部分胆管结扎致胆汁淤积小鼠模型的构建方法学研究

目的 观察不同结扎位点和禁食方法对部分胆管结扎(partial bile duct ligation, pBDL)致胆汁淤积C57BL/6J小鼠模型的影响,研究成模率高、症状典型、稳定性好的pBDL造模方法。方法 分别采用选择性结扎左肝胆管(L-pBDL法)和左侧与正中胆管汇合处(ML-pBDL法)进行造模,观察不同pBDL结扎法对C57BL/6J小鼠血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)、总胆红素、总胆汁酸和肝组织病理学的影响。同时,通过术前分别禁食12 h和禁食16 h、术后均禁食禁水4 h,观察不同禁食方法对ML-pBDL模型体症和肝损伤的影响。结果 (1)ML-pBDL组黄疸出现率52.94%、术后3周内存活率64.71%,而L-pBDL组黄疸出现率11.76%、术后3周内存活率82.35%;与假手术组比较,L-pBDL组和ML-pBDL组血清肝功能指标均显著升高(P<0.01),且ML-pBDL组ALP活性明显高于L-pBDL组(P<0.05);相对于L-pBDL组,ML-pBDL组术后3周的肝纤维化更严重(P<0.01);(2)禁食16 h组黄疸出现率93.33%、术后3周内存活率73.77%,而禁食12 h组黄疸出现率42.86%、术后3周内存活率71.42%;与假手术组比较,禁食16 h组和禁食12 h组ALP活性、谷草转氨酶/谷草转氨酶比值、总胆汁酸水平与胶原纤维面积占比均显著升高(P<0.05)。禁食16 h组各观察指标均高于禁食12 h组,但无显著性差异(P>0.05),禁食12 h和禁食16 h组均出现明显的胆管增生与肝纤维化(P<0.01),且禁食16 h组纤维化更严重(P<0.01)。结论 L-pBDL和ML-pBDL结扎法均可建立小鼠胆汁淤积模型,但L-pBDL模型症状仅表现为一过性的损伤特征,而ML-pBDL模型的肝病变典型、症状稳定,且适当延长术前禁食时间可提高ML-pBDL模型的成模率和稳定性,且病理症状更典型。

胆管结扎对大鼠血脑屏障上OCT1/2功能和表达的影响及其机制

探讨胆管结扎(BDL)诱导的肝损伤对血脑屏障(BBB)上有机阳离子转运体1/2(OCT1/2)功能和表达的影响及其可能机制。构建BDL大鼠模型,通过试剂盒、Western blot和LC-MS考察BDL大鼠生理生化指标、BBB完整性、皮层OCT1/2蛋白表达和功能以及血浆鹅去氧胆酸(CDCA)浓度。连续14 d灌胃CDCA后测定大鼠生理生化指标、血浆各胆汁酸浓度和皮层OCT1/2蛋白表达。结果显示,BDL大鼠血清天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)和碱性磷酸酶(ALP)等浓度升高,血浆CDCA浓度升高,金刚烷胺脑血浓度比值(K_(p))降低,皮层Claudin-5和Occludin无明显变化,OCT1表达下调,OCT2无明显变化。大鼠灌胃CDCA后,血清AST、ALT和ALP无明显变化,血浆CDCA浓度升高,皮层OCT1表达下调,OCT2无明显变化。本研究表明,BDL大鼠BBB上OCT1功能与表达下调与血液中升高的CDCA有关。

茵栀黄颗粒对胆管结扎大鼠肝细胞膜转运体Mrp2、Ntcp及Bsep表达的影响

目的通过考察茵栀黄颗粒(茵陈、栀子、金银花和黄芩)对肝细胞膜转运体多药耐药相关蛋白2(Multidrugresistance-associated protein 2,Mrp2/ABCC2)、Na+-牛黄胆酸共转运多肽(Na+/taurocholate cotransporter,Ntcp/SLC10A1)及胆盐输出泵(Bile salt export pump,Bsep/ABCB11)表达的影响。方法胆管结扎术制备胆汁淤积大鼠模型;生化检测和HE染色,观察茵栀黄颗粒的干预效果;流式细胞仪测定肝脏转运体Ntcp、Bsep和Mrp2的表达。结果与模型组相比,茵栀黄组肝细胞的脂肪病变和水肿较模型组显著减轻(P<0.05),Mrp2的表达显著升高(P<0.01);但Ntcp、Bsep的表达无明显变化。结论肝细胞膜转运体Mrp2的表达升高可能是茵栀黄颗粒的退黄利胆分子机制之一。

腹腔持续注射血管紧张素-(1-7)对胆管结扎大鼠肝纤维化的抑制作用

目的探讨血管紧张素(1-7)[Ang-(1-7)]对胆管结扎(BDL)大鼠肝纤维化的抑制作用。方法 18只Wister雄性大鼠随机分为假手术(SHAME组)组,BDL组和Ang-(1-7)治疗组。假手术组:行开腹术再关腹,在腹腔埋注射泵,以25μg.kg-1.h-1的速度持续注射生理盐水;BDL组:开腹结扎胆总管建立肝纤维化模型,在腹腔埋注射泵,以25μg.kg-1.h-1的速度持续注射生理盐水;Ang-(1-7)治疗组:BDL建立肝纤维化模型,同时在腹腔埋注射泵,以25μg.kg-1.h-1的速度持续注射Ang-(1-7)。4周后宰杀动物、取肝组织,行Masson胶原染色,肝纤维化评分,测定羟脯氨酸含量,免疫组织化学检测α-肌动蛋白(α-SMA)的表达。结果与BDL组相比,Ang-(1-7)治疗组肝纤维化评分(2.33±0.52 vs 5.17±0.75)、胶原面积(23.71±3.43 vs 89.77±9.92)、羟脯氨酸含量(0.36±0.03 vs 0.52±0.04)、α-SMA的表达(54.11±17.55 vs 191.84±31.72)均减少,有统计学意义(P<0.01)。结论Ang-(1-7)对胆总管结扎所致的肝纤维化具有抑制作用。

狗总胆管结扎所致肝硬化门脉高压症的肝脏血流动力学改变

本实验通过自身对照研究探讨狗总胆管结扎(CBDL)所致肝硬化门脉高压症的肝脏血流动力学的特征,结果表明:狗总胆管结扎后门静脉压力、嵌塞肝静脉压力、门-腔静脉压力梯度均较结扎前明显增加,门静脉血流量明显减少,而肝动脉血流量明显增加。门静脉血管阻力明显增加,而肝动脉血管阻力明显降低。肝脏组织学检查显示为完全和(或)不完全分隔型纤维间隔形成。上述改变与人类肝硬化门脉高压所见者一致。

四氯化碳、酒精与四氯化碳联合、胆管结扎致SD大鼠肝纤维化病理学比较

目的研究四氯化碳、酒精与四氯化碳联合、胆管结扎致SD大鼠肝纤维化模型肝脏的病理学改变,初步探讨肝纤维化发病机制。方法四氯化碳组SD大鼠以3 mg/kg的剂量(首次剂量加倍)皮下注射50%四氯化碳(四氯化碳∶橄榄油=1∶1),每周2次,连续注射6周;酒精与四氯化碳联合组SD大鼠每日按照10 mL/kg剂量灌服酒精混合物(酒精∶吡唑∶玉米油=10 mL∶25 mg∶2 mL),同时每周2次按0.3 mL/kg剂量给予腹腔注射四氯化碳∶橄榄油(1∶3),连续造模60 d;胆管结扎组大鼠按10 mg/kg体重腹腔注射3%戊巴比妥钠麻醉,腹部皮肤消毒,无菌操作沿腹部正中线剪开腹腔,分离出胆管,在胆管近端和远端2处结扎胆管,28 d后结束实验。试验结束后麻醉动物,解剖取动物肝脏组织,用10%福尔马林固定,进行病理学检查。结果四氯化碳致SD大鼠肝纤维化模型表现为弥漫性脂肪肝、肝炎、肝纤维化;酒精与四氯化碳联合致SD大鼠肝纤维化模型表现为酒精性脂肪肝、肝炎、肝纤维化;胆管结扎致SD大鼠肝纤维化模型表现为胆管增生、肝炎、肝纤维化。结论这3种方法都可以引起大鼠肝脏发生纤维化,其中胆管结扎致SD大鼠肝纤维化造模方法适合于临床胆汁淤积所致肝纤维化的模型建立,其它两种方法适合于化学性、病毒性肝炎引起的肝纤维化模型的建立,可根据不同的实验目的选择不同的方法构建相应的动物模型。

胆管结扎对大鼠肠道双歧杆菌组成的影响

目的分析胆管结扎对SD大鼠肠道双歧杆菌菌群结构组成的影响。方法采集手术前3 d和手术后2周5只模型组和5只对照组大鼠的粪便样品,提取粪便样品中微生物的混合DNA进行双歧杆菌类群特异性PCR-DGGE,结合主成分分析技术比较2组大鼠在手术前后肠道内双歧杆菌结构组成的变化。结果DGGE图谱及其主成分分析表明手术后对照组和模型组大鼠肠道双歧杆菌菌群的结构组成明显不同,主要表现在假长双歧杆菌的数量在模型组显著增加,而动物双歧杆菌却明显减少。结论胆管结扎导致SD大鼠肠道双歧杆菌结构发生异常变化。

胆管上皮细胞增生在胆管结扎大鼠胆汁性肝纤维化形成中的作用

目的研究胆管上皮细胞(biliary epitheliac ells,BECs)增生在胆管结扎(bile duct ligation,BDL)大鼠胆汁性肝纤维化形成中的作用。方法BDL的方法制作大鼠胆汁性肝纤维化模型,5周后杀鼠取材,观察内容包括大鼠血清总胆红素(TBlL)、总胆汁酸(TBA),肝组织羟脯氨酸(Hyp)含量,组织病理学,免疫组织化学观测Ⅰ型胶原(ColI)、IV型胶原(ColIV)、层粘蛋白(LN)、纤连蛋白(FN)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA);肝组织片激光显微切割(LCM)获取BECs,实时荧光定量PCR检测BECs表达Procollagenα1(Ⅳ)、血小板衍生生长因子B(PDGF-B)、结缔组织生长因子(CTGF)及转化生长因子β1(TGF-β1)mRNA。结果1、胆管结扎模型大鼠血清TBiL和TBA含量均值分别为假手术组大鼠的22倍和3倍(P<0.01);模型组大鼠肝组织Hyp含量是假手术组的4倍(P<0.01);2、模型组大鼠BECs增生非常显著,肝实质细胞比例显著减少;3、模型组大鼠在增生胆管周围的LM表达显著增加;FN不但在肝窦内有阳性染色,还强烈地表达于增生的胆管周围;肝窦壁的ColI阳性染色增强,增殖的BECs周围未见明显阳性染色;肝窦壁ColⅣ表达未见明显变化,但强烈表达于增殖的BECs周围的基底膜上;α-SMA阳性染色见于汇管区周围的肌成纤维细胞上,且这些肌成纤维细胞常常围绕在增生的胆管上皮细胞周围。4、模型组大鼠BECs的Procol α1(Ⅳ)、PDGF-B、TGF-β1及CTGF的mRNA表达量均显著增加(与假手术组比较,均为P<0.001)。结论BECs增生是BDL大鼠胆汁性肝纤维化的启动因素和中心病理环节,抑制胆管上皮细胞的异常增生及其细胞生物学病理变化应是抗胆汁性肝纤维化治疗学研究的主要目标。

秋水仙碱对大鼠胆管结扎所致胆汁淤积模型肝损伤的影响

考察秋水仙碱对大鼠胆管结扎所致胆汁淤积模型肝损伤的干预作用。采用胆总管结扎建立大鼠胆汁淤积模型,模型动物分别灌胃秋水仙碱0.12和0.24 mg/kg,连续7 d。通过血清生化指标、肝脏髓过氧化物酶(MPO)活力及肝脏组织病理学检查来评价秋水仙碱的作用。结果显示,秋水仙碱可显著降低模型动物血清ALP、γ-GTP、TBA水平。秋水仙碱高、低剂量组对肝脏MPO活力均有显著抑制作用,同时可明显改善肝脏的组织病理学改变。实验结果表明,小剂量的秋水仙碱(≤0.24 mg/kg)对于大鼠胆管结扎所致的胆管损伤具有明显的改善作用,而抑制炎性细胞活化和浸润可能是其重要的作用机制。

茵陈四苓散防治胆管结扎大鼠肝纤维化的实验研究

目的研究茵陈四苓散有效干预大鼠胆汁淤积性肝纤维化的作用机制。方法以胆管结扎的方法制备大鼠胆汁淤积性肝纤维化模型,造模1周后随机分为模型组和药物干预组,药物干预组经口灌胃分别给予茵陈四苓散和熊去氧胆酸,模型组给予等量生理盐水,用药4周后杀鼠取材进行观测。结果茵陈四苓散组小胆管增生较模型组明显减少,剩余肝细胞量较多;茵陈四苓散可明显降低肝组织羟脯氨酸含量;胆汁性肝纤维化程度评分结果显示,与模型组有显著差异;免疫组化检测结果显示,茵陈四苓散组胶原(Ⅳ型)和糖蛋白(FN)的表达明显减弱;图像分析结果显示,其阳性面积比也有明显差异。结论茵陈四苓散抑制胆管上皮细胞增殖,抑制增殖的胆管上皮细胞基底膜上细胞外基质的沉积,是其有效干预胆汁淤积性肝纤维化的重要机制之一。

肝细胞生长因子基因治疗减轻胆管结扎肝纤维化的实验研究

目的:验证肝细胞生长因子(HGF)基因治疗在胆管结扎肝纤维化中的保护作用。方法:用雄性CD-1小鼠,随机分为3组。正常对照组仅解剖肝门分离胆总管,不作胆管结扎;胆管结扎的2组,分别给予HGF质粒(pCMV-HGF,1μg/g)和空质粒(pcDNA3),每2周1次。3个月后将小鼠处死,评价肝纤维化程度。结果:肝细胞生长因子基因治疗能显著减少胆管周围胶原的沉积,表现在:肝胶原染色(Masson-Trichrome染色)减少;胆管周围Ⅰ型和Ⅲ型胶原的免疫荧光染色减少。和空质粒组相比,HGF治疗组肝组织羟脯氨酸的含量显著降低(两组分别为0.48±0.04μg/mgvs1.37±0.06μg/mg,P<0.05);肝纤维母细胞的激活减少——表现为肝组织中α-SMA的表达减少(两组分别为0.32±0.05vs.0.84±0.14,P<0.05);TGF-β1的表达减少(两组分别为0.69±0.11vs.1.31±0.23,P(0.01)。结论:在胆管结扎肝纤维化中,肝细胞生长因子基因治疗能减轻肝纤维化的程度,肝细胞生长因子可用于肝纤维化的治疗。

肾神经对胆管结扎大鼠钠代谢的作用

将动物分成４组：假手术（ＳＯ）组；单纯肾神经去除（ＤＮＸ）组；单纯胆管结扎（ＣＢＤＬ）组以及ＣＢＤＬ＋ＤＮＸ组。术后１６天，观察各组血浆肾素活性（ＰＲＡ）及肾对钠代谢的作用。结果发现，与ＳＯ组相比，ＤＮＸ组各指标无显著变化，ＣＢＤＬ鼠ＰＲＡ显著升高，ＣＢＤＬ组钠代谢呈显著正平衡（６７．２±２４．３％），显著高于其它组（Ｐ＜０．００１），而ＣＢＤＬ＋ＤＮＸ鼠钠代谢无显著变化。这些结果提示肾神经在胆管结扎鼠钠潴留中发挥重要作用。

逆转素对胆管结扎诱导大鼠肝损害的影响

目的探究小分子化合物逆转素(reversine,Rev)对胆管结扎(BDL)诱导的大鼠胆汁淤积性肝损害、纤维化、上皮细胞-间充质转化以及胆管反应的影响。方法雄性Lewis大鼠随机分成三组,每组各5只。按照如下处理:BDL组大鼠行2周的胆管结扎;BDL+Rev组行胆管结扎同时给予腹腔注射逆转素;对照采用假手术(Sham)。2周后获取血液和肝组织。血指标检测总白蛋白(TP)、总胆红素(TBIL)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、γ谷氨酰转肽酶(GGT)。H&E染色检测肝组织病理。Azan染色检测组织胶原蛋白。免疫组化检测肝组织α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、结蛋白(Desmin)、波形蛋白(Vimentin)、细胞角蛋白(CK7,CK19)、β-连环蛋白(β-Catenin)以及上皮细胞粘附分子(EpCAM)蛋白的表达情况。结果胆管结扎导致肝脏合成的总白蛋白量下降,总胆红素(TBIL)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、γ谷氨酰转肽酶(GGT)水平明显上升,逆转素处理使下降的总白蛋白上升,使上升的总胆红素(TBIL)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、γ谷氨酰转肽酶(GGT)水平向正常水平回复。逆转素可以缓解胆汁淤积引起的肝纤维化,表现为下调BDL引起的胶原蛋白和α-SMA蛋白沉积。逆转素可以抑制胆汁淤积引起的上皮细胞-间充质转化表现为逆转素明显降低BDL导致的Desmin和Vimentin的表达。逆转素可以抑制胆汁淤积引起的胆管反应表现为明显减少CK7和CK19阳性胆管的表达含量。逆转素抑制胆汁淤积引起的胆管反应与调节β-Catenin和EpCAM的表达有关。结论逆转素可以缓解胆汁淤积引起的大鼠肝损害,具有一定的保护作用。逆转素可以成为一种潜在治疗药物。

胆管结扎诱导大鼠肝纤维化模型的建立

肝纤维化是各种致病因素长期刺激肝脏引起炎症而形成的肝损伤,属于肝硬化的早期阶段。目前,国内研究者多采取腹腔注射CCl4或二甲基亚硝胺以及硫代乙酰胺诱导肝纤维化的形成,但由于其存在着药物具有毒性以及价格昂贵等问题。因此,为了寻求一种更安全以及更适于实验操作的模型,我们参考国外的文献,建立了结扎大鼠的胆总管而使胆汁反流造成肝细胞损伤来诱导肝纤维的模型。

胆管结扎与再通对大鼠肝内细胞表型和NOX4蛋白表达的影响

目的设计并建立胆管结扎及结扎后再通的大鼠肝纤维化模型,观察胆管结扎及再通对大鼠肝组织内细胞上皮-间质表型和氧化应激相关蛋白表达的影响。方法 12只雄性Wista大鼠随机分为假手术组、胆管结扎2周组、胆管结扎4周组和胆管结扎2周后再通2周组,通过组织HE染色、Masson染色等方法评估模型大鼠肝纤维化病变程度;通过免疫组化和Western blot等方法并检测上皮、间质标记蛋白及氧化应激相关蛋白的表达情况。结果相较于假手术组,随着胆管结扎时间的延长,模型组大鼠肝纤维化明显加重,α-SMA、collagen I、NOX4和Vimetin等蛋白表达显著升高,而E-cadherin表达则明显降低;结扎后再通组大鼠肝纤维化较单纯胆管结扎4周组大鼠明显减轻,NOX4及间质细胞标记蛋白表明显低于单纯结扎4周组,内皮细胞标记蛋白表达较单纯结扎4周组则显著升高。结论胆管结扎可上调大鼠肝内间质表型相关蛋白及NOX4蛋白的表达,同时抑制上皮表型相关蛋白的表达;当实施再通手术后,原胆管结扎大鼠肝内上皮表型相关蛋白表达增加,而间质表型相关蛋白及NOX4蛋白的表达明显减少。

百里醌对胆管结扎大鼠氧化应激和肝损伤的保护作用研究

目的研究百里醌对总胆管结扎大鼠氧化应激和肝损伤的保护和治疗作用。方法 32只SD大鼠随机分为4组,分别为正常对照组、模型对照组、百里醌低剂量和高剂量组,每组8只。在胆管结扎术前3 d起灌胃给予百里醌,低剂量组为25 mg.kg-1,高剂量组为50 mg.kg-1,连续2周。处死大鼠,检测肝组织匀浆中羟脯氨酸(HP)含量和丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)的活性。苏木精-伊红(HE)染色检测肝组织病理学改变。结果百里醌可显著降低胆总管结扎引起的肝脏组织内HP和MDA的含量,升高SOD和GPx含量(P<0.05)。百里醌治疗组肝脏坏死面积较模型对照组显著降低,炎性浸润程度明显降低。结论百里醌可以提高抗氧化损伤能力,减少肝脏氧化应激破坏,有望在胆汁淤积症患者中用于肝功能的保护。

清胆护肝汤对大鼠胆管结扎后肝脏组织化学成分的影响

原发性肝胆管结石可反复引起胆道梗阻和感染,造成肝功能损害,出现胆汁性肝硬化而最后死于肝肾功能衰竭.因此,提高原发性肝胆管结石的治愈率,减少并发症是经常面临的课题。中医认为,胆道疾患多有脾阴虚佐证,故主张“胆脾并治”,在治疗中注重调理脾胃扶正养阴。我们根据中医胆脾并治理论,设计出清胆护肝汤Ⅲ号,并就这一方剂对梗阻性黄疸大鼠肝脏组织化学成分的影响进行了实验观察,以探讨其疗效和作用机理。1

组蛋白对胆管结扎大鼠肝损伤的影响

目的探讨组蛋白对胆管结扎大鼠肝损伤的影响。方法大鼠随机分成4组:A组不给予任何操作,B组对肝门部和胆总管分离但不结扎和离断,C组结扎胆总管后予以离断,D组予以胆总管结扎和腹腔注射组蛋白。对比观察血样及肝组织标本。结果肝功能和病理学评分以及IL-6水平、TLR2、TLR4 mRNA方面,C组和D组高于A组和B组,差异具有统计学意义(P<0.05),C组高于D组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论组蛋白可以减轻胆管结扎大鼠肝损伤、保护肝功能,可能与组蛋白对肝组织的TLR2和TLR4的基因表达进行下调、炎症介质IL-6水平降低,局部及全身的炎症反应受到抑制有关。

七叶皂苷钠对胆管结扎诱导的肝纤维化作用研究

目的探究七叶皂苷钠(SA)对胆管结扎诱导的肝纤维化作用机制。方法54只雄性SD大鼠随机均分为:假手术组(Sham组)仅行开关腹,术后每日注射等量生理盐水、生理盐水组(OJ组)行胆管结扎后术后每日注射等量生理盐水、SA组(SA组)行胆管结扎后术后每日注射SA 3.6 mg/kg。通过ELISA测定各组大鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBIL)的水平。HE及Masson染色观察大鼠肝脏形态结构和胶原纤维的改变。免疫荧光检测Ⅰ、Ⅲ型胶原。免疫组化及Western blot检测eIF-4E、P-4EBP1蛋白表达。结果OJ组大鼠肝脏结构紊乱,血清中的ALT、AST、TBIL水平上升,Ⅰ、Ⅲ型胶原增多,eIF-4E、P-4EBP1在肝细胞中表达减少。SA干预的大鼠血清中ALT、AST、TBIL较OJ组下降,大鼠肝脏中Ⅰ、Ⅲ型胶原表达减少且上调OJ组大鼠肝细胞中原本下调的P-4EBP1、eIF-4E。结论七叶皂苷钠可以通过促进肝细胞中的4EBP1的磷酸化及eIF-4E的激活保护肝细胞从而减少了肝纤维化。

京尼平苷酸通过调控法尼醇X受体对胆管结扎诱导的胆汁淤积小鼠的影响

目的 基于法尼醇X受体(FXR)探讨京尼平苷酸(GPA)对胆管结扎(BDL)诱导的肝外胆汁淤积小鼠的影响。方法 将60只C57BL/6小鼠随机分为假手术组、模型组、阳性药组(奥贝胆酸,40 mg·kg^(-1))及GPA高、中、低剂量组(100、50、25 mg·kg^(-1)),每组10只。采用胆管结扎法复制肝外胆汁淤积小鼠模型。术后灌胃给药,每日1次,连续7 d。采用比色法测定血清中天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、总胆汁酸(TBA)、总胆红素(TBIL)的含量;采用qRT-PCR法测定肝组织中胆汁酸合成、吸收、转运相关基因(FXR、 SHP、BSEP、CYP27A1、CYP8B1、NTCP、MRP3、MRP4)、抗氧化应激相关基因(Nrf2、 HO-1、GCLC、GCLM)、炎症相关基因及凋亡因子(IL-6、IL-1β、TNF-α、NLRP3、NF-κB、Bax)、纤维化相关基因(TGF-β1、COL1A1、ICAM-1、p53)mRNA表达。采用HE染色法检测肝组织病理变化;采用天狼星红染色法检测肝组织纤维化情况;采用免疫荧光法测定肝细胞活性氧(ROS)含量。结果 与假手术组比较,模型组小鼠肝组织胆管周围有大量炎症细胞浸润,大面积的肝细胞坏死,肝脏组织结构病理损伤明显;黄疸指标AST、ALT、TBA和TBIL水平均明显升高(P<0.01,P<0.001);肝组织炎症因子(IL-6、IL-1β、TNF-α、NLRP3和NF-κB)和凋亡因子(Bax)的mRNA表达水平均明显升高(P<0.05,P<0.01,P<0.001);肝组织的胆管周围有明显的胶原沉积,纤维化相关基因(TGF-β1、COL1A1、ICAM-1和p53)的mRNA表达水平均显著升高(P<0.001);肝组织的主要胆汁酸核受体(FXR、SHP)、胆汁酸顶腔侧膜外排转运体(BSEP)、胆汁酸合成主要限速酶(CYP27A1、CYP8B1)、胆汁酸重吸收转运体(NTCP)mRNA表达水平均显著降低(P<0.01,P<0.001),而胆汁酸基底侧膜外排转运体(MRP3、MRP4)mRNA表达水平显著升高(P<0.001);肝细胞的ROS水平显著升高(P<0.01),抗氧化应激基因(Nrf2、GCLC、GCLM)mRNA表达水平显著降低(P<0.01,P<0.001)。与模型组比较,GPA高、中剂量组小鼠的肝组织胆管周围炎症细胞浸润、肝细胞坏死区明显减少,细胞形态和排列得到改善;AST、ALT、TBA、TBIL水平均显著降低(P<0.05,P<0.01,P<0.001),小鼠肝脏IL-6、IL-1β、TNF-α、NLRP3、NF-κB、Bax mRNA表达水平均明显降低(P<0.05,P<0.01,P<0.001),肝组织胶原沉积明显减少,TGF-β1、COL1A1、ICAM-1、p53 mRNA表达水平明显降低(P<0.05,P<0.01,P<0.001),肝细胞的ROS水平显著降低(P<0.001),抗氧化应激基因(Nrf2、HO-1、GCLC、GCLM)mRNA表达水平均显著升高(P<0.01,P<0.001);GPA高剂量组小鼠肝组织的FXR、BSEP mRNA表达水平显著升高(P<0.01, P<0.001), MRP3、 MRP4 mRNA表达水平明显降低(P<0.05, P<0.001),而SHP、 NTCP、CYP27A1、CYP8B1 mRNA表达水平无差异(P>0.05)。结论 GPA可能通过激动胆汁酸受体FXR的表达,促进胆汁酸排泄,改善肝内细胞炎症、氧化应激和纤维化,发挥抗BDL诱导肝外胆汁淤积小鼠的肝损伤作用。