血清胸苷激酶1在甲状腺乳头状癌患者术后监测中的价值

目的 探讨血清胸苷激酶1(TK1)在甲状腺乳头状癌(PTC)患者术后监测中的价值。方法 选取2020年7月—2021年3月陕西省人民医院PTC患者178例,根据治疗方式分为次全切组(53例,行甲状腺次全切术)、全切组(125例,行甲状腺全切术62例、行甲状腺全切术+~(131)I治疗63例)。根据患者术后12个月的恢复情况将178例PTC患者分为疗效满意(ER)组(153例)和疗效不满意(NER)组(25例)。收集所有患者的临床资料,监测患者术前和术后1、3、6、12个月血清TK1、甲状腺球蛋白(Tg)水平。采用受试者工作特征(ROC)曲线评价血清TK1、Tg水平判断PTC患者预后不良的效能。采用二元Logistic回归分析评估PTC患者预后不良的危险因素。结果 ER组与NER组之间年龄、肿瘤多灶性、肿瘤最大直径、T分期、N分期、转移淋巴结数差异均有统计学意义(P<0.05),性别、被膜侵犯情况、治疗方式2个组之间差异均无统计学意义(P>0.05)。NER组术后各时间节点血清TK1水平均高于ER组(P<0.05)。次全切组和全切组NER患者术后6、12个月血清TK1水平均高于ER患者(P<0.05)。全切组NER患者术前和术后各时间点血清Tg水平均高于ER患者(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,术后12个月血清TK1水平判断次全切PTC患者预后不良的效能最高[曲线下面积(AUC)为0.940],其次为术后6个月血清TK1水平(AUC为0.835);术后12个月TK1和Tg联合检测判断全切PTC患者预后不良的AUC最高(0.964),其次为术后6个月TK1和Tg联合检测(AUC为0.943)。二元Logistic回归分析结果显示,T分期、术前Tg≥62.08 IU·L~(-1)是PTC患者预后不良的危险因素[比值比(OR)值分别为5.060、2.908,95%可信区间(CI)分别为2.593~9.875、1.004~8.421,P<0.05]。结论 动态监测血清TK1有助于评估PTC患者次全切术后疗效,联合检测血清TK1、Tg水平有助于行全切术患者的预后评估。

热休克蛋白90α、胸苷激酶1检测对肝癌患者的诊断价值

目的:检测肝癌患者血清热休克蛋白90α(HSP90α)、胸苷激酶1(TK1)水平,分析其对肝癌的诊断价值。方法:纳入确诊肝癌患者为肝癌组(n=82);另纳入同期确诊良性肝病患者为对照组(n=82)。采用酶联免疫吸附法检测两组血清HSP90α、TK1水平并进行比较,联合临床病理分析血清HSP90α、TK1水平和病理特征的关系。采用受试者工作特征(ROC)曲线评价各指标对肝癌的诊断价值。结果:肝癌组患者血清HSP90α、TK1水平均高于良性肝病组患者(P<0.05);肝外转移、TNM分期为Ⅲ~Ⅳ的肝癌患者血清HSP90α、TK1水平均较高(P<0.05)。ROC曲线结果显示,血清HSP90α、TK1均对肝癌有一定的诊断价值(P<0.05),且联合检测诊断肝癌的曲线下面积(AUC)为0.921,高于各指标单独检测(P<0.05)。结论:肝癌患者血清HSP90α、TK1水平升高,且与病情的发生、发展有一定的关联,两项指标联合检测诊断肝癌的价值更高。

血管内皮细胞生长因子、可溶性胸苷激酶-1对乙型病毒性肝炎治疗效果的预测

目的:探讨血管内皮细胞生长因子(VEGF)、可溶性胸苷激酶-1(TK-1)对乙型病毒性肝炎(HBV)治疗效果的预测价值。方法:选取2021年2月~2022年2月厦门医学院附属第二医院收治的130例HBV患者为治疗组,另选取同期体检的130名健康人为对照组。根据治疗效果,将治疗组分为有效组和无效组,比较治疗组与对照组、有效组和无效组的肝功能、免疫功能以及VEGF、TK-1水平的差异,探讨VEGF、TK-1与肝功能、免疫功能的相关性,通过受试者工作特征(ROC)曲线评估不同指标对HBV治疗效果的预测价值。结果:治疗组VEGF、TK-1水平明显高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);对照组CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)、IgA、IgG、IgM均显著高于治疗组,差异有统计学意义(P<0.05);经治疗后,两组VEGF、TK-1、HBV DNA均有显著改善,且有效组改善程度较无效组更为显著,差异有统计学意义(P<0.05);经治疗后,有效组丙氨酸转氨酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBIL)水平均明显低于无效组,差异有统计学意义(P<0.05);无效组免疫功能显著低于有效组,差异有统计学意义(P<0.05);经Spearman相关性分析显示,VEGF、TK-1与CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)、IgA、IgG、IgM呈负相关,与AST、TBIL、ALT、HBV DNA呈正相关,差异有统计学意义(P<0.05);对于HBV患者治疗效果的预测,VEGF检测与TK-1检测联合的ROC曲线下面积明显高于单项VEGF检测与单项TK-1检测结果,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:VEGF和TK-1的表达水平与HBV患者的肝功能和免疫功能显著相关,VEGF和TK-1对HBV的治疗效果有显著的预测价值。

胸苷激酶1、细胞角质蛋白19片段抗原21-1在非小细胞肺癌中的表达及与患者临床特征和预后的关系

目的探讨胸苷激酶1(TK1)、细胞角质蛋白19片段抗原21-1(CYFRA21-1)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及与患者临床特征和预后的关系。方法选取100例NSCLC患者,采用免疫组化法检测肿瘤组织及癌旁组织中TK1、CYFRA21-1表达情况,比较NSCLC患者肿瘤组织与癌旁组织中TK1、CYFRA21-1的表达情况,以及不同临床特征NSCLC患者肿瘤组织中TK1、CYFRA21-1的表达情况。根据预后情况将NSCLC患者分为预后不良组和预后良好组,采用Logistic回归分析NSCLC患者的预后影响因素。结果肿瘤组织中TK1、CYFRA21-1的阳性表达率均明显高于癌旁组织,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。不同淋巴结转移情况NSCLC患者肿瘤组织中TK1、CYFRA21-1阳性表达率比较,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。预后良好组(n=71)和预后不良组(n=29)患者淋巴结转移情况及TK1、CYFRA21-1表达情况比较,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,有淋巴结转移及TK1、CYFRA21-1阳性表达均是NSCLC患者预后不良的独立危险因素(P﹤0.05)。结论TK1、CYFRA21-1在NSCLC中的阳性表达率较高,有淋巴结转移及TK1、CYFRA21-1阳性表达均是NSCLC患者预后不良的危险因素。

间隙连接细胞间通讯与胸苷激酶系统“旁观者效应”的关系及其调控

增强“旁观者效应”是提高单纯疱疹胸苷激酶/更昔洛韦(HSV-TK/GCV)基因系统治疗效果的关键手段。旨在探讨间隙连接细胞间通讯(GJIC)在HSV-TK/GCV系统“旁观者效应”中的作用及其化学调控。通过采用划痕标记染料示踪技术(SLDT)比较ACHN、HeLa、NIH-3T3、Cos-7及L-02等五种不同细胞系GJIC功能状况,四甲基偶氮唑盐酶反应比色法(MTT法)检测HSV-TK/GCV对其杀伤效应和“旁观者效应”,并比较GJIC上调剂apigenin和抑制剂18-α-glycyrrhetinic acid(AGA)对GJIC和“旁观者效应”的影响。结果表明,GJIC功能强大的NIH-3T3、Cos-7及L-02细胞对HSV-TK/GCV敏感性及“旁观者效应”程度远较GJIC功能低下的ACHN和HeLa细胞高(P<0.001)。Apigenin可显著提高ACHN细胞GJIC功能,对HeLa细胞则无影响;相反,AGA可显著抑制NIH-3T3、Cos-7和L-02等三种靶细胞的GJIC功能。相应地,apigenin可明显提高ACHN细胞的“旁观者效应”而对HeLa细胞的“旁观者效应”则无影响,AGA则可明显降低上述三种细胞的“旁观者效应”。因此认为,细胞内在的GJIC功能与靶细胞对HSV-TK/GCV的敏感性和“旁观者效应”程度有正向关系,人为调控细胞GJIC后,“旁观者效应”程度亦发生相应改变。

单纯疱疹病毒胸苷激酶基因对肺腺癌细胞杀伤作用探讨

目的探讨单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-tk)基因转染联合抗病毒药物更昔洛韦(GCV)对人肺腺癌细胞系的杀伤作用。方法应用基因工程技术构建了携带单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-tk)基因的逆转录病毒重组体pLXSN-tk,通过脂质体法转染PA317细胞,G418筛选出产重组病毒颗粒的生产细胞PA317-tk细胞。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测HSV-tk/GCV系统对人肺腺癌细胞系GLC-82的生长抑制率。结果 重组逆转录病毒载体能有效地将HSV-tk(基因导入GLC-82细胞系内并使其获得对GCV的敏感性。结论肺腺癌细胞转染HSV-tk基因后,能有效地被GCV杀死。

血清胃泌素17、胸苷激酶1联合检测辅助诊断胃癌的价值

目的探讨血清胃泌素17(G17)、胸苷激酶1(TK1)联合检测辅助诊断胃癌的价值。方法选择胃癌患者38例(胃癌组)、胃溃疡患者35例(胃溃疡组)、慢性浅表性胃炎患者32例(对照组),采用ELISA法和化学发光结合斑点杂交技术检测各组血清G17、TK1,并进行比较。以血清G17水平>15 pmol/L为G17阳性、血清TK1水平>2 pmol/L为TK1阳性,联合检测以二者任一指标阳性为联合检测阳性,分析各指标诊断胃癌的敏感性、特异性。结果对照组、胃溃疡组、胃癌组血清G17、TK1水平逐渐升高,组间两两比较P均<0.05。Pearson相关分析显示,胃癌组血清G17与TK1水平呈正相关(r=0.427,P<0.05)。与单独检测G17和TK1阳性比较,联合检测阳性的敏感性明显升高(P<0.05),特异性无明显变化。结论联合检测血清G17、TK1能提高胃癌诊断的敏感性。

伪狂犬病病毒Fa株胸苷激酶基因缺失株的构建

采用外切除缺失法对已克隆于ｐＢＲ３２２中包含伪狂犬病病毒（ＰＲＶ）胸苷激酶（ＴＫ）基因的ＢａｍＨＩ－１１片段（ｐＰＢ１１）进行改建，经筛选获得４株ＴＫ基因缺失重组质粒（ｐＤＴＫ３－１、ｐＤＴＫ３－６、ｐＤＴＫ３－８和ｐＤＴＫ５－６），对其进行酶切鉴定和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ转印杂交，结果其１１片段迁移率均发生改变，缺失的碱基数分别约１２５０、１１００、１２５０和２００ｂｐ。用ＰＲＶＦａ－ＤＮＡ或ＰＲＶＦａ细胞毒与重组质粒ｐＤＴＫ３－６ＤＮＡ和ｐＤＴＫ５－６ＤＮＡ通过磷酸钙法和脂质体法转染ＴＫ－１４３细胞，增殖后经５＇－溴脱氧尿嘧啶（５＇－ＢＵＤＲ）筛选得到ＰＲＶＦａＴＫ缺失株ＰＦＤＴＫＰ３－６、ＰＦＤＴＫＰ５－６、ＰＦＤＴＫＬ３－６和ＰＦＤＴＫＬ５－６。以斑点杂交技术和胸腺嘧啶核苷蚀斑放射自显影法检测证明这些缺失株均无ＴＫ活性。免疫小鼠以ＥＬＩＳＡ检测其免疫血清，抗体滴度可高达１：６４。对ＰＲＶＦａ强毒攻击有一定保护率。

肺癌患者血清胸苷激酶1的表达及其临床意义

目的:探讨血清胸苷激酶1(serum thymidine kinase 1,STK1)在肺癌患者中的表达及临床意义。方法:应用免疫印迹增强化学发光法检测127例肺癌初治患者治疗前的STK1浓度,并分析临床特征资料,对其中进行化疗的59例肺癌患者进行疗效观察3个月,另选取50例健康体检者为对照组。结果:肺癌组治疗前STK1浓度[(4.78±6.84)pmol/L]明显高于对照组[(1.15±0.52)pmol/L,t=5.935,P<0.001];与肺癌三项相比STK1灵敏度更高:STK1(73.2%)>CYFRA21-1(59.8%)>CEA(46.5%)>NSE(37.0%),STK1与CYFRA21-1联合检测灵敏度明显提高(91.3%),四项联合检测灵敏度达95.3%;STK1的表达与肺癌的病理类型(χ2=10.626,P=0.005)、淋巴结数(χ2=4.060,P=0.044)、是否有远处转移(χ2=4.226,P=0.04)及临床分期(χ2=3.991,P=0.046)有关;与其他临床病理特征无相关性(均P>0.05);进行化疗的患者,3个月后的血清TK1水平较化疗前明显降低(P<0.05)。结论:STK1在肺癌患者的检出及治疗效果评估等方面具有重要的临床意义,STK1指标与肺癌的分期明显相关;STK1与肺癌三项联合检测,可显著提高肺癌的检出率。

血清胸苷激酶1检测及其在肿瘤治疗监测和预后中的作用

目的探讨胸苷激酶1（sTK1）在肿瘤诊断和预后判断中的价值。方法利用免疫印迹增强化学发光法检测肿瘤患者组、良性疾病组和正常对照组的血清sTK1浓度及阳性率。结果sTK1诊断肿瘤的灵敏度是74．1％，特异度是97．3％；肿瘤患者组sTK1浓度为0．99～40．63pmol／L，平均浓度为4．70pmol／L，阳性率74．1％．明显高于良性疾病组（浓度为0．54～7，14pmol／L，平均浓度为1．70pmol／L，阳性率18．1％）和健康人对照组（浓度为0．14—2．15pmol／L，平均浓度为0．53pmol／L，阳性率2．73％），差异有显著性（P〈0．001）；肿瘤患者未经治疗组、治疗效果不佳组与治疗缓解组sTK1平均浓度比较，差异有显著性（P〈0．001）。结论血清胸苷激酶1是肿瘤诊断和预后判断的有价值的指标。

一种新肿瘤生长相关生物标志物胸苷激酶1临床应用进展

胸苷激酶1(TK1)是一种嘧啶补救途径的激酶,能催化脱氧胸苷磷酸化为一腺胸苷酸,与细胞周期调控和细胞增殖密切相关。多项实验证明,TK1可用于健康体检、肿瘤早期筛查、常规检测、疗效监视和预后等方面,是一种灵敏有效地评估人体肿瘤增长的标志物。本综述概述了近年关于TK1临床应用的新进展。

血清胸苷激酶1在乳腺癌诊治中的应用

目的:探讨血清胸苷激酶1(TK1)检测在乳腺癌辅助诊断及术后化疗效果评估中的作用。方法:应用免疫印迹-增强化学发光法(ECL)检测20例健康志愿者(健康对照组)和30例乳腺癌患者(乳腺癌组)术前、术后及化疗后血清TK1水平。比较不同疾病分期下TK1水平的差异。分析术前血清TK1水平与雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)的关系。结果:乳腺癌患者血清TK1水平均明显高于健康对照组(P<0.05);乳腺癌患者化疗后TK1水平明显低于术前(P<0.05),但术前术后TK1水平无明显差异(P>0.05),且TK1水平与乳腺癌分期也无明显相关性(P>0.05);同时ER、PR双阳性乳腺癌患者术前血清TK1水平低于ER、PR双阴性患者(P<0.05)。结论:血清TK1水平可反映肿瘤细胞增殖,有望成为乳腺癌预后判断及病情监测的重要指标,但其确切机制及与肿瘤进展间的关系还需深入研究。

结肠癌患者血清中microRNA-183及胸苷激酶1的表达及意义

目的检测结肠癌患者血清中mi RNA-183及胸苷激酶1(TK1)的表达并探讨其临床意义。方法收集结肠癌患者及健康体检者血清标本各52例,荧光定量PCR检测mi RNA-183表达,免疫印迹增强化学发光法检测TK1的表达,分析两者之间的相关性及与临床病理的关系。结果与正常对照组相比,结肠癌患者血清mi R-183的表达相对升高(P<0.01);中低分化腺癌者血清mi R-183的表达量高于高分化腺癌(P<0.01);Ⅲ~Ⅳ期结肠癌者血清中mi R-183的表达量高于Ⅰ~Ⅱ期(P<0.01),且在有淋巴结转移的患者中表达较高(P<0.01);受试者工作特征(ROC)曲线显示,以相对表达量1.15为临界点,血清mi R-183可能具有诊断结肠癌的价值,其敏感度为78.8%,特异度为67.3%,阳性预测值为78.9%,阴性预测值为70.2%。结肠癌患者血清中TK1的表达也较正常对照组升高,中低分化腺癌高于高分化腺癌(P<0.05),Ⅲ~Ⅳ期高于Ⅰ~Ⅱ期(P<0.01)。血清中mi R-183与TK1的表达呈正相关(rs=0.692,P<0.01)。结论血清中mi R-183及TK1可能是早期结肠癌的诊断标志物,并可用于判断肿瘤的恶性程度及预后。

血清胸苷激酶1在26055例健康体检人群肿瘤风险筛查中的应用

目的:探讨血清胸苷激酶1(serum thymidine kinase 1,STK1)在健康体检肿瘤风险筛查中的应用价值。方法:采用点印迹免疫增强发光法,检测长沙地区8家健康体检机构26 055例健康体检人群血清胸苷激酶1水平。结果:该体检人群中STK1阳性率(STK1>2 pmol/L)为2.61%;STK1升高组中60.35%的研究对象检出癌前病变和/或与肿瘤发生相关的病理改变;中度/重度增生性疾病(乳腺小叶增生、前列腺增生)者STK1升高比例明显增加。结论:在健康体检肿瘤风险筛查中,血清胸苷激酶1是早期发现肿瘤生长的预警信号。

细胞质胸苷激酶1在原发性肝癌中的表达及其对预后的临床意义

目的:研究细胞质胸苷激酶1(TK1)在原发性肝癌(PHC)中的表达情况。方法:用免疫增强化学发光法与电化学发光法分别对33例PHC、38例肝硬化、36例肝炎和35例健康人的血清TK1、AFP水平进行检测。结果:PHC组TK1和AFP水平明显高于对照组、肝炎组、肝硬化组(P<0.05),PHC组TK1与AFP呈正相关(r=0.966,P<0.05),PHC组低分化患者TK1水平明显高于中/高分化患者,TNMⅢ+Ⅳ分期患者明显高于Ⅰ+Ⅱ分期患者,TK1≤2.0 pmol/L患者3年生存率和生存时间高于>2.0 pmol/L患者(P<0.05);TK1>2.0 pmol/L和TNM分期≥Ⅲ期是影响PHC患者总体生存率的独立危险因素。结论 :血清TK1可作为PHC诊断、疗效监测、预后评估的一项潜在指标。

人胸苷激酶基因cDNA克隆

目的 克隆人胸苷激酶基因cDNA。方法采用逆转录PCR方法扩增胸苷激酶cDNA ,用十二烷基氟波酯 (TPA)刺激人外周血细胞的mRNA为模板 ;扩增的PCR产物经TA克隆重组和内切酶鉴定 ,以及DNA序列分析确定克隆基因的序列。结果经逆转录PCR扩增出一个 70 0bp左右的DNA片段 ,TA克隆出现 1 6个阳性克隆 ,选择其中的一个克隆 (TKTA8)进行DNA序列分析 ,序列分析结果表明TKTA8克隆重组的序列是人胸苷激酶的cDNA序列。结论从外周血细胞中得到了hTK完整的开放读码框架。

血清胸苷激酶1在肿瘤患者中的表达及临床意义

目的探讨血清胸苷激酶1(TK1)检测作为肿瘤细胞增殖标志物对肿瘤早期预测的意义,探讨血清TK1的含量与肿瘤病种、复发转移、临床分期及临床治疗效果评估的关系。方法应用酶免疫点印迹化学发光法测定144例肿瘤患者(肿瘤患者组)和67例健康对照者(对照组)血清TK1的水平,分析血清TK1与肿瘤患者各生物学行为参数的关系。结果肿瘤患者组和对照组在血清TK1水平及阳性表达率间的差异均有统计学意义(P<0.01),且TK1浓度与年龄呈正相关性(P<0.01)。肿瘤患者TK1的表达在不同病种之间的差异有统计学意义(P<0.05),有复发或转移的患者血清TK1阳性表达率与无复发或转移的患者比较差异有统计学意义(P<0.01),大肠癌及肺癌的Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期,各组血清TK1阳性表达率差异有统计学意义(P<0.01)。大肠癌患者治疗后不同临床疗效(完全缓解,部分缓解,疾病进展)的患者血清TK1水平的差异有统计学意义(P<0.01)。结论 TK1可用于对恶性肿瘤的早期筛查。血清TK1检测可作为临床上对肿瘤增殖程度及复发监测的手段之一。

血管内皮生长因子、上皮型黏附素和胸苷激酶1在胃癌和胃癌前病变组织中的表达及临床意义

目的探讨血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、上皮型黏附素(E-cadherin,E-cad)、胸苷激酶1(thymidine kinase 1,TK1)在胃癌组织和胃癌前病变组织中的表达及临床意义。方法选取2018年2月至2019年3月河北北方学院附属第一医院病理科经胃黏膜活检确定为胃癌前病变组织和胃癌手术标本103例为研究对象,按病理类型将其分为对照组(40例)和研究组(63例),其中对照组为胃癌前病变患者,是由胃黏膜异型增生和肠上皮化生病变而成,研究组为胃癌患者。比较对照组和研究组中TK1的表达水平、VEGF、E-cad的阳性表达率,以及VEGF、E-cad和TK1单一检测及联合检测对胃癌的诊断价值。结果研究组TK1表达水平为(2.62±1.09)pmol/L,显著高于对照组的(1.75±0.87)pmol/L(P<0.05);研究组VEGF的阳性表达率显著高于对照组(P<0.05);研究组E-cad的阳性表达率显著低于对照组(P<0.05);VEGF、E-cad、TK1联合检测对胃癌的特异度、敏感度和准确度均显著高于单一指标检测(P<0.05);VEGF在胃癌中的表达与TK1呈正相关(P<0.05),与E-cad呈负相关(P<0.05),E-cad在胃癌中的表达与TK1和VEGF均呈负相关(P<0.05)。结论在胃癌组织中VEGF和TK1表达均升高,E-cad表达降低。VEGF、E-cad、TK1联合检测对胃癌患者的诊断具有重要的临床价值,能显著提高诊断的特异度、敏感度和准确度。

腺病毒介导的VEGF启动子-胸苷激酶表达系统对肝癌细胞的选择性杀伤作用

目的 :构建携带受血管内皮生长因子 (VEGF)启动子调控的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因 (HSV- tk)的重组腺病毒载体 ,并探讨该重组腺病毒对体外培养的肝癌细胞的特异性杀伤活性。方法 :采用 Ad Easy System构建携带受 VEGF启动子或巨细胞病毒 (CMV)启动子调控 tk基因表达的 Ad VEGF- tk和 Ad CMV- tk,这两种重组腺病毒载体在 2 93细胞中包装、扩增后 ,体外感染正常肝细胞系 L 0 2和肝癌细胞系 Hep G2 ,并用不同浓度的丙氧鸟苷 (GCV)处理后以 MTT法检测受染细胞的增殖情况。 结果 :Ad VEGF- tk的病毒滴度为 1× 10 1 0 pfu/ ml,Ad CMV- tk为 5× 10 1 0 pfu/ ml。 L 0 2细胞感染 Ad VEGF- tk后对GCV的敏感性无明显改变 ,而 Hep G2细胞感染 Ad VEGF- tk后对 GCV的敏感性明显增加 ,在感染复数 (MOI)为 10 0并用 5 0μg/ m l GCV处理时 ,则有 90 %以上 Hep G2细胞被杀死 ;而 Ad CMV- tk可杀死 95 %Hep G2细胞和 80 %以上 L 0 2细胞。 结论 :VEGF启动子调控的 HSV- tk基因表达可特异性地杀死肝癌细胞 ,同时对正常肝细胞几无影响。

腺病毒介导的KDR启动子-胸苷激酶系统对血管内皮细胞的选择性杀伤作用

目的 :研究腺病毒介导的KDR启动子 胸苷激酶系统对血管内皮细胞的选择性杀伤作用。方法 :应用PCR克隆出人KDR基因启动子序列 - 2 2 5bp～ +12 7bp ,以AdEasysystem为载体 ,构建携带受KDR启动子或CMV启动子调控tk基因表达的 2种重组腺病毒质粒 pAdKDR tk和 pAdCMV tk ,在 2 93细胞中包装、扩增后 ,体外感染表达KDR的脐静脉血管内皮细胞系HUVEC和不表达KDR的肝癌细胞系HepG2 ,并给予不同浓度的丙氧鸟苷 (GCV)处理 ,5d后收集存活细胞并计数。结果 :产生的病毒滴度均为 5× 10 9pfu/ml。在MOI为 10 0、GCV为 5 0 μg/ml条件下 ,AdKDR tk转染HUVEC后细胞生存率下降 (31 49%± 6 .42 % ) ,AdKDR tk转染HepG2后细胞生存率为 76 .5 7%± 3.49% ,而转染AdCMV tk的 2细胞系生存率均显著下降 ,细胞生存率分别为 2 2 .2 4%± 3.77% (HUVEC)和 2 6 .5 3%± 6 .84% (HepG2 )。 结论 :KDR基因启动子可调控HSV tk在血管内皮细胞中特异性表达 ,为进一步开展靶向肿瘤血管内皮的自杀基因治疗研究奠定了基础。