染阳性与胃黏膜TFF1、GKN2表达阴性具有较高一致性,Kappa系数分别为0.774、0.570;高分期组胃黏膜Hp CagA mRNA相对表达量高于低分期组(P<0.05),TFF1及GKN2 mRNA相对表达量均低于低分期组(P<0.05);Spearman秩相关分析显示,OLGA分期及OLGIM分期均与胃黏膜Hp CagA mRNA相对表达量呈正相关(r=0.439、0.425),与TFF1及GKN2 mRNA相对表达量呈负相关(r=-0.712、-0.694、-0.705、-0.687);111例Hp感染阳性者有32例获得12个月的随访,随访12个月时,患者Hp感染阳性率及OLGA分期、OLGIM分期降低(P<0.05),TFF1及GKN2表达阳性率升高(P<0.05).结论 Hp感染可增加慢性胃炎病情进展,该作用机制可能与下调胃黏膜TFF1、GKN2的表达有关,可为慢性胃炎的治疗提供新靶点.