外源性胰岛素致胰岛素C肽比例分离现象1例

患者，男，52岁，因发现糖尿病10余年，消瘦1年于2013年5月6日入院。患者于2003年体检时化验空腹血糖8．0 mmol／L，当地诊断为2型糖尿病，行饮食控制，未检测血糖，自2007年开始服用“阿卡波糖片、二甲双胍”降糖治疗，平时测空腹血糖波动于5～6 mmol／L，餐后2 h 血糖波动于6～8 mmol／L。自2011年因血糖高（间断测空腹血糖波动于7 mmol／L左右，餐后2 h波动于13 mmol／L左右，无酮症发生），就诊于当地医院停用口服药物降糖治疗，改为“三餐前门冬胰岛素皮下注射，睡前甘精胰岛素皮下注射降糖治疗，根据血糖情况自行调整胰岛素剂量，因注射部位反复红色硬结，伴痒，为进一步诊治来我科住院。1年来患者进行性消瘦，体重较1年前下降8 kg，且间断出现心慌、易饥、出汗，当时测血糖最低达3．4 mmol／L，进食后症状好转，患者自发病以来未行胰岛功能检查。既往高血压病史三十余年，平时服用“厄贝沙坦片”，血压控制可。个人史及婚育史无特殊，父亲、姐姐患有糖尿病。

血清胰岛素、C肽和胰岛素C肽比值对胰岛素自身免疫综合征的诊断价值

目的探讨血清胰岛素、C肽和胰岛素C肽比值这三种指标在胰岛素自身免疫综合征(IAS)临床诊断中的价值。方法以"胰岛素自身免疫综合征"为关键词,搜索"万方医学网"、"中国知网"数据库,选择低血糖症状发作时血糖测定值小于2.8 mmol/L的患者,同时测定了胰岛素、C肽水平,且明确诊断的病例,分析空腹及之后各时段患者临床资料,并分析患者血清胰岛素、C肽和胰岛素C肽比值。结果入组的IAS患者共57例,患者空腹之后1 h、2 h、3 h及4 h时胰岛素水平值、C肽水平值均显著高于空腹时的胰岛素水平值、C肽水平值,而空腹之后1 h、2 h、3 h时的血糖值均明显高于空腹时的血糖水平,差异均有显著统计学意义(P<0.01);IAS患者空腹之后0.5 h、1 h以及2 h时胰岛素释放指数较空腹时胰岛素释放指数明显降低,而空腹之后4 h胰岛素释放指数较空腹时有显著升高,差异均有显著统计学意义(P<0.01);1 h、2 h、3 h及4 h时胰岛素C肽比值较空腹时均明显降低,差异均有显著统计学意义(P<0.01)。结论利用血清胰岛素、C肽和胰岛素C肽比值在检测中的差异表达,能够有效提高胰岛素自身免疫综合征在临床中的鉴别诊断,有效减少误诊率。

真空采血针在胰岛素C肽释放实验中应用体会

目的:探讨真空采血针与常规采血两种方法分别测定静脉血中C肽的浓度是否对检验结果产生影响。方法:采用自身对照法,对30名自愿患者同时用常规静脉穿刺采血法和一次性真空采血针留置法分别抽取患者0min、30min、60min、90min、120min、180min的静脉血,用荧光免疫法测定患者静脉血中C肽的浓度。结果:一次性真空采血针留置采血测定的静脉血中C肽的浓度与常规采血法相比,差异无显著性(P>0.05)。结论:胰岛素C肽检测时,一次性真空采血针留置法可代替传统的采血方法,能减轻多次静脉穿刺给患者带来创伤和痛苦。

胰岛素C肽检测在新生儿低血糖症诊治中的应用研究

探讨胰岛素C肽检测在新生儿低血糖症诊治中的应用效果。方法 选取2019年1月-2022年12月我院新生儿科收治的低血糖症新生儿100例为低血糖组,另选取同时血糖正常新生儿100例为正常组,均进行胰岛素C肽检测,分析C肽、胰岛素水平和血糖的关系。结果 正常组新生儿在C肽、胰岛素水平和低血糖组有较大差异,P<0.05;低血糖持续时间越长,C肽、胰岛素水平越高。结论 在新生儿低血糖症诊治应用胰岛素C肽检测,C肽、胰岛素水平和低血糖的发生具有一定的相关性,需要及时采取措施干预,保证新生儿的健康,可以在临床上进行推广。

2型糖尿病胰岛素、C肽水平变化特点及相关临床应用

目的了解2型糖尿病患者口服葡萄糖耐量实验和胰岛素、c肽水平变化特点及临床应用。方法2型糖尿病患者200例，口服75g进行葡萄糖耐量试验和胰岛素、C肽释放试验，分别在O、0．5、1、2、3h测定血糖、胰岛素和C肽。结果健康对照组胰岛素、c肽1h达到分泌高峰，3h回落至正常水平；实验组胰岛素、c肽分别于2、3h达至高峰，峰值低于健康对照组，且时限反应曲线低平。结论测定血清胰岛素、C肽水平是判定胰岛细胞功能是否正常以及敏感性的最佳选择，在临床应用具有重要的价值。

重组羧肽酶B在胰岛素原C肽制备工艺中的应用

用RT-PCR方法克隆了大鼠羧肽酶原B的cDNA编码序列,将其重组到原核表达质粒pT7-473中,并在大肠杆菌中以包涵体方式获得高表达。SDS-PAGE电泳及灰度扫描显示表达量达菌体总蛋白的35%,表达产物融合了表达质粒上的6His。在变性条件下,经Ni-NTA柱纯化,得到羧肽酶原B,在复性液中进行稀释复性后,胰蛋白酶切得具酶活性的羧肽酶B,然后经DEAE-FF分离纯化获得较纯的羧肽酶B(28.5mg/L),比活为13.5u/mg。用RP-HPLC分析胰蛋白酶+羧肽酶B酶解胰岛素原C肽三聚体的酶解产物,证明该重组的羧肽酶B可替代提取的羧肽酶B应用于胰岛素原C肽的制备工艺中。

重组人源胰岛素原C肽在大肠杆菌中的克隆、表达与纯化(英文)

目的:构建一种新型表达载体(pEDCC),表达并纯化得到人源胰岛素原C肽。方法:将编码截短的门冬酰胺酶突变体(ansB-C),天然C肽,人IgG1铰链区(hinge),额外的酸敏感二肽(DP)以及富含碱性氨基酸的8肽(KRKRKKSR)的核苷酸序列依次分别插入pET28a载体中,构建表达载体pEDCC。在乳糖的诱导下,融合蛋白ansB-C-hinge-DPKRKRKKSRNGS-GR-C-peptide以包涵体形式高效表达。融合蛋白经洗涤和乙醇分级沉淀纯化后,通过酸水解将PKRKRKKSRNGSGR-C-peptide释放出来。C肽N端14肽用胰蛋白酶切割,通过DE52柱与C-peptide分离。结果:构建的表达载体pEDCC序列正确,融合蛋白经分离纯化得到了高纯度的重组人源胰岛素原C肽。结论:以截短的门冬酰胺酶作为融合伙伴,并以富含碱性氨基酸的8肽调节等电点是一种生产重组人源胰岛素原C肽的有效方法。

胰岛素类似物取代人胰岛素联合口服降糖药对糖尿病患者用药量和C肽-胰岛素释放的影响

目的观察预混胰岛素类似物取代人胰岛素联合口服降糖药治疗2型糖尿病时的用药量及治疗后C肽-胰岛素的情况。方法将本院收治的2型糖尿病患者按自愿的方式分成胰岛素类似物组(60例)和人胰岛素组(50例)。所有患者均口服降糖药(二甲双胍)辅助治疗,胰岛素类似物组患者皮下注射诺和锐30降血糖,人胰岛素组患者皮下注射诺和灵30R降血糖。比较治疗期间两组患者的空腹血糖(FBG)、餐后2 h后血浆血糖(PBG)的含量、两组患者胰岛素总用量、治疗后C肽-胰岛素的情况。结果治疗期间,两组患者的空腹血糖含量和餐后2 h血糖含量较治疗前均显著下降,但组间差异无统计学意义(P>0.05);治疗期间实验组患者胰岛素总用量明显低于人胰岛素组患者胰岛素总用量(P<0.05,P<0.01);胰岛素类似物组患者的胰岛素抵抗指数显著低于人胰岛素组患者(P<0.05)。结论预混胰岛素类似物联合口服降糖药治疗2型糖尿病的临床效果优于应用人胰岛素联合口服降糖药的治疗效果,胰岛素类似物联合口服降糖药是一种值得推广的治疗2型糖尿病的方案。

hGH-双精氨酸C肽人胰岛素原基因的克隆表达及纯化研究

旨在提高基因重组人胰岛素在大肠杆菌中表达的稳定性及表达包涵体蛋白的复性水平。在人胰岛素原N端前融合人生长素N端的一段序列来充当前导肽,同时将C肽设计为两个精氨酸,分10段合成长链寡核苷酸链,利用重叠延伸PCR技术(SOE PCR)扩增得到该基因片段。与表达载体PET-30a连接,转化E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达。表达的融合蛋白采用Ni-NTA亲和层析纯化,纯化后的蛋白经复性、冻干等步骤后用胰蛋白酶,羧肽酶B双酶切再过DEAE Sepharose FastFlow阴离子交换柱,收集洗脱峰。对制备所得的胰岛素用SDS-PAGE,Western blot进行性质鉴定,及皮下注射小鼠测定生物活性。结果显示,目的蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中得到了表达,表达产物以不溶性包涵体形式纯在,约占大肠杆菌总蛋白的30%。经Ni-NTA亲和层析得到的重组蛋白纯度为85%,DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换纯化得到单组分胰岛素。Western Blot显示制备所得的胰岛素具有胰岛素免疫原性,皮下给药注射小鼠活性测定表明具有明显的降血糖活性。获得了一种高效生产基因重组人胰岛素的方法,为研究胰岛素类似物奠定了前期基础同时也为今后探索胰岛素的非注射给药途径提供了原料。

血C肽和胰岛素测定在2型糖尿病中的应用

目的 :对 4 0例 2型糖尿病患者及 4 5例正常人馒头餐代谢试验血清中 C肽和胰岛素含量测定结果进行分析。了解 2型糖尿病中糖代谢和胰岛β细胞功能。方法 :用美国 DPC化学发光测定仪检测 C肽和胰岛素。结果 :2型糖尿病空腹 C肽和胰岛素高于正常人 (P<0 .0 5 ) ,餐后 1h对照组出现峰值 ,餐后 2 h糖尿病组达到高峰 ,餐后 3h仍不能恢复至正常水平。结论 :临床应用发光法为糖尿病的检测提供了一种方法。

胰岛素原C肽对2型糖尿病患者离体红细胞膜Na^+-K^+-ATP酶活性及红细胞内Ca^(2+)浓度的影响

目的研究外源性胰岛素原C肽对2型糖尿病患者离体红细胞膜Na+-K+-ATP酶活性及红细胞内Ca2+浓度的影响。方法取2型糖尿病患者空腹血,肝素抗凝,分离红细胞,生理盐水重新悬浮,加外源性C肽,分别测定细胞膜上的Na+-K+-ATP酶活性和细胞内Ca2+浓度。结果外源性C肽的加入可升高2型糖尿病患者红细胞膜的Na+-K+-ATP酶活性,并降低红细胞内的Ca2+浓度。结论胰岛素原C肽可以改善2型糖尿病患者降低的红细胞膜Na+-K+-ATP酶活性。

胰岛素原C肽对糖尿病大鼠视网膜一氧化氮合酶活力及一氧化氮含量的影响

目的观察单独应用生理剂量的重组人胰岛素原 C 肽对链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)诱导的糖尿病大鼠视网膜一氧化氮合酶(Nitric oxide synthase,NOS)活力及一氧化氮(Nitric oxide,NO)合成的影响。方法链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病大鼠模型。实验动物分三组,糖尿病组、糖尿病应用 C 肽组(C 肽剂量:130nmol/KgBW 皮下注射2次/日)、正常对照组,SPF 环境饲养8 wk。用带标记的 L-精氨酸转化量检测 NOS 活力,硝酸还原酶法测定组织匀浆 NO 含量。结果平均 iNOS 活力糖尿病组比正常组显著升高(Q=5.179,P<0.01),C 肽组明显低于糖尿病组(Q=3.302,P<0.05),与正常组相比差异无统计意义(Q=1.877,P>0.05)。平均 cNOS活力糖尿病组与 C 肽组均低于正常对照组(Q=6.29,P<0.01;Q=3.24,P<0.05),C 肽组高于糖尿病组,两组问差别也有统计意义(Q=3.05,P<0.05)。平均 NO 含量三组差别有极显著意义(F=16.63,P<0.01,n=7)。结论早期单独应用胰岛素原 C 肽可以部分改善糖尿病引起的视网膜 cNOS/iNOS 失衡及 NO 合成过度。

C肽胰岛素胰高糖素胰岛素抗体在糖尿病诊治中的探讨

Ｃ肽胰岛素胰高糖素胰岛素抗体在糖尿病诊治中的探讨白晓光，王淑平，梁宏伟，雷琪智，杨文英，邓秀珍（内蒙古自治区医院）糖尿病是一组病因和发病机制尚未完全阐明的内分泌代谢疾病临床以高血糖、为主要特征。而胰岛素分泌绝对和相对不足及靶细胞对胰岛素敏感性降低又是...