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腺病毒介导的KDR启动子-胸苷激酶系统对血管内皮细胞的选择性杀伤作用 被引量:4
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作者 朱忠政 殷正丰 +2 位作者 吴宗娣 张柏和 吴孟超 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2001年第4期243-247,共5页
目的 :研究腺病毒介导的KDR启动子 胸苷激酶系统对血管内皮细胞的选择性杀伤作用。方法 :应用PCR克隆出人KDR基因启动子序列 - 2 2 5bp~ +12 7bp ,以AdEasysystem为载体 ,构建携带受KDR启动子或CMV启动子调控tk基因表达的 2种重组腺... 目的 :研究腺病毒介导的KDR启动子 胸苷激酶系统对血管内皮细胞的选择性杀伤作用。方法 :应用PCR克隆出人KDR基因启动子序列 - 2 2 5bp~ +12 7bp ,以AdEasysystem为载体 ,构建携带受KDR启动子或CMV启动子调控tk基因表达的 2种重组腺病毒质粒 pAdKDR tk和 pAdCMV tk ,在 2 93细胞中包装、扩增后 ,体外感染表达KDR的脐静脉血管内皮细胞系HUVEC和不表达KDR的肝癌细胞系HepG2 ,并给予不同浓度的丙氧鸟苷 (GCV)处理 ,5d后收集存活细胞并计数。结果 :产生的病毒滴度均为 5× 10 9pfu/ml。在MOI为 10 0、GCV为 5 0 μg/ml条件下 ,AdKDR tk转染HUVEC后细胞生存率下降 (31 49%± 6 .42 % ) ,AdKDR tk转染HepG2后细胞生存率为 76 .5 7%± 3.49% ,而转染AdCMV tk的 2细胞系生存率均显著下降 ,细胞生存率分别为 2 2 .2 4%± 3.77% (HUVEC)和 2 6 .5 3%± 6 .84% (HepG2 )。 结论 :KDR基因启动子可调控HSV tk在血管内皮细胞中特异性表达 ,为进一步开展靶向肿瘤血管内皮的自杀基因治疗研究奠定了基础。 展开更多
关键词 肿瘤 血管内皮细胞 KDR启动子 自杀基因治疗 腺病毒 胸苷激酶系统
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间隙连接细胞间通讯与胸苷激酶系统“旁观者效应”的关系及其调控 被引量:5
2
作者 邢毅飞 鲁功成 +4 位作者 肖亚军 赵军 曾甫清 熊平 冯玮 《细胞生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期162-166,共5页
增强“旁观者效应”是提高单纯疱疹胸苷激酶/更昔洛韦(HSV-TK/GCV)基因系统治疗效果的关键手段。旨在探讨间隙连接细胞间通讯(GJIC)在HSV-TK/GCV系统“旁观者效应”中的作用及其化学调控。通过采用划痕标记染料示踪技术(SLDT)比较ACHN、... 增强“旁观者效应”是提高单纯疱疹胸苷激酶/更昔洛韦(HSV-TK/GCV)基因系统治疗效果的关键手段。旨在探讨间隙连接细胞间通讯(GJIC)在HSV-TK/GCV系统“旁观者效应”中的作用及其化学调控。通过采用划痕标记染料示踪技术(SLDT)比较ACHN、HeLa、NIH-3T3、Cos-7及L-02等五种不同细胞系GJIC功能状况,四甲基偶氮唑盐酶反应比色法(MTT法)检测HSV-TK/GCV对其杀伤效应和“旁观者效应”,并比较GJIC上调剂apigenin和抑制剂18-α-glycyrrhetinic acid(AGA)对GJIC和“旁观者效应”的影响。结果表明,GJIC功能强大的NIH-3T3、Cos-7及L-02细胞对HSV-TK/GCV敏感性及“旁观者效应”程度远较GJIC功能低下的ACHN和HeLa细胞高(P<0.001)。Apigenin可显著提高ACHN细胞GJIC功能,对HeLa细胞则无影响;相反,AGA可显著抑制NIH-3T3、Cos-7和L-02等三种靶细胞的GJIC功能。相应地,apigenin可明显提高ACHN细胞的“旁观者效应”而对HeLa细胞的“旁观者效应”则无影响,AGA则可明显降低上述三种细胞的“旁观者效应”。因此认为,细胞内在的GJIC功能与靶细胞对HSV-TK/GCV的敏感性和“旁观者效应”程度有正向关系,人为调控细胞GJIC后,“旁观者效应”程度亦发生相应改变。 展开更多
关键词 间隙连接细胞间通讯 胸苷激酶系统 “旁观者效应” 单纯疱疹胸苷激酶/更昔洛韦
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胸苷激酶系统血管靶向抗肝癌效应的机制 被引量:1
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作者 李宝金 张超 +3 位作者 周玉梅 郝颖 刘晓平 区庆嘉 《第四军医大学学报》 北大核心 2006年第19期1795-1798,共4页
目的探讨KDR为启动子的HSV-tk重组腺病毒对肿瘤血管内皮细胞的特异性杀伤效能及机制.方法采用pAdeasy系统,构建受KDR启动子或巨细胞病毒(CMV)启动子调控并可表达HSV-tk基因的重组腺病毒,体外分别感染人脐静脉血管内皮细胞系(HUVEC)和肝... 目的探讨KDR为启动子的HSV-tk重组腺病毒对肿瘤血管内皮细胞的特异性杀伤效能及机制.方法采用pAdeasy系统,构建受KDR启动子或巨细胞病毒(CMV)启动子调控并可表达HSV-tk基因的重组腺病毒,体外分别感染人脐静脉血管内皮细胞系(HUVEC)和肝癌细胞系HepG2,并以MTT法检测其细胞增殖情况.人肝癌皮下移植瘤裸鼠随机分成更昔洛韦组(I),空载体病毒组(II),重组腺病毒CMV-tk组(III)及重组腺病毒AdKDR-tk组(IV).各治疗组瘤内分别注入重组腺病毒液及空载体病毒液.重组腺病毒治疗组在病毒给予24h后分别ipGCV,连续10d.对照组,ipGCV.观察瘤体大小及免疫组化法定量测定肿瘤微血管密度.结果病毒滴度均为1×1013pfu/L.感染复数(MOI)为100的条件下,GCV浓度由0增至50mg/L时感染含AdKDR-tk的HUVEC细胞和HepG2细胞存活率由(90.7±4.5)%和(91.8±4.3)%分别下降至(28.9±5.7)%和(75.4±2.9)%(P<0.01),而感染含AdCMV-tk的HUVEC细胞和HepG2细胞存活率分别下降至(17.6±2.5)%和(23.2±5.7)%(P>0.05).体内试验中,与对照组比较,Ⅲ,IV组经治疗后肿瘤的生长均受到了明显的抑制,其抑瘤率分别为(14.7±3.2)%和(23.6±5.6)%(P<0.05).组织内的平均血管密度(MVD),Ⅰ组为37.4±8.6,Ⅱ组为30.6±7.8,Ⅲ组为27.6±7.1,IV组为10.7±4.1.其中,Ⅲ组与Ⅱ组(P<0.05),IV组与Ⅱ组(P<0.01),IV组与Ⅲ组(P<0.01)之间比较均有统计学差异.结论KDR启动子介导的HSV-tk具有特异性杀伤肿瘤血管内皮细胞的作用. 展开更多
关键词 肝肿瘤 KDR启动子 基因冶疗 重组腺病毒 胸苷激酶系统 HEPG2细胞 裸鼠 BALB/C
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腺病毒介导的VEGF启动子—胸苷激酶系统对骨肉瘤细胞的杀伤试验
4
作者 周正明 殷正丰 +4 位作者 王孟龙 吴宗娣 康晓燕 杨惠光 吴孟超 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期53-55,共3页
目的 探讨腺病毒介导的VEGF启动子调控的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因 (HSV tk)系统 (AdVEGF tk)对体外培养的骨肉瘤细胞的选择性杀伤作用。方法 采用 2种重组腺病毒载体AdVEGF tk和AdCMV tk(CMV启动子调控tk基因表达 )体外感染低表达VEG... 目的 探讨腺病毒介导的VEGF启动子调控的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因 (HSV tk)系统 (AdVEGF tk)对体外培养的骨肉瘤细胞的选择性杀伤作用。方法 采用 2种重组腺病毒载体AdVEGF tk和AdCMV tk(CMV启动子调控tk基因表达 )体外感染低表达VEGF的成骨细胞系MC3T3 E1和高表达VEGF的骨肉瘤细胞系LM 8,并给予不同浓度的丙氧鸟苷 (GCV)处理 ,用MTT法检测感染细胞的增殖情况。结果 未感染病毒或感染空病毒的MC3T3 E1细胞和LM8细胞对GCV不敏感 ,感染AdCMV tk的MC3T3 E1细胞和LM 8细胞对GCV敏感。与感染空病毒的MC3T3 E1细胞相比 ,感染AdVEGF tk的MC3T3 E1细胞对GCV的敏感性轻度增加 ,用 5 0 μg/mlGCV处理时 ,30 %MC3T3 E1细胞被杀死 ;感染AdVEGF tk的LM8细胞对GCV的敏感性明显增加 ,用 5 0 μg/mlGCV处理时 ,95 %LM 8细胞被杀死 ,产生的细胞毒活性表现为剂量依赖性。结论 腺病毒介导的VEGF启动子 tk/GCV系统对高表达VEGF的骨肉瘤细胞具有杀伤作用。 展开更多
关键词 腺病毒 介导 VEGF启动子 胸苷激酶系统 骨肉瘤细胞 杀伤试验
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腺病毒为载体的单纯疱疹病毒胸苷激酶/更昔洛韦系统联合光动力治疗口腔恶性肿瘤的初步观察 被引量:3
5
作者 陈世璋 张燕升 +5 位作者 范忠 李维弟 郭莹 王潇 陈剑飞 李宁 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期610-613,617,共5页
目的应用腺病毒为载体的单纯疱疹病毒胸苷激酶(ADV-TK)/更昔洛韦(GCV)系统联合光动力疗法对口腔恶性肿瘤复发患者进行治疗,探讨此法治疗口腔恶性肿瘤的临床效果。方法选取10名口腔不同部位的恶性肿瘤复发患者,用光敏剂——血卟啉衍生物(... 目的应用腺病毒为载体的单纯疱疹病毒胸苷激酶(ADV-TK)/更昔洛韦(GCV)系统联合光动力疗法对口腔恶性肿瘤复发患者进行治疗,探讨此法治疗口腔恶性肿瘤的临床效果。方法选取10名口腔不同部位的恶性肿瘤复发患者,用光敏剂——血卟啉衍生物(HPD)静脉给药,选择相应激光输出功率定时照射,以ADV-TK基因行瘤体及周边注射,经GCV静脉输入治疗后,通过影像学及瘤体血流动力学分析进行临床疗效评估。结果经联合法治疗后,患者肿瘤明显缩小(甚至完全消失),瘤体内血流量降低,影像结果对比改变明显,治疗效果理想。结论将ADV-TK/GCV系统联合光动力治疗口腔恶性肿瘤具有显著的抗肿瘤效应,具备副作用轻微、临床安全性高的特点,为系统性治疗相关肿瘤提供了一种安全可靠的治疗手段。 展开更多
关键词 腺病毒为载体的单纯疱疹病毒胸苷激酶/更昔洛韦系统 光动力 血卟啉衍生物 恶性肿瘤
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HSV-TK/GCV系统在体外对胃癌MNK-45细胞株的增殖抑制作用研究
6
作者 李娅 张赟 +3 位作者 刘红莉 皇海 苏明权 屈慧 《现代检验医学杂志》 CAS 2021年第2期19-23,65,共6页
目的探讨单纯疱疹病毒胸苷激酶基因/丙氧鸟苷(HSV-TK/GCV)自杀基因系统对胃癌MNK-45细胞增殖、侵袭和迁移的抑制效应。方法分别采用MTS试验、CCK8试验、Transwell试验、Western blot试验和RT-PCR方法检测HSV-TK/GCV系统对胃癌MNK-45细胞... 目的探讨单纯疱疹病毒胸苷激酶基因/丙氧鸟苷(HSV-TK/GCV)自杀基因系统对胃癌MNK-45细胞增殖、侵袭和迁移的抑制效应。方法分别采用MTS试验、CCK8试验、Transwell试验、Western blot试验和RT-PCR方法检测HSV-TK/GCV系统对胃癌MNK-45细胞在24,48,72和96h的增殖、侵袭和迁移的改变;对MNK-45细胞凋亡相关蛋白mRNA水平的变化。结果HSV-TK/GCV系统能够有效抑制胃癌MNK-45细胞的增殖效应,并能够减弱胃癌MNK-45细胞的侵袭和迁移能力,诱导MNK-45细胞凋亡相关蛋白Caspase3、Bax蛋白水平和mRNA的表达增加,抑制Bcl-2蛋白表达水平的降低,促进凋亡的发生。结论HSV-TK/GCV系统能够有效抑制胃癌MNK-45细胞增殖、侵袭和迁移,诱导MNK-45细胞凋亡的发生。 展开更多
关键词 胃癌 单纯疱疹病毒胸苷激酶基因/丙氧鸟苷系统 MNK-45细胞 细胞增殖
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胸苷激酶基因系统联合大蒜素诱导膀胱癌细胞凋亡的研究 被引量:2
7
作者 丘少鹏 毛晓鹏 +4 位作者 曹开源 陈贤景 袁广卿 徐霖 黄小荣 《中华外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期382-386,共5页
目的 探讨单纯疱疹病毒胸苷激酶 (HSV TK) /更昔洛韦 (GCV)系统联合大蒜素对膀胱癌细胞的协同杀伤效应及对细胞凋亡的影响。方法 通过脂质体将胸苷激酶 (TK)基因转入膀胱癌BIU87细胞构建BIU87TK细胞,观察GCV(1mg/L)、大蒜素(5mg/L)及G... 目的 探讨单纯疱疹病毒胸苷激酶 (HSV TK) /更昔洛韦 (GCV)系统联合大蒜素对膀胱癌细胞的协同杀伤效应及对细胞凋亡的影响。方法 通过脂质体将胸苷激酶 (TK)基因转入膀胱癌BIU87细胞构建BIU87TK细胞,观察GCV(1mg/L)、大蒜素(5mg/L)及GCV+大蒜素(浓度同前)共同作用对BIU87TK细胞形态学、细胞凋亡率及细胞周期变化的影响,检测bcl 2、bax、半胱天冬蛋白酶(caspase 3)表达变化及caspase 3活性变化。结果 药物作用 72h,GCV+大蒜素对BIU87TK细胞的抑制率为 72 50%,高于GCV作用后的 35 00%和大蒜素作用后的 37 00%,二者可发挥协同抑瘤作用; (F=6 46,P<0 05)。GCV+大蒜素联合作用前期凋亡率高于单独作用细胞,细胞周期阻滞在S和G2 期,与单独作用比较阻滞时效提前;二者可抑制bcl 2表达并可促进caspase 3表达及活化。结论 HSV TK/GCV系统联合大蒜素可通过共同诱导凋亡发挥协同作用,抑制膀胱癌细胞生长。细胞周期阻滞,相关凋亡基因表达及活性的变化可能发挥了重要的作用。 展开更多
关键词 胸苷激酶基因系统 联合用药 大蒜素 膀胱癌 细胞凋亡
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胸苷激酶基因系统杀伤前列腺癌细胞的流式细胞术分析 被引量:2
8
作者 邢毅飞 鲁功成 +1 位作者 肖亚军 曾甫清 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期107-108,共2页
目的 探讨单纯疱疹病毒胸苷激酶/更昔洛韦(HSV-TK/GCV)自杀基因系统诱导人-前列腺癌细胞死亡的机制。方法利用脂质体介导的基因转染技术将携带HSV-TK基因的EB病毒表达载体导入激素非依赖性人前列腺癌(HRPC)细胞系PC-3m并给予GCV,采用流... 目的 探讨单纯疱疹病毒胸苷激酶/更昔洛韦(HSV-TK/GCV)自杀基因系统诱导人-前列腺癌细胞死亡的机制。方法利用脂质体介导的基因转染技术将携带HSV-TK基因的EB病毒表达载体导入激素非依赖性人前列腺癌(HRPC)细胞系PC-3m并给予GCV,采用流式细胞术(FCM)观察PC-3m细胞周期变化以及细胞坏死和凋亡情况。结果HSV-TK/GCV系统可使PC-3m细胞周期S期比例升高,高浓度GCV组尤其明显,S期细胞比例由16.73%升至33.60%;10和100μmol/L GCV作用72 h后,PC-3m细胞可出现较为明显的细胞坏死和凋亡,比例分别为13.54%、12.45%、34.70%和10.11%。结论细胞坏死和凋亡均参与了HSV-TK/GCV系统诱导的PCa细胞死亡,以细胞坏死比例稍高;TK自杀基因系统杀伤前列腺癌细胞时可能不依赖于其p53表达背景,因而具有更广阔的应用前景。 展开更多
关键词 胸苷激酶基因系统 列腺癌 流式细胞术 单纯疱疹病毒 更昔洛韦 细胞周期 脱噬作用
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腺病毒介导HSV-TK基因血管靶向治疗裸鼠皮下人肝癌细胞移植瘤 被引量:3
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作者 李宝金 宁长青 +3 位作者 张超 郝颖 刘晓平 区庆嘉 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2006年第2期120-123,共4页
目的:探讨重组腺病毒介导胸苷激酶系统通过血管靶向治疗裸鼠皮下人肝癌细胞移植瘤的疗效及作用机制。方法:32只BALB/c鼠皮下接种建立裸鼠皮下人肝癌细胞移植瘤模型,当瘤体达100 mm^3时随机分成4组,分别为更昔洛韦(GCV)组(Ⅰ)、空载体... 目的:探讨重组腺病毒介导胸苷激酶系统通过血管靶向治疗裸鼠皮下人肝癌细胞移植瘤的疗效及作用机制。方法:32只BALB/c鼠皮下接种建立裸鼠皮下人肝癌细胞移植瘤模型,当瘤体达100 mm^3时随机分成4组,分别为更昔洛韦(GCV)组(Ⅰ)、空载体病毒组(Ⅱ)、重组腺病毒CMV-TK组(Ⅲ)及重组腺病毒AdKDR-TK组(Ⅳ)。各治疗组瘤内分别注入重组腺病毒液及空载体病毒液,重组腺病毒治疗组在病毒给予24 h后分别在腹腔内注射GcV,连续10 d;对照组腹腔内注入GCV。观察各组瘤体生长情况及免疫组化法测定肿瘤微血管密度(MVD)。结果:与对照组比较,第Ⅲ、Ⅳ组经治疗后肿瘤的生长均受到了明显的抑制,其抑瘤率分别为12.3%和24.5%(两者比较,P<0.05)。肿瘤组织内的MVD,Ⅰ组为(37.4±8.6)个/mm^2、Ⅱ组为(30.6±7.8)个/mm^2、Ⅲ组为(27.6±7.1)个/mm^2、Ⅳ组为(10.7±4.1)个/mm^2,其中Ⅲ组与Ⅱ组(P<0.05)、Ⅳ组与Ⅱ组(P<0.01)、Ⅳ组与Ⅲ组(P<0.01)之间的肿瘤内MVD比较均有统计学差异。结论:重组腺病毒介导以KDR为启动子的胸苷激酶系统能够通过血管靶向性地有效抑制肿瘤的生长。 展开更多
关键词 血管靶向 基因治疗 重组腺病毒 胸苷激酶系统 肝肿瘤
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Effects of herpes simplex virus thymidine kinase/acyclovir system on growth of human pulmonary adenocarcinoma A549 cell line in vitro and in vivo
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作者 何祥梁 何东华 +4 位作者 郭先健 钱桂生 黄桂君 陈维忠 李淑萍 《Journal of Medical Colleges of PLA(China)》 CAS 2002年第3期227-231,共5页
Objective: To observe the effect of anciclovir (ACV) treatment on tumors induced by inoculation of TK gene-transfected human pulmonary adenocarcinoma A549 cells in nude mice. Methods: A recombinant plasmid containing ... Objective: To observe the effect of anciclovir (ACV) treatment on tumors induced by inoculation of TK gene-transfected human pulmonary adenocarcinoma A549 cells in nude mice. Methods: A recombinant plasmid containing TK gene was constructed and transfected into A549 cells by electroporation. The sensitivity of the transgenic cells (A549-TK) to ACV was examined by MTT assay in vitro and for in vivo observation, inoculation of A549-TK and A-549 cells into nude mice was separately performed to induce tumor growth, the response of which to ACV treatment was observed, and the tumor tissues were pathologically examined. Results: A recombinant plasmid containing TK gene was successfully constructed and transfected into A549 cells. The sensitivity of A549-TK cells to ACV was 43 times higher than that of A549 cells. The tumors induced by A549-TK cells showed no significant increase in size after ACV treatment (P>0. 05) , and light microscopy revealed local tissue necrosis, karyoklasis, and nuclei disappearance. Conclusion: A549-TK cells acquires sensitivity to ACV both in vitro and in vivo, and ACV can inhibit the growth of tumors induced by A549-TK cell inoculation in nude mice. 展开更多
关键词 pulmonary carcinoma herpes simplex virus thymine kinase gene gene therapy ACYCLOVIR nude mice
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