染色体微阵列技术在85例自然流产胚胎组织染色体检测中的应用及致病基因分析

目的探讨染色体微阵列技术在85例自然流产胚胎组织染色体检测中的应用及致病基因。方法选择2021年10月至2023年1月于周口市中心医院生殖医学中心收治的自然流产并行清宫术的流产样本85例,对流产的绒毛或胎儿组织予以采集,并采用染色体微阵列分析技术检测。分析40例染色体数目异常的染色体微阵列检测结果,早期流产组和晚期流产组流产组织的染色体异常率,流产史组和无流产史组流产组织的染色体异常率,辅助组和未辅助组流产组织的染色体异常率,7例染色体结构异常的染色体微阵列检测结果。结果85例研究对象均检测成功,染色体异常占比55.29%(47/85),染色体数目异常占比47.06%(40/85),染色体结构异常8.24%(7/85);其中染色体数目异常中三倍体例数为28例,占比70.00%(28/40)最高,染色单体为5例,占比12.50%(5/40),多倍体3例,占比7.50%(3/40),嵌合体2例,占比5.00%(2/40),常染色体缺失2例,占比5.00%(2/40);早起流产组流产组织的染色体异常率比晚期流产组高(χ^(2)=7.720,P=0.005);流产史组流产组织的染色体异常率比无流产史组高(χ^(2)=4.942,P=0.026);辅助组与未辅助组流产组织染色体异常率比较,差异无统计学意义(χ^(2)=0.223,P=0.636);7例染色体结构异常中,拷贝数变异的样本有4例,杂合性缺失的样本有1例,同时存在上述情况的样本有2例;共发现流产相关基因6个,分别为NFATC1、ERCC6L、RPS4X、KANK1、SMARCA2、PMP22。结论自然流产的主要原因在于染色体异常,染色体异常主要与孕周、既往是否存在流产史相关,而与是否采用辅助生殖技术无关,采用染色体微阵列技术检测可明确自然流产的原因,其中NFATC1、ERCC6L、RPS4X、KANK1、SMARCA2、PMP22等的基因变异可能是自然流产的致病基因。

一种快速的胚胎组织总RNA的提取方法

简要介绍一种改进的提取人体器官组织总 RNA的方法 ,该方法具有费用低 ,快速简便 ,重复性好的优点 ,提取的 RNA无 DNA等污染物 。

胚胎组织提取液影响表皮干细胞表型变化的初步研究

目的:模拟表皮干细胞周围生态微环境,研究表皮干细胞在此环境中的表型变化,表皮干细胞微环境在表皮干细胞"命运"决定过程中的作用。方法:分离、培养表皮干细胞,观察其形态,并进行免疫组织化学鉴定及免疫荧光检测。制备小鼠胚胎组织匀浆液,荧光活细胞示踪法和逆转录聚合酶链式反应检测胚胎组织提取液对表皮干细胞表型变化的影响。结果:原代分离培养的表皮基底层干细胞表达α6、β1整合素、K19、K14、p63、Nes-tin、PCNA为阳性,而K10不表达。激光共聚焦检测显示α6整合素和CD71在表皮干细胞中的分布存在着区域性差异。此外,流式细胞检测显示胚胎组织提取液作用后α6+CD71-表达细胞由细胞总数的22.49%减少至10.92%,而α6+CD71+、α6-CD71+表达细胞则分别由诱导前的62.29%及0.19%增加至诱导后的68.34%及4.51%。RT-PCR结果表明胚胎组织提取液作用后,表皮干细胞中β1整合素、K19、K10表达增强,而K14表达减弱。结论:Ⅳ型胶原黏附法分离的表皮干细胞具有干细胞的特点。α6整合素、CD71在表皮干细胞中分布的区域差异及CD71表达位点的空间变化可以作为区分表皮干细胞及其子代细胞标志之一。胚胎组织提取液对表皮干细胞的增殖分化具有促进作用。胚胎组织提取液中的某些因子可能抑制了K14表达的TA细胞的终末分化,甚至诱导其发生逆向分化,导致诱导后K14的总体表达水平下调。

人类胚胎组织完整RNA的分离

为探讨人类胚胎组织完整RNA的分离方法及其影响因素,采用液氮研磨及匀浆器两种制备组织匀浆方法,对不同引产方式的人类胚胎组织进行总RNA分离,并对RNA质量进行鉴定。结果发现,液氮研磨组分离完整RNA的阳性率高于匀浆器处理组,分别为68.42%和29.29%,两组比较有显著性差异;药物引产组及非药物引产组在分离完整RNA阳性率、胚胎组织RNA的OD260/OD280比值和胚胎组织βactin基因表达量上均无统计学差异。结论:液氮研磨方法可以应用于胚胎组织匀浆分离完整RNA,而不同引产方式对胚胎组织RNA质量并无直接的影响。

自然流产胚胎组织中生殖支原体的检测

目的:探讨生殖支原体(MG)感染与自然流产的关系。方法:收集自然流产者胚胎组织54例为自然流产组;另取40例人工流产者胚胎组织为对照组。采用套式PCR方法对两组标本进行生殖支原体检测。结果:流产组MG阳性9例,阳性率16.7％;对照组无MG阳性检出,两组比较有显著性差异(P<0.01)。结论:自然流产与MG感染有密切关系。

VitA对小鼠胚胎组织Hox gene蛋白表达的影响

目的 从发育基因角度探讨维生素A(VA)缺乏导致先天畸形的机理。方法 通过建立小鼠VA缺乏模型 ,用免疫组织化学等方法研究VA缺乏对小鼠胚胎组织Hoxgene蛋白表达水平的影响。结果 维生素A缺乏使胎鼠的Hoxgene蛋白表达明显低于正常对照组 (P <0 0 5 )。VA补充组明显高于VA缺乏组 ,但仍比正常对照组低。

氟对小鼠胚胎组织谷胱甘肽活性和卵黄囊细胞膜脂流动性的影响

目的探讨氟的发育毒性及其作用机理。方法8.5日龄的小鼠胚胎于体外培养系统中给予不同剂量的氟化钠,培养48 h后,观察胚胎生长发育和器官形态分化状况;并应用DTNB直接法测定胚胎组织谷胱甘肽(GSH)水平;以1,6鄄二苯己三烯为荧光探剂,用荧光偏振技术测定卵黄囊细胞膜脂质流动性。结果当培养液中氟浓度为10 mg/L时,卵黄囊直径未发生明显改变,胚胎生长发育和部分器官分化指标明显被抑制;15 mg/L时,畸形胚胎发生率明显升高,主要有前后神经管闭合不全、体翻转不全等(P< 0.05);氟浓度为10 mg/L时,胚胎组织GSH活性和卵黄囊细胞膜脂质流动性也显著降低(P< 0.05)。上述效应均呈现出一定的剂量-效应(反应)关系。结论氟有潜在的致畸性和胚胎毒性,胚胎组织GSH活性和卵黄囊细胞膜脂流动性降低可能在氟致胚胎发育毒性中起重要作用。

硫酸铝对小鼠胚胎组织谷胱甘肽活性和卵黄囊细胞膜流动性的影响

目的探讨硫酸铝的发育毒性及其发生机制。方法孕8.5d昆明小鼠胚胎于体外培养系统中给予不同剂量的硫酸铝 (Al3 +浓度0.6 ,0.9,1.2 ,3.0 ,9.0μg/ml) ,培养48h后 ,对胚胎进行Maele_Fabry形态评分 ,测量卵黄囊直径 ,胚胎体长及头长 ,胚胎干重 ,并应用DTNB分光光度法、DPH荧光偏振技术 ,观察硫酸铝作用下胚胎组织谷胱甘肽(GSH)和卵黄囊细胞膜脂质流动性的改变。结果当培养液中Al3 +剂量为3.0μg/ml时 ,胚胎生长发育和器官形态分化明显被抑制 ,并使畸形胚胎发生率明显升高 ,主要有神经管未闭 ,脑畸形和体屈异常 ;6.0μg/ml时则可致胚胎组织GSH活性和卵黄囊细胞膜脂质流动性显著降低。上述效应均表现出了一定的剂量_效应 (反应 )关系。结论硫酸铝有潜在的致畸性和胚胎毒性 。

巨细胞病毒感染与早期胚胎组织细胞染色体着丝粒及染色体变异关系研究

目的研究人类巨细胞病毒与早期流产的胚胎组织染色体着丝粒点(Cd)变异的关系,以及导致胚胎染色体畸变机理,探讨人类巨细胞病毒对早期胚胎发育的不良影响。方法选择早期流产的孕妇56例,曾有异常妊娠史3～5次,取静脉血以ELISA法检测人类巨细胞病毒抗体,阴性者(IgG+/IgM-或IgG-/IgM-)作为未感染组,阳性者(IgG+/IgM+或IgG-/IgM+)列为感染组,取其流产的胚胎组织采用常规短期组织培养法制作染色体,以同步银染法观察Cd变异情况,分析变异率与人类巨细胞病毒感染的关系,以G显带进行染色体核型分析,进一步研究Cd变异与胚胎组织染色体畸变的关系,另选择10例做人工流产的胚胎组织为正常对照组。结果56例中共有22例孕妇人类巨细胞病毒抗体阳性,其早期流产胚胎组织Cd畸变率显著高于非感染组和对照组,之间具有极显著性差异,但对照组和未感染组染色体畸变率之间无显著性差异。两组染色体畸变率之间无显著性差异,但均高于对照组,之间均具有显著性差异(P<0.001),结论人类巨细胞病毒可导致早期胚胎组织Cd变异,使细胞分裂时染色体复制错误或丢失,从而引起胚胎发育异常而导致死胎、流产。

早期药物流产胚胎组织用于亲子鉴定1例

对于早期药物流产胎儿用于亲权关系鉴定的案例近年文献报道较少,而在实际法医物证鉴定工作中,药物流产胚胎用于检材的案例却逐年增多。通常医院妇产科在进行早期药物流产时往往不考虑流产物作为法医学生物检材使用,一般对流产物不需做进一步的筛选,甚至有些流产者在家中排出流产物,这就给需要用早期药物流产胚胎作为法医学亲权鉴定生物检材带来不便,增加了获取有效检材的难度。

nm23在胚胎组织和肺癌组织中表达的意义

目的 探讨nm2 3 H1基因的表达与胚胎组织发育分化的关系和在肺癌组织中表达的意义。方法 对SD大鼠和人的胚胎组织 ,以及人肺癌组织进行nm2 3蛋白 (NM2 3 H1)免疫组化检测。结果 NM2 3 H1的积聚与胚胎发育期间各种上皮组织的分化和器官形成相一致 ,正常胚胎组织要发育至一定阶段 ,具有一定空间构型 (器官结构 )时才有较稳定的NM2 3 H1积聚。在 49例肺癌原发病灶中 ,NM2 3 H1阳性率 3 4 .7% ,其中鳞癌的阳性率 2 7.3 % ,腺癌的阳性率 5 0 .0 % ,5例未分化大细胞癌均阴性。 2 7例肺门淋巴结转移癌灶的NM2 3 H1阳性率 (2 2 .2 % )与原发瘤灶中的阳性率 (3 4 .7% )比较差异无显著性 (P >0 .0 5 )。在肺癌原发病灶中 ,NM2 3 H1阳性与阴性二组间淋巴结转移发生率的差异亦无显著性 (P >0 .0 5 )。结论 NM2 3 H1在胚胎组织和肺癌组织中的积聚与胚胎组织和肺癌组织器官样结构的分化有密切关系 ,NM2 3 H1可能对维持稳定的上皮组织结构起着重要的调节作用。NM2 3 H1似乎不能直接抑制肺癌细胞的转移。

超声引导清宫术下的早期胚胎组织的亲权鉴定

经超声引导清宫术获得的人工流产物大多为全部胚胎组织与母体组织的混合物。只有从这些混合物中辨认、分离出胚胎组织才能成功进行亲权鉴定。但由于孕早期胚胎过小、分化程度不明显,且经该手术的人工流产组织往往破碎,从而使分离胚胎组织进行取样的难度较大。本文通过1例超声引导清宫50d左右的人工流产胚胎组织的亲权鉴定,分析总结处理该案的要点,认为在这类案件中为能够更准确地选取人工流产物中的胚胎组织,应以蒸馏水细水反复清洗流产物至水清;取材应优先考虑提取绒毛膜组织进行DNA检测;多样化取材,如此可提高检出成功率。

肿瘤及胚胎组织特异表达蛋白65与低密度脂蛋白受体相关蛋白关联蛋白的结合

目的:寻找与肿瘤及胚胎组织特异表达蛋白65(cancerandembryoexpressionprotein65,CEP65)相互结合的蛋白分子,为研究CEP65在肿瘤发生中的作用机制提供线索。方法: 以CEP65为诱饵蛋白,通过酵母双杂交方法, 筛选人胚胎组织cDNA表达文库。将获得的阳性克隆cDNA片段分别克隆到原核和哺乳细胞表达质粒,通过GSTpull down和免疫共沉淀对相互作用蛋白作进一步验证。结果: 筛选到能与CEP65相互结合的低密度脂蛋白受体相关蛋白产关联蛋白(lowdensitylipoproteinreceptor relatedprotein associatedprotein1,RAP)。将分别在原核和哺乳细胞中表达的RAP与CEP65进行GSTpull down实验,结果显示,原核表达的GST RAP可以与His CEP65相互结合,而在哺乳细胞共表达的GST CEP65和Myc RAP也能相互结合。结论:RAP可以和CEP65相结合,CEP65有可能通过与RAP相互作用,在肿瘤的浸润、转移及增生中发挥其功能。

大鼠胚胎组织中DNA含量的测定

大鼠胚胎组织中ＤＮＡ含量的测定王秋枫，赵树芬，张秀池，张帆胚胎组织中的ＤＮＡ含量是衡量胚胎生长发育情况的一项重要指标，它可以反映胚胎ＤＮＡ的合成情况，与生长参数及胚胎蛋白质含量有一致性。以往的ＤＮＡ含量测定方法操作繁琐且条件要求较高，我们介绍一种快速...

蝴蝶兰叶片离体培养胚胎组织的发生

以蝴蝶兰试管苗叶片为外植体,以1/3MS为基本培养基,研究了不同浓度6-苄基腺嘌呤(6-BA),腺嘌呤(Ad),萘乙酸(NAA)及其组合对胚胎组织发生的影响。同时也研究了添加不同浓度椰汁对胚胎组织形成的影响。结果表明:6-BA对胚胎组织的诱导效果较AD好,NAA与二者配合使用可提高胚胎组织的发生率,其最佳浓度组合为6-BA2.0 mg·L-1+Ad2.0 mg·L-1+NAA0.4 mg·L-1。椰汁200-300mL·L-1有利于胚胎组织的形成。其胚胎组织的组织学观察表明:胚胎组织起源于叶片上表皮气孔附近单细胞的一些叶肉细胞,外源基因转入的最佳时期是多细胞球形胚时期。

52例子宫内胚胎组织残留的超声声像图回顾性分析

目的 探讨子宫内胚胎组织残留的诊断及图像分析。方法 应用超声图像诊断 5 2例子宫内胚胎组织残留与术后病理对照 ,并分析误诊原因。结果 超声诊断与术后病理诊断符合率为94.3%,误诊率 5 .7%。结论 子宫内胚胎组织残留具有一定的声像图表现 ,超声可做出较准确的诊断。部份病例超声图像不具有特异性 ,单从声像图判断困难 。

B型超声对药物流产后胚胎组织残留的诊断

目的:探讨B超对药物流产后胚胎组织残留的诊断价值。方法:选取30例服药后7～30d仍有间断性阴道出血患者,对其资料进行分析。结果:B超显示子宫增大,宫腔内形态不规则,边界清晰的液性暗区,其内可见光点、光斑反射,内部回声不均者22例,探及宫腔内单纯回声增强,边界清晰,内部回声均匀者8例。对宫腔内有胚胎组织残留者,行刮宫术,术后出血停止,B超复查,宫腔内异常回声消失。结论:B超对药物流产后胚胎组织残留的诊断价值较高。

自然流产胚胎组织解脲脲原体检测分析

初步探讨解脲脲原体 (Uu)感染与自然流产的相关性。对 82例自然流产、44例人工流产 (对照组 )的胚胎组织进行 Uu的人工分离培养 ,并对部分组织的超薄切片及培养物负染片置电镜下观察。结果显示 ,自然流产胚胎组织 U u的检出率为 6 4.6 % (5 3/ 82 ) ,与对照组相比 6 .8% (3/ 44 ) ,具有显著性差异 (P<0 .0 0 1) ;电镜下观察 ,U u检出阳性标本中合体滋养细胞膜和细胞滋养细胞膜表面见大量的 U u颗粒 ,与阳性培养物经负染后所见颗粒相似 ,而 U u阴性对照标本中未见此颗粒 ,提示 :Uu可引起宫内感染 ,损伤绒毛膜滋养细胞 ,是导致自然流产的重要病原体之一。

胚胎组织浸液降低无关个体混合淋巴细胞培养中的HLA基因表达

用3—4月龄的治疗性引产胎儿的肝、胸腺制成二种组织浸液,分别加入无关个体混合淋巴细胞培养(MLC)体系中,培养120小时后掺入~3H-TdR,测CPM值,计算刺激指数(SI);用经PCR生物素掺入的HLA-Ⅰ、Ⅱ类特异性探针进行细胞原位杂交,图像扫描定量。与不含胚胎组织浸液的对照组相比,胎肝、胸腺浸液组MLC的SI明显降低,混合淋巴细胞培养的细胞HLA-Ⅰ、Ⅱ类基因mRNA表达均有显著降低,胎肝浸液作用更明显。

小鼠胚胎组织中乳酸脱氢酶同工酶的分布

小鼠胚胎组织中乳酸脱氢酶同工酶的分布郭瑞华１宋桂兰２翟义敏１马玉妹３杜玉珍４（华北煤炭医学院１化学教研室，２设备处，３生化教研室，４微生物教研室，唐山０６３０００）乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）同工酶谱具有动物种属、组织及发育的特异性［１］。作者曾采用聚丙烯酰...