胰淀素作用于背外侧被盖核胆碱乙酰转移酶神经元调节小鼠体重

胰淀素(amylin)作用于背外侧被盖核(lateral dorsal tegmental nucleus,LDT),诱导减肥和抑食效应,并激活背肩胛棕色脂肪组织(interscapular brown adipose tissue,IBAT)产热。多种食欲激素受体与胆碱乙酰转移酶(choline acetyltransferase,ChAT)神经元共同定位于LDT中,以调节饱腹感和能量消耗。然而,LDT的ChAT神经元是否参与胰淀素介导的体重调节作用尚待探索。作者拟通过免疫荧光检测小鼠LDT中原癌基因蛋白(c-Fos)和ChAT神经元的表达,逆行示踪技术确认LDT的下游神经核团,神经元损伤试验分析胰淀素作用的神经机制。结果显示:腹腔注射胰淀素显著降低小鼠体重,并显著促进LDT和臂旁核(PBN)中c-Fos和ChAT神经元表达。ChAT和神经型一氧化氮合成酶(nNOS)神经元在LDT、PBN和迷走神经背侧核(DMV)中共表达。逆行示踪试验证明LDT向PBN神经元发送神经投射。此外,损伤LDT和PBN神经元可降低胰淀素的减肥效果。LDT是连接PBN的能量平衡调节中枢,ChAT神经元参与介导胰淀素的体重调节过程。

胰淀素对阿尔茨海默病小鼠学习和记忆能力以及Akt信号通路的影响

目的探讨胰淀素[也称为胰岛淀粉样多肽(islet amyloid polypeptide,IAPP)]对APP/PS1小鼠的学习和记忆能力,以及磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路的影响。方法依据随机数字表法将APP/PS1小鼠分为阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)组、IAPP组,每组10只。IAPP组小鼠腹腔内注射0.5μmol/L的IAPP,每日1次,AD组小鼠腹腔注射相同剂量的PBS。2组小鼠干预时间均为10周。采用Morris水迷宫检测小鼠学习记忆能力,HE染色观察小鼠脑海马组织病理形态变化,透射电镜观察小鼠海马神经元超微结构;生化方法检测小鼠海马组织谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)水平、超氧化物歧化酶(SOD),酶联免疫吸附实验(ELISA)试剂盒检测炎症因子白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素1β(IL-1β)水平以及Aβ42的含量;Western blot检测PI3K/Akt蛋白表达水平。结果与AD组相比,IAPP组小鼠平台潜伏期减少(P<0.01),穿越平台次数和探索隐藏平台时间均增加(P<0.01),小鼠游泳速度无明显差异。HE染色结果显示与AD组相比,IAPP组小鼠海马组织神经细胞数目较多,排列整齐(P<0.05)。免疫组化结果显示与AD组相比,IAPP组小鼠海马组织Aβ蛋白降低(P<0.01)。与AD组相比,IAPP组小鼠海马组织氧化应激水平和炎症因子水平降低(P<0.01)。与AD组相比,IAPP组小鼠超微结构观察到神经元线粒体结构较为清晰、空泡化减少,微管、微丝排列较为整齐。与AD组相比,IAPP组小鼠p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt蛋白相对表达量均升高(P<0.01)。结论胰淀素能够减少海马组织氧化应激和炎症反应,改善AD小鼠学习记忆能力,并且促进PI3K/Akt信号通路的激活。

胰岛素原和胰淀素原水平与胰岛素抵抗和胰岛β细胞功能的相关性研究

目的分析糖代谢异常个体血清胰岛素原(proinsulin,PI)、胰岛素(insulin,INS)和胰淀素原(proamylin,PA)、胰淀素(amylin,AMY)的变化,探讨胰岛素原和胰淀素原水平与胰岛素抵抗和胰岛β细胞功能的关系。方法研究对象分为正常组、糖调节异常组(IGR组)、2型糖尿病(T2DM)1组(FBG<10 mmol/L)和T2DM2组(FBG>15 mmol/L)。分别测定人体测量学指标、血生化指标,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)和胰岛素敏感指数(HOMA-B)。结果不同血糖水平的个体PI和AMY差异无统计学意义(P>0.05),但4组间PA、PI/INS和PA/AMY有显著性差异(P<0.05);PI和PI/INS对HOMA-IR有显著性影响(P<0.01),PA和PA/AMY对HOMA-B有显著性影响(P<0.01)。结论胰岛素原在胰岛素抵抗产生中可能起着重要的作用,而胰淀素原在胰岛β细胞功能障碍中可能起着重要的作用。

胰淀素类似物普兰林肽

近年来糖尿病患病率呈现不断上升的态势,然而血糖控制达标率仍然很低,即使在发达国家,人群血糖达标率也仅为1/3。目前降糖药物种类繁多,降糖机制也不尽相同,但仍不能满足临床治疗需求,新药开发依然任重道远。

胰淀素对胰岛细胞凋亡及相关基因表达的影响

目的 :观察胰淀素对胰岛细胞凋亡和凋亡相关基因表达的影响。方法 :应用放免法检测胰淀素培养后大鼠胰岛细胞和胰岛 β细胞瘤细胞系 (βTc3)高糖刺激后上清液的胰岛素水平 ;应用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记 (TUNEL)技术检测胰淀素培养后大鼠胰岛细胞和小鼠 βTc3细胞凋亡百分率 ;应用定量RT -PCR(QRT -PCR)检测培养后bcl-2、baxmRNA的表达。结果 :胰淀素使原代培养的大鼠胰岛细胞和 βTC3胰岛素分泌功能明显下降 ,使原代培养的大鼠胰岛细胞和 βTC3的凋亡细胞比例明显增加 ;胰岛细胞凋亡过程中 ,诱导凋亡的基因baxmRNA表达水平明显升高 ,抵抗凋亡基因bcl-2mRNA表达水平明显下降。结论 :胰淀素可能通过诱导胰岛细胞凋亡导致或加重糖尿病 ,其中bcl-2/baxmRNA表达比率变化可能起重要作用。

单纯性肥胖患者血清胰淀素水平与体成分的相关性研究

目的:利用生物电阻抗仪和多层螺旋CT研究单纯性肥胖患者血清胰淀素水平与体脂及腹部内脏脂肪和皮下脂肪的相关性。方法:检测36例单纯性肥胖患者腰围、血压、血糖、血脂、胰岛素和胰淀素,生物电阻抗仪测体成分,螺旋CT测腹部脂肪,与35例正常对照者比较,并做胰淀素与各指标间的相关性分析。结果:单纯性肥胖患者的空腹血清胰淀素较正常人显著增高(P<0.05),并与腹部皮下脂肪体积呈负相关(r=-0.786,P<0.05),与体脂含量无相关性,与血清总胆固醇呈负相关(r=-0.475,P<0.05)。结论:单纯性肥胖患者存在高胰淀素血症和胰淀素抵抗,胰淀素在人体内是否是反映体内脂肪储存的信号有待于进一步研究。

胰淀素对大鼠胰岛素和胰高血糖素分泌的影响

目的 研究胰淀素对大鼠胰岛素和胰高血糖素分泌的影响。方法 应用胶原酶消化和不连续密度梯度离心技术建立离体大鼠胰岛模型，研究不同浓度胰淀素对胰岛素和胰高血糖素分泌的影响。结果 不同浓度的葡萄糖增加胰岛素的分泌，抑制胰高血糖素的分泌，并都呈线性相关。葡萄糖浓度为0、5．6、11．2mmol／L时，孵育1h，胰淀素（10^-10～10^-5mol／L）显著抑制胰高血糖素的分泌（P〈0．05），且胰高血糖素的分泌与胰淀素浓度呈负相关（P〈0．01）。葡萄糖浓度为5．6mmol／L时，不同浓度的胰淀素增加胰岛素分泌，而且两者呈正相关（P〈0．05）；但葡萄糖浓度为11．2和16．7mmol／L时，10^-5mol／L胰淀素对胰岛素的分泌有明显抑制作用（P〈0．05）。结论 胰淀素对胰高血糖素的分泌有直接抑制作用；在葡萄糖浓度为5．6mmol／L时，胰淀素能增加胰岛素分泌，抑制胰高血糖素分泌；高糖时，高浓度的胰淀素抑制胰岛素分泌。

胰淀素诱导人肾小球系膜细胞凋亡

目的 :研究胰淀素 (amylin)对人系膜细胞的毒性作用。 方法 :采用电镜、TUNEL、DNA凝胶电泳和碘化丙啶染色 (PI)流式细胞仪分析技术及免疫组化技术 ,观察amylin对人系膜细胞的作用。 结果 :光镜和电镜下见细胞体积缩小、染色质浓染、致密、边移和凋亡小体形成 ;TUNEL细胞染色阳性 ,DNA凝胶电泳出现DNA“梯形”片断 ;amylin处理 48h后 ,均可见亚二倍体细胞凋亡峰。定量分析示 :系膜细胞的凋亡数量与amylin浓度呈剂量依赖性 (P <0 0 1)。amylin治疗组和对照组乳酸脱氢酶活性细胞释放率无显著性差异 (P >0 0 5 )。 结论 :amylin对人系膜细胞具有细胞毒性作用 ,并可诱导系膜细胞的凋亡。

不同糖耐量人群血清胰淀素与糖脂代谢的相关研究

目的探讨不同糖耐量人群胰淀素(Amylin)与糖脂代谢的关系。方法分别采用酶联免疫法、放射免疫分析法及全自动生化仪检测46例正常糖耐量者(NGT组)、68例糖调节受损者(IGR组)、92例糖尿病患者(DM组)的Amylin水平及糖脂代谢指标,并分析Amylin与糖脂代谢指标的相关性。结果 IGR、DM组较NGT组的Amylin水平明显升高,以DM组为著(P<0.05);Amylin水平与甘油三酯、空腹血糖、餐后2 h血糖、空腹胰岛素、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、糖化血红蛋白呈正相关,与高密度脂蛋白、胰岛素分泌指数呈负相关;Amylin是HOMA-IR的决定变量。结论 Amylin是参与糖脂代谢的重要因素。

糖尿病肾病肾组织胰淀素沉积及其致病意义

目的观察胰淀素(amylin)在糖尿病肾病(DN)患者肾组织的沉积和分布特征,探讨肾脏Amylin沉积的致病意义及其影响因素。方法149例经肾活检证实的2型DN患者,免疫组化方法检测肾组织Amylin的沉积,同时行肾组织ApoE检测及电镜观察。竞争性ELISA方法检测血浆Amylin水平,结合患者肾脏病理和临床相关指标进行分析。选择同期经肾活检确诊的肾淀粉样变性、肥胖相关性肾病、轻链沉积病和原发性肾小球肾炎(系膜增生性病变)患者作为相关疾病对照组。结果72例DN患者(48.3%)肾组织Amylin染色阳性,Amylin主要沉积在肾小球系膜基质增多而扩张的系膜区、K-W结节内、增厚的球囊壁和病变的血管壁。肾组织电镜可见无分支、长直线形丝状结构,随意分布于肾小球系膜区、内皮下或基膜内,直径(10.30±1.77)nm。DN患者肾组织Amylin沉积者其肾小球系膜增生,结节病变及肾小球硬化的发生率较无Amylin沉积患者明显增高而小管间质病变程度亦较无Amylin沉积患者重(P<0.05)。肾脏Amylin沉积DN患者24h尿蛋白定量、高血压、肾小管功能受损以及肾功能损伤的程度和贫血均较无Amylin肾组织沉积组更加严重(P<0.05)。DN患者血浆Amylin水平均显著增高(P<0.01),但Amylin肾组织染色阳性和阴性组二者之间并无明显差异(P>0.05)。结论DN患者血浆Amylin水平较正常人明显升高,肾脏可发生Amylin沉积。肾组织Amylin沉积不仅可加重肾组织损伤,而且还与疾病临床表现的严重程度有一定的联系。Amylin在肾脏的沉积参与了DN组织损伤的发生和发展。

胰淀素治疗糖皮质激素性骨质疏松大鼠的实验研究

目的 探讨胰淀素对糖皮质激素性骨质疏松的治疗作用。方法 采用 3月龄Wistar大鼠地塞米松肌注法建立糖皮质激素性骨质疏松症动物模型 ,随机分为 4组 :正常对照组、地塞米松组、胰淀素治疗组、维生素D组。 12h后行骨密度、骨生物力学及血、尿生化检查。结果 ①骨密度 :与地塞米松组相比 ,胰淀素治疗组腰椎骨密度增加 3 5 % ,股骨骨密度增加 17% ,其效果优于维生素D。②骨力学 :胰淀素能显著提高类固醇大鼠股骨的生物力学性能。③生化指标 :胰淀素治疗组骨钙素明显升高 ,同时尿羟脯氨酸 肌酐、尿钙 肌酐、尿磷 肌酐均普遍降低。结论 胰淀素可以有效地阻止糖皮质激素性骨质疏松大鼠的骨量丢失 ,不仅可以促进骨形成 ,同时还具有抑制骨吸收的作用。

老年男性骨质疏松患者血清胰淀素与骨密度及骨转换生化指标的关系

目的探讨老年男性骨质疏松患者血清胰淀素(Amylin)水平的变化及其与骨密度(BMD)及骨转换生化指标的关系。方法采用酶联免疫法(ELISA)测定89例老年男性骨质疏松患者和50例正常男性老年人血清Amylin、骨碱性磷酸酶(BAP)、骨钙素(BGP)、I型胶原氨基末端肽(NTX),采用美国NORLAND XR-46 Excell-plus双能X线骨密度测定仪分别测定正位腰椎(L2-L4)及左侧股骨颈BMD。结果老年男性骨质疏松患者正位腰椎及左侧股骨颈BMD、血清Amylin、BAP、BGP水平较正常男性老年人明显降低(均P<0.01),血清NTX水平较正常男性老年人明显升高(P<0.01)。老年男性骨质疏松患者血清Amylin水平与患者正位腰椎及左侧股骨颈BMD、血清BAP、BGP水平呈明显正相关(r=0.598,r=0.652,r=0.576,r=0.584,均P<0.01),与患者血清NTX水平呈明显负相关(r=-0.673,P<0.01)。结论血清胰淀素水平降低在老年男性骨质疏松的发病中可能发挥重要作用。

胰淀素在痴呆小鼠和正常小鼠脑内的分布和表达变化

目的观察胰淀素在正常小鼠、阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)模型小鼠和肥胖模型小鼠脑内的分布和表达情况,分析其与小鼠脑内老年斑的关系,探讨胰淀素是否参与老年性痴呆的发病。方法取5月龄雄性APP/PS1双转基因小鼠(AD模型小鼠)、ob/ob肥胖模型小鼠及野生型小鼠(正常小鼠),采用免疫荧光染色方法检测胰淀素和老年斑在各组小鼠脑内的分布和表达。结果免疫荧光双标检测结果显示:胰淀素免疫阳性神经元广泛分布于APP/PS1双转基因小鼠脑内,包括皮质、海马、丘脑等区域,强阳性表达于岛叶和梨形皮质区域(P<0.01),而老年斑则选择性表达于新皮质、海马等区域,胰淀素的分布范围较老年斑的分布广泛,在部分老年斑的周围可见胰淀素免疫阳性物质分布。5月龄AD模型小鼠、ob/ob肥胖模型小鼠新皮质内胰淀素阳性神经元数目明显高于正常小鼠(P<0.05,P<0.01)。结论胰淀素在AD模型小鼠、ob/ob肥胖模型小鼠及正常小鼠脑内的分布和表达存在差异,这种差异有可能促进老年斑的形成以及参与AD疾病的发生。

胰淀素对人胰岛β细胞凋亡的影响及其分子机制的初步研究

目的 :初步探讨胰淀素 (amylin)对人胰岛 β细胞凋亡的影响及其分子机制。 方法 :分离培养人胰岛细胞 ,免疫组化鉴定β细胞后分为对照组 (培养液中含 5 6mmol/L葡萄糖 )、胰淀素组 (培养液中含 10 μmol/L胰淀素+5 6mmol/L葡萄糖 )及氨基胍组 (培养液中含 10 μmol/L胰淀素 +0 5mmol/L氨基胍 +5 6mmol/L葡萄糖 ) ,于 37℃、5 %CO2 培养 2 4h后做胰岛素释放实验 ,测定培养液上清胰岛素、一氧化氮 (NO2 -/NO3 -)、还原型谷胱甘肽 (GSH)水平。原位末端核苷酸标记法 (TUNEL)和胰岛素免疫组化双染色法及ELISA检测胰岛β细胞凋亡 ,RT -PCR检测胰岛细胞p5 3和bcl- 2mRNA表达水平。结果 :胰淀素组胰岛 β细胞凋亡小体富计系数 (2 17± 0 2 1)、β细胞凋亡百分数 (13% )、NO2 -/NO3 -(2 0 1 3± 17 3) μmol/L和p5 3mRNA表达水平 (0 34± 0 0 4 )显著高于氨基胍组和对照组 (P <0 0 1) ,而胰岛素 (33 4± 13 1)mU·L-1/ 1× 10 6cells、GSH[(5 6± 0 8)mg/L]和bcl- 2mRNA(0 0 7± 0 0 1)表达水平则显著低于氨基胍组和对照组 (P <0 0 5 )。结论 :胰淀素可诱导人胰岛 β细胞凋亡 ,其机制可能与胰岛 β细胞抗氧化能力降低引起p5 3高表达有关。

胰淀素对糖皮质激素性骨质疏松大鼠骨生物力学性能的影响

目的:探讨胰淀素对糖皮质激素性骨质疏松症(G IO)大鼠骨生物力学性能的影响。方法:采用3月龄W istar大鼠地塞米松肌注法建立G IO动物模型,随机分为四组:正常对照组、模型组、胰淀素治疗组、维生素D组。12周后行骨生物力学检查。结果:胰淀素治疗后,大鼠股骨几何参数(直径)、结构力学性能(最大桡度、最大负荷)明显提高(P<0.05),材料力学性能(最大应力、最大应变)无显著差异。结论:胰淀素可以有效地改善G IO大鼠的骨生物力学性能,增强抗骨折能力。

胰淀素对胰岛细胞损伤作用的初步研究

目的观察胰淀素对体外培养胰岛细胞活力的影响，探讨胰淀素在２型糖尿病发病中的作用。方法应用体外单 层培养新生乳鼠胰岛细胞，采用噻唑蓝法测定在不同浓度胰淀素作用不同时间后细胞的活力变化。结果１０ μｍｏｌ／Ｌ以 上胰淀素能引起胰岛细胞活力降低（Ｐ＜０．０１），１０ μｍｏｌ／Ｌ胰淀素时间梯度组细胞活力呈进行性下降，在 ２ ｈ时与对照组 相比差异非常显著。相差显微镜下可见部分细胞胞体缩小，胞质发生空泡变性，少数细胞核固缩、裂解，胞膜突起呈出胞 状。结论 胰淀素对胰岛细胞有直接损伤作用，这种损伤程度与胰淀素浓度及作用时间呈正相关。

神经生长因子对胰淀素所致大鼠胰岛细胞功能障碍的保护作用

目的:评价神经生长因子(NGF)对高浓度胰淀素所致大鼠胰岛细胞活力和胰岛素分泌功能损伤的修复作用。方法:以不同浓度胰淀素(1、5、10μmol/L)孵育原代培养的大鼠胰岛β细胞,制备功能减退的细胞模型,再以不同浓度的NGF(50、100、200μg/L)孵育高浓度胰淀素(10μmol/L)作用过的胰岛细胞,分别设立空白对照组,比较各组细胞对四甲基偶氮唑盐(MTT)还原能力和胰岛素的分泌能力。结果:高浓度胰淀素(10μmol/L)作用后胰岛细胞对MTT还原能力以及基础糖(5mmol/L)和高糖状态(16.7mmol/L)下胰岛素分泌量的影响与对照组相比均明显下降,差异具有统计学意义(P<0.01),细胞模型制备成功。用不同浓度NGF孵育24h后,随着NGF剂量的增加,此受损胰岛细胞胰岛素分泌量(即24h胰岛素分泌量)、高糖(16.7mmol/L)刺激下胰岛素分泌量均明显增加,受损胰岛细胞对MTT还原能力亦逐步增强。结论:NGF可减轻高浓度胰淀素对胰岛细胞活力的抑制作用,并促进胰岛β细胞分泌功能的恢复。

胰淀素对类固醇性骨质疏松大鼠骨密度及骨小梁结构的影响

目的 :探讨胰淀素 (amylin)对类固醇性骨质疏松大鼠骨密度及骨小梁结构的影响。 方法 :采用 3个月龄Wistar大鼠以地塞米松肌内注射法 ,建立类固醇性骨质疏松症动物模型 ,随机分为四组 :即正常对照组、地塞米松组、胰淀素治疗组、维生素D治疗组 ,12周后行骨密度及骨形态学检查。 结果 :①骨密度 :与地塞米松组相比 ,胰淀素治疗组腰椎、股骨的骨密度均显著升高 (P <0 .0 1) ;维生素D治疗组腰椎骨密度明显升高 (P <0 .0 5 ) ,而股骨骨密度则无显著差异。②骨形态学 :地塞米松组较正常对照组骨小梁明显变细 ,且排列稀疏 ,部分区域的骨小梁出现断裂、残端游离 ,三维结构受到破坏。应用胰淀素治疗后 ,骨小梁数目增多 ,排列较密集 ,与维生素D组病理表现类似。 结论 :胰淀素可以有效地增加类固醇性骨质疏松大鼠的骨密度 ,改善骨小梁的结构 ,显示出良好的应用前景。

胰淀素对肥胖相关性肾病大鼠的致病作用

目的探讨胰淀素(Amylin)引起肥胖相关性肾病(ORG)大鼠血清学变化及病理学变化特征及Amylin对ORG大鼠的致病作用。方法 30只Wistar大鼠随机分为两组,正常对照组(NC组,10只)和ORG模型组(20只)。应用高脂饮食复制ORG大鼠模型。模型大鼠再随机均分成两组,分别为Amylin组和ORG组。采用ELISA法检测血清Amylin含量;放射免疫法检测胰岛素水平;自动生化分析仪测定血糖、血脂;考马斯亮蓝法检测24 h尿蛋白定量;免疫组化法检测肾小球内Amylin的表达。结果①ORG组和Amylin组Lee′指数显著高于NC组(P<0.01);②ORG组的TC和24 h-PRO与NC组比较差异具有显著性(P<0.05);Amylin组除血糖外,血脂、HOMA-IR和Amylin水平、24 h-PRO与NC组比较,差异具有显著性(P<0.01);③各组大鼠形态学变化:ORG组和Amylin组可见肾小球体积增大,节段系膜细胞增生,系膜基质增多;④免疫组化结果:NC组大鼠无Amylin表达,ORG组和Amylin组在肾小球系膜区有表达,Amylin组表达量较多。结论 Amylin可加重ORG大鼠肾脏损伤,促进疾病进展。