工程化的PMN-MDSCs来源外泌体在胶原诱导性关节炎小鼠中的应用

目的:使用电穿孔方法对多形核髓源性抑制细胞(polymorphonuclear myeloid-derived suppressor cells,PMN-MDSCs)来源的外泌体(exosomes,Ex)进行工程化改造,观察其对胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)模型小鼠疾病进程的干预作用。方法:构建CIA模型小鼠,磁珠分选PMN-MDSCs,运用超滤技术联合试剂沉淀法制备培养上清液中的PMN-Ex,免疫印迹法检测Ex标志性蛋白。使用电穿孔技术对PMN-Ex进行改造并设置分组,包括未处理的PMN-Ex组,电转miR-93-5p mimics NC组(miR-93-5p mimics NC组)以及电转miR-93-5p mimics组(miR-93-5p mimics组)。利用实时荧光定量PCR检测miR-93-5p的装载效率。流式细胞术检测改造后的Ex对Th17细胞分化的影响。将不同组别的PMN-Ex尾静脉注射到CIA小鼠体内,分别观察足趾外观情况、足趾HE染色切片情况,测定小鼠的平均关节炎指数(mean arthritic index,MAI)、腘窝淋巴结Th17的比例、血清IL-17A水平,以此判断不同组别PMN-Ex对CIA小鼠的干预作用。结果:PMN-MDSCs被成功分选并制备了PMN-Ex。荧光定量PCR结果显示,miR-93-5p mimics组中miR-93-5p的表达水平明显高于miR-93-5p mimics NC组。相比miR-93-5p mimics NC组,miR-93-5p mimics组处理的小鼠足趾红肿轻微,关节结构较完整;MAI、腘窝淋巴结Th17细胞比例以及血清IL-17A水平明显降低。结论:使用miR-93-5p mimics工程化改造后的PMN-Ex可以更有效地延缓CIA小鼠的疾病进程。

基于Hepcidin和JAK2/STAT3信号通路探讨通痹颗粒 对胶原诱导性关节炎大鼠的影响

目的研究通痹颗粒对胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)大鼠铁调素(hepcidin,Hepc)、Janus激酶(janus kinase,JAK)2/信号转导子和转录激活子(signal transduction and activator of transcription,STAT)3信号通路的影响。方法选取36只雌性SD大鼠随机分成空白组、模型组、阳性对照组和通痹颗粒低、中、高剂量组,每组6只。空白组不予处理,其余组用牛Ⅱ型胶原建立CIA模型。造模完成后,空白组、模型组予生理盐水灌胃,其余各组分别以巴瑞替尼片和低、中、高剂量通痹颗粒灌胃。每天1次,连续4周。HE染色行滑膜组织病理学观察;酶联免疫吸附法测定血清Hepc、白细胞介素6(interleukin 6,IL-6)水平;逆转录-聚合酶链反应法测定滑膜中JAK2、STAT3、细胞信号因子传导抑制体(suppressor of cytokine signaling,SOCS)1、SOCS3的mRNA相对表达量;Western blot法检测滑膜中JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3、SOCS1、SOCS3的蛋白表达量。结果模型组见滑膜上皮结构缺损,滑膜重度增生,排列紊乱,并有大量炎症细胞浸润和多个血管翳形成;各给药组滑膜炎症均有所减轻,阳性对照组优于通痹颗粒高剂量组,通痹颗粒中、高剂量组优于低剂量组。与模型组相比,各给药组关节炎指数评分、血清Hepc和IL-6水平均显著降低(P<0.01);与阳性对照组相比,通痹颗粒中、低剂量组关节炎指数评分、血清Hepc和IL-6水平均升高(P<0.05)。与模型组比较,阳性对照组和通痹颗粒低、中、高剂量组JAK2、STAT3 mRNA和蛋白以及p-JAK2、p-STAT3的蛋白表达量均降低(P<0.05),而通路抑制因子SOCS1、SOCS3 mRNA和蛋白的表达均升高(P<0.05);与阳性对照组比较,通痹颗粒各剂量组JAK2、STAT3 mRNA和蛋白以及p-JAK2、p-STAT3的蛋白表达量均升高(P<0.05),而SOCS1、SOCS3 mRNA和蛋白的表达均降低(P<0.05)。结论通痹颗粒能够改善CIA大鼠滑膜炎症,其机制可能与抑制JAK2/STAT3信号通路而减少Hepc的表达有关。

穿山龙薯蓣皂苷通过调控自噬治疗胶原诱导性关节炎小鼠模型的机制

目的探讨穿山龙薯蓣皂苷通过自噬治疗胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)模型小鼠的作用机制。方法通过鸡Ⅱ型胶原乳剂建立CIA模型小鼠,初次免疫DBA1小鼠(0.1 mL),第21天后再次给予相同剂量刺激。加强免疫后将胶原免疫的50只小鼠随机分组为CIA模型组、雷公藤组和穿山龙薯蓣皂苷低、中、高剂量组,另有10只小鼠注射等量生理盐水作为对照组。在对小鼠进行连续14天灌胃治疗并观察各组小鼠足爪的炎症程度,取下各组小鼠脾、腹股沟淋巴结和踝关节、膝关节,对踝关节、膝关节进行HE染色,检测各组淋巴结、脾组织中mRNA和蛋白质水平的相关自噬指标。结果与CIA模型组相比,穿山龙薯蓣皂苷高剂量组关节炎指数(AI)评分降低(P<0.05);雷公藤组及穿山龙薯蓣皂苷组足爪厚度差值减小(P<0.01)。与对照组相比,CIA模型组体质量明显下降(P<0.01);小鼠膝关节滑膜和足爪踝关节HE染色结果显示CIA模型组对比对照组出现免疫细胞浸润、骨质侵蚀、软骨破坏和滑膜增生的症状;雷公藤组与穿山龙薯蓣皂苷中、高剂量组对CIA模型有不同程度的治疗作用,可以减轻和预防症状。与CIA模型组相比,雷公藤组和穿山龙薯蓣皂苷治疗组中LC3、Beclin-1的mRNA水平和蛋白水平的表达升高,p62的mRNA水平和蛋白水平的表达降低。结论穿山龙薯蓣皂苷可能通过抑制自噬对CIA模型小鼠起到治疗作用。

基于IL-6/STAT3通路研究苗药方剂“四大血”对胶原诱导性关节炎小鼠的保护作用

目的基于白细胞介素-6(IL-6)/STAT3通路研究苗药方剂“四大血”(SX)对胶原诱导性关节炎(CIA)小鼠的保护作用机制。方法取40只C57BL/6雄性小鼠随机均分为4组[正常组、模型组、SX组和甲氨蝶呤(MTX)组],采用鸡Ⅱ型胶原和完全弗氏佐剂混合乳化剂诱导类风湿性关节炎(RA)小鼠模型。造模成功后按照实验分组(每组6只)进行灌胃给药。分别检测各组小鼠的足肿胀程度、关节病理改变、关节炎指数(AI)评分、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和IL-6水平、关节滑膜组织中p-STAT3蛋白表达情况。结果SX对RA疾病相关指标有显著改善作用,可以降低小鼠足肿胀程度、关节炎滑膜炎症、AI评分、TNF-α和IL-6水平,抑制p-STAT3蛋白的表达。结论SX可以发挥明显的抗RA作用,其可通过抑制IL-6/STAT3信号通路蛋白(p-STAT3)表达发挥对CIA小鼠的保护作用。

黑骨藤追风活络胶囊调节NF-κB/STAT3/mPGES-1信号通路改善胶原诱导性关节炎的作用研究

目的:研究黑骨藤追风活络胶囊(Heiguteng Zhuifenghuoluo cupsule,HZC)调节NF-κB/STAT3/mPGES-1信号通路改善胶原诱导性关节炎(Collagen induced arthritis,CIA)大鼠的作用机制。方法:取24只SD大鼠,随机分组为正常组、模型组、HZC组和甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)组。除正常组外,其余三组采用牛Ⅱ型胶原和完全弗氏佐剂混合乳化剂构建类风湿性关节(rheumatoid arthritis,RA)大鼠模型。按照实验分组分别给予生理盐水、MTX(1 mg/kg)和HZC(243 mg/kg)灌胃,共给药21天。每周测量大鼠足肿胀程度、观察并进行足肿胀评分、检测大鼠血清中前列腺素E 2(Prostaglandin E2,PGE 2),检测大鼠滑膜组织中微粒体前列腺素E2合酶-1(microsomal prostaglandin E synthase 1,mPGES-1)以及p-p65、p-STAT3蛋白表达情况。结果:模型组大鼠足肿胀程度、肿胀程度评分、大鼠血清PGE 2明显增加,HZC和MTX组大鼠足肿胀程度、肿胀程度评分和大鼠血清PGE 2明显降低。进一步机制研究发现模型组大鼠关节滑膜组织中mPGES-1、p-p65、p-STAT3蛋白的表达增加,HZC和MTX组大鼠关节滑膜组织中mPGES-1、p-p65、p-STAT3蛋白的表达明显降低。结论:HZC通过抑制NF-κB/STAT3/mPGES-1信号通路,发挥其对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠的治疗作用。

青藤碱对胶原诱导性关节炎大鼠滑膜细胞NF-κB的抑制作用

目的观察青藤碱(sinomenine,SN)对胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)大鼠滑膜细胞核因子-κB(NF-κB)的DNA结合活性及核转位的影响,以阐明该药抗炎的可能机制。方法以CIA大鼠为模型,收集膝关节滑膜细胞体外培养,设正常对照组、CIA组、CIA+甲氨喋呤10μmol/L(阳性对照组)、CIA+SN50μmol/L组、CIA+SN500μmol/L组。应用荧光标记与激光共聚焦扫描显微镜检测滑膜细胞NF-κBp65亚基核转位,电泳迁移率改变分析法(EM-SA)检测NF-κB与DNA序列的结合活性。结果与正常对照组相比,CIA大鼠滑膜细胞可见明显的p65亚基核移位,NF-κB的DNA结合活性显著升高(P<0.01),SN在50μmol/L及500μmol/L时可呈浓度依赖性地抑制CIA大鼠滑膜细胞p65亚基核转位及NF-κB的DNA结合活性,甲氨喋呤在10μmol/L时可下调NF-κB的DNA结合活性但未抑制p65亚基的核转位。结论SN抑制滑膜细胞内NF-κBp65核转位和NF-κB的DNA结合活性为其抗炎机制之一。

宣发膜原法对胶原诱导性关节炎大鼠免疫功能的影响

目的:探讨宣发膜原法对Ⅱ型胶原诱导性关节炎(CIA)的治疗机理,为研究类风湿关节炎(RA)的发病和损伤机理提供实验依据。方法:以CIA作为RA的动物模型,给以宣发膜原方治疗,检测CIA大鼠免疫指标和病理变化。结果:治疗组大鼠病理损伤减轻,TNF-α降低,IFN-γ升高,抗CⅡ抗体降低。结论:宣发膜原法能够减轻CIA病理损伤,调节CIA大鼠免疫功能,可以用于RA治疗。

桂枝芍药知母汤对Ⅱ型胶原诱导性关节炎大鼠血清肿瘤坏死因子-α、白细胞介素1β活性的影响

目的观察桂枝芍药知母汤对类风湿性关节炎(RA)的治疗作用,并探讨其作用机理。方法以Ⅱ型胶原(CⅡ)诱导的免疫性关节炎(CIA)大鼠为RA动物模型,通过测量其关节肿胀程度、关节炎指数观察桂枝芍药知母汤大、中剂量组的治疗效果;采用ELISA法测定大鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)活性,小鼠胸腺细胞法检测血清中白细胞介素1β(IL-1β)活性,探讨其作用机理。结果桂枝芍药知母汤大、中剂量组均可使大鼠踝关节肿胀程度和关节炎指数明显减少,与模型组比较差异显著(P<0.01);同时发现模型组大鼠血清TNF-α含量及IL-1β活性明显升高,治疗组起下调作用,接近正常组水平,与模型组比较差异显著(P<0.01)。结论TNF-α、IL-1β异常增高,与RA发病密切相关。桂枝芍药知母汤可以降低CIA大鼠血清中异常增高的TNF-α、IL-1β浓度,从而抑制或控制RA病情发展。

小柴胡汤对胶原诱导性关节炎大鼠的抗炎作用及机制探讨

目的观察小柴胡汤对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠的抗炎作用,并探讨其可能的作用机制。方法以胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠为动物模型,随机分为正常对照组、CIA模型组、雷公藤多苷对照组、小柴胡汤高剂量组和小柴汤低剂量组,评定关节炎指数,光镜观察关节滑膜病理学变化,ELISA法测定不同时间点各组大鼠血清中TNF-α、IL-6、IL-10的水平。结果小柴胡汤高、低剂量组均可使大鼠踝关节炎指数明显减少,与模型组比较差异显著(P<0.05)。光镜下观察,滑膜组织水肿、滑膜细胞增生及炎性细胞浸润明显改善。ELISA结果显示,小柴胡汤高、低剂量组均可降低TNF-α、IL-6浓度,升高IL-10浓度,与模型组比较差异显著(P<0.01),其中小柴胡汤高剂量组作用尤为显著。结论小柴胡汤对CIA大鼠具有较强的抗炎作用,其作用机制可能与TNF-α、IL-6、IL-10等炎症介质的表达有关。

穿山龙总皂苷对胶原诱导性关节炎大鼠关节滑膜组织NF-κB p65活性及STAT3表达的影响

目的通过观察穿山龙总皂苷对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠滑膜组织核转录因子κB(NF-κB)及信号转导子和转录激活因子3(STAT3)表达的影响,探讨穿山龙总皂苷抑制类风湿性关节炎血管新生可能的信号转导通路作用机制。方法将造模成功的60只CIA大鼠随机分为CIA模型组、雷公藤组(阳性对照组)、穿山龙总皂苷组、薯蓣皂苷元组、穿山龙水溶性皂苷片组,另设正常对照组,每组12只。造模成功后分别给予相应的药物灌胃,连续治疗35 d。应用TransAMTMNF-κB p65活性检测试剂盒检测滑膜组织中NF-κB p65的DNA结合活性。应用免疫组织化学染色的方法观察滑膜组织中STAT3蛋白的表达。结果与正常对照组相比,CIA模型组大鼠滑膜细胞核蛋白提取物中NF-κB p65的DNA结合活性和滑膜组织中STAT3蛋白的表达显著增高,有统计学意义(P<0.01);与CIA模型组相比,穿山龙总皂苷组、雷公藤组、薯蓣皂苷元组、穿山龙水溶性皂苷片组的NF-κB p65的DNA结合活性和STAT3蛋白的表达均显著降低,有统计学意义(P<0.01);各治疗组之间两两比较均无统计学意义(P>0.05)。结论穿山龙总皂苷可能通过抑制NF-κB信号转导通路中NF-κB p65的活性和JAK-STAT信号转导通路中重要底物STAT3蛋白的表达,起到抑制类风湿性关节炎血管新生的作用。

乌梢蛇Ⅱ型胶原蛋白调控胶原诱导性关节炎小鼠肠系膜淋巴结Treg/Th17平衡

目的探讨乌梢蛇Ⅱ型胶原蛋白(Zaocys typeⅡcollagen,ZCⅡ)对胶原诱导性关节炎(Collagen-induced arthritis,CIA)小鼠肠系膜淋巴结淋巴细胞(mesenteric lymph node lymphocytes,MLNLs)Treg/Th17细胞及其细胞因子的影响。方法鸡Ⅱ型胶原蛋白小鼠尾根部皮下注射,诱导CIA模型;胃蛋白酶消化法提取ZCⅡ,口服高、中、低剂量ZCⅡ干预。视觉评分法评价关节肿胀,HE染色评价膝关节组织病理学;分离小鼠MLNLs,流式细胞术(FCM)检测Treg和Th17细胞的比率;酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测MLNLs培养上清中TGF-β和IL-17的活性。结果与正常组比较,CIA小鼠关节炎及组织病理学评分升高(P<0.05),MLNLs中Treg和Th17的比率及其分泌TGF-β和IL-17水平上升(P<0.05)。与CIA模型组比较,不同剂量ZCⅡ干预组关节炎及组织病理学评分降低(P<0.05),MLNLs中Treg细胞的比率上升,Th17细胞的比率下降(P<0.05),MLNLs分泌TGF-β水平上升,分泌IL-17水平下降(P<0.05)。结论口服ZCⅡ能够改善CIA小鼠关节炎及组织病理学评分;ZCⅡ可能通过调节MLNLs中Treg/Th17比率及其细胞因子的水平,重新诱导CIA小鼠的免疫平衡,缓解关节炎症。

泼尼松对Ⅱ型胶原诱导性关节炎大鼠股骨微结构及生物力学的影响

目的应用骨生物力学和micro-CT技术,探讨泼尼松对Ⅱ型胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠股骨微结构及生物力学的影响。方法 40只8周龄Lewis♂大鼠,随机分为正常对照(CON)组6只、其余34只用来建立CIA模型。免疫3周后筛选出CIA大鼠随机分成CIA组、CIA加泼尼松4.5mg·kg-1·d-1组和CIA加泼尼松9 mg·kg-1·d-1组。CON和CIA组给予溶剂对照溶液,其它2组给予泼尼松4.5、9 mg·kg-1·d-1。连续给药90 d后处死,取左股骨进行生物力学测定,然后进行micro-CT扫描及三维重建。结果与CON组比较,CIA组骨小梁厚度、骨小梁数量、骨体积分数、骨密度明显减小,而骨小梁分离度、结构模型指数明显增加,骨生物力学参数(弹性载荷、最大载荷、断裂载荷、刚度)均明显减小。与CIA组比较,泼尼松2个剂量组骨体积分数与骨小梁数量均增加,骨小梁分离度均减小,而骨生物力学参数均无明显变化。结论泼尼松治疗CIA大鼠3个月后,对股骨松质骨微结构破坏有所改善,但对股骨生物力学性能和骨密度没有明显改变。

蜂毒对胶原诱导性关节炎炎性痛大鼠背根神经节TrkA、TRPV1的影响

目的探讨蜂毒对胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)大鼠Trk A、TRPV1疼痛信号分子的影响。方法分为正常对照组、模型组、蜂毒组(BV,3 mg/m L)。采用Wistar雄性成年大鼠,CollagenⅡ+IFA 0.2 m L造模。BV组于造模14 d后开始给药,直至21 d;记录每组足跖厚度、痛阈和肿胀关节评分,背根神经节采用IHC观察病理切片TRPV1的表达和western boltting观察Trk A的表达,评价蜂毒对CIA大鼠踝关节的干预。结果造模从10 d起开始肿胀,14 d内全部出现CIA体征,足跖厚度和肿胀关节评分整体上呈逐渐增加的趋势。在14 d时趋于平稳。BV组予蜂毒0.3 mg治疗7 d,BV组足跖厚度和肿胀关节评分低于模型组。痛阈(秒):正常对照组15.47±0.35,模型组10.90±0.10,BV组13.14±0.18。免疫组化TRPV1阳性细胞百分数(%):正常对照组11.40±1.48,模型组44.47±4.38,BV组21.60±2.20。western blotting观察Trk A表达(灰度值):正常对照组1.59±0.04,模型组4.53±0.21,BV组2.46±0.17。结论蜂毒注射能降低炎性痛大鼠DRG信号分子Trk A、TRPV1的表达水平。这可能是消炎镇痛的信号通路之一,为蜂毒治疗类风湿性关节炎提供新的启发。

宣发膜原方对胶原诱导性关节炎大鼠血清中TNF-α、IFN-γ、IL-6和IL-10影响的研究

目的:探讨宣发膜原方对CIA大鼠血清中TNF-α、IFN-γI、L-6和IL-10影响。方法:以CIA作为RA的动物模型,给予宣发膜原方治疗,用ELISA及放免法检测大鼠血清中TNF-α、IFN-γ、IL-6和IL-10的含量。结果:宣发膜原方可以降低大鼠血清中IFN-γ、TNF-α和IL-6(P<0.01),升高IL-10(P<0.01)。结论:宣发膜原方能够调节CIA大鼠血清中细胞因子含量。

祛痹镇痛方对胶原诱导性关节炎大鼠滑膜IL-1β、IL-8、VEGF表达的影响

目的研究中药祛痹镇痛方对胶原诱导性关节炎(collagen induced arthritis,CIA)大鼠滑膜白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白介素-8(interleukin-8,IL-8)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响,探讨祛痹镇痛方治疗CIA的作用机制。方法选用健康雄性Wistar大鼠,随机分为造模组(50只)及正常对照组(正常组,10只),造模组采用牛Ⅱ型胶原(typeⅡcollagen of bovine,BCⅡ)乳剂于大鼠尾根部及颈背部多点注射,建立CIA模型。造模成功后,选取30只造模成功大鼠随机分为模型组(10只)、甲氨喋呤(methotrexate,MTX)组(10只)、祛痹镇痛方组(中药组,10只)。中药组大鼠按22.9g/kg剂量灌胃中药祛痹镇痛方,正常组、模型组灌胃等量生理盐水,每日1次,MTX组按0.78mg/kg剂量灌胃MTX混悬液,每周1次。给药30天后,运用免疫组化法检测大鼠滑膜IL-1β、IL-8、VEGF水平,并予给药前后进行关节炎指数(arthritis index,AI)评分。结果与模型组及本组治疗前比较,治疗后中药组和MTX组大鼠AI评分明显降低(P<0.01)。与正常组比较,模型组大鼠滑膜IL-1β、IL-8、VEGF表达水平明显升高(P<0.01);与模型组比较,中药组和MTX组大鼠滑膜IL-1β、IL-8、VEGF表达水平明显降低(P<0.01),中药组和MTX组组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论降低CIA大鼠滑膜IL-1β、IL-8、VEGF水平可能是中药祛痹镇痛方治疗CIA的作用机制之一。

青藤碱对胶原诱导性关节炎大鼠滑膜血管新生的影响

目的观察青藤碱对Ⅱ型胶原诱导性关节炎模型大鼠(CIA)低氧诱导因子1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)及基质金属蛋白9(MMP-9)的影响,探讨青藤碱对类风湿关节炎(RA)滑膜血管新生的作用机制。方法 40只远交群大鼠,随机选取10只作为对照组,余30只大鼠采用尾根部皮下注射Ⅱ型胶原和不完全弗氏佐剂的方法复制关节炎模型。15 d后造模大鼠随机分为模型组、雷公藤组、青藤碱组,每组10只。雷公藤组:雷公藤多甙片9.68 mg/(kg·d)灌胃给药;青藤碱组:青藤碱片100 mg/(kg·d)灌胃给药;模型组灌服等体积0.9%氯化钠注射液。1次/d,共28 d。期间测量大鼠踝关节肿胀度。灌药28 d后处死大鼠,免疫组织化学法检测关节滑膜组织HIF-1α水平,酶联免疫吸附试验测定血清中VEGF、MMP-9水平。结果与模型组比较,青藤碱组和雷公藤组大鼠关节肿胀度减轻(P<0.05);青藤碱组和雷公藤组滑膜组织中HIF-1α表达降低(P<0.05);青藤碱组和雷公藤组血清中VEGF、MMP-9表达降低(P<0.05)。结论青藤碱可降低CIA踝关节肿胀,疗效与雷公藤多甙相当。其机制可能是通过下调HIF-1α的表达及VEGF、MMP-9水平,从而减少滑膜新生血管生成。

姜酚对胶原诱导性关节炎的抗炎作用及其机制研究

目的探讨姜酚对牛II型胶原诱导性关节炎(Collagen Induced Arthritis,CIA)大鼠的抗炎作用及其机制。方法将6周龄雌性Wistar大鼠随机分为空白对照组、模型组、姜酚组和雷公藤多苷组,每组10只。制备CIA模型,观察姜酚对CIA大鼠关节病理、关节炎指数的变化及对大鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1(IL-1)、白介素-1β(IL-1β)表达的影响。结果姜酚能够抑制CIA大鼠踝关节肿胀,降低关节炎指数,并能降低血清TNF-α、IL-1及IL-1β水平,减轻关节滑膜细胞增生、滑膜层及滑膜下层淋巴细胞浸润,其疗效与雷公藤多苷组相当(P>0.05)。结论姜酚对CIA大鼠关节炎具有治疗作用,其机制可能与下调TNF-α、IL-1和IL-1β有关。

穿山龙总皂苷对胶原诱导性关节炎大鼠血清及滑膜组织肿瘤坏死因子α影响的研究

目的探讨穿山龙总皂苷对Ⅱ型胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠血清及滑膜组织肿瘤坏死因子α(TNF-α)的影响,探讨其治疗类风湿关节炎(RA)的免疫调节机制。方法选取48只清洁级Wistar大鼠,随机分成4组:正常对照组(A组)、模型组(B组)、雷公藤多苷片组(C组)和穿山龙总皂苷组(D组),每组12只。B、C、D组大鼠均建立CIA大鼠模型,待模型建立成功后,C、D组大鼠分别给予相应的药物灌胃;A、B组大鼠给予等体积0.9%氯化钠注射液灌胃;均连续给药21 d,然后处死大鼠取材。应用双抗体夹心酶联免疫吸附(ELISA)法检测4组大鼠血清TNF-α水平,同时应用逆转录联合酶链式反应(RT-PCR)方法测定4组大鼠滑膜组织TNF-αmRNA表达量。结果 B组大鼠血清TNF-α水平及滑膜组织TNF-αmRNA表达量均高于A组,差异有统计学意义(P<0.05);而C、D组大鼠血清TNF-α及滑膜组织TNF-αmRNA表达量均低于B组,差异有统计学意义(P<0.05);但C、D组大鼠上述指标比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论穿山龙总皂苷可能通过调节细胞因子TNF-α的水平来发挥其对RA有益的免疫调节作用。

乌梢蛇Ⅱ型胶原蛋白的鉴定及其对胶原诱导性关节炎小鼠的干预研究

目的：分析乌梢蛇Ⅱ型胶原蛋白（Zaocys type Ⅱ collagen，ZC Ⅱ）与其他物种Ⅱ型胶原蛋白（C Ⅱ collagen）的同源性，探讨其对胶原诱导性关节炎（Collagen—induced arthritis，CIA）小鼠关节炎症的影响。方法：采用限制性胃蛋白酶消化法提取ZCⅡ；SDS—PAGE凝胶电泳及紫外分光光度计法对其鉴定，质谱分析其同源性。鸡CⅡ小鼠尾根部皮下注射诱导CIA模型；口服ZCII高、中、低剂量干预，视觉评分法对关节炎评分，HE染色评价小鼠膝关节病理变化。结果：提取的ZCU分子量约为110～140kD，紫外吸收峰为230nm左右；质谱分析所得肽质量指纹图谱与其他物种有4个以上肽段匹配，蛋白评分大于95％。在关节炎症方面，与正常对照组比较，CIA小鼠关节炎及组织病理学评分升高（P〈0．05）；与CIA模型组比较，不同剂量ZCU干预组关节炎及组织病理学评分显著降低（P〈0．05）。结论：质谱分析结果提示ZCⅡ与其他物种CⅡ具有较高同源性；ZCII能显著抑制CIA小鼠的关节肿胀，改善关节组织病理变化。