脂肪酸结合蛋白5结合Vimentin蛋白在肝癌中的作用机制

目的 筛选和验证与脂肪酸结合蛋白5(FABP5)结合的互作蛋白,同时研究FABP5与候选蛋白的调控关系,进一步探讨FABP5在肝癌中的作用机制。方法 采用免疫沉淀联合串联质谱分析方法(IP-MS)筛选出与FABP5相互结合的蛋白;通过免疫共沉淀实验(Co-IP)从外源性和内源性层面验证FABP5与候选互作蛋白的结合关系;利用RT-qPCR、Western blot和免疫荧光法观察敲低FABP5对肝癌细胞中波形蛋白(Vimentin)转录和翻译水平的影响;通过鬼笔环肽染色实验观察过表达FABP5对肝癌细胞骨架的影响。结果 IP-MS鉴定出336个与FABP5相互结合的潜在靶蛋白,结合文献,挑选出5个与肿瘤相关的候选蛋白,分别为PRDX1、PRSS3、PKM、HSP90AA1和Vimentin蛋白。通过外源性和内源性Co-IP实验证实FABP5与Vimentin蛋白存在结合关系。敲低FABP5对肝癌细胞中Vimentin mRNA的表达没有显著作用,但可抑制Vimentin蛋白的表达,而过表达FABP5会影响肝癌细胞的骨架。结论 FABP5促进肝癌细胞的迁移和侵袭,其机制可能与FABP5结合调控Vimentin蛋白和影响细胞骨架重塑有关,有望成为抗肝癌的潜在靶点,为肝癌的治疗提供新的思路。

脂肪酸结合蛋白5在急性肺损伤中作用机制研究

目的通过建立急性肺损伤大鼠模型,探讨脂肪酸结合蛋白5(FABP5)在急性肺损伤中作用的分子机制。方法选取60只雄性SPF级SD大鼠,随机分为对照组(n=15)、模型组(n=15)、阴性对照(NC)组(n=15)及FABP5组(n=15)。模型组、NC组、FABP5组建立脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤模型。NC组、FABP5组在建立模型后分别通过尾静脉注射NC质粒、FABP5质粒,对照组、模型组给予等量生理盐水。1周后,苏木精-伊红染色法观察各组大鼠肺组织理病变化;通过酶联免疫吸附法检测各组大鼠外周血白细胞介素1(IL-1)、白细胞介素4(IL-4)、白细胞介素8(IL-8)水平;流式细胞仪检测各组大鼠外周血及脾单核细胞比例;蛋白质印迹法检测大鼠肺组织巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)、核因子κB受体活化因子配体(RANKL)蛋白表达水平。结果苏木精-伊红染色结果显示,对照组肺组织细胞排列有序,未见或少见炎性细胞和血管增生;模型组和NC组可见细胞结构破坏,炎性细胞浸润明显,细胞排列扭曲,细胞间隙明显;FABP5组可见细胞结构出现破坏,伴随炎性细胞浸润,细胞排列不整齐,但损伤程度低于NC组和模型组。与对照组比较,模型组、NC组、FABP5组大鼠血清IL-1、IL-4和IL-8表达水平均显著增高;与模型组、NC组比较,FABP5组IL-1、IL-4和IL-8表达水平均显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,模型组、NC组、FABP5组大鼠血液和脾单核细胞比例均显著增高;与模型组和NC组相比,FABP5组大鼠血液和脾单核细胞比例均显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,模型组、NC组、FABP5组大鼠M-CSF、RANKL蛋白表达水平均显著增高;与模型组、NC组比较,FABP5组大鼠M-CSF、RANKL蛋白表达水平均显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论FABP5对大鼠急性肺损伤具有保护作用,其机制可能与抑制巨噬细胞早期炎症反应和抑制M-CSF信号通路的激活有关。

脂肪酸结合蛋白5在食管鳞状细胞癌中的表达及其评估预后的价值

目的 探讨脂肪酸结合蛋白5(FABP5)在食管鳞状细胞癌(ESCC)中的表达及其与临床病理特征和预后的关系。方法 分析癌症基因组图谱(TCGA)数据库中ESCC患者的临床资料与FABP5表达的关系。采用免疫组织化学和Western-blot实验分析165份接受根治性手术的ESCC患者的组织样本;采用χ^(2)检验分析FABP5蛋白与临床病理特征的关系;采用Cox单因素和多因素分析影响患者总生存率(OS)和无疾病生存率(DFS)的因素,并建立预测患者预后的列线图(nomogram)模型。结果 在TCGA数据库中,ESCC组织中FABP5 mRNA的含量明显低于正常的食管组织,差别有统计学意义(P<0.05)。临床ESCC组织样本的免疫组织化学显示,FABP5在正常食管黏膜组织中高表达,在ESCC中表达下调,差别有统计学意义(76.9%vs 43.0%,P<0.001)。Western-blot实验结果显示,ESCC组织中FABP5蛋白的表达水平明显低于癌旁组织,差别有统计学意义(P=0.027)。在ESCC中,与高表达组比较,FABP5低表达组T分期较晚,差别有统计学意义(P=0.011);生存分析显示,FABP5低表达组与高表达组的OS和DFS比较,差别有统计学意义(P<0.001)。多因素Cox回归分析显示,FABP5低表达是不良OS(P=0.002)和DFS(P=0.019)的影响因素。基于多因素的结果,建立个性化预测患者OS和DFS的nomogram模型。该模型具有一定的预测性能和临床应用价值。结论 ESCC患者FABP5低表达与较晚的分期和不良预后相关,可能成为潜在的预后标志物和治疗的靶点。

脂肪酸结合蛋白5和细胞维甲酸结合蛋白2在脑胶质瘤中的表达

目的探讨脂肪酸结合蛋白5(fatty acid-binding protein 5,FABP5)与细胞维甲酸结合蛋白2(cellular retinoic acid-binding protein 2,CRABP2)在脑胶质瘤中的表达及与脑胶质瘤病理级别、维甲酸治疗抵抗的关系。方法应用免疫组织化学染色法检测125例脑星型细胞瘤组织中FABP5及CRABP2蛋白表达。全反式维甲酸作用前后,以Brdu-ELISA法检测胶质瘤细胞增殖,并以实时荧光定量PCR检测胶质瘤细胞株中FABP5及CRABP2在m RNA水平的表达。结果 FABP5阳性细胞比例在WHOⅡ级星型细胞瘤中占(16±9)%,Ⅲ级中占(33±22)%,Ⅳ级中占(50±29)%,FABP5蛋白表达与胶质瘤病理级别呈显著正相关(P<0.05)。CRABP2阳性细胞比例在Ⅱ级星型细胞瘤中占(46±12)%,WHOⅢ级中占(30±15)%,Ⅳ级中占(10±9)%,CRABP2蛋白表达与胶质瘤病理级别呈显著负相关(P<0.05)。全反式维甲酸促进了胶质瘤细胞株的增殖,全反式维甲酸作用后胶质瘤细胞FABP5 m RNA表达显著上调,而CRABP2显著下调。结论 FABP5及CRABP2的异常表达与胶质瘤恶性程度相关,并可能介导了胶质瘤细胞对维甲酸的分化抵抗效应。

脂肪酸结合蛋白5对奶牛乳腺上皮细胞乳脂合成的影响

脂肪酸结合蛋白5(fatty acid binding protein 5,FABP5)是一种胞内脂质运载体。本试验应用甘油三酯测定法及BODIPY染色法检测奶牛乳腺上皮细胞(bovine mammary epithelial cell,BMEC)中甘油三酯及脂滴分泌情况,采用实时荧光定量PCR、Western blotting技术检测BMECs中FABP5对固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)的表达影响。结果显示,试验成功获得高纯度的BMECs,构建了pGCMV-IRES-EGFP-FABP5真核表达载体,且与空白对照组和空载体组相比,FABP5过表达组的甘油三酯和脂滴分泌量极显著增加(P<0.01),同时SREBP-1c及靶基因FAS、ACC的表达量均极显著增加(P<0.01);试验成功筛选了FABP5siRNA1为最佳干扰片段,当FABP5抑制时,抑制组的甘油三酯、脂滴分泌量极显著减少(P<0.01),SREBP-1c、FAS、ACC的表达量均极显著降低(P<0.01)。表明FABP5可通过上调SREBP-1c的表达从而促进BMEC中乳脂的合成。

下调缺氧诱导性脂肪酸结合蛋白5(FABP5)表达抑制Huh7细胞的促血管生成能力

目的探讨脂肪酸结合蛋白5(FABP5)在肝癌缺氧诱导的血管生成中的作用及机制。方法Huh7细胞进行常规培养及低氧培养;FABP5小干涉RNA(FABP5 siRNA)转染敲低Huh7细胞FABP5表达,反转录PCR检测FABP5 mRNA表达,Western blot法检测FABP5、血管内皮生长因子A(VEGFA)表达,ELISA检测Huh7细胞上清液VEGFA浓度;成管实验检测Huh7细胞上清液诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的成管能力。结果低氧培养后,FABP5 mRNA以及FABP5及VEGFA蛋白表达增加;采用FABP5 siRNA转染后,低氧培养Huh7细胞VEGFA表达及分泌均下降,低氧培养Huh7细胞上清液诱导HUVEC的成管能力下降。结论缺氧诱导Huh7细胞FABP5表达增加,敲低FABP5则抑制Huh7细胞VEGFA表达及HUVEC的成管能力。

乙型病毒性肝炎患者血清微小RNA-101、脂肪酸结合蛋白4 mRNA、脂肪酸结合蛋白5 mRNA表达水平与肝纤维化程度的相关性

目的探讨乙型病毒性肝炎患者血清微小RNA-101(miR-101)、脂肪酸结合蛋白4(FABP4)mRNA、脂肪酸结合蛋白5(FABP5)mRNA水平与肝纤维化程度的相关性。方法选取2020年3月至2021年3月于河南大学第一附属医院确诊的96例乙型病毒性肝炎患者,纳入乙型肝炎组。选取同期该院健康体检者94例作为对照组。根据乙型病毒性肝炎患者肝纤维化程度将其分为S 0期(40例)、S_(1)期(28例)、S_(2)期(16例)、S_(3)期(12例)。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测血清miR-101、FABP4 mRNA、FABP5 mRNA水平。采用Pearson法分析乙型病毒性肝炎患者血清miR-101与FABP4 mRNA、FABP5 mRNA水平的相关性。采用Spearman法分析血清miR-101、FABP4 mRNA、FABP5 mRNA水平与乙型病毒性肝炎患者肝纤维化程度的相关性。结果乙型肝炎组血清FABP4 mRNA、FABP5 mRNA水平高于对照组,miR-101水平低于对照组(P<0.05)。血清FABP4 mRNA、FABP5 mRNA水平随着肝纤维化分期的增加而上升,miR-101水平随着肝纤维化分期的增加而下降(P<0.05)。乙型病毒性肝炎患者血清miR-101与FABP4 mRNA、FABP5 mRNA水平均呈负相关(r=-0.524、-0.590,P<0.05)。乙型病毒性肝炎患者肝纤维化程度与血清FABP4 mRNA、FABP5 mRNA均呈正相关(r=0.654、0.723,P<0.05),与miR-101呈负相关(r=-0.861,P<0.05)。结论血清miR-101、FABP4 mRNA、FABP5 mRNA水平与乙型病毒性肝炎患者肝纤维化程度存在相关性,可能对评估肝纤维化程度有潜在价值。

下调脂肪酸结合蛋白5对人皮肤角质形成细胞放射损伤的影响

目的探究下调脂肪酸结合蛋白5(FABP5)对皮肤细胞放射损伤的影响及其相关机制。方法构建下调FABP5的慢病毒载体,将慢病毒感染人皮肤角质形成细胞(HaCaT)并检测转染效率。将细胞分为空白对照组、下调FABP5组、单纯照射组、下调FABP5+照射组。予6 MV X射线照射后,CCK-8法测定细胞增殖活力,划痕实验检测细胞迁移,流式细胞术分析细胞凋亡,克隆形成实验检测放射敏感性,免疫印迹检测细胞中PARP1、γ-H2AX、AKT、p-AKT的蛋白表达水平。结果成功构建下调FABP5的HaCaT细胞,从RNA水平(t=25.14,P<0.05)和蛋白水平(t=20.06,P<0.05)验证均达到下调FABP5的目的。下调FABP5组细胞增殖(t=3.55、5.88、3.18,P<0.05)、迁移能力(t=15.44,P<0.05)显著减弱,其放射增敏比为0.782。下调FABP5+照射组细胞凋亡率较单纯照射组显著减少[(9.82±1.45)%vs.(22.05±6.71)%,t=3.08,P<0.05]。下调FABP5+照射组细胞的PARP1和γ-H2AX蛋白水平分别为0.04±0.04、0.11±0.06和0.26±0.11、0.22±0.07,均低于单纯照射组的0.21±0.10、0.52±0.22和0.57±0.06、0.43±0.02(t=2.83、3.07、4.50、5.33,P<0.05),而p-AKT蛋白水平高于单纯照射组(t=-16.24~3.02,P<0.05)。结论下调FABP5抑制皮肤细胞增殖、迁移,增强放射抵抗性,减少辐射诱导皮肤细胞凋亡和DNA损伤。这可能是通过磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路来抑制皮肤细胞放射敏感性,为放射性皮肤损伤防护提供一种新思路。

脂肪酸结合蛋白5促进宫颈癌细胞增殖侵袭和转移

目的探讨脂肪酸结合蛋白5(FABP5)在宫颈癌发生和发展中的作用机制。方法选取人宫颈癌细胞株C33A、Siha、Caski、HeLa和HCC94,206例Ⅰa2期~Ⅱa2期宫颈癌组织蜡块以及40例正常宫颈组织,采用实时荧光定量PCR和Western blot法检测5种宫颈癌细胞和正常宫颈组织中FABP5 mRNA和蛋白的表达。构建慢病毒载体,采用细胞计数盒8法、平板克隆形成实验、划痕实验、Transwell侵袭实验检测干扰FABP5表达对Siha细胞增殖、迁移和侵袭的影响。以酶联免疫吸附法检测干扰FABP5表达后Siha细胞中基质金属蛋白酶2(MMP-2)和MMP-9的表达。建立裸鼠移植瘤和肺转移瘤模型,观察移植瘤生长曲线和转移瘤数目,分别采用实时荧光定量PCR法、Western blot法检测移植瘤组织中MMP-2和MMP-9 mRNA和蛋白的表达情况。结果与正常宫颈组织的细胞比较,FABP5 mRNA和蛋白在宫颈癌细胞中均呈高表达(P<0.05)。体外实验结果显示,与空白对照组和阴性对照组比较,Siha-FABP5-RNAi组Siha细胞中FABP5 mRNA和蛋白的表达明显受到抑制,增殖能力和克隆形成能力明显减弱,损伤修复能力和侵袭能力明显减弱。空白对照组、阴性对照组和Siha-FABP5-RNAi组Siha细胞的克隆形成率分别为(84.6±4.5)%、(84.6±5.1)%和(21.2±2.6)%,差异有统计学意义(P<0.05)。空白对照组、阴性对照组和Siha-FABP5-RNAi组的穿膜细胞数分别为(72.8±4.7)个/高倍视野、(72.6±3.3)个/高倍视野和(21.4±2.3)个/高倍视野,差异有统计学意义(P<0.05)。体内实验结果显示,空白对照组、阴性对照组和Siha-FABP5-RNAi组裸鼠皮下移植瘤体积分别为(921.4±63.0)mm^3、(1 021.4±56.0)mm^3和(139.6±36.0)mm^3,与空白对照组和阴性对照组比较,Siha-FABP5-RNAi组的裸鼠成瘤能力明显降低(P<0.001),且每侧肺叶肿瘤转移灶明显减少(P<0.001)。实时荧光定量PCR法检测结果显示,空白对照组、阴性对照组和Siha-FABP5-RNAi组裸鼠移植瘤组织中MMP-2 mRNA的相对表达量分别为1.00±0.10、1.00±0.10和0.34±0.13;MMP-9 mRNA的相对表达量分别为1.00±0.10、1.00±0.10和0.38±0.17。Siha-FABP5-RNAi组MMP-2和MMP-9 mRNA的表达较空白对照组和阴性对照组明显降低(均P<0.05)。MMP-2和MMP-9蛋白的表达与mRNA的表达趋势一致。结论 FABP5可促进宫颈癌细胞的增殖、迁移、侵袭和转移,可能通过调节MMP-2和MMP-9的表达发挥作用。

表皮型脂肪酸结合蛋白-5基因沉默对人卵巢癌细胞A2780增殖、凋亡及侵袭力的影响

目的探讨通过siRNA干扰技术沉默表皮脂肪酸结合蛋白(FABP)-5基因表达对人卵巢癌A2780细胞增殖、凋亡及侵袭的影响。方法以人卵巢癌A2780细胞为研究对象,根据FABP-5 mRNA编码序列设计并合成干扰siRNA序列,实施瞬时转染卵巢癌A2780细胞。将人卵巢癌A2780细胞分为FABP-5 siRNA组,阴性对照组、空白对照组。用逆转录聚合酶链式反应(RTPCR)和Western印迹法分别从mRNA水平和蛋白水平检测FABP-5基因的表达。细胞计数试剂盒(CCK)-8法测定细胞体外增殖能力;流式细胞技术(FCM)检测各组细胞周期和凋亡的变化情况,划痕愈合实验、细胞侵袭实验评价沉默FABP-5基因对人卵巢癌A2780细胞迁移及侵袭能力的影响。结果 RT-PCR和Western印迹法显示,FABP-5 siRNA组较阴性对照组和空白对照组的FABP-5 mRNA和蛋白相对表达水平均显著降低。FABP-5 siRNA组细胞的生长速度明显减慢,细胞周期阻滞在G0/G1期,S期细胞数减少;与阴性对照组和空白对照组相比,FABP-5 siRNA组细胞的凋亡率明显升高(P<0.01),迁移、侵袭力显著下降(P<0.05)。结论特异性干扰FABP-5基因表达可抑制人卵巢癌A2780细胞的迁移和侵袭能力,并抑制肿瘤细胞增殖,因此,FABP-5的siRNA序列可能成为治疗宫颈癌的有效靶点。

FABP5在肿瘤中作用及机制的研究进展

脂肪酸结合蛋白5(fatty acid binding protein 5,FABP5)是脂肪酸结合蛋白家族之一,在调控脂肪酸的摄取、运输和代谢中发挥重要作用。近年来多项研究证实,FABP5在多种肿瘤中高表达,其参与了肿瘤的增殖、转移以及诱导免疫逃逸等多种肿瘤生物学过程。该文综述了FABP5在肿瘤中的最新研究进展,旨在讨论FABP5在肿瘤中的作用及机制,为肿瘤相关研究提供新思路,同时为肿瘤新靶点的开发提供更多理论依据。

多层螺旋CT灌注扫描联合血清FABP5、SEMA-3B对老年原发性肝癌的诊断和预后评估价值

目的探讨多层螺旋CT灌注扫描联合血清脂肪酸结合蛋白(FABP)5、信号素(SEMA)-3B对老年原发性肝癌的诊断和预后评估价值。方法选取老年原发性肝癌患者110例为原发性肝癌组;慢性肝炎或肝硬化患者50例为肝脏良性病变组;同期健康志愿者50例为健康对照组。使用美国GE的64排多层螺旋CT进行平扫和增强扫描,记录血流量、对比剂达到时间、肝动脉灌注量、平均通过时间。采集空腹肘静脉血4 ml,酶联免疫吸附试验检测血清FABP5、SEMA-3B水平。收集原发性肝癌组肿瘤数目、肿瘤直径、血管侵犯情况、组织分化程度、TNM分期、Child-Pugh肝功能分级及甲胎蛋白、乙肝表面抗原表达情况。对患者进行1年的随访,将转移、复发、死亡的患者纳入预后不良组,其他患者纳入预后良好组。结果原发性肝癌组肝癌组织血流量、肝动脉灌注量、平均通过时间明显高于癌旁组织及肝脏良性病组、健康对照组,对比剂达到时间明显短于癌旁组织及肝脏良性病组、健康对照组(P<0.05)。原发性肝癌组血清FABP5水平明显高于肝脏良性病变组和健康对照组,SEMA-3B水平明显低于肝脏良性病变组和健康对照组(P<0.05);肝脏良性病变组血清FABP5水平明显高于健康对照组,SEMA-3B水平明显低于健康对照组(P<0.05)。血清FABP5、SEMA-3B水平在不同肿瘤数目、肿瘤直径、血管侵犯、组织分化程度、TNM分期、Child-Pugh肝功能分级的老年原发性肝癌患者间比较差异均有统计学意义(P<0.01)。110例老年原发性肝癌患者随访1年期间预后良好39例(35.45%)。预后良好组入院时血清FABP5水平明显低于预后不良组,SEMA-3B水平明显高于预后不良组(P<0.01)。受试者工作特征(ROC)曲线分析显示,多层螺旋CT及血清FABP5、SEMA-3B单独和联合检测对老年原发性肝癌均具有较高的预测价值(P<0.05);其中联合检测的预测价值最高〔曲线下面积(AUC)=0.952〕,特异度、阳性预测值明显高于各指标单独检测。结论多层螺旋CT灌注扫描联合血清FABP5、SEMA-3B在老年原发性肝癌诊断中具有较高的应用价值,且与患者预后水平密切相关。

中枢神经系统胶质母细胞瘤重组人脂肪酸结合蛋白-5、细胞维甲酸结合蛋白-Ⅱ表达及维甲酸疗效研究

目的检测人体中枢神经系统胶质母细胞瘤中脂肪酸结合蛋白-5（FABP-5）、细胞维甲酸结合蛋白-Ⅱ（CRABP-Ⅱ）表达，评估维甲酸对细胞增殖的抑制作用。方法随机性选取96例中枢神经系统胶质母细胞瘤病例，提取胶质母细胞瘤细胞悬液后给予加入维甲酸储存液，经组织免疫荧光化学检测分析FABP-5、CRABP-Ⅱ表达评估临床疗效。结果选取研究标本中，FABP-5阳性表达者为45例（＋，46．88％），而CRABP-Ⅱ的阳性表达者为41例（＋，42．71％）；经维甲酸处理后，在TG-905细胞中FABP-5表达明显下降，CRABP-Ⅱ则表达明显上升，而在U87MG细胞中FABP-5表达轻度上升，CRABP．Ⅱ则表达个别细胞增强。结论经选取胶质母细胞瘤病理样本进行临床研究证实，在胶质母细胞瘤组织中有较高的FABP-5、CRABP-Ⅱ表达，且个体间差异有统计学意义（P〈0．05），经加入维甲酸后显示耐药细胞中FABP-5表达均明显增高，而在敏感细胞中CRABP-Ⅱ表达明显上升，这表明维甲酸可经FABP-5信号通路抑制瘤体组织细胞生长、促进分化及凋亡。

RNA干扰FABP5基因对人肝癌HepG2细胞裸鼠移植瘤生长的影响

目的:研究脂肪酸结合蛋白5(FABP5)基因沉默的慢病毒载体对人肝癌Hep G2细胞成瘤效应的影响。方法:采用RNA干扰技术构建重组逆转录慢病毒载体。Hep G2细胞分为3组:实验组以FABP5基因沉默慢病毒颗粒(LV-shRNA-FABP5)感染Hep G2细胞;阴性对照组以空载体慢病毒颗粒(LV-shRNA-NC)感染Hep G2细胞;空白对照组不做任何处理。将裸鼠随机分为3组,接种肿瘤细胞后观察裸鼠成瘤情况。4周后测量肿瘤的体积和重量,绘制移植瘤生长曲线。Real-time PCR、Western blot及免疫组织化学法检测裸鼠移植瘤中FABP5的表达。结果:LV-shRNA-FABP5可以降低Hep G2细胞FABP5的表达。3组裸鼠接种癌细胞后均有肿瘤形成。与空白对照组和阴性对照组相比,实验组肿瘤生长速度明显减慢,且体积及重量明显减小(P<0.05);实验组裸鼠肝癌移植瘤组织的FABP5 mRNA和蛋白表达水平相比空白对照组和阴性对照组表达明显下降(P<0.05)。结论:沉默FABP5基因表达能有效抑制人肝癌裸鼠移植瘤的生长。FABP5可能成为肝癌基因治疗的一个有效靶点。

FABP-5基因沉默对人胶质瘤细胞增殖、侵袭、凋亡及肿瘤干细胞标志物CD44^+CD133^+表达的影响

背景:已有研究表明,FABPs在多种恶性肿瘤,包括乳腺癌、前列腺癌、肝癌、肺癌、膀胱上皮癌都有不同程度的表达,与恶性肿瘤的发生、转移、侵袭和抗药性关系密切。目的:探讨沉默FABP-5基因表达对人胶质瘤细胞U251增殖、侵袭、凋亡的影响。方法:以人胶质瘤细胞U251细胞为研究对象,根据FABP-5 mR NA编码序列设计并合成干扰siR NA序列,瞬时转染U251细胞。将人胶质瘤细胞U251分为3组:FABP-5-shR NA组加入Lv-shR NA-FABP-5,阴性对照组加入LV-sh RNA-NC,空白对照组仅行常规培养。RT-PCR和Western blot法分别从mR NA和蛋白水平检测FABP-5的表达,CCK-8法测定细胞体外增殖能力,流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡及肿瘤干细胞标志物CD44+CD133+的表达,TUNEL染色检测细胞凋亡。结果与结论:(1)与阴性对照组和空白对照组比较,FABP-5-sh RNA组的FABP-5 m RNA和蛋白表达明显下降;(2)与阴性对照组和空白对照组比较,FABP-5-shR NA组细胞生长速度明显减慢,细胞周期阻滞在G0/G1期,S期细胞数减少;肿瘤干细胞标志物CD44+CD133+的表达比例亦显著降低(P<0.05);(3)与阴性对照组和空白对照组相比,FABP-5-sh RNA组细胞凋亡率明显升高(P<0.01),增殖、侵袭力显著下降(P<0.05);(4)结果表明,FABP-5基因可能直接或间接地参与到胶质瘤细胞周期的调控和凋亡过程,其基因的表达水平改变与肿瘤细胞侵袭力关系密切。

FABP5-PPARγ信号通路对血管性痴呆大鼠学习记忆及脂质代谢的影响

目的:探讨脂肪酸结合蛋白5(FABP5)-过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)信号通路对血管性痴呆(VD)大鼠学习记忆及脂质代谢的影响及其作用机制。方法:①采用双侧颈总动脉结扎法制备VD模型大鼠,设立正常对照组(WT组)、假手术组(sham组)及VD模型组;②设立WT组和WT+FABP5抑制剂组。4周后行Morris水迷宫实验检测大鼠空间学习记忆能力;采用RT-qPCR及Western blot方法测定脑内FABP5、PPARγ、p-PPARγ及脂蛋白脂肪酶(LPL)在转录水平和蛋白水平的表达;用试剂盒检测脑组织中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)及游离脂肪酸(FFA)含量。结果:与WT组和sham组相比,VD模型和FABP5抑制剂组大鼠学习记忆能力明显下降(P<0.05,P<0.01),脑内的FABP5、PPARγ、p-PPARγ及LPL在转录水平和蛋白水平上表达显著降低(P<0.05,P<0.01);脑内的TC、TG和FFA含量明显提高(P<0.05,P<0.01)。结论:FABP5可通过PPARγ和LPL影响VD大鼠的学习记忆和脂质代谢。

少突胶质细胞瘤中FABP5的表达及其临床意义

目的探讨脂肪酸结合蛋白5(fatty acid-binding protein 5,FABP5)在少突胶质细胞瘤中的表达及其临床意义。方法采用免疫组化En Vision两步法检测87例人脑少突胶质细胞瘤以及23例肿瘤旁脑组织中FABP5及Ki-67的表达。分析FABP5在少突胶质细胞瘤中的表达与Ki-67、临床病理参数以及预后的关系。结果 (1)FABP5在少突胶质细胞瘤中高表达率为63.2%(55/87),显著高于肿瘤旁脑组织(34.8%,8/23)(P<0.05);(2)FABP5在少突胶质细胞瘤中的表达与组织学分级(P=0.018,rs=0.254)、Ki-67表达呈正相关(P=0.003,rs=0.318);(3)单因素生存分析显示,FABP5蛋白、Ki-67、化疗、年龄与少突胶质细胞瘤患者预后相关(P<0.05)。结论 FABP5可能在少突胶质细胞瘤的发生、发展过程中发挥重要作用,有望成为判断少突胶质细胞瘤患者疾病进展及预后的生物学指标。

FABP5在宫颈癌组织的表达及其与预后的关系

目的探讨脂肪酸结合蛋白5(fatty acid binding protein 5,FABP5)在宫颈癌组织的表达及其与临床预后的关系.方法行广泛性子宫切除术和系统性腹膜后淋巴结切除术的早期宫颈癌组织蜡块共206例(淋巴结转移阳性41例,阴性165例),另选取相匹配年龄的40例因子宫肌瘤行全子宫切除的正常宫颈组织作为空白对照组.采用免疫组化法检测FABP5在206例早期宫颈癌组织标本及正常宫颈组织中的表达;分析FABP5与宫颈癌患者临床、病理参数之间的相关性;采用多变量COX比例风险模型评估FABP5在宫颈癌预后中的价值.结果FABP5高表达主要集中在细胞核和细胞浆中;宫颈癌组织中FABP5的表达较正常宫颈组织显著升高(P<0.05);且在淋巴结转移阳性组较阴性组表达显著升高(P<0.05).而在正常宫颈组织中,FABP5仅在宫颈上皮层低表达;FABP5与FIGO分期(P<0.001)、肿瘤大小(P=0.011)、淋巴结转移(P<0.001)和淋巴脉管浸润(P<0.001)显著相关.多变量COX比例风险模型分析结果显示年龄、盆腔淋巴结转移、肿瘤大小和FABP5为宫颈癌的独立预后因素.生存分析显示FABP5高表达与不良预后显著相关(P<0.05).结论FABP5在宫颈癌中高表达,且可作为宫颈癌不良预后的预测指标.

黄药子醇提物对人胃癌细胞凋亡及FABP-5表达的影响

目的:探讨黄药子醇提物对人胃癌MGC-803细胞的侵袭、凋亡及FABP-5表达的影响。方法:制备黄药子醇提物,以人胃癌细胞MGC-803细胞为研究对象,根据细胞培养液所含黄药子醇提物的不同浓度,将实验分为空白对照组(等量无菌水)、黄药子醇提物低浓度组(60 mg/L)和高浓度组(120 mg/L)。分别以CCK-8法检测体外细胞增殖能力;流式细胞技术观测细胞周期及凋亡的情况变化;TUNEL染色观察各组细胞的凋亡情况;细胞侵袭小室法观测体外细胞的侵袭力变化,以RT-PCR法和Western blot法从mRNA水平和蛋白水平对FABP-5基因的表达进行检测,每组实验重复3次。结果:黄药子醇提物高浓度组和低浓度组MGC-803细胞的生长速度明显减缓,G1期细胞比例降低,S期和G2/M期比例增高;与空白对照组相比,高浓度组和低浓度组细胞的凋亡率明显升高(P<0.01),增殖、侵袭能力显著下降(P<0.05),高浓度组和低浓度组细胞相比促进凋亡和抑制FABP-5表达的作用更明显(P<0.05)。RT-PCR和Western blot显示,黄药子醇提物高浓度组和低浓度组较空白对照组的FABP-5 mRNA和蛋白表达都明显下降。结论:黄药子醇提物可加快人胃癌MGC-803细胞的凋亡,抑制其增殖力和侵袭能力,并对FABP-5 mRNA和蛋白的表达起到抑制作用,提示此机制可能使其参与了抗肿瘤的作用。

FABP5基因重组突变体蛋白抗前列腺癌细胞活性分析

为构建脂肪酸结合蛋白5(FABP5)突变体的原核表达体系,评价突变体蛋白质体外抗前列腺癌细胞的活性。利用定点突变技术,突变FABP5蛋白脂肪酸结合的3个关键位点,并构建原核表达体系,对重组蛋白质进行原核表达、分离纯化。通过细胞毒性、细胞划痕和细胞侵袭试验,评价重组FABP5突变体蛋白质对前列腺癌细胞22RV1和PC3增殖、迁移和侵袭的影响。结果显示定点突变后的DNA与表达载体pQE32连接并转入大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3),经序列测定正确,构建了重组表达工程菌,并诱导表达的重组蛋白经亲和层析纯化获得纯度较高的重组蛋白;三突变体对细胞的增殖、迁移和侵袭抑制作用比3个单突变体和3个双突变体抑制效果明显;单突变体和双突变体组内对细胞的增殖、迁移和侵袭抑制作用差异较小;而野生型重组蛋白质对两株细胞的增殖、迁移和侵袭具有促进作用。本研究从所有突变体中筛选出FABP5的三突变体重组蛋白质对前列腺癌细胞抑制作用较好,为后续开发去势抵抗性前列腺癌(CRPC)蛋白质药物提供参考。