干扰NIX通过抑制自噬缓解脊髓神经元的缺血再灌注损伤

目的观察线粒体外膜蛋白NIX能否通过抑制自噬缓解脊髓神经元缺血再灌注损伤。方法利用H_(2)O_(2)(200μmol/mL)处理分离的原代脊髓神经元,以构建体外缺血再灌注模型,通过转染shNIX干扰NIX的表达,并通过流式凋亡检测与CCK-8增殖检测观察脊髓神经元的凋亡情况,PCR检测NIX基因的转录水平,蛋白免疫印迹法检测NIX、LC3与Beclin蛋白的表达水平。结果shNIX能显著下调NIX基因的转录水平与蛋白的表达水平,抑制效果明显,用于后续的实验操作。流式凋亡检测与CCK-8增殖检测表明,缺血再灌注损伤诱导脊髓神经元出现凋亡,降低其增殖速度。缺血再灌注损伤促进NIX、LC3和Beclin的表达。shNIX使缺血再灌注损伤诱导脊髓神经元的凋亡减少,促进了细胞的增殖,并且使LC3和Beclin的蛋白表达减少。结论干扰NIX通过抑制自噬减弱了缺血再灌注诱导的脊髓神经元损伤。

牛磺熊去氧胆酸干预缺糖缺氧条件下脊髓神经元的凋亡

背景:牛磺熊去氧胆酸是一种亲水性胆汁酸衍生物,在多种神经系统疾病模型中均有神经保护作用,但目前鲜有报道研究牛磺熊去氧胆酸对脊髓损伤的作用。目的:观察缺糖缺氧条件下牛磺熊去氧胆酸对脊髓神经元凋亡的作用,以及对脊髓损伤后小鼠运动功能恢复的影响。方法:①体外实验:从孕13.5 d的C57 BL/6小鼠胚胎中分离提取原代脊髓神经元,培养72 h后,分3组处理:正常组加入Neurobasal完全培养基,置于CO_(2)培养箱(体积分数5%CO_(2)+95%空气)内培养24 h;氧糖剥夺组加入无糖的Neurobasal培养基,置于三气培养箱(体积分数94%N2+5%CO_(2)+1%O_(2))培养12 h,更换为Neurobasal完全培养基后置于CO_(2)培养箱内培养12 h;实验组处理过程大致同氧糖剥夺组,其中在加入无糖Neurobasal培养基的同时加入牛磺熊去氧胆酸。采用TUNEL染色检测细胞凋亡,CCK-8法检测细胞活性,免疫荧光染色检测细胞βⅢ微管蛋白表达。②动物实验:采用随机数字表法将60只C57 BL/6小鼠分为假手术组、脊髓损伤组与实验组,每组20只,脊髓损伤组与实验组采用Allen打击法建立T_(9)-T_(10)脊髓损伤模型,造模后第1天开始,实验组灌胃给予牛磺熊去氧胆酸溶液,假手术组与脊髓损伤组灌胃给予生理盐水,1次/d。连续给药14 d后,采用行为学和组织学方法评估脊髓组织修复情况。结果与结论:①体外实验:TUNEL染色、CCK-8与免疫荧光染色检测显示,氧糖剥夺组细胞凋亡数量高于正常组(P<0.01),细胞活性与βⅢ微管蛋白表达低于正常组(P<0.01);实验组细胞凋亡数量低于氧糖剥夺组(P<0.01),细胞活性与βⅢ微管蛋白表达高于氧糖剥夺组(P<0.01)。②动物实验:旷场实验BBB评分与后肢足迹实验显示,实验组小鼠行走与运动功能恢复程度好于脊髓损伤组。苏木精-伊红染色显示,脊髓损伤组小鼠脊髓损伤部位可见明显畸形和空洞,神经细胞数量明显减少;与脊髓损伤组比较,实验组脊髓损伤病变面积显著减小,脊髓畸形程度更小、空洞更少,神经细胞数量增加。免疫荧光染色显示,脊髓损伤组神经元胞核标记神经元细胞数量少于假手术组(P<0.01),实验组神经元胞核标记神经元细胞数量高于脊髓损伤组(P<0.01)。③结果表明:牛磺熊去氧胆酸能减少缺糖缺氧引起的脊髓神经元凋亡、轴突的丢失,促进脊髓损伤小鼠运动功能的恢复。

补阳还五汤通过BDNF/TrkB介导PI3K/Akt信号通路抗脊髓神经元凋亡的机制研究

目的探讨补阳还五汤通过BDNF/TrkB介导PI3K/Akt信号通路抗脊髓神经元凋亡的机制。方法将48只SD大鼠分为标准模型组、补阳还五汤组、抑制剂组、假手术组四组,每组各12只。采用标准方法损伤大鼠脊髓,分别连续治疗7 d。改良神经功能评分(mNSS)评价大鼠经7 d治疗后神经功能,进行组织切片,用尼氏染色(NS)法、免疫组织化学法(Immunohistochemistry)和蛋白质印记(WB)法分别检测各组脊髓神经元细胞形态及BDNF、TrkB、PI3K/Akt的表达情况。结果给药治疗后对各组大鼠第1、3、7天mNSS评分,补阳还五汤组、抑制剂组分别与标准模型组相比,得分均有明显降低(P<0.05);治疗7 d后,补阳还五汤组与抑制剂组相比,两组得分有明显差异(P<0.05);尼氏染色显示,标准模型组镜下脊髓神经元破坏明显,大量空洞样改变,神经元髓鞘脱落散乱,余各组镜下神经元损伤较轻;标准模型组较假手术组明显减少(P<0.05);补阳还五汤组与标准模型组比较,明显增多(P<0.05);抑制剂组较标准模型组明显增多(P<0.05),但与补阳还五汤组比,明显降低(P<0.05);在BDNF表达方面,标准模型组较假手术组降低(P<0.05),补阳还五汤组、抑制剂组较标准模型组有所升高(P<0.05);在TrkB表达方面,补阳还五汤组、抑制剂组较标准模型组降低(P<0.05),抑制剂组比补阳还五汤组降低(P<0.05);在PI3K/Akt表达方面,补阳还五汤组、抑制剂组较标准模型组升高(P<0.05)。结论补阳还五汤可通过BDNF/TrkB介导PI3K/Akt信号通路,促进神经元修复,对于脊髓神经元再生、修复以及运动功能的恢复都具有一定的促进作用。

LncRNA CYTOR对大鼠背脊髓神经元细胞损伤及炎性因子的影响

目的探讨LncRNA CYTOR对大鼠背脊髓神经元细胞损伤及炎性因子的影响及其可能作用机制。方法采用过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导大鼠背脊髓神经元细胞建立细胞损伤模型,随机分为:con组、H_(2)O_(2)组、H_(2)O_(2)+pcDNA组、H^(2)O_(2)+pcDNA-LncRNA CYTOR组、H_(2)O_(2)+pcDNA-LncRNA CYTOR+miR-NC组、H_(2)O_(2)+pcDNA-LncRNA CYTOR+miR-136-5p组。qRT-PCR检测LncRNA CYTOR、miR-136-5p的表达量;MTT法与流式细胞术分别检测细胞增殖及凋亡;ELISA法检测IL-6、IL-21的水平;双荧光素酶报告实验检测LncRNA CYTOR与miR-136-5p的靶向关系;Western blot检测Bax、Bcl-2蛋白表达量。结果与con组比较,H_(2)O_(2)组LncRNA CYTOR的表达量降低(P<0.05),Bcl-2蛋白水平降低(P<0.05),miR-136-5p的表达量升高(P<0.05),细胞增殖抑制率、细胞凋亡率和Bax蛋白水平升高(P<0.05),IL-6、IL-21的水平升高(P<0.05);与H_(2)O_(2)+pcDNA组比较,H_(2)O_(2)+pcDNA-LncRNA CYTOR组细胞增殖抑制率、凋亡率、Bax蛋白表达及IL-6、IL-21水平均降低(P<0.05),Bcl-2蛋白表达升高(P<0.05);LncRNA CYTOR可负向调控miR-136-5p表达;与H_(2)O_(2)+pcDNA-LncRNA CYTOR+miR-NC组比较,H 2O 2+pcDNA-LncRNA CYTOR+miR-136-5p组细胞增殖抑制率、凋亡率、Bax蛋白表达及IL-6、IL-21水平均升高(P<0.05),Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05)。结论LncRNA CYTOR过表达可通过抑制miR-136-5p表达而促进细胞增殖及抑制细胞凋亡、炎性反应从而减轻H_(2)O_(2)诱导的大鼠背脊髓神经元细胞损伤。

胎鼠原代脊髓神经元分离培养方法的改良

目的:介绍一种改良原代胎鼠脊髓神经元的分离培养方法.方法:取育龄期雄、雌SD大鼠各36只,合笼配种怀孕.取受孕10~12d、13~15d及16~18d的SD大鼠各6只,解剖分离胚胎脊髓,按常规胰酶消化法制备单细胞悬液,应用细胞计数板及台盼蓝染色,在显微镜下数出蓝色细胞数和细胞总数,计算细胞存活率,明确最佳取材胎龄;接着以上述最佳取材胎龄为取材时间点,每组6只孕鼠,按无酶法、胰酶法和Accutase酶法消化三种不同的方法制备单细胞悬液,显微镜下数出蓝色细胞数和细胞总数,计算细胞存活率.接种、纯化细胞并培养1、3、7d后,用倒置相差显微镜观察脊髓神经元生长状态,利用神经元特异性标志物βtubulinⅢ与细胞核双标记法鉴定培养脊髓神经元的纯度.结果:孕13~15d组细胞总量和存活细胞量高于孕10~12d组,细胞存活率高于孕16~18d组(P<0.05).Accutase酶组获取的细胞总量、存活细胞量以及细胞存活率均明显高于常规无酶组及胰酶组(P<0.05).在倒置相差显微镜下观察发现,脊髓神经元培养7d后,胞体周围逐渐出现光圈,神经突起逐渐伸长,最终形成密集的神经突起网络;与无酶组及胰酶组相比,Accutase酶法分离的脊髓神经元分布更加均匀并且神经突起形成的网更密集.经βtubulinⅢ和hoechst33342荧光染色鉴定,Accutase酶组、无酶组及胰酶组三组分离提取培养的脊髓神经元纯度分别为(90.29±2.55)%、(83.51±6.20)%和(88.10±4.07)%,组间无统计学差异(P>0.05).结论:13~15d胎龄是原代培养脊髓神经元的最佳取材时间;Accutase酶法相较于常规无酶法、胰酶法所获取的脊髓神经元产量更大、生长状态更好,可作为体外研究脊髓神经元病变的细胞模型.

利多卡因对糖尿病大鼠脊髓神经元的损伤作用

目的探讨利多卡因对糖尿病大鼠脊髓神经元的损伤作用。方法选择健康SPF级雄性SD大鼠30只、GK大鼠30只,12周龄,体重180~200 g。取大鼠脊髓神经元进行体外分离培养。采用随机数字表法将大鼠脊髓神经元分为四组:SD大鼠脊髓神经元组(C组)、SD大鼠脊髓神经元+利多卡因组(CL组)、GK大鼠脊髓神经元组(GK组)和GK大鼠脊髓神经元+利多卡因组(GKL组)。C组和GK组置于DMEM高糖培养基中,在37℃,5%CO_(2)培养箱内培养24 h,CL组和GKL组在相同条件下加入浓度为2 mmol/L的利多卡因培养24 h。采用Western blot法检测脊髓神经元中自噬相关蛋白PINK1、mTORC1、AMPK、p-AMPK、LC3Ⅱ和LC3Ⅰ含量,DCFH-DA法检测脊髓神经元中活性氧(ROS)含量,免疫荧光法检测脊髓神经元中PINK1和LC3含量。结果与C组比较,CL组、GK组和GKL组脊髓神经元PINK1、LC3含量和p-AMPK/AMPK、LC3Ⅱ/Ⅰ比值均明显升高(P<0.05),mTORC1含量明显降低(P<0.05),ROS含量明显升高(P<0.05)。与GK组比较,GKL组脊髓神经元PINK1、LC3含量和p-AMPK/AMPK、LC3Ⅱ/Ⅰ比值明显升高(P<0.05),mTORC1含量明显降低(P<0.05),ROS含量明显升高(P<0.05)。结论利多卡因诱导GK大鼠脊髓神经元的自噬相关蛋白的表达及ROS的释放,加重对GK大鼠脊髓神经元的损伤。

ZXDC基因敲减对脊髓神经元氧化应激损伤的保护作用

目的 探讨转录因子ZXDC基因敲减对脊髓神经元(SCNs)氧化应激损伤后的保护作用及机制。方法 应用不同浓度H_(2)O_(2)诱导SCNs氧化应激损伤,CCK8检测细胞活性筛选H_(2)O_(2)诱导最佳浓度;实验细胞分为:Control组、H_(2)O_(2)+AAV-NC组和H_(2)O_(2)+AAV-ZXDC siRNA组,免疫荧光染色鉴定原代SCNs,检测各组ZXDC表达和神经突起平均长度;Western bolt检测各组细胞中ZXDC、CCL2、CCR2表达,qRT-PCR检测细胞中炎症因子TNF-α和IL-1β m RNA表达,应用EdU荧光染色、CCK8检测ZXDC对SCNs增殖和活性的影响。结果 筛选600μmol/L H_(2)O_(2)适用于SCNs氧化应激模型制备。β-Ⅲ-tubulin免疫荧光染色鉴定原代SCNs培养成功;与Control组比较,H_(2)O_(2)+AAV-NC组神经突起平均长度显著降低,ZXDC、CCL2和CCR2表达显著增高,而H_(2)O_(2)+AAV-ZXDC siRNA组较H_(2)O_(2)+AAV-NC组神经突起平均长度显著增高,ZXDC、CCL2和CCR2蛋白表达显著降低(P<0.05);与Control组比较,H_(2)O_(2)诱导组TNF-α和IL-1β m RNA相对表达显著增高,细胞增殖和细胞活力显著降低。与H_(2)O_(2)+AAV-NC组比较,H_(2)O_(2)+AAV-ZXDC si RNA组TNF-α和IL-1β m RNA相对表达显著降低,细胞增殖和细胞活力显著增高(P<0.05)。结论 ZXDC基因敲减通过调控CCL2/CCR2信号通路促进氧化应激损伤SCNs细胞增殖、细胞活力和神经突生长。

Shh-BMSCs外泌体调控miR-133a对脂多糖诱导脊髓神经元细胞凋亡的影响

目的探讨音猬因子(Shh)-骨髓间充质干细胞(BMSCs)外泌体调控miR-133a对脂多糖(LPS)诱导脊髓神经元细胞凋亡的影响。方法体外培养大鼠脊髓神经元细胞,通过CCK-8实验检测0、100、300、500、700、900μg/mL的LPS对其细胞活力的影响,筛选最佳作用浓度。然后以0、20、40、80、120、160μg/mL的Shh-BMSCs外泌体处理LPS诱导的脊髓神经元细胞,通过同样方法筛选最佳作用浓度。将大鼠脊髓神经元随机分为对照组、模型组、Shh-BMSCs外泌体组、miR-133a inhibitor阴性对照组、miR-133a inhibitor组、Shh-BMSCs外泌体+miR-133a inhibitor组,除对照组外,其余各组以LPS诱导脊髓损伤(SCI)细胞模型,然后分组处理后,流式细胞术检测各组细胞凋亡情况;免疫荧光染色检测各组细胞轴突长度;酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测各组细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β和IL-10释放水平;实时荧光定量PCR检测各组细胞miR-133a和Shh mRNA表达;免疫印迹实验检测各组细胞Shh及核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎性信号相关蛋白表达。结果与对照组比较,模型组脊髓神经元细胞轴突长度、IL-10释放水平、miR-133a表达、Shh mRNA及蛋白表达明显降低(均P<0.05),凋亡率、TNF-α及IL-1β释放水平、NLRP3、ASC、caspase-1蛋白表达明显升高(均P<0.05)。与模型组比较,Shh-BMSCs外泌体组脊髓神经元细胞轴突长度、IL-10释放水平、miR-133a表达、Shh mRNA及蛋白表达升高(P<0.05),凋亡率、TNF-α及IL-1β释放水平、NLRP3、ASC、caspase-1蛋白表达降低(均P<0.05);miR-133a inhibitor组脊髓神经元细胞轴突长度、IL-10释放水平、miR-133a表达、Shh mRNA及蛋白表达降低(P<0.05),凋亡率、TNF-α及IL-1β释放水平、NLRP3、ASC、caspase-1蛋白表达升高(均P<0.05);miR-133a inhibitor阴性对照组脊髓神经元细胞各指标均无明显变化(P>0.05)。与Shh-BMSCs外泌体组比较,Shh-BMSCs外泌体+miR-133a inhibitor组脊髓神经元细胞轴突长度、IL-10释放水平、miR-133a表达、Shh mRNA及蛋白表达降低(均P<0.05),凋亡率、TNF-α及IL-1β释放水平、NLRP3、ASC、caspase-1蛋白表达升高(P<0.05)。结论Shh-BMSCs外泌体可通过促进miR-133a表达而抑制NLRP3炎性信号激活,从而抑制LPS诱导的脊髓神经元细胞炎症,减轻其凋亡,缓解其轴突损伤。

针灸对不完全性截瘫兔损伤脊髓神经元内线粒体影响的动态研究

目的 :探讨针灸治疗不完全性截瘫的机理。方法 :采用不完全性截瘫兔模型 60只 ,随机分为 2组 :模型组、针灸组 ,每组于造模后分 3批 ,每批 1 0只 ,分别于 6h、7d、1 5d处死 ,电镜下观察线粒体不同时期的动态变化。结果 :造模形成后 6h针灸能缓解线粒体肿胀 ,对抗继发性损伤 ;7d后针灸组线粒体各项指标优于模型组 ;1 5d后针灸组线粒体形态恢复正常。结论 :针灸可减轻损伤脊髓神经元内线粒体肿胀变性 ,维持线粒体有效功能面积及有效个数 ,促进线粒体进行能量代谢 ,促进神经元恢复 ,对抗继发损伤 。

挤压伤后脊髓神经元NT-3和NT-4的表达变化

为了研究脊髓挤压伤后 ,脊髓神经元 NT-3和 NT-4的早期变化 ,本研究采用免疫组织化学 ABC法和阳性神经元计数 ,结果在大鼠脊髓证明了 NT-3免疫阳性反应产物主要在胞核着色 ,NT-4则胞浆及胞核均着色。腹角的 NT-3阳性神经元数在脊髓挤压伤后 7d组和 2 1d组较正常组和 2 4h组明显增高 ( P<0 .0 1) ;背角的 NT-3阳性神经元仅 2 1d组较正常组有显著增加 ( P<0 .0 1)。腹角的 NT-4阳性神经元数在损伤后 2 4h组、7d组和 2 1d组均较正常组有显著增加 ( P<0 .0 5 ) ,且随时间的延长呈增加趋势 ( P<0 .0 5 ) ;背角的 NT-4阳性神经元数 7d组和 2 1d组较正常组和 2 4h组显著增加 ( P<0 .0 1) ,随时间延长仍有增加趋势 ( P<0 .0 1)。结论 :在脊髓挤压伤后的早期腹、背角 NT-3和 NT-4阳性神经元数均有增多 ,提示内源性 NT-3和

胚胎脊髓不同移植方法对成年大鼠损伤脊髓神经元的影响

目的 探讨胚胎脊髓不同移植方法防止成年鼠脊髓轴突损伤后引起的神经元萎缩的作用。方法采用 Wistar成年大鼠腰脊髓半切洞损伤模型 ,将实验动物分为五组 :A组为正常对照组 ;B组为损伤组 ;C组为损伤 +移植组 ;D组为损伤 +移植 +椎旁肌组 ;E组为损伤 +移植 +大网膜组。手术后应用行为学和电生理检查观察大鼠神经功能恢复情况 ,应用尼氏染色方法观察神经元的大小 ,采用计算机图像分析技术 ,进行定量分析。结果 胚胎脊髓不同移植方法均可以防止成年鼠脊髓轴突损伤后引起的神经元萎缩 ,图像分析发现其作用为 E组 >D组 >C组 >B组 >A组 ,尤以 E组效果最好 ,可以完全恢复损伤神经元的形态。大鼠神经功能的恢复也出现了相同的变化趋势。结论 鼠胚胎脊髓不同移植方法能维持神经元的细胞形态 。

胚胎大鼠脊髓神经元体外分离培养优化条件的建立

神经元的分离培养是神经科学研究的关键性技术。本实验通过观察比较不同条件下胚胎大鼠脊髓神经元的分离培养结果 ,摸索出了一套适合脊髓神经元体外培养的条件 ,分离出了生长状态良好、高纯度的脊髓神经元。并且优化了胚胎大鼠脊髓神经元的分离培养方法 。

人参皂苷保护脊髓神经元与NO的关系

目的 :探讨人参皂苷保护脊髓神经元与一氧化氮 (NO )的关系。方法 :体外培养鼠胚脊髓神经细胞 ,划痕法建立周围神经损伤模型 ,用Griess法间接测定NO含量。结果 :损伤组的NO含量比非损伤组高 ,损伤时人参皂苷培养组的NO含量比常规培养基组的含量低。结论 :周围神经损伤时NO含量增高 。

鞘内注射重比重布比卡因对糖尿病神经病变大鼠脊髓神经元凋亡的影响

目的探讨鞘内注射重比重布比卡因对糖尿病神经病变大鼠脊髓神经元凋亡的影响。方法健康雄性SD大鼠32只，体重220-300g，随机取8只设为对照组（C组），其余大鼠以腹腔注射1％链脲佐菌素（STZ）60mg／kg制备大鼠糖尿病神经病变模型。C组和糖尿病神经病变模型大鼠实施鞘内置管。将鞘内置管成功的糖尿病神经病变大鼠采用随机数字表法随机分为三组：重比重布比卡因组（HB组）、等比重布比卡因组（IB组）和葡萄糖组（G组），每组8只。C组和HB组大鼠鞘内注射重比重0．75％布比卡因10μl，IB组给予等比重0．75％布比卡因10μl，G组给予10％葡萄糖10μl，1次／天，连续3d。于制备糖尿病模型前（T1）、鞘内注射给药前（T2）、鞘内给药后第1天（T3）、第2天（T4）、第3天（T5）及结束给药后第4天（T6）时测定大鼠右后爪机械缩足反射阈值（PWT）；T3～T5时分别记录大鼠每次给药2min后运动阻滞持续时间；瓦时处死大鼠，取腰膨大处的脊髓组织，HE染色，光镜下观察病理学结果；并采用TUNEL法检测脊髓神经元凋亡的情况。结果与HB组比较，C组和IB组大鼠运动阻滞时间明显缩短，脊髓凋亡神经元明显减少（P〈0．05）。与T1时比较，T2～T5时HB组、IB组和G组PWT明显降低（P〈0．05）。与T6时比较，T2～T5时HB组PWT明显降低（P〈0．05）；G组未出现运动阻滞及未见脊髓凋亡神经元。结论鞘内注射重比重布比卡因可促进糖尿病神经病变大鼠脊髓神经元的凋亡。

miR-210inhibitor对大鼠背脊髓神经元细胞氧化应激的保护作用

【目的】观察mi R-210 inhibitor对大鼠背脊髓神经元细胞氧化应激的保护作用。【方法】体外培养大鼠背脊髓神经元细胞,随机分成正常组,H2O2组,H2O2联合mi RNA Negative control组以及H2O2联合mi R-210 inhibitor组。采用MTT法检测细胞的存活率,流式细胞仪检测细胞的凋亡率,活性氧检测试剂盒检测细胞内活性氧,Elisa检测NOX2。【结果】q PCR结果显示,100μmol/L H2O2处理可导致大鼠背脊髓神经元细胞内mi R-210表达量上升7.34倍;转染mi R-210 inhibitor可明显抑制mi R-210的表达量;MTT结果显示,抑制mi R-210的表达可明显降低H2O2对大鼠背脊髓神经元细胞存活率的抑制作用;流式细胞仪检测发现抑制mi R-210的表达可以明显阻止H2O2对大鼠背脊髓神经元细胞凋亡的诱导,显著降低凋亡率;进一步研究发现,转染mi R-210 inhibitor可显著性降低H2O2诱导的细胞内NOX2和ROS的表达。【结论】H2O2刺激鼠脊髓神经元细胞导致细胞内mi R-210表达的上调;降低mi R-210的表达能够降低细胞内NOX2和ROS的表达,抑制NOX2/ROS通路从而减缓H2O2对大鼠背脊髓神经元细胞造成的损伤,推测mi R-210可以作为脊髓损伤治疗的靶点。

中药髓复康对损伤后的脊髓神经元的保护作用

为了研究“髓复康”在体外培养中是否具有一定的神经元保护作用 ,本研究采用原代培养胎鼠脊髓神经元 ,分别将高浓度的髓复康 ( 10μl/ ml)、低浓度的髓复康 ( 5μl/ ml)与体外培养 5 d的原代脊髓神经元共同孵育 2 4h,空白对照组不加中药只加入等量的培养液。选用 10 0 μmol/ L的谷氨酸作用于细胞 1h,建立谷氨酸诱导原代脊髓神经元凋亡的细胞培养模型 ,采用酶学方法( MTT法 )评价神经元损伤程度。结果表明 ,髓复康组神经元线粒体内的琥珀酸脱氢酶的活性明显地高于空白对照组 ,组间有极显著的差异 ( P<0 .0 0 1)。提示 ,“髓复康”

联合应用神经生长因子和神经节苷脂1对坐骨神经损伤大鼠脊髓神经元的保护作用

目的:了解联合应用神经生长因子(NGF)和神经节苷脂1(GM1)对大鼠周围神经损伤后脊髓神经元的保护作用。方法:选用SD大鼠,分为生理盐水(NS)组、NGF组、GM1组和NGF+GM1组,将大鼠坐骨神经造成5mm缺损,术中硅胶管内局部加药、术后大鼠损伤侧小腿肌注药物。术后定期光、电镜观察L4～L6脊髓前角神经元结构变化,测定损伤远段和近段神经传导速度。结果:脊髓运动神经元数目以及神经传导速度4周时,NGF组和GM1组均多于或快于NS组,NGF+GM1组则多于或快于NS组、NGF组和GM1组,8周时NGF+GM1组、NGF组、GM1组组间无显著性差异但均多于或快于NS组。结论:NGF+GM1对周围神经损伤后脊髓运动神经元退变的保护作用与单用NGF或GM1相比,能更早期地发挥作用,并且效果优于单用NGF或GM1。

体外培养脊髓神经元损伤后c-Jun蛋白表达

目的 建立一个模拟脊髓全横断损伤后脊髓组分———原代培养的脊髓神经元损伤的模型。探讨中枢神经损伤后损伤应答基因c jun的表达及变化。 方法 取Wistar大鼠 (孕 14d)脊髓 ,培养 10～ 12d后 ,采用所设计的标准模板 ,直视下进行损伤。观察损伤前、后不同时间神经元的形态及即刻早期基因c jun的表达及变化。 结果 脊髓神经元损伤 10min后胞核即有c Jun标记 ,损伤 2h后最多 ,而且阳性神经元的密度与划痕之间的距离呈明显的反比关系。 结论 受机械损伤的神经元中 ,c Jun表达阳性意味着此即刻早期基因产物已进入细胞核内起着“第三信使”的作用。

人参皂甙Rg1对脊髓神经元细胞增殖的影响

背景:不同的神经受体通过不同的受体介导产生各自的生物功能,脊髓损伤的根本原因是神经元的死亡和突触的功能丧失,人身皂苷Rg1对神经元细胞可能具有保护作用。目的:验证人身皂苷Rg1对SD大鼠脊髓神经元细胞的营养保护作用。方法:对孕龄16日的胚鼠进行脊髓神经元细胞分离提取,对神经元细胞进行冻存和复苏。实验分为3组:空白组、人参皂苷Rg1干预组、阳性对照组(培养孔内加入苯酚溶液)。采用MTT法检测细胞内线粒体的活性及人参皂甙Rg1对神经元细胞的增殖作用。结果与结论:人参皂苷Rg1干预组细胞吸光度显著高于空白对照组细胞,人参皂苷Rg1干预组细胞的相对活力高于空白组,说明人参皂苷Rg1对神经元细胞具有促进生长的作用。人参皂苷Rg1干预后,细胞的突起增长速度明显快于空白组的细胞,说明人参皂苷Rg1对脊髓神经元细胞具有保护作用,可抑制神经元细胞凋亡,使细胞活力增强。

白藜芦醇对过氧化氢损伤脊髓神经元分泌一氧化氮的影响

目的 :通过体外培养脊髓神经细胞并制成过氧化氢 (H2 O2 )的细胞损伤模型 ,研究白藜芦醇 (Res)对脊髓神经细胞分泌一氧化氮 (NO)的影响。方法 :以H2 O2 为工具药制备过氧化损伤脊髓神经元模型 ,观察 1μmol/L～2 0 μmol/LRes对受损伤神经元分泌NO的影响。结果 :H2 O2 在 2 0 0 μmol/L～ 6 0 0 μmol/L范围呈剂量依赖性地造成细胞内、外NO分泌增多。结论 :Res能够降低神经元受损时细胞内、外NO水平 ,从而对神经元提供可靠的保护作用。