芒硝外敷联合乌司他丁对胰腺炎大鼠肠屏障功能、胰腺细胞活性及PI3K/Akt/mTOR信号的影响

目的探讨芒硝外敷联合乌司他丁对胰腺炎大鼠肠屏障功能、胰腺细胞活性及PI3K/Akt/mTOR信号的影响。方法选取50只SPF级SD雄性大鼠,随机分为正常(N)组,模型(M)组,芒硝外敷(G)组,乌司他丁(U)组,芒硝外敷+乌司他丁(O)组,每组10只,对M组、G组、U组、O组采用开腹经胰胆管逆行性注射5%牛黄胆酸钠法建立胰腺炎模型,N组不建立该模型,建模成功后,对G组腹部给予芒硝外敷,对U组腹腔注射乌司他丁5万U/kg,对O组腹部给予芒硝外敷和腹腔注射乌司他丁5万U/kg,N组、M组同期给予腹腔注射同体积生理盐水,HE法检测胰腺组织病理形态,电镜检测肠屏障功能,TUNEL法检测胰腺细胞凋亡,免疫印迹法检测PI3K/Akt/mTOR信号相关蛋白表达。结果与N组相比,M组可见胰腺组织明显病理变化及肠屏障功能损伤,与M组比较,G组、U组、O组病理形态及肠屏障功能明显改善,且O组改善最为明显;与N组相比,M组大鼠肠粘膜损伤程度、胰腺组织中PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白表达显著升高,胰腺细胞凋亡水平显著降低(均P<0.05),与M组比较,G组、U组、O组大鼠肠粘膜损伤程度、胰腺组织中PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白表达显著降低(均P<0.05),胰腺细胞凋亡水平显著升高(P<0.05),且U组与G组相比差异无统计学意义(P>0.05),O组比U组变化明显(P<0.05)。结论芒硝外敷联合乌司他丁可显著改善胰腺炎大鼠肠屏障功能及胰腺细胞活性,并显著抑制PI3K/Akt/mTOR信号。

孙毅教授团队成果揭示UBE2F-CRL5^(ASB11)-DIRAS2是调控胰腺细胞癌变的促癌和抑癌蛋白轴

2024年4月3日,浙江大学医学院附属第二医院肿瘤研究所/浙江大学转化医学研究院孙毅教授团队在《发育细胞》(Developmental Cell)杂志上发表了最新研究成果论文“The UBE2F-CRL5ASB11-DIRAS2 axis is an oncogene and tumor suppressor cascade in pancreatic cancer cells”(DOI:10.1016/j.devcel.2024.03.018),该研究发现拟素化耦联酶Ube2f在KrasG12D诱导的胰腺肿瘤发生过程中起着重要的协同作用,是一个靶向胰腺癌的潜在靶点。在小鼠KrasG12D诱导的胰腺导管腺癌(PDAC)模型中,研究人员发现敲除Ube2f基因显著延缓了胰腺腺泡细胞导管化及转变为胰腺上皮内瘤变的进程。分子机制研究显示,UBE2F与SAG拟素化连接酶E3共同作用,激活cullin-RING泛素连接酶5(CRL5)E3泛素连接酶,CRL5通过底物识别成员ASB11募集新的底物蛋白DIRAS2,促进其泛素化修饰和降解,从而激活下游的MAPK/c-Myc信号通路,促进胰腺肿瘤的发生和发展。

镉对长江华溪蟹肝胰腺细胞超微结构的影响

目的 观察低浓度镉 (39μmol L)处理长江华溪蟹 (Sinopotamonyangtsekiense)后 ,其肝胰腺细胞超微结构的变化。 方法 实验组 30只雄蟹培养在浓度为 39μmol L的氯化镉 (CdCl2 )溶液中 ;对照组 30只雄蟹培养在已放置 2d的自来水中 ,分别在镉处理后 5d、15d、30d三个不同时间段活体解剖雄蟹 ,电镜下观察肝胰腺细胞超微结构。 结果 镉对肝胰腺细胞内的主要细胞器影响表现为 :核膜从弥散状到最后解体 ;线粒体膜通透性改变 ,肿胀变形 ,嵴减少或消失 ,最后完全空泡化 ;粗面内质网先裂解为大小不同的小泡 ,尔后小泡上的核糖体开始脱落 ,直至变成同心圆状板层结构 ;出现大量滑面内质网 ;溶酶体数量随镉处理时间的延长而增多 ,形成空泡、自噬体或髓样体 ;微绒毛出现脱落和部分空泡化。 结论 镉使长江华溪蟹肝胰腺细胞的解毒功能丧失 ,破坏了肝胰腺细胞的细胞核、线粒体、粗面内质网等主要细胞器的结构与功能的完整性 ,影响了肝胰腺细胞的正常生理机能。

善宁对重症急性胰腺炎胰腺细胞的保护作用

目的 探讨善宁对重症急性胰腺炎胰腺细胞的保护作用。方法 采用 15 g/ L去氧胆酸钠逆行胆胰管内注射建立大鼠重症急性胰腺炎 (SAP)模型 ,治疗组背部皮下注射善宁 (1.35μg/ 10 0 g体质量 )给予治疗。观察血中 NO、ET、过氧化脂质 (L PO)以及胰腺细胞线粒体琥珀酸脱氢酶 (SDH )活性、溶酶体酸性磷酸酶 (ACP)释放率、微粒体细胞色素 P4 50 的变化 ,并进行相关分析。结果 与对照组比较 ,模型组血中 NO、ET、L PO以及溶酶体ACP释放率明显升高 (P<0 .0 5 ) ,线粒体 SDH活性以及微粒体细胞色素 P4 50 则显著降低 (P<0 .0 5 ) ;善宁治疗后上述各检测指标均较模型组明显改善 (P<0 .0 5 ) ;相关分析显示 NO、ET、L PO与溶酶体 ACP释放率呈正相关 ,而与线粒体 SDH和微粒体细胞色素 P4 50 呈明显负相关。结论 NO、ET在 SAP的病损中起重要作用 ,善宁能缓解三者的损伤作用 。

锯缘青蟹幼体肝胰腺细胞结构变化与其营养状况的关系Ⅰ状幼体Ⅰ期的研究

对锯缘青蟹氵蚤状幼体Ｉ期不同营养状态下（饥饿或投饵）肝胰腺细胞的超微结构进行了研究，实验表明，不同营养状态下肝胰腺细胞结构发生了较明显的变化，特别是Ｒ细胞某些胞器（如线粒体结构变化和微体颗粒数量和分布的变化）的变化与幼体的营养状态存在有密切的关系，在一定程度上可以表征幼体所处的营养状态，可作为营养状况的生理指标．

海洋骨胶原肽对去卵巢大鼠体重以及胰腺细胞凋亡和组织病变的影响

目的探讨海洋骨胶原肽(MOP)对去卵巢大鼠体重和胰腺细胞凋亡和组织病变的影响。方法将70只SD大鼠随机分为7组:假手术组(A组),去卵巢对照组(B组),去卵巢后加MOP 0.375g/kg干预组(C组),去卵巢后加MOP 0.75g/kg干预组(D组)。去卵巢后加MOP 1.5 g/kg干预组(E组),去卵巢后加MOP 3.0g/kg干预组(F组),去卵巢后加MOP6.0g/kg干预组(G组)。3个月后检测各组大鼠的体重,然后处死大鼠分离摘取胰腺,常规石蜡包埋切片后进行HE染色和TUNEL凋亡检测,观察胰腺组织的病理变化和胰腺细胞的凋亡情况。结果B组3个月后体重增加值明显高于其他组。G组的体重增加值明显低于其他组。HE染色结果:A组未见明显病理改变。其他各去卵巢大鼠组胰腺都可见不同程度的炎症细胞浸润、脂肪变性和坏死等病理表现。TUNEL标记胰腺细胞凋亡数比较:A组显著低于其他6个去卵巢大鼠组(P<0.01);去卵巢大鼠组间比较:B、C、D组都显著高于E、F、G组(P_(B,C)<0.01,P_D<0.05)。而E、F、G组之间没有显著性差异。结论肥胖症的发生以及胰腺细胞凋亡和炎症性坏死或脂肪变性可能是绝经期妇女发生胰岛素抵抗(IR)和糖代谢异常的病理基础。较低剂量(1.5g/kg)MOP就能明显抑制去卵巢大鼠胰腺细胞凋亡,保护胰腺组织减轻炎症损伤变性坏死;较高剂量(6.0g/kg)MOP能明显抑制去卵巢大鼠体重增加。MOP可望应用于绝经期妇女骨质疏松症、IR和心血管疾病的防治。

银杏叶提取物对重症胰腺炎胰腺细胞凋亡作用机制的探讨

目的 探讨银杏叶提取物 (EGb)对急性重症胰腺炎 (ASP)胰腺细胞凋亡的作用机制。方法 将 78只SD大鼠分为假手术 (SO)组、ASP组和治疗组。治疗组在ASP模型诱发后经腹腔注射金纳多注射液 2 0mg/kg ,每 6h注射一次 ,动态观察胰腺病理变化 ,免疫组化 (TUNEL法与SP法 )检测胰腺凋亡情况与细胞凋亡调控基因Bcl 2和C myc蛋白的表达。结果 治疗组胰腺病理损害程度较ASP组减轻。ASP组凋亡指数明显高于SO组 ,(P <0 0 1) ,且术后 3h达高峰 ,治疗组 3h、6h凋亡指数明显下降 (P <0 0 5 )。免疫组化 :ASP组Bcl 2表达明显增多 ,治疗组 3h的Bcl 2表达较ASP组同时相点上调 (P <0 0 5 ) ;ASP组C myc表达术后 6h达高峰 ,治疗组 3h、12h的C myc表达虽有增高 ,但无显著性差异。结论 金纳多能减轻胰腺病理损害、抑制胰腺细胞的凋亡 ,其抑制细胞凋亡可能与其上调凋亡调控基因Bcl 2的表达有关。

亚油酸对培养日本沼虾肝胰腺细胞的影响

对日本沼虾肝胰腺细胞进行培养,采用M199(GIBCOBRL)细胞培养基加质量分数为10%的胎牛血清,添加的补充成分有:NaCl,NaHCO3,MgCl2,CaCl2,葡萄糖,青霉素和链霉素.同时对pH和渗透压两因子进行了研究,结果表明pH7.0～7.2、渗透压为600μmol/g时,细胞长势最好.以此作为培养条件,在培养基中加入促细胞生长因子的亚油酸,发现其促生长作用明显,其中亚油酸浓度为16×10-5mol/L时,促进作用最好.日本沼虾肝胰腺细胞共继代2次,存活时间约45d.

栀子对急性胰腺炎时胰腺细胞膜功能的影响

本文观察了栀子对大鼠急性胰腺炎时胰腺细胞膜功能的影响。结果显示：（１）模型组胰腺细胞膜上的Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰ酶和Ｃａ２＋－Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶活性均明显低于正常组（Ｐ＜０．０１），用栀子治疗可使其保持正常。（２）治疗组的ｃＡＭＰ虽无明显变化，但ｃＧＭＰ明显降低，ｃＡＭＰ／ｃＧＭＰ比值显著增加（Ｐ＜０．００１）。（３）模型组血清乳酸脱氢酶活性明显增高，而胰腺组织中的活性则降低，治疗组与正常组相近。（４）胰腺炎时血清淀粉酶活性显著增高（Ｐ＜０．０１），治疗组与正常组很接近。上述结果表明栀子对大鼠急性胰腺炎时胰腺细胞膜的功能具有保护作用。

胰腺细胞中与HCV NS2蛋白相互作用蛋白中代谢相关基因的筛选

目的:研究人胰腺细胞中与丙型肝炎病毒(HCV)包膜糖蛋白NS2相互作用的结合蛋白中的代谢相关基因.方法:扩增人胰腺细胞cDNA文库并进行纯化鉴定,将文库质粒转化酵母菌株Y187.诱饵质粒pGBKT7-NS2转化酵母菌株AH109,在色氨酸缺陷型培养基(SD/-Trp)上筛选阳性菌落.应用酵母双杂交系统3将阳性重组AH109菌株与重组酵母菌株Y187进行配合,在4缺培养基(SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade)和铺有X-α-gal的4缺培养基上进行筛选,提取蓝色酵母菌落质粒,电转化大肠埃希菌DH5α后再提取质粒测序.测序结果进行序列比对.结果:成功构建人胰腺cDNA文库以及pGB-KT7-HCVNS2重组质粒,筛选出7种与HCVNS2蛋白相结合的蛋白基因.结论:筛选出的与HCVNS2蛋白结合的部分人胰腺细胞蛋白基因与糖、脂类代谢密切相关.

生长抑素和生长激素对急性重症胰腺炎胰腺细胞凋亡的影响

目的:探讨生长抑素联合生长激素治疗大鼠急性坏死性胰腺炎对胰腺细胞调亡和调控基因 Bax 和 Bcl-2的影响.方法:以牛胆酸钠诱导 SD 大鼠急性坏死性胰腺炎模型,并应用 TUNEL 染色,免疫组化 SABC 法检测胰腺组织中基因 Bax、Bcl-2蛋白表达以及生长抑素联合生长激素治疗后对胰腺细胞凋亡及凋亡调控基因 Bax、Bcl-2蛋白表达的影响.结果:TUNEL 染色显示生理盐水治疗组胰腺细胞凋亡指数显著低于生长抑素治疗组和生长抑素联合生长激素治疗组.免疫组化 SABC 法生长抑素联合生长激素治疗组胰腺细胞Bax 染色阳性率明显高于生理盐水组,而生长抑素治疗组Bax 染色阳性率虽高于生理盐水组,但无统计学意义;生理盐水组胰腺细胞 Bcl-2染色阳性率明显高于生长抑素治疗组及生长抑素联合生长激素治疗组.结论:生长抑素治疗急性坏死性胰腺炎的机制之一可能是诱导损伤的胰腺细胞凋亡以减轻胰腺炎症反应,细胞凋亡机制可能与抑制 Bcl-2的表达有关而与促进 Bax 的表达无关;生长抑素和生长激素联合治疗急性坏死性胰腺炎的机制之一可能是诱导损伤的胰腺细胞凋亡,这机制可能与促进Bax 的表达及抑制 Bcl-2的表达有关.

人胚胎发育中胰腺细胞的增殖变化

目的:探索人胚胎发育过程中胰腺细胞增殖水平。方法:应用免疫组织化学EnVision法,检测30例人胚胎胰腺组织PCNA的表达。结果:各胎龄段胰腺外分泌细胞PCNA的阳性表达均显著高于内分泌细胞,胚胎发育早期阶段(9～14w)外分泌细胞PCNA的阳性表达明显高于其它胎龄,胚胎发育晚期阶段(29～37w)内分泌部PCNA阳性率高于其它胎龄组。结论:在胚胎发育过程中胰腺外分泌部细胞增殖水平高于内分泌部,随着胎龄的变化,胰腺内、外分泌细胞的增殖水平也发生了变化。

硫酸软骨素对牛磺胆酸钠诱导的大鼠离体胰腺细胞骨架损伤的影响

为探讨硫酸软骨素(CS)对牛磺胆酸钠诱导的大鼠离体胰腺腺泡细胞氧化应激损伤及细胞骨架蛋白F-actin结构的影响。笔者将雄性Wistar大鼠36只,经分离提纯获取胰腺腺泡细胞悬液,牛磺胆酸钠处理离体胰腺细胞后,随机分3组即细胞模型(细胞骨架损伤)组,CS处理组和对照组。各组分别于30min,1h,3h进行MDA,GSH,SOD和ATP含量测定。离心细胞涂片后,以罗丹明-法罗丁F-actin染色,在共聚焦激光显微镜下观察F-actin结构的变化;用流式细胞术检测细胞的F-actin蛋白含量。结果示,模型组GSH,SOD和ATP明显下降(P<0.05),MDA明显升高(P<0.05)。CS组GSH,SOD,ATP下降幅度小于模型组,差异有显著性(P<0.05);MDA升高幅度小于模型组,差异有显著性(P<0.05)。模型组细胞骨架蛋白F-actin解聚并弥漫分布于胞浆内,其蛋白含量持续下降(P<0.05);CS组F-actin结构较稳定,其蛋白水平明显高于模型组(P<0.05)。提示:牛磺胆酸钠诱导的离体胰腺细胞早期已存在内源性抗氧化物质的显著下降,脂质过氧化增加和ATP耗竭加重了细胞损伤。CS可通过减轻氧化应激损伤维持ATP含量,缓解F-actin的降解,稳定细胞骨架结构从而减轻细胞损伤。

谷氨酰胺对重症急性胰腺炎大鼠胰腺细胞凋亡的影响

目的:研究谷氨酰胺(G ln)对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠胰腺细胞凋亡的影响。方法:将80只大鼠随机分成G ln组(n=36)、SAP组(n=36)和对照组(n=8)。术后12、24和36 h处死。用高效液相色谱仪测定血浆和胰腺组织内G ln浓度变化,取大鼠胰腺组织,采用原位末端标记法检测胰腺细胞凋亡指数。结果:SAP时,血浆和胰腺组织内G ln浓度明显下降,经肠道补充G ln能明显提高血浆和胰腺组织内G ln浓度。应用G ln治疗可使SAP大鼠胰腺细胞凋亡指数上升,术后12 h,SAP组为(6.88±0.52)个/100细胞,G ln组为(13.07±0.62)个/100细胞,SAP组相比,其他时点差异也均有显著性意义(P<0.01)。结论:SAP时,应用G ln具有促进胰腺细胞凋亡的作用。

葡多酚对胰腺细胞增殖活性的影响作用

目的 观察葡多酚 (GPC)对正常胰腺细胞和受损伤胰腺细胞增殖活性的影响。方法 ( 1)将经口灌胃不同剂量GPC的小鼠分作给予和不给予60 Co γ射线辐射 2种处理 ,取胰腺用MTT法检测细胞的增殖活性。 ( 2 )将加入和不加入GPC培养的胰腺细胞再分别加入双蒸水、葡萄糖和H2 O2 共同培养 2 4h ,测定细胞增殖活性。结果 ( 1)15 0mg/kgGPC组动物照射组和不照射组的细胞增殖率分别为 ( 3 16± 0 13) %和 ( 12 0 + 0 10 ) % ,均较不给GPC组显著性升高 (P <0 0 1)。 ( 2 )双蒸水、30mmol/L葡萄糖和 2 0mmol/LH2 O2 组细胞不加GPC的增殖活性分别为0 12 0± 0 0 0 8,0 0 70± 0 0 0 2和 0 0 6 3± 0 0 0 6 ,均较加入 10 0 μg/mlGPC显著降低 (P <0 0 5 )。结论 GPC可促进正常胰腺细胞的增殖活性 ,抑制辐射。

星状神经节阻滞对腹腔镜胆囊切除术患者血流动力学和胰腺细胞功能的影响

目的探讨星状神经节阻滞(stellate ganglion block,SGB)对腹腔镜胆囊切除术(laparoscopic cholecystectomy,LC)患者血流动力学及胰腺细胞功能的影响。方法选取2016年3月至2017年3月在本院行LC的患者60例,随机分为SGB组(n=30)和对照组(n=30),记录两组手术一般情况,比较分析两组术前(T0)、插管即刻(T1)、建立气腹后5分钟(T2)、胆囊切除后即刻(T3)、术毕(T4)时的血清胰高血糖素、C肽、血糖(GLU)水平以及平均动脉压(mean arterial pressure,MAP)、收缩压(systolic blood pressure,SBP)、舒张压(diastolic blood pressure,DPB)、心率(heart rate,HR)、血氧饱和度(oxygen saturation,SpO2),分别于术前及术后1天、2天采用简易精神状态量表(mini-mental state examination,MMSE)评价患者的认知功能,并观察两组不良事件发生情况。结果两组麻醉时间、手术时间、血管活性药物使用率及术后镇痛药用量比较差异无显著性(P>0.05)。治疗前两组反映胰腺细胞功能的指标胰高血糖素、C肽及GLU水平差异无显著性(P>0.05),治疗后两组胰高血糖素、C肽、GLU水平均明显升高,T1、T2时SGB组胰高血糖素、C肽明显低于对照组(P<0.05),至T3、T4时两组间比较差异已无显著性(P>0.05)。SGB组T2、T3时MAP、HR、SBP、DPB明显低于对照组(P<0.05),但两组各时点SpO2比较差异均无显著性(P>0.05)。术后1天和2天时SGB组的MMSE评分均明显高于对照组,差异有显著性(P<0.05)。SGB组不良事件发生率为6.67%,明显低于对照组(26.67%),差异有显著性(P<0.05)。结论行LC的患者应用SGB有助于保持术中循环平稳,且术后认知功能恢复快,安全性好,虽然对胰腺细胞功能具有一定影响,但术毕可较快恢复,因此值得在临床推广应用。

缺血后处理对大鼠移植胰腺细胞凋亡的影响

目的探讨缺血后处理(IPO)对大鼠移植胰腺细胞凋亡的影响及其机制。方法取12只糖尿病SD大鼠随机分为缺血再灌注组(I/R组,n=6)和缺血后处理组(IPO组,n=6),I/R组和IPO组均行胰腺移植。另取12只健康SD大鼠为供体、6只糖尿病SD大鼠为假手术组(对照组);检测各组再灌注前、后血糖;TUNEL法观察移植胰腺组织细胞凋亡情况,W estern B lot检测移植胰腺组织Bax和B cl-2蛋白表达。结果 再灌注后IPO组较I/R组血糖低(P<0.01),移植胰组织中A I值低(P<0.01),IPO组再灌注后移植胰组织Bax蛋白低表达,B cl-2蛋白高表达。结论缺血后处理可以减少移植胰腺缺血再灌注后的细胞凋亡,机制可能与上调B cl-2蛋白和下调Bax蛋白有关。

Ca^(2+)和Mg^(2+)对培养日本对虾肝胰腺细胞的影响

以测定的日本对虾肝胰腺细胞的RNA/DNA值作为评价指标,研究了培养基中加入Ca2+和Mg2+对其细胞生长的影响。结果表明,培养基中加入适量的Ca2+和Mg2+可促进肝胰腺细胞的生长,各实验组细胞中的RNA/DNA值均高于对照组;培养基中加入适量的Ca2+和Mg2+的混合液时有助于肝胰腺细胞贴壁生长。

从胰腺细胞凋亡角度探讨急性胰腺炎的中医治疗思路

急性胰腺炎(Acute Pancreatitis,AP)是一发病机制复杂,过程曲折,预后凶险的疾病。胰腺细胞凋亡(apoptosis,APO)是AP发展过程中的一个重要病理生理过程,在AP的发生发展和转归中发挥重要作用。急性胰腺炎与细胞凋亡关系方面的研究起步较晚,许多机制未能完全阐明。提高对胰腺细胞凋亡的认识,对于降低本病的重症程度和病死率具有重要意义。这篇文章针对本病肝郁气滞、瘀热内蕴、腑气不通的发病特点,从胰腺细胞凋亡的角度探讨中医清下化瘀法治疗急性胰腺炎的优势。