敲低PRDX6对利福平诱导HepG2细胞胆汁酸转运体适应性表达的影响

目的探讨敲低过氧化物还原酶-6(PRDX6)在利福平(RFP)诱导人肝癌细胞(HepG2)损伤及胆汁酸转运体适应性表达中的作用。方法将处于对数生长期的细胞均匀接种于6孔板中,使用特异PRDX6-siRNA、control-siRNA分别转染HepG2细胞构建敲低组及对照组。给予细胞100μmol/L RFP诱导24 h后,Western blot和qRT-PCR检测各组细胞PRDX6、多药耐药蛋白1(MDR1)、多药耐药相关蛋白2、3、4(MRP2、MRP3、MRP4)、Na+/牛磺胆酸协同转运蛋白(NTCP)的蛋白及基因表达水平;Annexin V-FITC/PI双染法检测各组细胞凋亡率;CCK-8法检测各组细胞增殖变化;试剂盒检测各组细胞培养上清液中细胞损伤标志物丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)、总胆汁酸(TBA)相对含量变化。结果RFP可诱导HepG2细胞MRP2、MRP3、MRP4、MDR1、NTCP及PRDX6的蛋白和基因表达水平升高(P<0.05),而敲低PRDX6后,MRP2、MRP3、MRP4、MDR1、NTCP的蛋白和基因表达水平均有不同程度的降低(P<0.05)。此外,PRDX6敲低后HepG2细胞凋亡率升高(P<0.05),细胞增殖能力下降(P<0.05),细胞培养上清液中细胞损伤标志物(ALT、AST、TBIL、DBIL、TBA)水平升高(P<0.05)。结论RFP可增加HepG2细胞胆汁酸转运体及PRDX6的蛋白和基因表达量,敲低PRDX6并用RFP诱导后胆汁酸转运体的蛋白及基因表达量降低,同时细胞损伤加重,表明PRDX6在RFP诱导的HepG2细胞适应性反应中发挥保护作用。

利福平对小鼠肝细胞胆汁酸转运体Bsep和Mrp2表达与定位的影响

目的利福平(Rifampicin,RIF)具有肝毒性,但其机制尚不清楚。本研究在RIF诱导的肝内胆汁淤积小鼠中,探讨RIF对肝细胞胆汁酸转运体胆汁酸输出泵(bile salt exportpump,Bsep)和多药抵抗相关蛋白-2(multidrug resistance-associated protein-2,Mrp2)表达和定位影响。方法 48只♀ICR小鼠随机分为4组,RIF1wk组:经灌胃给予RIF(200mg.kg-1.d-1),连续1周,于末次给药后6h取材;RIF6h组:单次灌胃给予RIF(200mg.kg-1)后6h取材;RIF1周对照组(CON1wk)与RIF6h对照组(CON6h):经灌胃给予等容积生理盐水。所有小鼠均收集血液和肝组织,常规生化检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、总胆红素(TB)和结合胆红素(DB),并检测小鼠血清和肝组织总胆汁酸(TBA)水平。HE染色分析肝组织病理改变。RT-PCR测定肝脏肝细胞胆汁酸转运体Bsep和Mrp2mRNA表达。免疫荧光法分析Bsep和Mrp2在肝细胞的位置。结果给予RIF1周后,小鼠血清TB由(1.25±0.69)μmol.L-1上升至(65.73±12.08)μmol.L-1,上升近70倍,DB由(0.77±0.40)μmol.L-1上升至(53.33±12.43)μmol.L-1,上升约80倍,ALP由(110.2±13.8)U.L-1上升至(279.5±80.4)U.L-1,上升约1.5倍,TBA由(3.15±0.89)μmol.L-1上升至(13.54±6.51)μmol.L-1,上升约5倍并伴有血清ALT和AST轻度升高;肝脏组织TBA由(0.15±0.04)μmol.g-1liver上升至(0.30±0.19)μmol.g-1liver,上升约2倍;肝脏组织HE染色显示肝细胞出现脂肪变性、轻度坏死和炎症。单次给予RIF6h后血清TB、DB、ALP、ALT、AST和TBA明显上升,但未观察到小鼠肝脏组织病理发生改变。免疫荧光分析显示,给予小鼠RIF1wk与单次给予RIF6h后肝细胞中Bsep和Mrp2的定位发生了改变。而无论单次给予RIF还是连续给药1周,肝细胞Bsep和Mrp2mRNA表达水平均未发生变化。结论肝细胞胆汁酸转运体Bsep和Mrp2定位改变可能是RIF诱发肝内胆汁淤积的重要机制。

胎盘胆汁酸转运体及核受体与妊娠期肝内胆汁酸淤积症

妊娠期肝内胆汁酸淤积症(ICP)可由多种因素引起,如雌激素过高、遗传、免疫、环境等因素,但最终结果均是胆汁酸在胎儿体循环增加了,而造成这一结果的原因可能是胎儿自身产生的胆汁酸不能有效通过胎盘转运体转运至母体代谢,也有可能是母体过多的胆汁酸经胎盘胆汁酸转运体转运至胎儿体循环,对胎儿造成不利影响。不管是哪种方式,胎盘胆汁酸转运体及其调控因子核受体在其中均起着关键作用。本文就胎盘胆汁酸转运体及其相关核受体与妊娠期肝内胆汁酸淤积的关系作一综述。

回肠Na^+/胆汁酸转运体及其抑制剂的研究进展

回肠Na+/胆汁酸转运体是位于回肠末端、特异性吸收胆汁酸的一种Na+依赖性胆汁酸联合转运蛋白。该转运蛋白结构和功能的改变会引起胆汁酸吸收异常 ,进而影响到胆固醇和脂类的吸收。对该转运体及其抑制剂的研究 ,是寻找具有新作用机制降胆固醇药的一条有效途径 。

胎盘胆汁酸转运体及核受体与妊娠期肝内胆汁淤积症的研究进展

妊娠期肝内胆汁淤积症病因及发病机制尚不明确,但最终都会导致胆汁酸淤积,对胎儿产生直接或间接的毒害作用。国内外研究已经证实肝内胆汁淤积与肝脏中胆汁酸核受体、转运体相关。近年来不断发现了胆汁酸核受体、转运体在妊娠期肝内胆汁淤积症胎盘中的表达,并且推测它们在胎盘内胆汁酸的转运中发挥着关键作用。本文对胎盘胆汁酸转运体及核受体与妊娠期肝内胆汁淤积症的研究进展进行综述。

大鼠肝脏缺血再灌注损伤后胆汁酸转运体Bsep与Mrp2的表达及意义

目的探讨大鼠肝缺血再灌注损伤(I/R)后高胆红素血症发生的分子机制。方法 60只健康雄性SD大鼠随机分成两组,A组为对照组,只解剖第一肝门,不行肝门阻断,B组为缺血再灌注后,阻断第一肝门30 min后开放。于术后的1h、6 h、12 h、1 d、3 d开腹,每个预定时相点取5只大鼠进行取材和指标检测,应用全自动生化分析仪检测血清TBA、DBIL、ALT的含量,应用HE染色方法检测各组肝组织病理学改变,应用免疫组织化SP(Streptavidin-perosidase)法和实时定量逆转录-聚合酶链反应(Real time Reverse Transcriptase-PCR)技术,检测各组大鼠肝组织中的Bsep与Mrp2蛋白和mRNA表达情况。结果鼠肝缺血30 min再灌注模型肝组织呈轻度炎症改变,各时相点均未见肝细胞坏死的发生。B组大鼠缺血再灌注后1 h^1 d血清中TBA、DBIL、ALT的含量明显增加,具有统计学意义(P<0.05)。B组大鼠缺血再灌注后1 h^1 d胆汁酸转运体BsepmRNA表达水平明显下调(P<0.05),同时Bsep蛋白在肝细胞膜上染色不规则、稀疏,蛋白质的表达减少,胞浆内未见表达;再灌注后1 h^12 h,Mrp2 mRNA表达水平下调(P<0.05),再灌注后1 d,Mrp2 mRNA表达水平恢复正常,而再灌注后的1 h^1 d,Mrp2蛋白在肝细胞膜上染色稀疏、散乱,表达减少,并可见胞浆内表达。结论大鼠缺血再灌注损伤(I/R)后肝脏组织中Bsep表达下调和Mrp2定位改变可能是鼠肝缺血再灌注损伤后高胆红素血症发生的重要机制。

回肠Na^+/胆汁酸转运体与高脂血症关系的研究

目的:探讨回肠Na+/胆汁酸性转运体(IBAT)基因表达与高脂血症形成的相关性。方法:取Wistar雄性大鼠60只随机分为2组:普通饮食组(对照组)、高脂饮食组(实验组)。喂养13周后分别提取对照组和实验组Wistar大鼠的空肠末端、回肠末端、盲肠、结肠近端组织,应用RT-PCR和免疫SP法分别检测2组模型Wistar大鼠的空肠末端、回肠末端、盲肠、结肠近端组织的IBAT基因表达强度;对所得结果进行统计分析。结果:IBAT基因表达:结肠近端在对照组和实验组均无表达,空肠末端、回肠末端、盲肠表达实验组强于对照组(P<0.05)。结论:实验组的IBAT表达升高,引起体内胆酸池增大和肝内胆固醇含量升高,从而引起血清胆固醇增加,加速高脂血症的形成。

一项关于回肠胆汁酸转运体抑制剂GSK2330672对原发性胆汁性胆管炎瘙痒症状影响的Ⅱa期随机、双盲、安慰剂对照、交叉研究

【据《Lancet》2017年2月报道】题：一项关于回肠胆汁酸转运体抑制剂GSK2330672对原发性胆汁性胆管炎瘙痒症状影响的Ⅱa期随机、双盲、安慰剂对照、交叉研究（作者Vinod SH等）高达70%的原发性胆汁性胆管炎（PBC）患者在病程中会出现瘙痒症状,而对其治疗又非常困难,熊去氧胆酸（UDCA）是治疗PBC的标准一线药物,但对瘙痒无效,因此临床上迫切需要新的治疗方法。回肠胆汁酸转运体（IBAT）抑制剂可阻断胆汁酸肠肝循环,但目前尚无临床研究评估其对PBC瘙痒症的影响。

回肠Na^+/胆汁酸转运体(IBAT)及相关疾病

随着人们生活水平的提高和饮食习惯的改变,脂质代谢紊乱及相关性疾病呈现明显的上升趋势。胆汁酸循环在胆固醇代谢中扮演着非常重要的角色。而回肠末端的主动转运过程也是胆汁酸主要成分牛磺酸结合胆酸的唯一吸收方式。本文就回肠Na^＋／胆汁酸转运体（iled bile acid transporter，mAT）与相关疾病的研究作一综述。

敲减MANF对利福平诱导的HepG2细胞中胆汁酸转运体适应性表达的影响

目的 探讨中脑胶质细胞神经营养因子(MANF)在利福平(RFP)诱导的人肝癌细胞(HepG2)胆汁酸转运体的适应性表达中的作用。方法 使用慢病毒稳转构建对照组细胞株(Y07)和敲减组细胞株(Y25),于对数生长期的Y07和Y25细胞中加入RFP 200μmol/L处理48 h。利用qRT-PCR和Western blot检测MANF、胆盐输出泵(BSEP)、多药耐药相关蛋白2/3/4(MRP2、MRP3、MRP4)、多药耐药蛋白1(MDR1)、有机溶质转运体a/β(OSTα/β)、有机阴离子转运蛋白(OATP2B1)的蛋白和基因表达程度。检测增殖细胞核抗原(PCNA)、增殖细胞标志物Ki67蛋白和基因表达程度评价各组细胞增殖水平变化;检测C/EBP同源蛋白(CHOP)、天冬氨酸半胱氨酸特异性蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白和基因表达程度变化评估各组细胞凋亡情况。用试剂盒检测各组细胞培养液上清中的损伤标志物丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)、总胆汁酸(TBA)的水平。结果 在蛋白和基因水平,RFP可诱导HepG2细胞的MANF、BSEP、MRP2、MRP3、MRP4、MDR1、OSTα、OSTβ、OATP2B1的上升(P<0.05),而MANF敲减后BSEP、MRP2、MRP3、MRP4、MDR1、OSTα、OSTβ、OATP2B1的蛋白和基因表达水平均下降(P<0.05)。在RFP作用下,敲减MANF后PCNA、Ki67的蛋白表达相对较高,CHOP、Caspase-3蛋白和基因表达上升(P<0.05),肝细胞损伤标志物水平上升(P<0.05)。结论 RFP可诱导HepG2细胞胆汁酸转运体的表达上升(P<0.05),而敲减MANF后的HepG2在RFP诱导下胆汁酸转运体的表达会明显下降(P<0.05),同时细胞损伤加重,提示MANF在RFP诱导的适应性反应中起保护作用。

肠道顶端钠离子/胆汁酸转运体及其相关疾病研究进展

胆汁酸在脂类的消化、吸收中起十分重要的作用。顶端钠离子/胆汁酸转运体(ASBT)位于回肠刷状缘侧,发挥重吸收胆汁酸的作用,对于维持机体胆汁酸稳态具有重要意义。近年来,关于ASBT的表达调控及其与肠道炎症、肿瘤、肠道分泌、运动和感觉功能、肠道微生态、肠-肝轴等关系的研究提示其在一些消化道疾病中发挥重要作用,有望成为这些疾病新的治疗靶点。本文就相关研究进展作一综述。

顶端钠离子依赖性胆汁酸转运体在小肠癌组织中的表达及其意义

目的:研究顶端钠离子依赖性胆汁酸转运体(ASBT)在小肠癌组织中的表达,探讨其在小肠癌发生中可能的意义。方法:采用免疫组织化学显色和蛋白印迹检测ASBT在人小肠腺癌、黏液腺癌、小细胞癌及其癌旁正常组织中的表达。结果:ASBT在癌旁正常小肠组织主要表达于小肠吸收细胞游离面的胞膜;在小肠癌中,ASBT表达明显下调,在小肠黏液腺癌和小细胞癌还可见ASBT的细胞核异位表达。结论:ASBT在小肠癌组织中表达下调和异位表达提示编码ASBT的基因第10溶质转运蛋白家族第2成员(SLC10A2)可能作为一种新的抑癌基因在小肠癌的发生过程中起重要作用。

胎盘胆汁酸转运体及核受体与妊娠期肝内胆汁淤积症研究进展

妊娠期肝内胆汁淤积症是妊娠期中晚期特有的一种并发症,该病发生后患者通常会出现皮肤瘙痒症状,同时还可见转氨酶水平、血清总胆汁酸水平异常升高现象,容易诱发多种不良妊娠结局,对于围产儿安全影响较大。导致妊娠期肝内胆汁淤积症发生的原因较多,随着研究的深入,临床上逐渐认识到胎盘胆汁酸转运体及其核受体在该病发生发展中发挥着较为重要的作用。为此,本文就胎盘胆汁酸转运体及核受体与妊娠期肝内胆汁淤积症的研究展开综述。

内毒素对小鼠胆汁酸转运体Ntcp mRNA和Bsep mRNA表达及肝功能的影响

目的探讨脂多糖（LPS）建立内毒素血症小鼠模型中，LPS剂量和作用时间对肝脏胆汁酸转运体钠离子／牛磺胆酸共转运蛋白（Ntcp）和胆盐输出泵（Bsep）mRNA表达，以及肝功能的影响。方法128只雄性C57BL／6小鼠，腹腔注射LPS（剂量分别是5、10、20、40mg／kg），制作内毒素血症模型；并设生理盐水（NS）对照组、健康对照组；按给药后取材时间进一步分为24h、48h、72h组，每组8只。留取小鼠血液样本测定血清TBIL、TBA、ALT、AST水平，留取肝脏标本，实时荧光定量聚合酶链反应技术（RT-qPCR）测胆汁酸转运体NtcpmRNA和BsepmRNA表达量，苏木精．伊红（HE）染色观察肝组织病理学变化。各组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验进行统计。结果（1）内毒素血症各组小鼠NtcpmRNA、BsepmRNA相对表达量在24—72h内下降，24h表达最低[LPS5、10、20、40ms／kg组NtcpmRNA相对表达量分别为（0．64±0．02）、（O．53±0．14）、（0．25±0．09）、（0．15±0．07），BsepmRNA相对表达量分别为（0．74±0．12）、（0．58±0．11）、（0．41±0．09）、（0．27±0．11）]，并随着LPS剂量增加逐渐降低，24h各组差异均有统计学意义（NtcpmRNA、BsepmRNA对应F=5．29、F=9．31，P=0．04、P=0．02）。（2）内毒素血症小鼠各组总胆红素（TBIL）、总胆汁酸（TBA）、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）较对照组均升高（P〈0．05），24h达峰值；其中40mg／kgLPS处理后72h较24h均有显著降低，TBIL浓度为（1．29±0．25）μmol／L和（1．71±0．22）μmol／L，TBA浓度为（6．97±0．98）μmol／L和（8．96±1．01）μmol／L，ALT水平为（120．17±21．08）u／L和（179．22±16．57）U／L，AST水平为（360．34±35．31）U／L和（510．97±34．70）U／L，均P〈0．05。（3）5、10ms／kgLPS组小鼠24h见肝组织疏松淡染，间质炎性细胞浸润，48h及72h见肝细胞嗜酸性变、空泡样变，炎性细胞浸润，胆小管增生；20、40mg／kgLPS组小鼠各时间点均见肝组织结构改变，灶性坏死，间质炎症细胞浸润，胆小管增生、扩张。结论内毒素血症肝损伤模型24h时即出现NtcpmRNA和BsepmRNA表达下调，且随LPS剂量增加而加重，可能是内毒素肝损伤的重要机制。

顶端Na^+依赖性胆汁酸转运体相关研究进展

胆汁酸是体内维持脂质代谢稳态的关键物质,而位于回肠末端黏膜上皮细胞刷状缘侧的顶端Na^+依赖性胆汁酸转运体(ASBT)是在肝肠循环中负责胆汁肠道重吸收的关键转运体,对于维持机体代谢平衡具有重要意义。近年来,随着关于ASBT调控相关机制研究的不断深入以及其在肠道炎症、肠道肿瘤、糖尿病、高脂血症等疾病治疗中发挥的重要作用被不断挖掘,使其有望成为上述疾病治疗的新靶点。本文将综述ASBT表达调控及其在疾病治疗方面的相关研究进展。

有机溶质转运体α-β在胆汁酸代谢及胆汁淤积症中的作用

过去20多年的研究发现了数个在胆汁酸肠肝循环中重要的转运体，包括肝细胞摄取胆汁酸的钠离子一牛磺胆酸共转运多肽（Na—Tauroeholate Co—transporting Polypeptide，NTCP），肝细胞输出胆汁酸的胆盐输出泵（Bile Salt Export Pump，BSEP）及回肠顶端膜刷状缘吸收胆汁酸的顶膜钠离子依赖性胆汁酸转运体（Apical Sodium—dependent Bile acid Transporter，ASBT）。

岩黄连对急性肝内胆汁淤积大鼠的干预作用及胆汁酸转运体表达的影响

目的:观察岩黄连对α-萘基异硫氰酸酯(ANIT)诱导的大鼠急性肝内胆汁淤积的防治作用及其可能作用机制。方法:32只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型组、岩黄连组、熊去氧胆酸组,分别给予相应药物灌胃,连续7d。造模大鼠于第5天进行ANIT灌胃,诱导急性肝内胆汁淤积模型。HE染色法观察大鼠肝组织病理形态;检测血清肝功能指标;Western blot检测大鼠肝组织胆汁酸转运体MRP2、MRP4、BSEP、NTCP蛋白表达。结果:岩黄连能够减轻模型大鼠肝组织汇管区小叶间胆管增生及炎性细胞浸润,改善肝功能指标(P<0.01,P<0.05),增加模型大鼠肝组织胆汁酸转运体BSEP、NTCP蛋白表达(P<0.01)。结论:岩黄连有效防治ANIT诱导的大鼠急性肝内胆汁淤积,其机制可能与增加肝脏胆汁酸转运体BSEP、NTCP蛋白表达有关。

胆汁酸转运体与相关疾病及药物研发进展

胆汁酸(bile acids, BAs)是胆汁的主要成分之一,在人体的脂肪代谢过程中起到重要作用。人体中95%的胆汁酸中通过肠肝循环而维持,在肠肝循环过程中,存在4个主要介导胆汁酸进行跨膜转运的转运体,每一个转运体都发挥着不可或缺的作用。已有病例报道,胆汁酸转运体的基因缺陷会导致肠肝循环被破坏,引发严重的代谢性疾病,甚至威胁到患者生存。另一方面,代谢性疾病状态下的患者胆汁酸转运体表达也会发生改变,这提示胆汁酸转运体的改变或许是某些代谢性疾病发生的重要病理机制。因此,以胆汁酸转运体为靶点的新药研发正在成为研究热点。本综述探讨了不同胆汁酸转运体与疾病发生的关系,并对胆汁酸转运体靶点药物研发的最新进展进行总结,为后续针对胆汁酸转运体的研究提供指导。

袖状胃切除术对肥胖型2型糖尿病大鼠末端回肠胆汁酸转运体表达的影响

目的探讨袖状胃切除术(sleeve gastrectomy,SG)对肥胖型2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)大鼠末端回肠顶端钠依懒性胆盐转运体(apical sodium-dependent bile acidtransporter,ASBT)、回肠胆汁酸结合蛋白(ileum bile acid binding protein,IBABP)表达的影响。方法30只8周龄雄性SD大鼠,按随机数字表法分为O组(手术组)、F组(假手术组)、N组(正常对照组),每组大鼠各10只。3组大鼠饲养于SPF级动物房,不限饮水量,其中O组与F组予以高糖高脂饲料,N组普通饲料喂养。术前及术后1、2、4周测定各组大鼠体重、血糖及血浆总胆汁酸水平,术后4周处死实验动物,取末端回肠组织,应用Westernblot、免疫组化分别对ASBT、IABAP两种胆汁酸转运体进行检测。结果术后4周O组血糖较F组明显降低,分别为(5.8±1.77)、(19.55±2.16)mmol/L,(F值为2.96,P<0.05);术后4周O组体重较F组下降明显,分别为(182±10.66)、(362±23.54)g,(F值为1455,P<0.05);术后4周血浆总胆汁酸水平O组明显高于F组、N组,分别为(52±18.48)、(6.39±1.18)、(5.89±1.21)μmol/L,(F值为3.63,P<0.05);术后4周O组末端回肠的ASBT、IBABP表达均增高,F组与N组无明显变化。结论SG术对肥胖型T2DM大鼠降糖及减重效果确切。SG术后大鼠血浆胆汁酸水平升高,大鼠末端回肠胆汁酸转运体表达的增加是其机制之一。