Rho激酶抑制剂Y27632促进人诱导多能干细胞来源原始神经上皮细胞向多巴胺能神经前体细胞的转化

目的提高人诱导多能干细胞来源原始神经上皮细胞(hiPSCs-NECs)定向诱导中脑多巴胺能神经前体细胞(DAPs)的效率。方法将人iPSCs在含有小分子组合[DMH1(10μmol/L)、SB431542(10μmol/L)、音猬因子(SHH 200 ng/mL)、成纤维细胞生长因8(FGF8100 ng/mL)、嘌吗啡胺(2μmol/L)、CHIR99021(3μmol/L)、N2(1%)]的mTeSRTM培养基中诱导至12 d,细胞分化为原始神经上皮细胞(NECs)。特异性诱导DAPs,将诱导的hiPSCs-NECs用胶原酶IV消化后,在神经分化培养基[添加1%N2、2%B27-A、BDNF(10 ng/mL)、GDNF(10 ng/mL)、AA、TGF-β、cAMP、1%GlutaMax]中加入不同浓度的Rho激酶抑制剂Y27632重新接种,并于次日更换培养基去除Y27632,持续诱导至第28天获得DAPs。结果人iPSCs可在基质胶上稳定传代,表达多潜能性标记物OCT4、SOX2、Nanog和SSEA1,且碱性磷酸酶染色呈阳性。诱导分化至第13天获得hiPSCs-NECs,形成玫瑰花结样结构,能够表达特征性标记物(SOX2、Nestin和PAX6)。将hiPSCs-NECs消化后,添加5μmol/LY27632的hiPSCs-NECs相比较未加Y27632的对照组,细胞解离后贴壁存活率明显增加,处于S期的细胞(P<0.01)与细胞活力显著提高(P<0.01),且凋亡率显著降低(P<0.05),持续诱导至第28天,细胞高表达DAPs特异性的标记物(TH、FOXA2、NURR1和Tuj1)。结论添加Y27632(5μmol/L)24 h可显著提高人iPSCs-NECs细胞向iPSCs-DA神经前体转化时的细胞存活率,并且Y27632去除后,不会影响后续向DA神经前体细胞分化,间接的提高了细胞的分化效率.

可卡因对多巴胺能神经元的作用及机制

可卡因主要作用于单胺类转运体,包括多巴胺转运体(DAT)、5-HT转运体(SERT)和去甲肾上腺素转运体(NET),阻止这些转运体将突触前释放的神经递质转运回突触前膜神经末梢,从而增强单胺能神经递质的作用而产生精神兴奋效应,其中DAT是可卡因作用的主要环节。可卡因也能够增加突触前末梢神经递质的释放,对突触后神经元的基因和蛋白水平的调节在可卡因成瘾中的作用也是不可忽视的。本文就可卡因成瘾分子机制的最新研究进展作一综述。

针刺“足三里”对大鼠小肠胆碱能和某些肽能神经的影响

电针大鼠双侧“足三里”50min 后,小肠神经结构内胆碱酯酶活性和脑啡肽免疫反应性明显降低,P 物质免疫反应性明显升高。提示电针“足三里”调整胃肠功能可能是通过肠壁内神经递质活性的变化来实现的。

烫伤应激对大鼠结肠胆碱能和CO能神经的影响

目的:探讨烫伤后大鼠肠功能障碍时肌间神经丛有无形态学异常及可能机制。方法:20只大鼠随机分成对照组(n=10)和烫伤组(n=10),建立30%TBSAIII度烫伤大鼠模型,测定肠传输速率,用酶组织化学方法观察结肠肌间神经丛内胆碱能和CO能神经的组织学改变,并对两组大鼠结肠肌间神经丛内乙酰胆碱酯酶(Actylcholinesterase,AE)和血红素氧合酶-2(Hemeoxygenase-2,HO-2)阳性神经元、神经节的密度进行了测定。结果:烫伤组大鼠肠传输速率明显降低。烫伤后大鼠结肠肌间神经丛内胆碱能神经元及神经节密度明显减小(P<0.01);HO-2阳性神经元在两组大鼠结肠组织中均有表达,烫伤组大鼠结肠肌间神经丛HO-2阳性神经元及神经节的密度,明显低于对照组(P<0.05)。结论:烫伤后大鼠结肠肌间神经丛胆碱能和CO能神经受损,可能是烫伤引起肠功能障碍的原因。

慢传输型便秘大鼠结肠肌间神经丛胆碱能神经及氮能神经的组化研究

目的 研究慢传输型便秘大鼠结肠肌间神经丛内胆碱能 (AchE)神经及氮能 (NOS)神经的变化 ,探讨慢传输型便秘的发病机制。方法 建立大鼠慢传输型便秘模型 ,利用铺片技术制作结肠肌间神经丛标本 ,采用组织化学技术行结肠肌间神经丛内AchE神经及NOS神经染色。结果 与正常大鼠比较 ,模型组结肠肌间神经丛内AchE阳性神经分布较稀疏 ,神经元数量较少 ,但胞体增大 ,染色加深 (阳性细胞数、核浆比例分别为 14 34± 4 5 6vs2 7 5 6± 6 6 4 ;0 5 7± 0 2 0vs 0 76± 0 18,P <0 0 1) ;NOS阳性神经元分布较稀疏 ,数量较少 ,染色较淡 ,节间束纤维减少 (阳性细胞数、弱阳性细胞数分别为 7 10± 2 0 4vs 11 16± 2 81;2 2 1± 1 38vs 0 84±0 6 7,P <0 0 1)。结论 慢传输型便秘大鼠肠神经系统存在明显的病理改变 ,结肠传输功能障碍与肠壁内胆碱能和氮能神经的病理改变和 (或 )功能障碍有关。

电针对大鼠不稳定膀胱逼尿肌及膀胱颈氮能神经递质的影响

目的:观察电针治疗对大鼠不稳定膀胱模型下尿路组织氮能神经递质的影响。方法:制作大鼠不稳定膀胱模型,电针会阳、中膂俞7d后,采用免疫组织化学法检测大鼠膀胱逼尿肌、膀胱颈平滑肌神经源性一氧化氮合酶(neuronal nitric oxide synthase,nNOS)、内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide syn-thase,eNOS)和诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)阳性细胞并计数。结果:不稳定膀胱模型其膀胱逼尿肌、膀胱颈平滑肌中氮能神经递质明显下降,而电针治疗则可促进氮能神经递质的生成和分泌。结论:电针促进膀胱组织中氮能神经递质的生成和分泌可能是电针治疗改善不稳定膀胱功能的主要机制之一。

P物质能神经阻滞剂治疗变应性鼻炎的实验研究

对实验性变应性鼻炎动物模型进行Ｐ物质能神经阻滞剂（ｃａｐｓａｉｃｉｎ，ＣＡＰ）治疗。在整个治疗过程中观察记录鼻分泌量、喷嚏反射、鼻部抓痒等症状，并与对照组进行量化指标比较。对治疗组、未治疗组和正常对照组分别用特异性Ｐ物质放射免疫测定法，检测了鼻粘膜中的Ｐ物质含量，用滤纸法观察了鼻分泌功能状态。实验组予Ｐ物质能神经阻滞剂（ＣＡＰ）滴鼻，治疗结果表明，变应性鼻炎的症状明显缓解，鼻分泌量较治疗前减少了６４％，鼻粘膜中ＳＰ含量与未治疗组相比明显减少（Ｐ＜０．０１），ＣＡＰ的反复应用能有效地耗竭鼻粘膜中Ｐ物质含量。从而证实了ＣＡＰ对Ｐ物质能神经脱敏作用的新学说，ＣＡＰ阻断了Ｐ物质能神经的轴索反射，发挥对变应性鼻炎的治疗作用。

肠易激综合征大鼠P物质能神经通路的改变

目的:应用c-fos作为神经通路的指示物,探讨SP能神经通路在IBS发病机制中的可能作用.方法:应用冰水灌胃法建立便秘型肠易激综合征(c-IBS)大鼠模型,模型组与对照组各10只大鼠.通过免疫组化方法研究两组大鼠直肠球囊扩张后肠道肌间神经丛、腰骶段脊髓背角、下丘脑及前扣带回SP和c-fos表达,对染色切片进行计算机病理图像分析.结果:模型组回盲部及结肠肌间神经丛SP阳性表达的不透光率密度均显著高于对照组(分别为176.6vs155.5,172.3vs152.0,P<0.05),脊髓背角、下丘脑及前扣带回SP阳性表达的面积均显著高于正常对照组(分别为169318vs137655,144728vs114403,145117vs117612,P<0.05),脊髓背角、下丘脑及前扣带回SP阳性表达的不透光率密度均显著高于正常对照组(分别为182.1vs160.2,128.3vs117.9,127.9vs114.5,P<0.05).模型组回盲部及结肠肌间神经丛、脊髓背角、下丘脑及前扣带回c-fos阳性表达的面积均显著高于正常对照组(191712vs154363,73597vs41179,46258vs33238,302369vs204563,708506vs409856,P<0.05),模型组回盲部及结肠肌间神经丛、脊髓背角、下丘脑及前扣带回c-fos阳性表达的不透光率密度均显著高于正常对照组(120.9vs109.0,101.3vs92.2,125.4vs88.7,115.5vs88.6,120.6vs105.1,P<0.05).相关分析显示:模型组肠道、脊髓、下丘脑、前扣带回SP表达与c-fos表达之间密切相关(r=0.594-0.721,P<0.05).结论:SP在中枢及肠道可能参与C-IBS的病理生理过程,而且SP能神经通路可能是参与肠道感觉或运动功能调节的神经传导通路之一.

山羊子宫内肽能神经分布及妊娠时的变化

采用免疫组化方法 ,研究了山羊子宫内含 P物质 ( SP)和含血管活性肠肽 ( VIP)神经的分布。结果 ,妊娠及未妊娠山羊子宫颈内有粗细不等的神经束行经于外膜和肌层中 ,神经分支形成丛状分布于血管壁 ,子宫颈部未见 SP神经元胞体及 VIP神经元胞体 ;未妊娠山羊子宫角内 SP神经和 VIP神经均呈丛状围绕血管并分布于血管壁 ;妊娠中期的孕角和非孕角均有胎盘形成 ,除胎盘内无神经分布外 ,SP神经及 VIP神经同样分支形成丛状分布于血管壁。结果提示 ,山羊子宫内 SP神经和 VIP神经主要支配子宫内血管 ,妊娠时除胎盘内无神经分布外 ,SP神经及

自发性高血压鼠脑底动脉单胺能神经分布的形态学观察

应用免疫组织化学ABC法，对10只雄性自发性高血压大鼠和10只正常大鼠脑底动脉单胺能神经纤维分布进行了观察、在自发性高血压鼠脑底血管的大脑前动脉、大脑中动脉和基底动脉壁上均可见棕褐色的免疫反应阳性纤维，纤维较粗，弯曲，环行走行，密度较高。与正常鼠同一部位脑底动脉壁的阳性纤维密度比较有明显增加。经统计学检验，P＜0．05，表明高血压鼠和正常鼠脑底动脉之间的单胺能神经纤维的密度有明显差异。本文结果提示，高血压鼠脑底动脉各主要分支较正常鼠脑底动脉各主要分支有更高密度的单胺能神经纤维分布，这些纤维属于交感神经纤维，说明交感神经可能在高血压鼠的脑血管活动和对高血压的发生和发展具有重要的作用。

大鼠椎动脉基底动脉系脑血管神经肽Y能神经与星状神经节、颈上神经节的关系

应用免疫组织化学技术 ABC法和神经节切除术 ,观察了大鼠脑底血管椎动脉、基底动脉系主要动脉分支神经肽 Y能神经纤维的起始核团。正常组大鼠脑底血管椎动脉颅内段、基底动脉和小脑上动脉均可见棕褐色的神经肽 Y能免疫反应阳性纤维 ,呈细线状 ,攀附于血管壁上。手术 I组作左侧星状神经节切除术 ,术后存活 7～ 10 d,左侧椎动脉颅内段阳性纤维基本消失 ,基底动脉和双侧小脑上动脉阳性纤维明显减少 ;右侧椎动脉颅内段阳性纤维无减少。手术 II组作双侧星状神经节切除术 ,双侧椎动脉颅内段、基底动脉和小脑上动脉阳性纤维基本消失。手术 III组作左侧颈上神经节切除术 ;手术 IV组作双侧颈上神经节切除术 ,上述各动脉阳性纤维密度未发现减少现象。手术 I、II组各组纤维密度数据与正常组者比较进行了统计学分析 ,P<0 .0 5。结果提示 :大鼠一侧星状神经节发出的神经肽 Y能神经纤维分布于同侧椎动脉颅内段、基底动脉和双侧小脑上动脉 ,即大鼠脑血管椎 -基底动脉系神经肽 Y能神经纤维主要起源于星状神经节 。

人胚胎期小肠六种肽能神经发生的研究

采用免疫组织化学ＰＡＰ法，对５３例不同胎龄的人胚胎小肠的亮氨酸脑啡肽（Ｌ－Ｅｎｋ）、Ｐ物质（ＳＰ）、神经肽Ｙ（ＮＰＹ）、降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）、血管活性肠肽（ＶＩＰ）和甘丙素（ＧＡＬ）等６种肽能神经的发生发育过程进行观察，并与ＡＣｈ能神经和膀胱的肽能神经的发生做了对比研究。结果表明，人胚胎小肠神经中ＡＣｈ能神经发生早于肽能神经；同一个体不同器官肽能神经并非同时发生。本文观察到的小肠肽能神经的分布，比已有的报道广泛；６种肽能神经的出现时间，亦比以往研究所见的早。

大鼠鼻粘膜及耳廓皮肤肥大细胞与肽能神经末梢关系的免疫组织化学研究

目的:为了从形态学角度验证肥大细胞与肽能神经“双向”调节理论.方法:采用免疫组织化学方法(ABC法)对Wistar大鼠鼻粘膜及耳廓皮肤进行肥大细胞与肽能神经末梢关系的研究.结果:大鼠鼻粘膜及耳廓皮肤肥大细胞与P物质能神经末梢存在较为密切的形态学构筑关系;肥大细胞可“串连”于P物质能神经纤维;肥大细胞免疫组化染色呈阳性,但尚不能断定肥大细胞为P物质阳性细胞.结论:提示肥大细胞与P物质能神经关系密切,为进一步研究肥大细胞的非IgE调控机制提供了形态学依据.

白术对肝硬化大鼠胃动力和氮能神经分布的影响及意义

目的:观察中药白术对肝硬化大鼠胃动力及胃肌间神经丛氮能神经的影响.方法:Wister大鼠24只随机分为肝硬化模型组,白术治疗组和对照组,采用葡聚糖蓝-2000为胃肠内标记物观察大鼠胃动力变化,NADPH-d组织化学染色及肌间神经丛全层铺片技术,观察肝硬化大鼠胃底、胃体及胃窦肌间神经丛氮能神经的变化,并对其分布进行定量分析.结果:与对照组比较,肝硬化组大鼠胃动力明显减弱(160.23±45.13vs100±17.78,P<0.01),胃体、胃窦肌间神经丛氮能阳性神经排列紊乱,染色增强,密度增加,明显高于对照组(7.35±0.95vs5.52±0.92,P<0.01或6.26±0.79vs5.28±0.78,P<0.05),胃底肌间神经丛氮能阳性神经元数量及分布无明显变化;中药治疗组肝硬化大鼠胃动力明显改善(100±17.78vs96.12±16.25),胃窦肌间神经丛氮能阳性神经明显恢复(5.39±0.84vs5.28±0.78),与对照组比较均无明显变化(P>0.05).结论:中药白术对肝硬化大鼠胃动力减退有治疗作用,其机制与改善胃窦肌间神经丛氮能神经分布有关.

食管鳞癌组织中的肽能神经支配研究

目的 探讨食管鳞癌组织中的肽能神经支配情况。 方法 采用免疫组织化学ABC法 ,检查外科手术取得的食管鳞癌标本中 10种神经肽免疫反应性神经纤维的分布及其与肿瘤细胞的关系 ;采用食管鳞癌组织块和鸡胚背根神经节共培养的方法 ,初步探讨肿瘤组织对神经元的影响 ,以推测肿瘤中神经纤维的来源。 结果 食管鳞癌组织中存在相当数量的GAL、SP、NPY等多种神经肽免疫反应神经纤维 ,神经纤维与肿瘤细胞紧密接触。共培养组有约 6 3%的神经节长出突起 ,其中有 49%的神经节突起在靠近肿瘤组织块的一侧较浓密 ,对侧则较稀少。对照组鸡胚神经节则无突起生长。 结论 食管鳞癌组织中可能存在肽能神经支配 ;食管鳞癌组织块对神经节突起具有促生长作用。

交感肾上腺素能神经在针刺治疗关节炎中的作用

以诱发荧光法研究了６－ＯＨＤＡ引起佐剂性关节炎大鼠的自然恢复减慢和电计可以促进的机理．证明：６－ＯＨＤＡ可破坏肾上腺素能神经末梢，在佐剂性关节炎组１周后虽有再生，但荧光膨体仍显著减少或不见，到８周还未恢复到正常水平．电针加６－ＯＨＤＡ的佐剂关节炎组与非电针组比较，荧光膨体明显增多增亮，说明电针有促进交感肾上腺素能神经末稍再生的作用．这是电针促进６－ＯＨＤＡ注入后佐剂性关节炎恢复的原因之一．

大鼠脑血管颈内动脉系神经肽Y能神经纤维的来源

应用免疫组织化学技术 ABC法和神经节切除术 ,观察了 3 0只 Sprague-Dawley大鼠 (分正常组和四个手术组 )颈内动脉系脑底血管主要分支神经肽 Y( NPY)能神经纤维的起源。正常组大鼠脑底血管大脑前动脉、大脑中动脉和大脑后动脉均可见棕褐色的 NPY能免疫反应阳性纤维 ,呈细线状 ,攀附于血管壁上。手术 组做左侧颈上神经节切除术 ,术后存活 7～ 10 d,发现左侧大脑前动脉、大脑中动脉和大脑后动脉阳性纤维明显减少 ,右侧同名动脉阳性纤维亦有减少 ,但不如同侧明显 ;手术 组做双侧颈上神经节切除术 ,术后存活 7～ 10 d,双侧大脑前动脉、大脑中动脉和大脑后动脉阳性纤维基本消失 ;手术 组做左侧星状神经节切除术 ;手术 组做双侧星状神经节切除术 ,上述各动脉阳性纤维密度都未减少。将手术 、 组各组阳性纤维密度数据与正常组进行对比 ,经统计学分析 ,有显著差异。结果提示 :大鼠一侧颈内动脉系各主要动脉分支的 NPY能神经纤维都起源于双侧颈上神经节 。

糖胃康对糖尿病胃轻瘫大鼠胃肽能神经的影响

目的探讨中药复方糖胃康对糖尿病胃轻瘫(DGP)大鼠胃肽能神经的影响。方法将实验大鼠分为正常对照组,模型对照组,糖胃康大、小剂量组,胃复安组,分别灌胃给药4周后处死,取胃窦部组织,测定并分析其肽能神经面积和光密度。结果模型组与正常对照组大鼠比较,血管活性肠肽(VIP)、降钙素基因相关肽(CGRP)神经面积、光密度均有显著降低(P<0.01),糖胃康大、小剂量组与模型组比较,VIP、CGRP神经面积及光密度均有明显上升(P<0.01或 P<0.05),而胃复安组相应指标均无明显变化(P>0.05)。结论中药糖胃康可显著改善 DGP 大鼠的胃肽能神经病变。

炎性胃痛幽门括约肌内VIP和CGRP能神经的变化

目的 :研究大鼠幽门括约肌内肠神经系统的分布与胃肠运动功能的相互关系。方法 :30只大鼠 ,设对照组、实验组 ,采用免疫组织化学技术 ,显示括约肌内VIP 和CGRP ir神经元成分。结果 :①正常幽门括约肌肌层可见个别的CGRP 和VIP ir神经元胞体 ,阳性纤维丰富。于肌纤维增厚的括约肌部位神经元成分特别丰富。②甲醛致胃炎性痛鼠 ,肌间神经丛VIP神经元胞体和肌层内神经纤维的活性 (图像分析 ,平均光密度 )降低 ,甲醛组比对照组均显著降低 (P <0 .0 1 ) ,但CGRP的甲醛组较对照组升高 (P <0 .0 1 )。结论 :肠神经系统中这两种神经元成分参与幽门括约肌活动与胃肠运动的调控机制。

大鼠脑内血管的胆硷能神经纤维的分布

本文应用ＡＢＣ免疫过氧化物酶法，以胆硷乙酰转移酶（ＣｈＡＴ）作为标记物，对１２只Ｗｉｓｔａｒ大鼠脑实质内血管的免疫阳性神经纤维的分布类型，纤维密度进行了观察。结果是：端脑皮质区（第Ⅰ感觉运动皮质，第Ⅱ感觉运动皮质，中央前区，纹状皮质）的血管；海马（ＣＡ１区，ＣＡ２区）血管；下丘脑（前区、外侧区）血管；脑桥（被盖部）及延髓实质内血管均可见明显免疫反应阳性胆硷能神经纤维分布。纤维呈棕褐色，多数为单一细线状结构。纤维走行不一，有的与血管长轴垂直走行或斜行，有的与血管长轴平行。可见类似膨体样结构。各部脑实质内血管阳性纤维分布均较稀疏。