14,15-EET减轻脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤的作用及其机制

目的探讨14,15-环氧二十碳三烯酸(14,15-EET)减轻脂多糖(LPS)诱导小鼠急性肺损伤(ALI)的作用及其机制。方法将32只6~8周的C57BL/6J雄性小鼠按照随机数字表法分为4组:对照组、LPS组、LPS+铁死亡抑制剂(Fer-1)组以及LPS+14,15-EET组,每组各8只。对照组小鼠气管内滴注无菌磷酸盐缓冲液(PBS)50μL,另外3组小鼠气管内分别滴注0.2 mg/mL LPS 50μL。气管内滴注LPS刺激6 h后,LPS+Fer-1组尾静脉注射Fer-1(0.8 mg/kg),LPS+14,15-EET组尾静脉注射14,15-EET(100 nmol/L),分别作用16 h。造模成功后取小鼠肺组织及支气管肺泡灌洗液(BALF),苏木精-伊红染色观察各组小鼠肺组织病理学变化,测量肺湿/干(W/D)比重;记录各组小鼠BALF中总蛋白浓度及总细胞数量;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测小鼠肺组织白细胞介素(IL)-1β和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)mRNA表达;采用冰冻切片活性氧簇(ROS)染色观察肺组织中ROS的生成;分别使用试剂盒检测肺组织丙二醛水平及铁含量;采用蛋白质印迹法检测铁死亡相关分子谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、环氧化物酶2(COX2)的表达水平。结果与对照组相比,LPS组肺损伤评分及W/D值均明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与LPS组相比,LPS+Fer-1组和LPS+14,15-EET组肺损伤评分及W/D值均明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,LPS组BALF中总蛋白浓度、细胞数量明显升高,肺组织中IL-1β和MCP-1 mRNA表达水平均明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与LPS组相比,LPS+Fer-1组和LPS+14,15-EET组BALF蛋白、细胞的数量及肺组织中IL-1β和MCP-1表达均明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,LPS组ROS红色荧光信号明显增强,丙二醛、铁离子、COX2水平均显著升高,GPX4水平下降,差异均有统计学意义(P<0.05);与LPS组相比,LPS+Fer-1组和LPS+14,15-EET组肺组织中ROS红色荧光信号明显减弱,丙二醛、铁离子、COX2水平显著降低,GPX4水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。LPS+Fer-1组和LPS+14,15-EET组以上各指标比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论14,15-EET可能通过抑制铁死亡减轻LPS诱导的小鼠ALI,发挥肺部保护作用。

氢吗啡酮对脂多糖诱导小鼠肺泡巨噬细胞高尔基体应激影响

目的探讨氢吗啡酮(HM)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠肺泡巨噬细胞高尔基体应激的影响及其机制。方法以10mg/LLPS处理小鼠肺泡巨噬细胞系MH-S,构建肺泡巨噬细胞高尔基体应激模型。将细胞随机分为Control组(A组,正常培养)、LPS组(B组,给予10mg/L的LPS)、LPS+HM组(C组,给予1μmol/LHM和10mg/LLPS)、Nrf2siRNA+LPS+HM组(D组,Nrf2siRNA转染后给予1μmol/LHM和10mg/LLPS)和NC siRNA+LPS+HM组(E组,NCsiRNA转染后给予1μmol/LHM和10mg/LLPS)。采用ELISA法检测细胞上清液白细胞介素1β(IL-1β)和白细胞介素6(IL-6)含量;检测丙二醛(MDA)含量与超氧化物歧化酶(SOD)活性;采用Westernblot法检测核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶-1(HO-1)、高尔基体基质蛋白130(GM130)、高尔基体蛋白97(Golgin-97)、甘露糖苷酶Ⅱ(MannosidaseⅡ)、钙转运ATP酶2C型成员1(ATP2C1)蛋白表达水平;透射电镜下观察细胞高尔基体形态学改变。结果与A组比较,B组IL-1β、IL-6、MDA含量显著升高及Nrf2、HO-1蛋白表达上调,SOD活性显著降低及GM130、Golgin-97、MannosidaseⅡ、ATP2C1蛋白的表达下调(F=2.33~47.61,P<0.05);与B组比较,C组IL-1β、IL-6、MDA含量显著降低,SOD活性显著升高及Nrf2、HO-1、GM130、Golgin-97、MannosidaseⅡ、ATP2C1蛋白表达上调(P<0.05);与C组比较,D组IL-1β、IL-6、MDA含量显著升高,SOD活性显著降低及Nrf2、HO-1、GM130、Golgin-97、MannosidaseⅡ、ATP2C1蛋白表达下调(P<0.05)。透射电镜显示,C组细胞高尔基体损伤、空泡化与碎片化较B组减轻;D组细胞高尔基体损伤、空泡化与碎片化较C组加重。结论HM通过调控Nrf2/HO-1信号通路抑制LPS诱导的肺泡巨噬细胞高尔基体应激,减轻细胞炎症与氧化应激反应。

甘草次酸通过抑制p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路促进脂多糖诱导的小胶质细胞M2极化

目的探究甘草次酸(GA)通过抑制p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路促进脂多糖(LPS)诱导的小胶质细胞M2极化。方法将小鼠BV2小胶质细胞分为阴性对照(NC)组、LPS组(100μg/ml LPS)、GA组(100μg/ml LPS+10μmol/L GA)、GA+抑制剂组(100μg/ml LPS+10μmol/L GA+10μmol/ml p38 MAPK通路抑制剂)、抑制剂组(100μg/ml LPS+10μmol/ml p38 MAPK通路抑制剂)和GA+激活剂组(100μg/ml LPS+10μmol/L GA+300 ng/ml p38 MAPK通路激活剂)。用细胞计数试剂盒8法测定细胞活力,酶联免疫吸附测定炎性因子水平,倒置显微镜观察细胞形态,Western blot检测精氨酸酶1(Arg-1)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及p38 MAPK通路相关蛋白表达水平。结果与LPS组比较,GA组和抑制剂组细胞足突增多、胞体变大、细胞间隔缩小,白细胞介素(IL)1β、IL-6、iNOS、P53蛋白、磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)表达显著降低(22.53±0.53、24.13±1.00 vs 29.56±1.46,10.37±0.59、10.16±0.21 vs 15.13±1.00,0.39±0.01、0.38±0.01 vs 1.12±0.01,0.34±0.01、0.31±0.01 vs 0.89±0.01,0.40±0.01、0.40±0.02 vs 0.88±0.01,P<0.05),IL-10、Arg-1表达显著升高(177.33±7.57、187.21±6.87 vs 64.67±11.50,0.41±0.01、0.44±0.03 vs 0.10±0.01,P<0.05)。与GA组比较,GA+抑制剂组细胞足突增多、胞体变大,IL-1β、IL-6、iNOS、P53蛋白、p-p38 MAPK表达显著降低,IL-10、Arg-1表达显著升高(P<0.05);GA+激活剂组细胞足突减少、胞体变小,IL-1β、IL-6、iNOS、P53蛋白、p-p38 MAPK表达显著升高,IL-10、Arg-1表达显著降低(P<0.05)。结论GA可通过阻断p38 MAPK信号通路促进LPS诱导的小鼠BV2小胶质细胞M2极化。

RasGRP1启动子区甲基化对脂多糖诱导人T淋巴细胞炎症的作用及机制

目的探讨RAS鸟苷酸释放蛋白1(RasGRP1)启动子区甲基化对脂多糖(LPS)诱导人T淋巴细胞炎症的作用及机制。方法人T淋巴细胞白血病细胞JurkatE6-1培养至对数生长期,分为对照(完全培养基,C)组、1 mg/L(低浓度)LPS(L1)组、10 mg/L(高浓度)LPS(L2)组及10μmol/L甲基化转移酶抑制剂5-Aza-2′-脱氧胞苷+10 mg/L LPS(LA)组,干预5 d,置于荧光显微镜下观察细胞形态变化;离心收集细胞、留取上清液,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和比色法检测各组细胞中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)浓度及乳酸脱氢酶(LDH)活性,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组细胞中RasGRP1、细胞外调节蛋白激酶(ERK)1/2、TNF-α、IL-6、DNA甲基转移酶(DNMT)1、DNMT3a mRNA的表达,采用Western blotting法检测各组细胞RasGRP1、ERK1/2及p-ERK1/2蛋白的表达,采用甲基化特异性PCR(MSP)法和琼脂糖凝胶电泳检测RasGRP1启动子区甲基化状态。结果光学显微镜结果显示,C组JurkatE6-1细胞生长状态良好,L1组、L2组细胞数量明显减少,细胞形态趋于碎片化,死亡细胞逐渐增加,随LPS浓度增加而增加;LA组较L2组细胞数量及形态明显好转;与C组比较,L1组JurkatE6-1细胞炎症因子表达升高(P<0.05),细胞RasGRP1、p-ERK1/2表达升高(P<0.05),DNMT1和DNMT3a mRNA表达无差异(P>0.05),RasGRP1启动子区未检测到甲基化表达;与L1组比较,L2组细胞炎症因子表达升高(P<0.05),细胞RasGRP1、p-ERK1/2表达降低(P<0.05),DNMT1和DNMT3a mRNA表达升高(P<0.05),RasGRP1启动子区呈现高甲基化表达;与L2组比较,LA组细胞炎症因子表达降低(P<0.05),细胞RasGRP1、p-ERK1/2表达升高(P<0.05),DNMT1和DNMT3a mRNA表达降低(P<0.05),RasGRP1启动子区未检测到甲基化表达;各组间ERK1/2总量比较无差异(P>0.05)。结论抑制RasGRP1启动子区高甲基化可减轻LPS诱导的人T淋巴细胞炎症损伤,其机制可能是与调控下游ERK信号通路有关。

多黏菌素B及其模拟肽与脂多糖类脂A结合的比较研究

目的 观察多黏菌素B(PMB)及其模拟肽与脂多糖 (LPS)、类脂A的结合能力。方法将10 0 μg/L的LPS、类脂A分别包被于生物传感器 ,再将 0 .0 1μg/L的PMB、PMB模拟肽 1、PMB模拟肽 2各 5 μl分别加入疏水样品池 ,比较PMB及其模拟肽与LPS、类脂A的结合能力。 结果 ( 1)PMB模拟肽 1几乎没有与LPS、类脂A结合的活性 ,PMB及模拟肽 2均与LPS、类脂A高亲和力结合。( 2 )PMB模拟肽 2与LPS结合的峰值 ( 98.4 1± 7.31)rad/s高于PMB与LPS结合的峰值 ( 83.5 8±5 4 2 )rad/s( P <0.0 5 );PMB及其模拟肽 2与类脂A结合的峰值基本一致。 ( 3)PMB与LPS结合的峰值明显低于其与类脂A结合的峰值 (P <0.0 5),但PMB模拟肽 2与LPS、类脂A结合的峰值比较 ,差异无显著性意义 (P >0.0 5 )。(4 )PMB模拟肽 2能在较短时间内与LPS、类脂A结合并达到高峰。 结论 与PMB比较 ,PMB模拟肽 2与LPS、类脂A能更好更快地结合 ,且亲和力相近 ;模拟肽2与LPS中的类脂A结合没有空间位阻 。

脂多糖在肝癌发生发展中的作用

肝癌是世界范围重大的公共卫生疾病。近来随着高通量测序及基因编辑技术的进步,肠道微生物群通过“肝-肠轴”途径在肝癌发生、进展及转移过程中的生物学机制被进一步揭示,特别是发现革兰阴性细菌外膜脂多糖可动员下游一系列致癌相关免疫级联反应。本文从肠道环境改变与肝癌发生的关系、脂多糖免疫调控、临床前治疗研究等方面,对肠道微生物脂多糖在肝癌发生发展中的可能作用机制进行了综述。

牛分枝杆菌脂多糖在动物结核病血清学诊断中的应用价值

目的:评价牛分枝杆菌脂多糖在动物结核病血清学诊断中的临床应用价值。方法:从灭活的牛分枝杆菌中提取具有生物活性的脂多糖,用提取的脂多糖进行酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA),检测阴性牛血清和结核病、副结核病、布鲁氏菌病、口蹄疫、衣原体病和新孢子虫病阳性牛血清,判断脂多糖用于动物结核病诊断的特异性。同时,收集牛血清样本245份[结核菌素皮肤试验(tuberculin skin test,TST)阳性177份,TST阴性68份],梅花鹿血清样本29份(TST阳性10份,TST阴性19份),獐子血清样本14份(TST阳性14份),通过ELISA方法检测血清中的抗体水平,以TST结果为参照,评估脂多糖在动物结核病血清学诊断中的临床应用价值。结果:除结核病阳性牛血清外,其余阳性病牛血清的检测结果与阴性牛血清差异无统计学意义(P>0.05),且均低于Cut off值。基于脂多糖建立的ELISA抗体检测方法与TST结果的总符合率为88.54%(255/288),总敏感度为87.56%(176/201),总特异度为90.80%(79/87)。结论:牛分枝杆菌脂多糖可作为动物结核病血清学诊断的特异性抗原之一,有助于提高现有诊断方法的特异性和检出率,具有较好的应用价值。

肌苷对脂多糖诱导的急性肺损伤大鼠的肺保护作用及机制探讨

目的探讨肌苷对急性肺损伤(ALI)大鼠的肺保护作用及其相关机制。方法20只SD大鼠随机分为4组:空白(NC)组、模型(LPS)组、肌苷低剂量干预(IN-L)组、肌苷高剂量干预(IN-H)组,每组5只。气管内滴入脂多糖(LPS)完成建模的大鼠在1、6、12 h后采用腹腔注射法给予100 mg/kg肌苷(IN-L组),200 mg/kg肌苷(IN-H组)和生理盐水(LPS组)。NC组在建模和干预阶段均使用等体积生理盐水。在诱导ALI 24 h后采集动脉血测定氧分压(PaO2);取肺组织,计算湿/干质量比(W/D)并进行病理检查;取血清和支气管肺泡灌洗液(BALF)测定多聚ADP核糖聚合酶(PARP)-1、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-1β含量。制备肺组织匀浆,检测Toll样受体4(TLR4)、髓样分化蛋白88(MYD88)、核因子κB(NF-κB)蛋白表达。结果LPS诱导大鼠肺组织损伤,造成严重的低氧血症,PARP-1、iNOS水平升高,促进炎性因子TNF-α和IL-1β分泌,肺组织中TLR4、MYD88、p-NF-κB p65蛋白表达上调(P<0.05)。肌苷干预后可使肺组织TLR4、MYD88和p-NF-κB p65蛋白表达下降,PARP-1、iNOS、TNF-α和IL-1β的产生减少,肺组织损伤程度减轻,大鼠低氧血症得到改善(P<0.05)。IN-H组上述改变较IN-L组更加明显(均P<0.05)。结论肌苷可减轻LPS诱导的肺部炎症,减少炎性细胞因子的产生,其机制可能与肌苷下调TLR4/MYD88/NF-κB信号通路,抑制PARP-1活性,减少NF-κB核易位有关。

基于肠道菌群代谢产物的变化探讨芪苈强心胶囊改善心肌纤维化的机制

目的从肠道菌群代谢产物氧化三甲胺(TMAO)、脂多糖(LPS)的变化角度探讨芪苈强心胶囊对心肌梗死后大鼠心肌纤维化的影响和作用机制。方法将60只大鼠随机分为假手术组、模型组、芪苈强心高剂量组(1.0 g/kg)、芪苈强心中剂量组(0.5 g/kg)、芪苈强心低剂量组(0.25 g/kg)、培哚普利组(0.84 mg/kg),每组10只。造模时死亡13只,灌胃时死亡5只,最终假手术组8只,模型组8只,芪苈强心高剂量组7只,芪苈强心中剂量组6只,芪苈强心低剂量组7只,培哚普利组6只。超声心动图检测各组大鼠的左心室射血分数(LVEF)、左心室短轴缩短率(LVFS)、左心室舒张末期内径(LVEDD)、左心室收缩末期内径(LVEDS),苏木精-伊红染色检测心肌与回肠组织的病理形态,Masson染色检测心肌纤维化程度,计算心肌胶原容积分数(CVF),液相色谱-质谱法检测血浆TMAO的含量,酶联免疫吸附测定可溶性生长刺激表达基因2蛋白(sST2)和LPS的含量。结果与假手术组比较,模型组大鼠LVFS、LVEF显著降低,LVEDD、LVEDS、sST2、TMAO、LPS显著升高(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,芪苈强心高、中、低剂量组及培哚普利组大鼠LVFS、LVEF显著升高,芪苈强心高剂量组大鼠血浆sST2浓度[(2025.45±413.13)pg/ml vs(2800.86±208.64)pg/ml]、血浆TMAO含量[(351.68±129.01)ng/ml vs(641.41±188.44)ng/ml]、血浆LPS浓度[(420.22±62.32)EU/L vs(594.62±83.40)EU/L]显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论芪苈强心胶囊可能通过抑制肠道菌群代谢产物TMAO、LPS改善心肌纤维化,具体机制还需进一步探究。

八肽胆囊收缩素对脂多糖诱导大鼠肺组织NF-κB活性增高的抑制作用

目的与方法 :为探讨八肽胆囊收缩素 (CCK - 8)防治内毒素引起急性肺损伤的分子作用机理 ,用电泳迁移率变动分析技术 (EMSA) ,观察CCK - 8对脂多糖 (LPS)诱导核转录因子κB(NF -κB)活性变化的影响 ,用光密度扫描电泳谱带峰面积积分值表示NF -κB活性 ,观察肺组织的病理学变化。结果 :LPS入血可以明显引起大鼠肺组织的NF -κB活性 16 39 92± 198 6 3(P <0 0 1) ,显著高于对照组 (5 93 5 6± 89 34) ,此作用为预先静脉注入CCK - 8部分逆转 ,NF -κB活性低至 82 3 91± 97 32 (P <0 0 1) ,CCK - 8可减轻LPS引起的肺组织病理学变化。结论 :CCK -8对LPS激活肺组织NF

脂多糖通过PI3K/Akt/mTOR通路调控巨噬细胞自噬

目的:观察脂多糖对巨噬细胞自噬活化的影响及相关信号通路的探讨。方法:体外培养巨噬细胞株RAW264.7,分为对照组、饥饿状态激活自噬组、单纯脂多糖(LPS)刺激组、LPS+PI3K抑制剂(hVps34)组和LPS+mTOR抑制剂(雷帕霉素)组。构建荧光真核表达载体pcDNA3.1-GFP-LC3,转染巨噬细胞,通过荧光显微镜观察各组细胞中自噬体形成情况。qRT-PCR方法检测各组中与细胞自噬相关的Atg5、Atg7、LC3-II和Bnip3 mRNA表达水平的改变。利用Western blotting检测LC3-II、p-Akt和p-mTOR蛋白在各组中的表达情况,以评价LPS激活巨噬细胞自噬的分子通路。结果:成功构建稳定表达GFP-LC3的巨噬细胞,在荧光显微镜下可以观察到自噬在饥饿状态组、LPS+hVps34组和LPS+雷帕霉素组均有明显增强;qRT-PCR检测到Atg5、LC3-II和Bnip3 mRNA的表达在饥饿状态组、LPS+hVps34组和LPS+雷帕霉素组均有明显增强,而在LPS组中略微下降;Western blotting检测发现p-Akt在饥饿状态组、LPS组和LPS+雷帕霉素组中表达明显升高;p-mTOR在饥饿状态组、LPS+hVps34组和LPS+雷帕霉素组表达明显下降;LC3-II的表达在饥饿状态组、LPS+hVps34组和LPS+雷帕霉素组中表达要高于对照组和LPS组。结论:LPS参与巨噬细胞自噬的调控,其可能的信号通路为PI3K/Akt/mTOR通路,但仍存在其它有效的调控通路。

八肽胆囊收缩素抑制脂多糖诱导的大鼠肺间质巨噬细胞CD14的表达

目的 :初步探讨八肽胆囊收缩素 (CCK - 8)对体外脂多糖 (LPS)激活大鼠肺间质巨噬细胞 (IM)的调节作用。方法 :分离大鼠肺IM ,经LPS、CCK - 8、CCK受体拮抗剂丙谷胺及溶剂单独或共同孵育后 ,测定细胞CD14的表达及上清中TNF -α含量。结果 :LPS(1mg/L)孵育 12h ,肺IMmCD14表达上调 ,上清中sCD14及TNF -α含量均明显增加 ;CCK - 8(10 -7- 10 -6mol/L)抑制了LPS的上述效应 ,且可被丙谷胺所拮抗。结论 :CCK - 8对LPS激活的肺IM的部分功能具有抑制性调节作用 ,该作用是由其受体介导的 ,可能是CCK - 8减轻内毒素血症时肺组织炎性变化的重要机制之一。

狗肝菜多糖减轻D-氨基半乳糖与脂多糖诱导的大鼠急性肝损伤

目的:观察壮药狗肝菜多糖对D-氨基半乳糖(D-GalN)及脂多糖(LPS)所致大鼠急性重症肝炎的影响。方法:将48只雄性Wistar大鼠随机分成模型、狗肝菜多糖高、低剂量和对照组;狗肝菜多糖高剂量组(300mg·kg-1)、低剂量组(150mg·kg-1)在造模前灌胃给药6d,其它各组用生理盐水对照;末次给药后1h除对照组外均在腹腔内注射D-GalN(500mg.kg-1)和LPS(20μg/kg)建立大鼠急性重症肝炎模型,对照组用生理盐水对照。于6h、12h分别观察并计算各组动物死亡率;存活动物于6h行眶后静脉窦采血用于检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β);12h摘除眼球采血用于检测血清ALT、AST、TNF-α、IL-1β和一氧化氮(NO);分光光度法检测血清ALT、AST、NO含量,ELISA法检测血清TNF-α、IL-1β水平。12h后全部处死存活动物,肝组织切片观察肝脏病理形态学变化。结果:6h各组动物均存活;与模型组相比,狗肝菜处理组12h死亡率明显低于模型组。模型组血清ALT、AST活力和TNF-α、IL-1β、NO水平均升高,狗肝菜多糖高、低剂量组血清指标均明显低于模型组。模型肝组织大片坏死、淤血,狗肝菜多糖高、低剂量组组织损伤程度明显降低,以高剂量组效果最佳。结论:狗肝菜多糖能减轻D-GalN/LPS诱导的肝损伤,可能通过降低炎性介质TNF-α、IL-1β和NO的水平发挥作用。

积雪草苷对脂多糖诱导大鼠发热的预防及对相关炎症因子的影响

目的探索积雪草苷的解热作用。方法雄性SD大鼠56只,随机平均分为正常组、模型组、溶媒对照组、对乙酰氨基酚组和积雪草苷3个剂量组。除正常组外,每只大鼠ip细菌脂多糖(LPS)100μg.kg-1制备大鼠发热模型,连续6h监测大鼠体温变化,6h后取血、肝脏和脑组织标本。积雪草苷3个剂量组造模前连续3dig积雪草苷(5,15和45mg.kg-1),每日1次;正常组和模型组给予等量生理盐水;溶媒对照组给予等量0.5%羧甲基纤维素钠;对乙酰氨基酚组于造模前30min一次性给予对乙酰氨基酚(50mg.kg-1,ip)。肝组织髓过氧化物酶(MPO)活性采用MPO试剂盒检测,肝脏组织血红素氧化酶1(HO-1)和脑组织环氧合酶2(COX-2)蛋白表达采用Western印迹方法测定,血浆前列腺素E2(PGE2)含量用酶联免疫法检测,HO-1活性用Morita法检测。结果注射LPS后,模型组出现3相热,最高升温幅度为2.01℃。积雪草苷5,15和45mg.kg-1组体温明显低于模型组,其中45mg.kg-1组与对乙酰氨基酚组相当。与模型组比较,3个积雪草苷剂量组发热后6h肝组织MPO活性、脑组织COX-2蛋白表达和血浆中PGE2的产生明显降低,肝组织HO-1活性和蛋白表达升高。结论积雪草苷具有预防发热作用,该作用可能与抑制COX-2/PGE2系统,并抑制炎症因子MPO活性、增强炎症保护因子HO-1的活性和表达有关。

脂多糖对B细胞的活化作用及机制的初步研究

目的观察TLR4配体脂多糖(LPS)对B细胞功能影响及相关的信号转导通路。方法利用免疫磁珠法分选小鼠脾脏CD19+B细胞,体外用LPS刺激后,CBA(cytometric bead array)法检测B细胞分泌的Ig(immunoglobulin)亚型;流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测B细胞表型;CBA法检测培养上清中细胞因子IL-6、IL-10、IL-12p70、TNF浓度。利用ERK、JNK、p38MAPK和NF-κB信号转导抑制剂检测B细胞内细胞因子分泌的信号转导通路。结果 LPS可以诱导B细胞产生IgG1-κ和IgM-κ抗体,上调B细胞表面CD40、CD80、CD86和MHCⅡ类分子的表达,促进IL-6、IL-10和TNF的高分泌。JNK、p38MAPK和NF-κB信号转导通路调控B细胞IL-6、IL-10和TNF的分泌。结论 LPS可以通过诱导抗体产生、上调共刺激分子表达和促进细胞因子分泌等多方面调节B细胞功能。

吸入脂多糖诱导小鼠急性肺炎模型的建立

目的:用吸入脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)的方法建立简便、经济、稳定的小鼠急性肺炎模型。方法:将正常BALB/c小鼠麻醉后仰位固定,行LPS(50μL,1g/L)吸入,于不同时间点获取支气管肺泡灌洗液(bron-choalveolar lavage fluid,BALF)后取肺组织制备匀浆,对支气管肺泡灌洗液进行细胞染色分类计数,用ELISA的方法检测肺组织匀浆和支气管肺泡灌洗液白介素-1β((interleukin-1β,IL-1β)的含量。再取肺组织固定、切片,用HE染色鉴定炎症程度。结果:LPS吸入2～4h后,支气管肺泡灌洗液和肺组织匀浆中IL-1β水平即明显增加。2h时肺内就开始出现炎性细胞浸润,12～24h炎症加剧甚至形成脓肿。支气管肺泡灌洗液中中性粒细胞增多最早出现,从2h即开始增加,巨噬细胞和淋巴细胞则在1d后开始明显增加,一直持续3d。结论:用LPS吸入的方法可以建立快速、稳定、典型的小鼠急性肺炎模型。

细胞自噬在D-氨基半乳糖/脂多糖诱导的小鼠急性肝损伤模型中的保护作用及机制

目的利用D-氨基半乳糖(D-Gal N)/脂多糖(LPS)诱导的小鼠急性肝损伤模型研究细胞自噬在急性肝损伤中的作用及机制。方法以C57BL/6小鼠为研究对象,腹腔注射D-Gal N/LPS建立小鼠急性肝损伤模型。动物实验分组:对照组、DGal N/LPS组、雷帕霉素+D-Gal N/LPS组、三甲基腺嘌呤(3-MA)+D-Gal N/LPS组、Atg7 siRNA+D-Gal N/LPS组。观察不同分组中小鼠的生存情况,观察肝组织病理变化评价肝损伤情况,全自动生化分析仪检测血清ALT、AST水平,实时荧光定量PCR检测肝组织中TNFα和IL-6基因表达,荧光显微镜观察肝组织中肝细胞凋亡情况。多样本组间比较采用One-way ANOVA分析,进一步两两比较,方差齐时采用LSD-t检验,方差不齐时采用Games-Howell法。结果与D-Gal N/LPS组相比,应用自噬激活剂雷帕霉素干预后,小鼠生存率明显升高(80%vs 40%),肝脏出血、炎症和坏死明显减轻,肝细胞凋亡明显减少,血清ALT、AST水平明显降低[ALT:(427.4±195.5)U/L vs(977.7±247.3)U/L,P=0.002;AST:(378.2±169.7)U/L vs(1100.0±438.0)U/L,P=0.004],肝组织中炎症因子TNFα和IL-6 mRNA表达水平明显降低[TNFαmRNA:0.288±0.010 vs 1.136±0.267,P=0.003;IL-6mRNA:0.272±0.061 vs 0.869±0.317,P=0.010];应用自噬抑制剂3-MA和Atg7 siRNA干预后,小鼠生存率明显降低(0、10%vs 40%),肝脏出血、炎症和坏死明显加重,肝细胞凋亡明显增多,血清ALT、AST水平明显升高[ALT:(1836.0±560.5)、(1654.0±627.6)U/L vs(977.7±247.3)U/L,P值分别为0.006、0.034;AST:(1948.0±645.5)、(1804.0±492.6)U/L vs(1100.0±438.0)U/L,P值分别为0.029、0.033],肝组织中TNFα表达水平明显升高[2.026±0.342、1.994±0.286 vs 1.136±0.267,P值分别为0.006、0.005]。结论在D-Gal N/LPS诱导的小鼠急性肝损伤中,细胞自噬发挥着重要的保护性作用,其调控机制可能与自噬抑制炎症因子和肝细胞凋亡有关。

水飞蓟素对脂多糖性大鼠急性肺损伤的拮抗作用

目的:观察水飞蓟素(SIL)对脂多糖所致的大鼠肺损伤的拮抗作用及其可能的机制。方法:雄性SD大鼠58只,体重230-250 g,分为对照组(control,n=12)、脂多糖组(LPS,n=15)、水飞蓟素组(SIL50 mg/kg.n=15)、LPS+水飞蓟素组(LPS+SIL 50 mg/kg,n=16)。造模6 h后测定血清及肺组织中TNF-α、IL-1β、MCP-1的浓度与表达,进行动脉血气分析,取肺组织观察大体标本形态和光镜下的组织病理形态,测定肺组织血管通透性变化、湿/干质量比值、髓过氧化物酶活性(MPO)、脂质过氧化产物[丙二醛(MDA)和共轭二烯(C-d iene)、SOD及GSH-Px酶活性。结果:光镜下可见对照组大鼠肺组织学正常,LPS组大鼠肺间质弥漫性出血,肺泡腔内可见大量粒细胞聚集、浸润,并可见弥漫性肺泡间隔增厚,而SIL+LPS组大鼠上述病理表现明显轻于LPS组。肺组织湿/干质量比值和每克肺组织伊文思蓝含量在LPS组显著高于对照组;LPS+SIL组上述指标显著低于LPS组。LPS组大鼠血清及肺组织中TNF-α、IL-1β及MCP-1的浓度与表达、肺组织脂质过氧化产物水平均明显高于对照组;而SOD及GSH-Px的活性则明显低于对照组(P<0.05,P<0.01)。SIL+LPS组大鼠上述指标明显轻于LPS组。结论:SIL明显降低LPS引起的肺组织的炎症反应与氧化损伤,对脂多糖所致大鼠急性肺损伤具有显著的拮抗作用。

右美托咪定联合乌司他丁减轻脂多糖诱导的大鼠急性肺损伤

目的:研究右美托咪定(DEX)联合乌司他丁(UTI)对脂多糖(LPS)诱导的大鼠急性肺损伤(ALI)的影响。方法:健康雄性Wistar大鼠40只,随机分为5组:生理盐水对照组(NS组)、LPS模型组(L组)、右美托咪定治疗组(L+D组)、乌司他丁治疗组(L+U组)和右美托咪定+乌司他丁治疗组(L+D+U组)。对照组股静脉给予5 mL/kg生理盐水(NS);模型组股静脉给予LPS(10 mg/kg);右美托咪定治疗组股静脉给予LPS(10 mg/kg),即刻持续输注右美托咪定(1μg·kg-1·h-1);乌司他丁治疗组股静脉给予LPS(10 mg/kg),即刻腹腔注射乌司他丁(50 000 U/kg);右美托咪定联合乌司他丁治疗组股静脉给予LPS后立即持续输注右美托咪定(1μg·kg-1·h-1)及腹腔注射乌司他丁(50 000 U/kg)。在注射LPS或NS后6 h处死动物。血气分析检测动脉血氧分压(PaO2)、pH和碱剩余(BE);HE染色光镜下观察肺组织病理学变化并进行肺损伤评分;检测肺组织湿干重比(W/D)、髓过氧化物酶(MPO)活性、丙二醛(MDA)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、巨噬细胞炎症蛋白2(MIP-2)、一氧化氮(NO)及前列腺素E2(PGE2)的含量;检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中白蛋白浓度;提取肺组织核蛋白,检测NF-κB p65的表达。结果:与NS组比较,L组动脉血PaO2、pH和BE降低,肺组织水肿、出血、炎症细胞浸润程度及肺损伤评分上升,肺组织TNF-α、IL-1β、MIP-2、MDA、NO、PGE2含量及W/D升高,MPO活性升高,肺组织NF-κB表达明显升高。与L组相比,联合治疗组动脉血PaO2、pH和BE上升,肺组织水肿、出血、炎症细胞浸润程度及肺损伤评分降低,TNF-α、IL-1β、MIP-2、MDA、NO、PGE2含量及W/D降低,MPO活性降低,肺组织NF-κB表达降低;与L组相比,右美托咪定和乌司他丁单独治疗组上述指标没有明显变化。结论:右美托咪定联合乌司他丁能够减轻脂多糖诱导的大鼠急性肺损伤。

人参皂苷Rg1对脂多糖诱导的C6细胞株淀粉样前体蛋白和脑啡肽酶表达的影响

目的 :为寻找治疗阿尔茨海默病的有效药物 ,探讨人参皂苷Rg1对脂多糖 (LPS)诱导的C6细胞株淀粉样前体蛋白 (APP)和脑啡肽酶 (NEP)表达的影响。方法 :应用MTT比色法检测一定剂量LPS(10 0mg·L-1)和不同浓度人参皂苷Rg1(2 5、5、10、2 0 μmol·L-1)对C6细胞存活率的影响 ,应用RT -PCR观察细胞中APP、NEP表达的变化。结果 :LPS作用于C6细胞株 ,C6细胞存活率下降 ,细胞内APP的表达增加 ,NEP的表达降低。人参皂苷Rg1能提高LPS处理的C6细胞存活率 ,使细胞内APP的表达降低 ,NEP的表达升高。结论 :LPS造成细胞损伤和细胞内APP表达增加、NEP表达降低 ,人参皂苷Rg1对LPS造成的细胞毒性具有拮抗作用 ,可减弱LPS引起的细胞内APP表达增强 ,减轻LPS对细胞内NEP表达的抑制。