氧自由基清除剂对背根神经节慢性压迫模型大鼠机械痛阈值的影响

目的观察腹腔内注射活性氧(ROS)清除剂苯亚甲基叔丁基氮氧化物(PBN)对背根神经节慢性压迫(CCD)模型大鼠手术侧足底疼痛的影响,以阐明ROS在CCD大鼠疼痛中的作用。方法将33只成年雌性Sprague-Dawley大鼠随机分为正常对照组(6只)、假手术组(6只)和CCD模型组(21只);术后第7天,再将CCD模型组大鼠随机分为CCD+PBN100亚组(9只)、CCD+PBN30亚组(6只)和CCD+0.9%氯化钠溶液亚组(CCD+N亚组,6只)。应用vonFrey纤维丝分别检测术前机械刺激缩足反应阈值(PWMT)基础值(0d)和术后第1、3、5、7天大鼠损伤侧后足的PWMT。术后第7天,分别在CCD+PBN100亚组、CCD+PBN30亚组和CCD+N亚组大鼠腹腔内注射PBN100mg/kg或PBN30mg/kg或等体积0.9%氯化钠溶液,并于注射后0.5、1、2、4、6、8、24h检测大鼠损伤侧后足的PWMT。结果假手术组大鼠术后第1天和CCD模型组大鼠术后第1、3、5、7天的PWMT均较同组术前基础值和正常对照组同时间点显著降低(P值均<0.05),CCD模型组大鼠术后第1、3、5、7天的PWMT均较假手术组同时间点显著降低(P值均<0.05)。CCD+PBN100亚组和CCD+PBN30亚组大鼠注射药物后0.5、1、2h的PWMT均较CCD+N亚组同时间点显著升高(P值均<0.05),CCD+PBN100亚组大鼠注射药物后0.5、1h的PWMT均较CCD+PBN30亚组同时间点显著升高(P值均<0.05)。结论腹腔内注射ROS清除剂PBN可显著缓解CCD模型大鼠痛觉过敏,高剂量PBN(100mg/kg)缓解疼痛的效果更佳,表明ROS可能参与CCD模型大鼠疼痛信息的调节。

背根神经节慢性压迫大鼠行为及缰核内c-fos CGRP的变化

目的 建立有效的背根神经节压迫模型 ,并探讨缰核内c -fos和CGRP的变化。方法 采用铬制 1- 0肠线通过椎间孔压迫Wistar大鼠L4 、L5背根神经节制备背根神经节压迫模型 ;应用SP法检测缰核c -fos表达 ;放射免疫分析法测定缰核内CGRP含量。结果 术后 4周内受压侧后肢持续表现痛敏行为 ,制备了稳定的背根神经节压迫模型 ;外侧缰核检测到中等强度表达的核内fos蛋白免疫阳性细胞 ,其表达呈一过性 ;测得缰核内CGRP含量基础值为 (5 0 6 6± 0 4 34)ng/L ,并随压迫刺激时间的延长 ,CGRP呈逐渐增高趋势。结论 本实验建立了慢性背根神经节压迫的可靠模型。缰核内c -fos表达呈一过性增高 ,而CGRP呈持续增高 ,与痛敏行为呈负相关 。

氧自由基清除剂对大鼠背根神经节慢性压迫致镜像痛的行为学影响

目的研究氧化应激在背根神经节慢性压迫(CCD)模型致大鼠镜像痛中的作用。方法选取雌性Sprague-Dawley(SD)大鼠建立L4、L5两节段CCD模型(CCD模型组),并设立假手术对照组(10只),应用von Frey纤维丝测定双侧后足机械痛缩足阈值(PWMT)。术后第7天,筛选出CCD模型组发生镜像痛大鼠30只,按照5mL/kg标准分别予腹腔内注射氧自由基清除剂N-叔丁基-α-苯基硝酮(PBN)100mg/kg(CCD+PBN100亚组,10只)、PBN 30mg/kg(CCD+PBN30亚组,10只)和0.9%氯化钠溶液(CCD+NS亚组,10只)。记录并比较各组大鼠双侧后足在给药前0.5h和给药后0.5、1、2、4、6、8、24h时的PWMT值和镇静评分。结果CCD模型组术后第1、3、5、7天压迫侧和损伤对侧的PWMT值均显著低于同组同侧术前(P值均<0.05),假手术组术后第1天压迫侧和损伤对侧的PWMT值均显著低于同组同侧术前(P值均<0.05)。CCD模型组术后第1、3、5、7天压迫侧和术后第3、5、7天损伤对侧的PWMT值均显著低于假手术组同侧同时间(P值均<0.05)。CCD模型组术后1、3、5、7天损伤对侧的PWMT值均显著高于同组压迫侧同时间(P值均<0.05)。CCD+PBN100亚组注射后0.5、1、2h压迫侧和损伤对侧的PWMT值均显著高于同亚组同侧注射前和CCD+PBN30亚组同侧同时间(P值均<0.05),CCD+PBN30亚组注射后0.5、1、2h压迫侧和注射后0.5、1h损伤对侧的PWMT值均显著高于同亚组同侧注射前和CCD+NS亚组同侧同时间(P值均<0.05)。CCD模型组3个亚组的镇静评分均为0分,3组间差异均无统计学意义(P值均>0.05)。结论腹腔注射氧自由基清除剂PBN可以缓解大鼠CCD引发的镜像痛行为。

小鼠背根神经节慢性压迫引起的痛敏化机制

目的探讨背根神经节慢性压迫(CCD)引起的低剂量辣椒素诱发痛敏化机制。方法将光滑L型钢柱插入小鼠的L4椎间孔,对背根神经节(DRG)造成持续压迫,建立小鼠CCD模型。于CCD术前1 d及术后第1、3、5、7 d向小鼠胫骨前区皮下注射不同浓度的辣椒素(0. 01、0. 1、1 g/L) 10μl后采用行为学检测动物的痛行为学表现并录像,以寻找CCD术后辣椒素诱发痛行为差异最显著的浓度。利用Pirt-GCaMP3转基因小鼠,胫骨前区皮下注射最佳浓度辣椒素,利用激光扫描共焦显微镜在体记录DRG神经元对外周体表感受野辣椒素刺激的反应。利用免疫荧光染色技术观察正常及CCD模型压迫5 d后DRG内辣椒素受体(TRPV1)的表达变化。结果行为学检测结果显示,与正常小鼠相比,低浓度(0. 1 g/L)辣椒素在CCD模型小鼠上引起的诱发痛显著提升(n=8;术后1d,P<0. 01;术后5 d,P<0. 05;术后7 d,P<0. 05;术后3 d,P> 0. 05)。在体激光扫描共焦成像结果表明,在记录的398(n=4)个正常小鼠L4DRG神经元中,对皮下注射0. 1 g/L辣椒素有反应的神经元为75个,在382(n=6)个CCD术后5 d的小鼠L4DRG神经元中,对皮下注射0. 1 g/L辣椒素有反应的神经元为169个,差异有显著性(P<0. 01)。免疫荧光染色结果显示,在653(n=10)个正常神经元中,TRPV1阳性的细胞数为148,在611(n=6)个CCD神经元中,TRPV1阳性的细胞数为237,差异有显著性(P<0. 01)。结论在小鼠CCD模型中,受到压迫DRG神经元TRPV1表达上调,导致相应的体表感受区域对辣椒素诱发痛敏化。

大黄素抑制背根神经节压迫小鼠模型STAT3、VEGFA、p-ERK蛋白表达及其镇痛作用研究

目的 研究大黄素(Emodin,ED)对背根节压迫小鼠模型的镇痛作用以及对STAT3/VEGFA/p-ERK信号通路的影响。方法 建立背根神经节慢性压迫(chronic compression damage,CCD)小鼠疼痛模型,随机分为空白组、模型组、普瑞巴林组及ED低、中、高剂量组。通过检测动物机械痛敏和热辐射痛敏阈值、醋酸扭体实验评价镇痛效果;ELISA检测小鼠L4-L5节段脊髓组织中白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和CD18等炎症因子含量;Western blot和免疫荧光检测脊髓组织信号转导子和转录激活子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和磷酸化细胞外信号调节激酶(phosphorylated extracellular signal-regulated kinases 1/2,p-ERK1/2)蛋白表达。结果 与空白组比较,模型组的机械痛敏、热辐射痛敏阈值显著降低(P<0.05),脊髓背角炎症因子表达显著增高(P<0.05),脊髓中VEGFA、STAT3、p-ERK的表达显著上调(P<0.05)。与模型组比,ED低、中、高剂量组CCD小鼠模型的机械痛敏、热辐射痛敏阈值升高(P<0.05);脊髓背角炎症因子表达降低(P<0.05);脊髓背角小胶质细胞STAT3、VEGFA、p-ERK的表达降低(P<0.05),醋酸诱导的小鼠急性疼痛中扭体次数减少(P<0.05)。结论 ED对背根节压迫小鼠模型有良好的镇痛作用,其机制可能与抑制脊髓背角炎症因子表达和STAT3/VEGFA/p-ERK介导的脊髓小胶质细胞活化有关。

5-羟色胺在小鼠慢性背根神经节压迫模型中的作用机制

目的探讨5-羟色胺(5-HT)在小鼠慢性背根神经节压迫(CCD)模型中的作用机制。方法将L型不锈钢棍插入小鼠右侧L3和L4椎间孔,持续压迫背根神经节(DRG)建立小鼠CCD模型。在CCD手术前1 d及手术后1、3、5、7 d向小鼠胫骨前区皮内注射10μL 5-HT(低剂量浓度为0.003 g/L,高剂量浓度为0.3 g/L)后,录像分析小鼠对注射5-HT后所产生的痒与痛行为学;免疫荧光实验检测小鼠DRG中H4蛋白的表达;实时PCR检测CCD模型小鼠压迫5 d后双侧L3和L4 DRG内5-HTr1a和5-HTr2a的表达。结果与手术前1 d比较,低浓度5-HT在CCD手术后3 d可以明显增加痒行为;高浓度5-HT在CCD手术后1 d可以明显增加痒行为(P<0.05)。与手术前1 d比较,低浓度5-HT在小鼠CCD手术后1 d和3 d可以明显增加痛行为(P<0.05);高浓度5-HT在小鼠CCD手术后1 d可以明显增加痛行为(P<0.05)。与对侧DRG比较,压迫5 d的DRG中H4蛋白,5-HTr1a、5-HTr2a mRNA表达均显著升高(均P<0.05)。结论受压迫DRG神经元H4、5-HTr1a和5-HTr2a表达上调,引起感受野对5-HT诱发痛与痒的敏化。

活性氧对背根神经节P2X3受体介导的痛信号功能的影响

目的探讨活性氧(reactive oxygen species,ROS)对P2X3受体介导的神经病理性疼痛作用的影响。方法用成年雌性SD大鼠建立背根神经节慢性压迫(CCD)神经病理性疼痛模型,建模成功后随机分为4组(每组10只),经腹腔分别注射生理盐水(NS)、PBN 100mg/kg、PBN 30mg/kg、PBN 10mg/kg,给药30min后,经足底注射P2X3受体特异性激动剂α,β-meATP 50nmol,体积为50μL,持续观察注射后15min内的自发缩足次数和主动悬足时间,并整合计算每2min内的综合悬足时间(PLTPM)。结果 PBN能够剂量依赖性抑制由α,β-meATP引发的自发性痛行为,与NS组比较,PBN100mg/kg组在前6min内能明显抑制自发性疼痛,差异具有统计学意义(P<0.05),而PBN 30mg/kg组大鼠仅在2至4min时间单位表现出差异有统计学意义(P<0.05)。结论氧自由基清除剂可以有效缓解由CCD模型引发的神经病理性疼痛及P2X3受体激动剂诱发的自发痛,ROS可能作为信号分子参与了P2X3受体介导的痛觉信息的传递。

EPO/NGF对大鼠背根节压迫性损伤的治疗作用

目的:外源EPO/NGF通过其抗痛敏作用,抗凋亡作用及对钠离子通道的影响来探索和研究其在背根神经节(DRG)慢性压迫中的治疗作用。方法:制作多节段DRG慢性压迫大鼠模型,并给予外源EPO或NGF,进行行为学检测,测量大鼠的机械痛阈值和热痛阈值,Tunnel方法原位检测组织中细胞凋亡情况,通过免疫荧光技术,RT-PCR和Western Blot技术检测c-jun,c-fos,NGF,Nav1.8的表达情况。结果:与对照组相比,模型组的大鼠从建模第1 d起痛阈就开始下降,并持续到13 d;与模型组相比,EPO/NGF治疗组的机械痛阈值和热痛阈值得以升高,DRG神经细胞的损伤和凋亡现象减轻或者恢复。NGF的表达由于受到压迫损伤而降低,在给予外源NGF或EPO治疗后表达升高,Nav1.8的表达与NGF相一致。结论:EPO和NGF在神经系统中具有一定的抗凋亡作用,镇痛作用及促进钠离子通道Nav1.8的表达,并且痛阈的降低与Nav1.8表达下降具有一定相关性。

TNF-α在CCD模型大鼠背根神经节中的表达及机制

目的：探讨TNF-α和NF-κB在背根神经节慢性压迫（CCD）模型大鼠背根神经节（DRG）中的表达变化及其对疼痛学行为的影响。方法：建立CCD大鼠模型,采用von Frey纤维丝监测机械痛阈的改变;通过Western blotting检测TNF-α和NF-κB在DRG中的表达变化趋势,分析其与疼痛行为之间的相关性;并采用免疫荧光双染技术研究TNF-α在DRG中的表达位置。结果：CCD组的50%机械缩足阈值在术后1 d即开始明显下降（P〈0.01）,7~14 d达到高峰,其后逐渐上升,直至术后35 d仍明显低于术前及sham组（P〈0.01）。而DRG上的TNF-α及NF-κB于造模后各时点均显著增多（P〈0.01）,且TNF-α的表达趋势与50%机械缩足阈值显著相关（P〈0.05）。结论：DRG慢性压迫可促进其上的TNF-α和NF-κB的合成和分泌,进而诱发机械痛觉过敏。因此,TNF-α/NF-κB信号通路可能是CCD模型疼痛形成的重要通路之一。

恒古骨伤愈合剂对背根节压迫模型大鼠的镇痛作用及机制

目的:探讨恒古骨伤愈合剂(OK)对腰椎间盘突出压迫神经的镇痛作用及机制。方法:建立模拟临床腰椎间盘突出压迫神经的背根神经节慢性压迫(CCD)大鼠模型,将大鼠随机分为模型组、OK低、中、高剂量组(1.31、2.63、5.25 mL·kg^(-1))、普瑞巴林组(5 mg·kg^(-1)),每组8只;另取8只SD大鼠作为空白组,灌胃给予等体积的生理盐水。并采用行为学检测、不良反应评估、网络分析、蛋白免疫印迹法、免疫荧光及拮抗剂应用等方法进行探讨。结果:与空白组比较,模型组的机械痛敏、热辐射痛敏阈值、脊髓背角炎症因子表达均显著升高(P<0.01),患侧足印相关指标均显著下调(P<0.01);模型组脊髓背角小胶质细胞中信号转导和转录激活因子3(STAT3)、血管内皮生长因子A(VEGFA)、磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)表达显著升高(P<0.01)。与模型组比较,OK低、中、高剂量组可剂量依赖性提高CCD大鼠的机械痛敏、热辐射痛敏阈值(P<0.05,P<0.01),改善CCD大鼠步态(P<0.05,P<0.01),降低脊髓背角炎症因子表达(P<0.05,P<0.01),降低CCD大鼠脊髓背角小胶质细胞STAT3、VEGFA、p-ERK的表达(P<0.05,P<0.01),并有效降低醋酸诱导的小鼠伤害性反应(P<0.05,P<0.01),且无耐受性;体质量检测、脏器指数、强迫游泳、轮替等实验结果显示OK无明显的不良反应。进一步的拮抗剂实验显示,与OK高剂量组比较,MRS1523、RS127445能逆转OK的瞬时镇痛效应(P<0.01)。结论:OK对CCD模型有良好的镇痛效应且无明显不良反应,其机制可能与激动ADORA3、HTR2B及抑制小胶质细胞STAT3、VEGFA、p-ERK等元件相关。

慢性压迫背根神经节大鼠模型背根神经节Wnt5a的表达变化

目的观察Wnt5a在慢性压迫背根神经节(chronic compression of dorsal root ganglia,CCD)大鼠模型背根神经节的表达变化,探索Wnt5a在神经根病中的作用及神经根病中TNF-α与Wnt5a的关系。方法取192只成年雄性SD大鼠随机分为4组,每组48只,分别为假手术组(A组)、CCD组(B组)、CCD+生理盐水组(C组)、CCD+依那西普组(D组)。B、C、D组按照Hu等方法制备CCD模型后,C、D组分别腹腔注射生理盐水(5.5 mg/?kg)和依那西普(5.5 mg/kg);A组仅暴露椎间孔。各组于术后1、3、5、7 d利用von Frey纤维细丝检测大鼠后足机械痛阈值;术后3、7 d分别采用免疫组织化学染色和RT-PCR法检测背根神经节中Wnt5a蛋白和基因表达。结果术后各时间点B、C组机械痛阈值均显著低于A、D组,D组低于A组,差异均有统计学意义(P<0.05);B、C组间差异无统计学意义(P>0.05)。免疫组织化学染色示各组大鼠背根神经节的大、中、小神经元均有Wnt5a表达。除A组外,术后7 d B、C、D组Wnt5a阳性细胞数和Wnt5a mRNA相对表达量均明显高于术后3 d(P<0.05)。术后3、7 d,B、C组Wnt5a阳性细胞数和Wnt5a mRNA相对表达量显著高于A、D组,D组高于A组,差异均有统计学意义(P<0.05);B、C组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 CCD大鼠模型背根神经节中Wnt5a表达增加,阻断TNF-α后背根神经节Wnt5a表达减少。

慢性压迫背根神经节对TRPV1功能作用的研究进展

辣椒素受体(TRPV1)是瞬态感受器电位非选择性阳离子通道,在介导炎性痛、内脏痛等多种痛觉方面均起重要作用,是目前研究疼痛机制与研发镇痛药物的一大热点。慢性腰背痛是临床上常见的疾病,椎间盘突出是常见病因之一。现阶段研究表明,TRPV1在介导神经病理性疼痛和热痛觉过敏中起着关键性作用,同时TRPV1阳性神经元介导了慢性神经痛的发生。

CYCLIC AMP-DEPENDENT PROTEIN KINASE CONTRIBUTES TO THE EXCITATORY RESPONSE TO NOREPINEPHRINE IN CHRONICALLY COMPRESSED RAT DORSAL ROOT GANGLION NEURONS

Chronic compression of the dorsal root ganglion (DRG) in the rat, which closely mimics intervertbral foraminal stenosis in humans, produces mechanical and thermal hyperalgesia as shown by behavioral signs. The present study was undertaken to further investigate the catecholarnine sensitivity and its underlying intracellular mechanism in sensory neurons with a new model of chronic DRG compression. Extracellular recordings of

鞘内注射KN93对神经病理性疼痛大鼠痛行为学的影响

目的观察鞘内注射钙，钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ（Ca2＋／calmodulin dependent proteinkinaseⅡ，CaMKⅡ）抑制剂KN93对腰背根神经节慢性压迫（chronic compression of dorsal root ganglion，CCD）大鼠神经病理性疼痛的影响。方法SD雄性大鼠48只，按随机数字表法分为3组：假手术组（S组，11只）、CCD模型组（C组，11只）、KN93组（K组，26只）。C组、K组制备CCD模型，S组仅暴露L。椎间隙。术后14dS组和C组鞘内注射10％溶媒二甲基亚砜（dimethylsulfoxide，DMSO）25μl，K组鞘内注射溶于10％DMSO的KN9350μg／25μl。各组在造模前1d（t1），造模后4（t2）、7（t3）、10（t4）、14d（t5）随机取8只大鼠检测热缩足反射潜伏期（paw withdrawal thermal latency，PWTL）和机械缩足反射阈值（paw withdrawal mechanical threshold，PWMT）；并于鞘内注射DMSO或KN93后2（t6）、4（t7）、10（t8）、12（t9）、24h（t10）时进行相同的行为学检测。各组于给药前以及K组的给药后各时间点（t6．t9）随机取8只大鼠处死并取脊髓腰膨大部分，采用Westernblot方法检测CaMK11蛋白表达水平。结果鞘内给药后t6．t9时点，K组PWTL[（14．7±1．6）、（18．6±1．8）、（21．2±2．5）、（15．3±2．0）S]，PWMT[（12．0±1．0）、（15．4±1．4）、（17．5±1．7）、（14．9±1．6）g]比C组PWTL[（11．6±1．8）、（10．7±1．7）、（11．7±2．4）、（9．9±1．7）s]，PWMT[（8．4±0．9）、（9．6±1．6）、（10．6±1．7）、（8．9±1．3）g]升高，差异有统计学意义（P〈0．05）。给药前及给药后t10时，K组PWTL、PWMT与C组比较，差异无统计学意义（P〉0．05o和t5时CaMKII值（1．55±0．12）比较，给药后t6～t9时间点CaMKⅡ蛋白[（1．37±0．11），（1．15±0．12）、（0．75±0．08）、（0．86±0．12）]表达下降（P〈0．05）。结论鞘内注射KN93可有效缓解神经病理性疼痛大鼠的疼痛反应。