红景天苷联合顺铂对人胃癌HGC-27细胞生物学功能的抑制研究

目的:探讨红景天苷联合顺铂通过磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)/雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路对人胃癌HGC-27细胞的生物学功能的抑制作用及其机制。方法:选取人胃癌细胞株HGC-27,随机分为空白组、红景天苷组(40μmol/L红景天苷)、顺铂组(10μmol/L顺铂)、联合组(40μmol/L红景天苷+10μmol/L顺铂)。采用四甲基噻唑蓝(MTT)实验检测细胞活力,采用流式细胞仪检测细胞凋亡率,采用划痕实验检测细胞迁移率,采用Transwell小室实验检测细胞侵袭能力,采用实时聚合酶链反应检测PI3K、Akt、mTOR mRNA表达情况,采用蛋白免疫印迹法检测PI3K、Akt、磷酸化Akt(phospho-Akt,p-Akt)、mTOR、磷酸化mTOR(phospho-mTOR,p-mTOR)、凋亡蛋白B细胞淋巴瘤因子-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-associated x protein,Bax)蛋白表达情况。结果:与空白组对比,红景天苷组、顺铂组和联合组HGC-27细胞活力,细胞迁移率,侵袭细胞数,PI3K、Akt、mTOR mRNA表达,PI3K、p-Akt、p-mTOR、Bcl-2蛋白表达水平降低;细胞凋亡率和Bax蛋白表达水平升高(P<0.05)。与红景天苷组和顺铂组对比,联合组HGC-27细胞活力,细胞迁移率,侵袭细胞数,PI3K、Akt、mTOR mRNA表达,PI3K、p-Akt、p-mTOR、Bcl-2蛋白表达水平降低;细胞凋亡率和Bax蛋白表达水平升高(P<0.05)。红景天苷组以上指标与顺铂组对比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:红景天苷对胃癌细胞HGC-27增殖、迁移和侵袭有一定的抑制作用,并能促进肿瘤细胞凋亡,联合顺铂可以提高疗效,可能是通过抑制Akt、mTOR蛋白磷酸化水平从而阻断PI3K/Akt/mTOR信号通路发挥抑制作用。

miR-186-5p靶向CXCL13基因通过Wnt/β-catenin信号调节胃癌HGC-27细胞增殖、凋亡、细胞周期、迁移和侵袭

目的探讨miR-186-5p对胃癌HGC-27细胞增殖、凋亡、细胞周期、迁移和侵袭的影响及作用机制。方法在胃癌HGC-27细胞中通过脂质体转染miR-186-5p模拟物(mimics),采用实时荧光定量PCR检测转染效果,MTT实验分析HGC-27细胞增殖水平,流式细胞术分析细胞周期变化和细胞凋亡情况,Transwell实验分析HGC-27细胞迁移和侵袭能力,生物信息学、双荧光素酶报告基因实验以及Western blotting分析miR-186-5p和CXCL13的靶向关系,Western blotting分析Wnt/β-catenin信号通路活化情况。结果体外转染miR-186-5p mimics可上调HGC-27细胞中miR-186-5p的表达。上调miR-186-5p表达能够抑制HGC-27细胞体外增殖、细胞周期进程、迁移和侵袭能力,并促进细胞凋亡。miR-186-5p可靶向抑制CXCL13的表达,上调miR-186-5p表达能够抑制β-catenin和c-Myc的表达。结论miR-186-5p可靶向抑制CXCL13的表达,阻断Wnt/β-catenin信号通路,并抑制胃癌HGC-27细胞增殖、细胞周期、迁移和侵袭,促进细胞凋亡。

3-氢化松苓酸B诱导人胃癌HGC-27细胞的程序性死亡

目的研究3-氢化松苓酸B对人胃癌细胞HGC-27程序性死亡的影响。方法 MTT法测定细胞增殖。流式细胞仪测定细胞周期及凋亡率。吖啶橙染色及透射电镜观察细胞自噬;Western blot法检测自噬相关蛋白的表达。结果 3-氢化松苓酸B对HGC-27细胞的增殖具有抑制作用,并呈明显的时间、剂量依赖性。10、20、40μmol/L 3-氢化松苓酸B处理HGC-27细胞24 h后,可将细胞阻滞于G0/G1期,但对细胞凋亡无明显影响。20μmol/L 3-氢化松苓酸B处理HGC-27细胞24 h后,透射电镜观察到大量自噬泡和自噬体,细胞自噬比例随浓度增加而显著提高;3-氢化松苓酸B促进I型微管相关蛋白1轻链3(LC3 I)向II型微管相关蛋白1轻链3(LC3 II)转化,上调肌球蛋白样B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)结合蛋白(Beclin-1)和细胞周期依赖性蛋白激酶抑制因子1A(p21)的表达,并抑制G1/S-特异性周期蛋白-D1(Cyclin D1)的表达。结论 3-氢化松苓酸B可诱导HGC-27细胞发生自噬性死亡,但是对细胞凋亡无明显影响。

银杏内酯B通过阻抑PI3K/Akt/mTOR信号通路抑制胃癌HGC-27细胞的恶性生物学行为

目的:探讨银杏内酯B(GKB)是否通过阻抑PI3K/Akt/mTOR信号通路抑制胃癌HGC-27细胞的增殖、凋亡、迁移及侵袭。方法:将HGC-27细胞分为对照、GKB低剂量(100 mg/L)、GKB高剂量(200 mg/L)、GKB高剂量(200 mg/L)+740Y-P(PI3K激活剂)、Ly294002(PI3K抑制剂)组。采用MTT、Edu、FCM、Transwell实验分别检测各组细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭能力,q PCR和WB法分别检测各组细胞中PI3KmRNA、AktmRNA、mTOR mRNA和Ki-67、caspase-3、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR蛋白的表达。构建胃癌HGC-27细胞裸鼠移植瘤模型,观察GKB对移植瘤生长的影响,WB法检测移植瘤组织中Ki-67、caspase-3、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR蛋白的表达。结果:体外实验结果表明,与对照组相比,GKB低剂量组、GKB高剂量组、Ly294002组HGC-27细胞的增殖活力及细胞增殖率、迁移和侵袭细胞数,PI3K、Akt、mTOR mRNA表达,以及Ki-67、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR蛋白表达均显著降低(均P<0.05);细胞凋亡率、caspase-3蛋白表达均显著升高(均P<0.05);740Y-P可部分逆转GKB对HGC-27细胞的抑制作用(均P<0.05)。荷瘤裸鼠实验结果显示,GKB可显著抑制HGC-27细胞裸鼠移植瘤的生长(P<0.05),且可下调PI3K/Akt/mTOR通路相关蛋白的表达。结论:GKB可通过阻抑PI3K/Akt/mTOR信号通路而抑制胃癌HGC-27细胞增殖、迁移与侵袭并促进其凋亡。

异丙酚对胃癌HGC-27细胞侵袭能力的影响

目的观察异丙酚对人胃癌HGC-27细胞侵袭能力的影响,并探讨可能的作用机制。方法体外培养HGC-27细胞,分为对照组和实验组,实验组用不同浓度(5、10、20μg/m L)异丙酚处理HGC-27细胞24 h,对照组加入等体积的培养基,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力;Western blotting检测基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、Akt、p-Akt及p-GSK-3β的表达。结果与对照组比较,异丙酚可显著降低HGC-27细胞侵袭能力;异丙酚处理后,MMP-9表达下调;异丙酚可抑制p-Akt及其下游蛋白p-GSK-3β的表达。结论异丙酚可降低人胃癌HGC-27细胞侵袭能力,其机制可能与抑制Akt通路、下调MMP-9表达有关。

Ⅱ型cGMP依赖性蛋白激酶抑制VEGFR2介导的人胃癌HGC-27细胞增殖

目的:探讨Ⅱ型c GMP依赖性蛋白激酶(typeⅡc GMP-dependent protein kinase,PKGⅡ)对血管内皮生长因子受体2(vascular endothelial growth factor receptor 2,VEGFR2)介导的人胃癌HGC-27细胞增殖的影响及其作用机制。方法:应用编码PKGⅡc DNA的腺病毒(Ad-PKGⅡ)感染HGC-27细胞,使其高表达PKGⅡ,并以特异性激动剂8-p CPTc GMP激活PKGⅡ。应用血管内皮生长因子-A(vascular endothelial growth factor A,VEGF-A)激活VEGFR2。MTT法检测细胞增殖;蛋白质印迹法检测p-VEGFR2、磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated-protein kinase B,p-PKB/p-Akt)和磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(phosphorylated-extracellular signal-regulated kinase,p-ERK1/2)表达;免疫共沉淀法检测PKGⅡ与VEGFR2的结合;免疫沉淀法联合蛋白质印迹法检测PKGⅡ对VEGFR2丝氨酸/苏氨酸(Serine/Threonine,Ser/Thr)的磷酸化作用。结果:VEGF-A可促进HGC-27细胞增殖,并诱导胞内p-VEGFR2、p-Akt和p-ERK1/2表达水平明显升高;以Ad-PKGⅡ感染HGC-27细胞使其高表达PKGⅡ并激活后,VEGF-A引起的细胞增殖受到明显抑制,pVEGFR2、p-Akt和p-ERK1/2表达水平显著降低;PKGⅡ可与VEGFR2相互作用,使后者丝氨酸/苏氨酸磷酸化。结论:激活的PKGⅡ可通过使VEGFR2发生丝氨酸/苏氨酸磷酸化抑制人胃癌HGC-27细胞的VEGFR2酪氨酸磷酸化,进而抑制其下游的增殖相关信号转导,最终抑制该细胞的增殖。

百里醌联合5-氟尿嘧啶对胃癌HGC-27细胞增殖和凋亡的影响

目的观察百里醌(TQ)联合5-氟尿嘧啶(5-Fu)诱导对胃癌HGC-27细胞发生增殖和凋亡的影响。方法于2015年9月—2017年8月在武汉大学中心实验室进行实验,以TQ 50μmol/L(TQ组)、5-Fu 75μg/ml(5-Fu组)及TQ 50μmol/L+5-Fu 75μg/ml(联合组)刺激胃癌HGC-27细胞24 h后,CCK-8检测其对增殖的影响,Hoechst染色、流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹法分析凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达。结果 CCK-8结果显示,百里醌可抑制胃癌HGC-27细胞的增殖,联合组对细胞的抑制率高于5-Fu组及TQ组(F=767.05,P<0.01)。Hoechst结果显示,联合组的凋亡率明显高于5-Fu组。流式细胞仪检测显示,对照组的凋亡率为(2.26±0.17)%,TQ组、5-Fu组及联合组的凋亡率分别为(3.76±0.44)%、(6.24±0.19)%及(9.76±0.25)%,联合组的凋亡率高于TQ组和5-Fu组(F=449.58,P<0.01)。蛋白质印迹法结果显示,联合组的促凋亡蛋白Bax表达量均较(TQ组或5-Fu组)升高(F=58.803,P<0.01),且抑凋亡蛋白Bcl-2较TQ组或5-Fu组降低(F=67.203,P<0.01)。结论百里醌联合5-氟尿嘧啶可抑制胃癌HGC-27细胞增殖并促进其凋亡,百里醌可增加胃癌HGC-27细胞对5-氟尿嘧啶的敏感性。

分离鉴定人胃癌HGC-27细胞系中的肿瘤干细胞

目的 分析人胃癌细胞系HGC-27细胞系中肿瘤干细胞相关的侧群细胞（SP细胞）的比例,分选出相关的SP细胞和非侧群细胞（NSP细胞）,检测相关的SP细胞是否具有干细胞的生物学特性。方法 制备人胃癌细胞系HGC-27细胞中细胞悬液,实验组的人胃癌细胞株中加入Hoechst 33342至终浓度为5μg/mL,对照组的人胃癌细胞株中加入Hoechst 33342后再加入维拉帕米至终浓度为50μg/mL。应用流式细胞仪分选出人胃癌细胞系HGC-27细胞中相关的SP细胞,并进行分析。采用克隆形成实验和四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法（MTT法）检测相关的SP细胞和NSP细胞增殖能力差异。利用磁珠筛选实验方法测定胃癌细胞系HGC-27细胞中肿瘤干细胞表面特异性抗体。结果 实验组HGC-27细胞中SP细胞亚群所占比例为（6.00±0.05）%,显著高于对照组的（0.10±0.01）%（P〈0.05）。选用2×10^8个对数生长期细胞,经流式细胞仪分选出SP细胞7.5×10^5个和NSP细胞8.5×10^7个。分选后经低血清培养液（2%胎牛血清）培养后,SP细胞的密度较NSP细胞低,且细胞形态也不同。培养第1~7天SP细胞的光密度值分别为0.13±0.03、0.18±0.04、0.33±0.04、0.41±0.04、0.47±0.07、0.51±0.06、0.55±0.06,NSP细胞的光密度值分别为0.13±0.02、0.16±0.04、0.20±0.04、0.24±0.03、0.28±0.05、0.30±0.06、0.31±0.07,培养第3、4、5、6、7天,SP细胞的光密度值均显著高于NSP细胞（P值均〈0.05）。磁珠筛选后经流式细胞仪检测,SP细胞和NSP细胞表面抗原CD133分别为（89.94±28.19）%、（38.22±16.45）%,SP细胞和NSP细胞表面抗原CD44分别为（86.99±23.59）%、（46.09±13.60）%。结论 人胃癌细胞系HGC-27细胞中存在相关的SP细胞,应用流式细胞仪可分选出相关的SP细胞,采用克隆形成实验和MTT法检测相关的SP细胞和NSP细胞增殖能力有差异。人胃癌细胞系HGC-27细胞中相关的SP细胞可能具有肿瘤干细胞特性。

人胃癌HGC-27细胞中过表达生物钟蛋白CRY1对细胞内cAMP生成的抑制作用

目的建立稳定过表达生物钟蛋白CRY1的人胃癌细胞系,并检测CRY1过表达对细胞内cAMP生成造成的影响。方法克隆CRY1基因,构建出过表达CRY1基因的慢病毒穿梭质粒。制备并浓缩过表达CRY1的慢病毒颗粒,用其感染人胃癌HGC-27细胞,筛选获得稳定过表达CRY1的细胞系。对过表达CRY1的细胞及未过表达的对照组细胞给予异丙肾上腺素(isoproterenol,ISO)刺激,检测两组细胞内c AMP含量的变化的差异。结果成功构建过表达生物钟蛋白CRY1的人胃癌细胞系。Real-Time RT-PCR结果显示,相对于对照组,过表达组细胞内CRY1 mRNA表达量高出约64倍。Western blotting结果显示,相对于对照组,过表达组细胞内CRY1蛋白表达量高出近4倍。在受到ISO刺激后,过表达组细胞的c AMP的生成量相对于对照组明显较少。结论在人胃癌HGC-27细胞中过表达生物钟蛋白CRY1,显著抑制了ISO刺激下细胞内cAMP的生成。

熊果酸通过下调COX-2表达降低人胃癌HGC-27细胞侵袭能力研究

目的观察熊果酸对人胃癌HGC-27细胞侵袭能力的影响,并探讨可能的作用机制。方法体外培养HGC-27细胞,分为对照组和实验组,实验组用不同浓度(15、30、60μmol/L)熊果酸处理HGC-27细胞24 h,对照组加入等体积的培养基,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力;Western blotting检测基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、环氧化酶-2(COX-2)及p-NF-κB的表达。结果与对照组比较,熊果酸可显著降低HGC-27细胞侵袭能力;经熊果酸处理后,MMP-9表达下调;熊果酸可抑制COX-2及其上游调控基因pNF-κB的表达。结论熊果酸可降低人胃癌HGC-27细胞侵袭能力,其机制可能与抑制p-NF-κB、下调COX-2表达、降低MMP-9表达有关。

索拉非尼联合二甲双胍对胃癌HGC-27细胞增殖的协同抑制作用

目的研究索拉非尼单药、二甲双胍单药及联合用药对胃癌HGC-27细胞增殖的影响,并探讨其作用机制。方法MTT法及集落形成实验检查索拉非尼单药、二甲双胍单药及两者联合用药后胃癌HGC-27细胞的增殖情况;流式细胞术检查细胞凋亡率;Western blot检查相关蛋白表达水平。结果索拉非尼单药、二甲双胍单药及两者联合用药对胃癌HGC-27细胞增殖均有抑制作用,而联合给药后两药具有协同效果。给药后胃癌HGC-27细胞形态均发生改变,呈碎片状,联合用药后细胞破碎程度增加。经以上3种药物治疗后细胞总凋亡率均升高,联合用药效果更加显著。经索拉非尼单药、二甲双胍单药及二者联合治疗处理的胃癌HGC-27细胞p-ERK表达降低,而单药作用后ERK无明显变化,联合用药ERK表达降低;索拉非尼单药和联合二甲双胍用药后Bax表达均增加;而Bcl-2在单独及联合用药情况下表达均降低。结论索拉非尼联合二甲双胍抑制肺癌细胞增殖作用加强,两者具有协同增效的作用,其机制可能与抑制ERK活化,促进细胞凋亡,抑制细胞增殖有关。

藤黄茎皮中莽吉柿素对人胃癌HGC-27细胞的作用研究

目的:探讨藤黄树茎皮中氧杂环酮类成分莽吉柿素对人胃癌HGC-27细胞的生长抑制作用及潜在的作用机制。方法:采用噻唑蓝(MTT)染色实验检测莽吉柿素对HGC-27细胞的抑制作用。采用克隆形成实验评估莽吉柿素对HGC-27细胞增殖的影响。采用Hoechst染色实验研究莽吉柿素对HGC-27细胞形态变化的影响。采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测莽吉柿素给药后与凋亡过程、Neddylation修饰途径及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路相关的蛋白表达水平变化。采用裸鼠移植瘤模型进行莽吉柿素裸鼠体内抗肿瘤药效研究。结果:莽吉柿素给药后能够抑制HGC-27细胞的增殖能力和细胞集落形成。与对照组比较,莽吉柿素显著上调HGC-27细胞多聚ADP核糖聚合酶1(PARP1)和Bax蛋白表达(P<0.001),下调抗凋亡蛋白B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)的表达(P<0.001),发挥促进胃癌细胞凋亡的作用。莽吉柿素给药后HGC-27细胞中β淀粉样蛋白前体蛋白结合蛋白1(APPBP1)、泛素样修饰激活酶3(UBA3)和泛素结合酶E2M(UBC12)蛋白及MAPK信号通路蛋白c-Jun、c-Jun氨基端激酶(JNK)和p38的磷酸化水平均显著下调(P<0.001)。进一步的体内移植瘤动物实验结果显示,莽吉柿素给药后裸鼠肿瘤体积缩小18.7%,差异具有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,莽吉柿素组裸鼠体内与肿瘤细胞增殖相关的标志蛋白Ki67阳性细胞数明显减少,肿瘤组织中棕色细胞数量明显增加。结论:藤黄树茎皮中氧杂环酮类化学成分莽吉柿素在HGC-27细胞和裸鼠上均显示良好的抗胃癌活性,其作用机制可能与抑制Neddylation修饰途径以及抑制MAPK信号通路相关。

LINC01018通过miR-297调控胃癌HGC-27细胞的增殖、凋亡及放射敏感性

目的:探讨长基因间非编码RNA(long intergene non-coding RNA,LINC)01018是否通过抑制miR-297调控胃癌HGC-27细胞的增殖、凋亡及放射敏感性。方法:收集于青海省第五人民医院接受手术的胃癌患者(21例)及化疗抵抗胃癌患者(19例)的癌组织和癌旁组织,以q PCR检测胃癌组织、化疗抵抗胃癌组织和胃癌HGC-27细胞中LINC01018、miR-297的表达。双荧光素酶报告基因实验验证LINC01018与miR-297之间的靶向关系。在HGC-27细胞中转染LINC01018过表达质粒pcDNALINC01018或miR-297抑制剂,或共转染pcDNA-LINC01018和miR-297模拟物,以qPCR检测验证细胞转染效果。MTT和克隆形成实验检测转染后HGC-27细胞的增殖活力与克隆形成能力,流式细胞术检测转染后HGC-27细胞的凋亡率,克隆形成实验检测各组转染后HGC-27细胞的放射敏感性,WB实验检测细胞中Ki67、cleaved-caspase3、pro-caspase3蛋白的表达。结果:与癌旁组织或胃正常黏膜上皮细胞GES-1相比,胃癌组织、化疗抵抗胃癌组织和胃癌HGC-27细胞中LINC01018呈低表达、miR-297呈高表达(均P<0.01)。LINC01018与miR-297存在靶向结合关系,LINC01018负向调控miR-297的表达。过表达LINC01018或敲减miR-297可抑制HGC-27细胞的增殖活力与克隆形成能力、降低细胞存活率,促进细胞的凋亡、下调Ki67和pro-caspase3蛋白表达水平、上调cleaved-caspase3蛋白表达水平、提高HGC-27细胞的放射敏感性(均P<0.01)。共转染pcDNA-LINC01018和miR-297模拟物可逆转过表达LINC01018对HGC-27细胞的所有上述作用,尤其可逆转其对HGC-27细胞的放射增敏作用(P<0.05或P<0.01)。结论:LINC01018通过下调miR-297表达抑制胃癌HGC-27细胞增殖而促进凋亡和增强细胞的放射敏感性,该作用与Ki67和caspase3的表达变化有关。

他莫昔芬对胃癌HGC-27细胞Mcl-1siRNA、miR-302a表达的影响

目的分析他莫昔芬对胃癌HGC-27细胞髓样细胞白血病-1蛋白(Mcl-1)siRNA、micorRNA-302a(miR-302a)表达的影响。方法将细胞分为对照组、他莫昔芬0、50、100、200、400μg/mL组,检测细胞增殖及凋亡情况;检测细胞中Mcl-1siRNA、miR-302a水平;检测血管内皮生长因子(VEGF)及纤维细胞生长因子b(bFGF)水平。结果随着他莫昔芬给药量增加,HGC-27细胞增殖活性显著降低(P<0.05),早期凋亡率、晚期凋亡率及总凋亡率均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);HGC-27细胞Mcl-1siRNA水平均显著降低(P<0.05),miR-302a水平均显著升高(P<0.05);HGC-27早期VEGF及bFGF水平均明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论采用他莫昔芬对胃癌HGC-27细胞干预后可有效提高细胞中miR-302a表达并降低细胞中Mcl-1siRNA水平。

芦荟大黄素对人胃癌细胞HGC-27增殖周期及凋亡的影响

目的:探讨芦荟大黄素对人胃癌细胞HGC-27细胞生长的抑制作用及其对细胞增殖周期和凋亡的影响。方法:采用甲基噻唑(MTT)比色法和生长曲线测定不同浓度芦荟大黄素在不同作用时间内对在体外培养HGC-27细胞增殖的影响,同时应用流式细胞术检测细胞增殖周期及凋亡率的变化。结果:芦荟大黄素可在G0/G1期阻滞人胃癌细胞HGC-27的增殖,使S期细胞比率降低;在一定范围内,芦荟大黄素的浓度越高、作用时间越长,对肿瘤细胞生长的抑制作用越强,凋亡率也越高。结论:芦荟大黄素能抑制人胃癌细胞HGC-27细胞生长,并诱导细胞凋亡而阻止细胞周期。

维甲酸对人胃癌细胞HGC-27增殖、细胞周期及细胞周期素依赖性激酶抑制蛋白(P16、P21、P27)表达的影响

目的 观察维甲酸 (RA)作用人胃癌细胞系GHC - 2 7后 ,细胞增殖、细胞周期及细胞周期素依赖性激酶抑制蛋白 (CKIs) (P16、P2 1、P2 7)表达的变化 ,探讨RA抑制HGC 2 7增殖 ,促进其分化的作用机制。方法 不同浓度RA作用HGC 2 7细胞后 ,MTT法检测细胞增殖情况 ,流式细胞仪检测细胞周期 ,Westermblot、Northernblot分别检测CKIs(P16、P2 1、P2 7)蛋白、mRNA水平。结果 在一定浓度范围之内 ,RA能抑制HGC 2 7细胞增殖 ,细胞周期发生G1→S期阻滞 ,并上调P2 1、P2 7的蛋白、mRNA水平 ,但对P16的蛋白、mRNA水平没有影响。结论 RA能通过上调CKIs尤其是P2 1、P2 7的表达而抑制HGC 2 7增殖 ,促进其分化。

微小RNA-4286调控肌醇多聚磷酸-4-磷酸酶Ⅰ型对胃癌细胞系HGC-27生长、迁移及侵袭的影响

目的探讨微小RNA-4286(miRNA-4286)调控肌醇多聚磷酸-4-磷酸酶Ⅰ型(INPP4A)对胃癌细胞系NGC-27生长、迁移及侵袭的影响。方法将胃癌HGC-27细胞分为空白对照组和阴性对照组、干预组,空白对照组不作任何处理,阴性对照组转染p EGFP-N1质粒,干预组转染pEGFP-N1-miRNA-4286质粒,采用Real-time PCR检测3组胃癌HGC-27细胞miRNA-4286表达量,采用Western blotting检测3组胃癌HGC-27细胞中INPP4A蛋白表达量,采用八肽胆囊收缩素(CCK8)法检测3组胃癌HGC-27细胞增殖率,采用Transwell小室侵袭实验检测3组胃癌HGC-27细胞侵袭能力,采用划痕实验检测3组胃癌HGC-27细胞迁移能力。结果干预组miRNA-4286表达量、增殖率、穿过小室膜的HGC-27细胞数明显高于空白对照组和阴性对照组(P<0.05);干预组INPP4A蛋白表达量、划痕伤口愈合间距明显低于空白对照组和阴性对照组(P<0.05);阴性对照组miRNA-4286表达量、INPP4A蛋白表达量、增殖率、穿过小室膜的HGC-27细胞数、划痕伤口愈合间距较空白对照组差异无统计学意义(P>0.05)。结论MiRNA-4286可能通过下调INPP4A表达而促进胃癌细胞系HGC-27生长、迁移及侵袭。

榄香烯脂质体对人胃癌细胞HGC-27的体内外作用的初步研究

背景与目的：近年来，许多研究表明榄香烯脂质体在临床治疗消化道肿瘤及其恶性胸腹水中应用广泛。本研究结合体内和体外实验旨在观察榄香烯脂质体对人胃癌细胞HGC-27生长的抑制作用。方法：在体外实验中，应用机器视觉一全自动活细胞观测分析系统（Cell—IQ）对不同浓度下的榄香烯脂质体进行观测，以筛选出对人胃癌HGC-27细胞产生抑制作用的最佳浓度，并通过流式细胞术分析在最佳浓度下，榄香烯脂质体对人胃癌细胞HGC-27凋亡的影响。在胃癌腹膜转移的裸鼠模型中，观察榄香烯脂质体、顺铂（cisplatin，DDP）等药物对裸鼠腹膜肿瘤指数（peritoneal cancer index，PCI）的影响，并用免疫组化检测CD31标记的肿瘤微血管密度（microvessel density，MVD）及血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）在肿瘤中的表达，以期对榄香烯脂质体抑制胃癌HGC-27细胞腹膜转移的机制进行探讨。结果：榄香烯脂质体作用于人胃癌细胞HGC-27后，Cell—IQ分析抑制作用随浓度增加，逐渐增强，以100gg／mL为最佳，榄香烯脂质体浓度再增高，其抑制肿瘤作用不再增强。最佳作用时间为4～19h。应用流式细胞术检测，100gg／mL榄香烯脂质体作用于人胃癌HGC-27细胞24h后，肿瘤细胞凋亡率为45％，对照组仅有0．019％。处理组的细胞凋亡率明显高于对照组。人胃癌腹膜转移裸鼠模型建立后给予榄香烯脂质体等药物干预，腹膜转移瘤PCI指数有明显差异，其中以联合治疗组下降明显，免疫组化检测发现CD31-MVD及VEGF蛋白表达与对照组差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：榄香烯脂质体对于人胃癌细胞有明确抑制作用，最佳质量浓度为100μg／mL，最佳作用时间为4～19h；榄香烯脂质体对人胃癌裸鼠腹腔转移有明确预防作用；榄香烯脂质体对人胃癌细胞抑制作用的主要机制可能为诱导凋亡。

DON对胃癌细胞HGC-27细胞周期和凋亡的影响

目的探讨脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON）对体外培养胃癌细胞HGC-27细胞周期和凋亡的影响。方法体外培养的胃癌细胞HGC-27经50、100、1000、2000μg／L DON处理12h、24h、48h，应用流式细胞术（FCM）进行细胞周期分析，检测凋亡情况及其量效关系，Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和Caspase-3的表达情况。结果FCM检测结果表明，较高浓度（1000和2000μg／L）DON处理对细胞周期分布的影响随处理时间不同有明显差异。DON处理12h，可明显降低G0／G1细胞百分率、增加S期细胞百分率。处理时间延长至24h和48h，则表现为G0／G1细胞百分率增加，S期细胞百分率降低（P〈0．05）。DON处理24h和48h，各DON实验组HGC-27细胞凋亡率均高于对照组，在50～2000ug／L浓度范围内，凋亡率随着DON处理浓度的升高而升高。Western blot检测凋亡相关蛋白结果显示，DoN处理12、24和48h，Bax和Caspase-3蛋白表达均明显升高，而Bcl-2蛋白表达降低。结论DON处理可影响体外培养的胃癌细胞象HGC-27细胞的细胞周期分布，其作用依DON浓度和作用时间的不同而有差异。同时DON可诱导HGC-27细胞凋亡，上调Bax和Caspase-3蛋白表达和下调Bcl-2蛋白表达可能是其诱导细胞凋亡的机制之一。

海参岩藻聚糖硫酸酯对缺氧条件下胃癌HGC-27细胞转移作用的影响

目的研究美国肉参中分离得到的岩藻聚糖硫酸酯(SC-FUC)对化学缺氧条件下人胃癌HGC-27细胞转移作用的影响。方法利用化学法建立HGC-27细胞体外缺氧培养模型。采用MTT法检测了SC-FUC对HGC-27细胞增殖活性的影响,细胞粘附实验研究了SC-FUC对肿瘤细胞粘附能力的影响,Transwell小室法观察了对HGC-27细胞迁移和侵袭能力的影响,体外小管形成和鸡胚尿囊膜实验(chorioallantoic membrane assay,CAM)观察了SC-FUC抑制血管新生的情况。结果 SC-FUC具有显著抑制HGC-27细胞增殖的活性(72和96 h的IC50值分别为170和100 g/ml);可降低肿瘤细胞同基质和血管内皮细胞间的粘附率,并抑制HGC-27细胞的侵袭和迁移能力,其72h的侵袭率和迁移率分别降低了59.73%和67.96%(P<0.05,P<0.01);能显著抑制体外内皮细胞小管形成能力,并减少体内CAM新生血管数目。结论 SC-FUC具有显著抑制缺氧诱导的HGC-27胃癌细胞转移的能力。