姜黄素对脊髓缺血再灌注损伤的保护机制研究进展

脊髓缺血再灌注损伤常见于脊柱损伤及胸腹部大动脉手术,且存在截瘫的风险。研究表明姜黄素可用于治疗脊髓缺血再灌注损伤,但临床中缺少姜黄素治疗脊髓缺血再灌注损伤机制的系统总结。本文从姜黄素对脊髓缺血再灌注损伤过程中的抑制氧化应激、抑制炎症、抑制细胞凋亡、调节自噬、维持血-脊髓屏障完整性以及减少瘢痕形成等作用机制进行总结梳理,为后续临床治疗脊髓缺血再灌注损伤提供新思路。

阿魏酸对家兔脊髓缺血再灌注损伤的防治作用

目的 研究阿魏酸对家兔肾下主动脉阻断所致脊髓损害的防治作用及其机理。方法家兔 2 4只 ,随机分为假手术组 (A组 ) ,缺血再灌注损伤组 (B组 )及阿魏酸组 (C组 ) ,每组 8只。B、C组肾下主动脉阻断 4 0分钟后开放 ,再灌注 7天。C组于阻断前 15分钟一次性静注阿魏酸 5 0mg/kg ,余两组则以同样方法静注等容量生理盐水作对照。测定阻断前 (C0 )、开放前 (C40 )、开放后 6 0分钟(R60 )及 7天 (R7d)血清中MDA、SOD、S10 0蛋白、TNFα、IL 1β的含量 ;术后观察后肢神经功能和脊髓形态学变化。结果 (1)B组缺血及再灌注后血清MDA、S10 0蛋白、TNFα、IL 1β含量明显高于C0点及A组值 (P <0 0 1) ;C组明显低于B组 (P <0 0 1) ,与A组无显著性差异。 (2 )B组缺血及再灌注后SOD活力明显低于C0 点及A组值 (P <0 0 1) ;C组明显高于B组 (P <0 0 1) ,与A组无显著性差异。 (3)C组瘫痪发生率明显低于B组 (P <0 0 1) ,其后肢神经功能评分显著高于B组 (P <0 0 1)。 (4)B组脊髓病理变化较重 ,可见大量神经元坏死 ;C组偶有神经元坏死。结论 预防性静注阿魏酸对家兔主动脉阻断所致脊髓损害有良好的防治作用。其机理与阿魏酸抗氧化、抗炎及抑制TNFα、IL

甘草酸二铵对大鼠脊髓缺血再灌注损伤后运动神经元Caspase-3表达的影响

目的:观察甘草酸二铵(DG)对大鼠脊髓缺血再灌注损伤后脊髓前角运动神经元Caspase-3表达的影响。方法:60只大鼠随机分为3组,每组20只。两组采用手术夹闭大鼠左右肾动脉之间的腹主动脉30min致脊髓缺血,然后松开再灌注,其中一组在缺血前10min舌下静脉注射DG20mg/kg(DG干预组),一组仅造成脊髓缺血损伤(损伤组);另一组打开腹腔后即关腹,不进行缺血再灌注(正常对照组)。分别于术后3、24、72、16 8h处死大鼠取腰段脊髓行免疫组化染色,观察脊髓前角Caspase-3光密度变化情况;72、168h处死动物前先采用Behrmann 5点评分法评定大鼠后肢功能。结果:损伤组与干预组72h时后肢功能评分分别为4.2±0.45分、5.8±1.1分;168h时分别为5±0分、6.2±1.3分,两组相同时间比较有显著性差异。Caspase-3表达位于脊髓前角运动神经元胞浆。术后3、24、72、168h,正常对照组前角运动神经元的平均光密度为0.13±0.04、0.15±0.06、0.13±0.06、0.15±0.06,损伤组为0.18±0.04、0.18±0.03、0.20±0.04、0.20±0.05,DG干预组为0.17±0.06、0.15±0.02、0.16±0.04、0.15±0.02,损伤组各时间点与对照比较均有显著性差异,DG干预组在24、72、168h与损伤组比较差异有显著性。结论:DG可下调凋亡信号转导通路中Caspase-3的表达水平,从而抑制脊髓前角神经元凋亡的发生。

神经细胞凋亡在脊髓缺血再灌注损伤延迟性瘫痪中的作用

目的研究细胞凋亡在脊髓缺血再灌注损伤发生延迟性瘫痪中的作用。方法将48只新西兰白兔随机分为2组:对照组(sham)和缺血再灌注组(IR)。参照并改进Zivin方法建立兔脊髓腰骶段缺血再灌注延迟性瘫痪模型,比较各组动物不同时间点后肢运动功能及病理形态学变化;采用原位末端脱氧核糖核酸酶转移介导的脱氧尿三磷酸(dUTP)标记法(TUNEL法)检测神经细胞凋亡水平。结果HE染色显示,再灌注8 h组神经细胞形态基本正常,结构清楚,灰质中有少量空泡,但神经元细胞结构完好;再灌注24 h组:灰质中前角神经元细胞破坏严重,空泡形成,无明显炎症细胞浸润;再灌注72 h组:灰质前角中大量空泡形成,尚残存数个结构清楚的运动神经元,有明显炎症细胞浸润;再灌注168 h组:灰质中运动神经元消失,残存数个固缩坏死神经元。TUNEL法染色显示,sham组及再灌注8 h后,仅见非特异性染色。再灌注24 h后出现大量阳性细胞,至再灌注72 h阳性细胞数量达到最高峰,主要分布在前角运动神经元。再灌注1周后,灰质结构破坏严重,仅有少量神经元幸存,但其阳性细胞平均积分吸光度值仍较对照组高。结论脊髓缺血再灌注后发生延迟性瘫痪时,神经元死亡的方式主要是细胞凋亡。

脊髓缺血再灌注损伤对大鼠水通道蛋白4表达的影响

目的:在整体水平研究脊髓缺血再灌注损伤对大鼠水通道蛋白4表达水平的影响。方法:SD大鼠72只随机分为空白组、假手术组和SCII组,每组24只。建立大鼠脊髓缺血再灌注损伤模型,并于1、3、5、7天四个时间点分别处死6只。BBB评分评价神经功能,Western blot和免疫荧光方法检测AQP4的表达情况。结果:空白对照组和假手术组在不同时间点的BBB评分均为21分,SCII组的BBB评分在1天时最低,随时间推移逐渐增加,3天明显优于1天(P<0.05),5天明显优于3天(P<0.05),5天明显优于7天(P<0.05)。Western blot在34 kD及43 kD分子量处可见特异性条带,SCII组早期AQP4的表达水平显著下降,即在1、3、5、7天四个时间点AQP4的表达显著低于空白对照组和假手术组,但呈逐渐增加趋势;在7天仍显著低于正常空白组和假手术组(P<0.05)。免疫荧光检测AQP4的表达变化趋势与Western blot的检测结果相似。结论:SCII存在AQP4低表达,这可能是造成SCII神经功能障碍的重要原因。

葛根素治疗急性脊髓缺血再灌注损伤大鼠的神经保护机制

目的探索葛根素在治疗急性脊髓缺血再灌注损伤(ASII)大鼠中的作用机制。方法 28只雄性大鼠阻断主动脉来实施ASII。实验动物随机分为4组:阴性对照(NC)组(假手术处理)、阳性对照(IR+S)组(脊髓缺血再灌注损伤+盐水处理)、IR+P组(脊髓缺血再灌注损伤+葛根素处理)、IR+R组(脊髓缺血再灌注损伤+细胞周期蛋白B激酶抑制剂处理)。检测各组大鼠运动机能、脊髓梗死体积、细胞凋亡指数及细胞周期素依赖性激酶5(CDK5)和P25的活性。结果 IR+S组与NC组比较,P35和P25蛋白表达差异有统计学意义(P<0.01);IR+P组、IR+R组与IR+S组比较差异亦有统计学意义(P<0.05)。提示葛根素对ASII神经保护可能通过类似抑制剂的作用,并且与P35和P25的表达相关。结论脊髓损伤减小与CDK5及P25活性受抑制相关;在ASII大鼠治疗过程中,抑制CDK5及P25活性是葛根素的神经保护机制之一。

锌对脊髓缺血再灌注损伤大鼠ATP酶、MAO活性和T-AOC含量影响的研究

目的方法研究外源性补锌对脊髓缺血再灌注损伤大鼠ATP酶、MAO活性和T-AOC含量的影响,从而探讨锌对脊髓缺血再灌注损伤的保护作用的机制。方法 60只Wistar大鼠随机分为5组,每组12只,雌雄各半,分别为假手术组、模型组、硫酸锌预处理高剂量组(100mg/kg)、中剂量组(50mg/kg)和低剂量组(25mg/kg)。各剂量组每日灌胃给予硫酸锌1次,连续7天。假手术组和模型组给予相同剂量生理盐水,7天后制备脊髓缺血再灌注损伤动物模型,损伤后24h采用Basso Beattie Bresnahan(BBB)运动功能评分法对脊髓缺血再灌注损伤模型进行后肢神经功能评价;测定脊髓组织中ATP酶、MAO活性和T-AOC含量。结果与模型组比较,各给锌组大鼠神经功能评分明显高于模型组,差异具有显著性(P<0.05)。各硫酸锌处理组Na+-K+-ATP酶活性明显低于假手术组(P<0.05),但明显高于模型组(P<0.05)。模型组和各硫酸锌处理组脊髓组织Ca2+-Mg2+-ATP酶活性显著低于假手术组(P<0.05)。模型组和各硫酸锌处理组大鼠脊髓组织内的MAO活性均显著高于假手术组(P<0.05),且100mg/kg/d硫酸锌处理组MAO活性显著低于模型组(P<0.05)。模型组和各硫酸锌处理组大鼠脊髓组织内的T-AOC含量显著低于假手术组(P<0.05)。模型组大鼠脊髓组织中T-AOC含量最低,随着硫酸锌剂量的增加,T-AOC含量呈上升趋势。结论锌可能通过提高ATP酶的活性、抑制MAO活性和升高T-AOC含量,从而对脊髓缺血再灌注损伤起到一定的保护作用。

人参皂甙改善Hsp70、Bax及EAAS表达在脊髓缺血再灌注损伤中作用的实验研究

目的观察人参皂甙对大鼠脊髓缺血再灌注损伤中热休克蛋白70(Hsp 70)、细胞凋亡基因(Bax)的表达及兴奋性氨基酸的含量的影响,探讨其作用与机制。方法 SD大鼠随机分为空白组、损伤组、人参组、甲强龙组。术前30分钟,前两组腹腔注射0.9%氯化钠溶液,人参组给予人参注射液,甲强龙组给予注射甲基强地松龙。空白组打开腹腔但不夹闭腹主动脉,余3组制作脊髓缺血再灌注损伤模型。4组分别于术后0.5、1、4、8和12小时检测脊髓组织中的Hsp70、Bax及兴奋性氨基酸的含量,并系统地进行大鼠神经功能学变化观测。结果空白组各观测时点Hsp70、Bax未见阳性表达。其余3组伤后0.5小时,Hsp70及Bax开始升高,4小时达到高峰值。人参组及甲强龙组Hsp70及Bax的含量在1、4、8、12小时较损伤组明显降低(<0.05)。伤后0.5小时开始出现Bax阳性表达,12小时内持续增多。人参组及甲强龙组在1、4、8、12小时时点差异无显著意义(P>0.05)。3组兴奋性氨基酸于0.5小时后开始上升,并在4小时达到高峰值,人参组及甲强龙组在1、4、8、12小时较损伤组明显降低(<0.05),人参组及甲强龙组在1、4、8、12小时时点差异无显著意义(>0.05)。大鼠神经功能学变化观测结果显示,各时间点甲强龙组和人参组均明显高于损伤组(<0.05),而甲强龙组与人参组间无显著差异。结论人参可以降低脊髓缺血再灌注损伤中脊髓的Hsp70及Bax的表达,降低兴奋性氨基酸的含量,减轻炎症反应。人参皂甙作用与甲强龙相当,且避免了甲强龙的副作用。

脊髓缺血再灌注损伤与血脊髓屏障关系的研究进展

脊髓缺血再灌注损伤（spinal cord ischemia reperfusion injury，SCIRI）是许多病理生理情况下的并发症，如胸腹主动脉瘤以及脊椎手术［1］。在胸腹主动脉瘤及脊柱手术时为了减少术中出血，便于手术操作，常常需要阻断主动脉一段时间，再开放时往往会引起脊髓组织损伤，甚至导致截瘫。 SCIRI不仅给患者造成了严重的生理和心理伤害，而且给其家庭及社会造成了沉重的经济负担。虽然缺血预处理、低温处理、药物干预等治疗措施取得了一定的疗效，但SCIRI引发的截瘫仍对患者有着严重的威胁［2］。有效地防治SCIRI仍是临床上亟需解决问题。血脊髓屏障（blood spinal cord barrier，BSCB）对维持神经系统内环境的稳定发挥着至关重要的作用。近来研究［3－4］发现BSCB在SCIRI中起着极其重要的作用，保护BSCB 的完整可以减轻 SCIRI 及其降低截瘫的发生，为防治SCIRI提供了一个新的治疗方向。

辛伐他汀预处理对大鼠脊髓缺血再灌注损伤后炎症介质及NOS的影响

目的:探讨辛伐他汀预处理对大鼠脊髓缺血再灌注损伤后肿瘤坏死因子(Tumer nectosis factor-α,TNF-α)、白介素-10(Interleukim-10I,L-10)、S-100蛋白以及一氧化氨合酶(Nitric oxide synthase,NOS)亚型的影响。方法:雄性SD大鼠72只,随机分为假手术组(C组),缺血再灌注损伤组(I/R组)和辛伐他汀预处理组(Si组)(20 mg/kg灌胃,术前连续3 d),采用Zivin改进法建立模型,造模成功后,分别在再灌注6、12、24 h,取脊髓组织作HE形态学染色;ELISA法测定组织TNF-αI,L-10;应用免疫组化法检测脊髓S-100蛋白;比色法检测组织NOS各亚型以及测定24 h内神经功能评分。结果I:/R组各时间点TNF-α与S-100蛋白表达量呈显著正相关;与I/R组相比,Si组形态学的损伤改变较轻;Si组能提高再灌注后12、24 h神经功能评分,降低各时间点TNF-α含量及再灌注后12、24 h S-100蛋白的表达,提高再灌注6、12 h结构型NOS(Constitutcive NOS,cNOS)活性,降低再灌注12、24 h诱导型NOS(Inducible NOSi,NOS)活性,但IL-10含量在再灌注24 h上升不如I/R组明显。结论:脊髓缺血再灌注损伤后,组织S-100蛋白的表达与炎症反应具有一定相关性。辛伐他汀预先给药后,S-100蛋白的表达减少,脊髓缺血再灌注损伤减轻,神经功能得到改善,其机制可能与减少TNF-α的释放,上调cNOS表达,降低iNOS活性有关,但辛伐他汀不能通过增加IL-10的释放而发挥保护作用。

脊髓缺血再灌注损伤中血流量变化与组织病理学相关性研究

目的探讨缺血再灌注脊髓损伤(SCI/R)中的脊髓血流量(SCBF)与组织病理学变化规律相关性。方法阻断兔腹主动脉法制备腰段脊髓IR模型,实验组根据SCI/R时间段分为假手术组、缺检查。结果在缺血30 min组腰髓局部血灌注量迅速下降至基线值的-77.51%(p=2.01E-17),有明确病理学改变。再灌注初始,局部血流迅速增高并超过基线水平,随后逐渐降低,再灌注1 h后局部血灌注基本恢复基线水平(3.7%P值=0.437 899),以后血流量低于基线水平,出现缺血后延迟低灌注;直至再灌注4 h(-23.5%,P值=1.34E-3),低灌注保持相对稳定,血流未见恢复,病理学改变明显进一步加重。结论研究表明SCI/R血流动力学变化与组织病理学改变程度具有时间依从性,组织延迟性低灌注损伤是SCI/R重要病理学特点,为脊髓继发性损伤提供了理论依据。

经腹主动脉阻断致犬脊髓缺血再灌注损伤实验模型的探讨

目的 经腹主动脉阻断建立犬脊髓缺血再灌注损伤模型。方法 健康成年家犬14只，其中肾动脉后阻断型8只，阻断时间分别为30、60、90及120min（各2只），肾动脉前阻断型6只，阻断时间分别为60和120min（各3只）。于动脉阻断前、阻断后0、20、40、60、80、100min及动脉开放后0、10、30min测定心率（HR）、桡动脉压（RABP）、股动脉压（FABP）、鼻咽温度（NPT）和直肠温度（RT），再灌注后12、24、48h及7d动物行为学评分。结果 动脉阻断前后HR基本平稳；RABP略有升高，动脉开放后则逐渐趋于平稳，FABP在动脉阻断后波形消失，收缩压及舒张压基本相等，维持在20～40mmHg之间；NPT基本平稳，RT随着阻断时间的延长逐渐降低；再灌注后12h行为学评分均为≥3分，24h以后均为4分。结论 本研究采用的方法确能保证腹主动脉完全阻断，但建立脊髓缺血再灌注损伤模型失败。

ICAM-1在脊髓缺血再灌注损伤后表达变化及意义

目的 探讨细胞间粘附分子 1在大鼠脊髓缺血再灌注损伤后表达变化及其意义。方法 采用Zivin法建立脊髓缺血再灌注损伤模型。以GAPDH为内参照物 ,应用半定量RT PCR方法、免疫组化及免疫荧光激光共聚焦显微镜定性、定量测定脊髓微血管内皮细胞表面ICAM 1mRNA表达变化。结果 正常脊髓微血管内皮细胞表面仅有微量的ICAM 1表达 ,单纯缺血不引起ICAM 1表达。再灌注后损伤区ICAM 1表达发生了改变 ;再灌注 4h ,ICAM 1mRNA表达量明显升高 ,再灌注 12h其在单位微血管面积上的荧光强度约比单纯缺血组增加了 1 2。提示脊髓损伤后微血管内皮细胞初始ICAM 1表达增加是由再灌注损伤激发 ,其后延迟递增表达增强 ,说明ICAM 1参与了脊髓再灌注损伤的炎症病理过程。结论 ICAM 1可做为脊髓I R后炎症反应程度的监测指标。

硫酸镁对兔脊髓缺血再灌注损伤保护作用的研究

目的:探讨硫酸镁对兔脊髓缺血再灌注损伤的保护效果。方法:27只新西兰大白兔,随机分为A组(硫酸镁处理组)、B组(生理盐水)和C组(假手术对照组)。A、B两组参照Tetik方法建立兔脊髓腰骶段缺血模型,比较三组动物不同时间点的体感诱发电位(SEP)、后肢运动功能评分及缺血再灌注后48h的病理学改变。结果:C组SEP没有明显变化,动物均完全康复。缺血30min时B组波形消失,A组波幅降为基线的(29.3±1.9)%。再灌注60min后A组、B组SEP波幅分别渐升致基线的(74.5±2.3)%和(49.2±2.1)%。A组N1、P1波峰潜伏期在缺血30min及再灌注60min时均明显优于B组(P<0.05);再灌注24h和48h后,A组的后肢运动功能评分均显著高于B组(P<0.05);再灌注48h后A组的脊髓前角神经细胞计数显著高于B组(P<0.01)。结论:硫酸镁具有减轻兔脊髓缺血再灌注损伤及保护神经功能的作用。

细胞自噬在脂氧素A4治疗大鼠脊髓缺血再灌注损伤中的作用

目的脂氧素A4(LXA4)在大鼠脊髓缺血再灌注损伤中已被证实具有良好的保护作用,细胞自噬是否是其保护作用机制之一仍不明确。文章拟讨论细胞自噬在LXA4治疗大鼠脊髓缺血再灌注损伤中的作用。方法48只大鼠以随机数字表法分为LXA4组、缺血再灌注组、假手术组,每组16只,假手术组仅暴露腹主动脉,其他两组构建脊髓缺血再灌注损伤模型,LXA4组:在关腹后30 min脊髓鞘内注射10μL LXA4(300 pmol);缺血再灌注组:在关腹后30 min脊髓鞘内注射等渗盐水(0.1 mL/kg);假手术组:不注射药物。3组大鼠分别于再灌注24 h后颈椎脱臼法处死,处死后取出腰段脊髓。LC3B荧光染色法对3组大鼠的脊髓组织进行染色并计数,Western blot检测LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、γ-氨基丁酸受体A相关蛋白(GABARAP)的表达。结果假手术组LC3B阳性细胞较少,缺血再灌注组(399.80±18.46)和LXA4组(240.80±12.76)的LC3B阳性细胞数较假手术组(73.40±19.42)明显升高(P<0.05),LXA4组较缺血再灌注组阳性细胞数明显减少(P<0.05)。缺血再灌注组及LXA4组大鼠的LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、GABARAP的表达较对照组明显增高(P<0.05);与缺血再灌注组比较,LXA4组脊髓组织中LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ明显下降(P<0.05)。结论当SCII发生后,激活了细胞自噬,说明细胞自噬参与了SCII发生的过程;给予LXA4后,细胞自噬被抑制,脊髓缺血再灌注损伤缓解。

促红细胞生成素联合甲强龙治疗脊髓缺血再灌注损伤效果分析

目的探讨促红细胞生成素联合甲强龙治疗脊髓缺血再灌注损伤的效果。方法2011年8月-2015年7月选择在笔者医院进行诊治的脊髓型颈椎病患者56例，根据数字表法随机分为观察组与对照组各28例，两组手术方式都为减压植骨融合内固定术，对照组在脊髓减压前30rain开始快速静脉滴注甲强龙30mg／kg，在此基础上观察组同时滴注促红细胞生成素3000U／kg，两组都治疗观察14天。结果观察组与对照组术后3个月的JOA评分分别为15．09±2．14和12．48±2．98分，均明显高于术前的9．02±1．89和9．07±1．67分（P〈0．05），同时观察组术后3个月的JOA评分明显高于对照组（P〈0．05）。两组术后3个月的血清S-100B和NSE浓度均明显低于术前（P〈0．05），同时观察组术后3个月的血清S-100B和NSE浓度也均明显比对照组低（P〈0．05）。两组患者手术之前诱发电位波形种类比较，差异无统计学意义（P〉0．05），术后3个月均逐渐好转（P〈0．05），同时观察组术后3个月的诱发电位波形类型明显好于对照组（P〈0．05）。结论促红细胞生成素联合甲强龙治疗脊髓缺血再灌注损伤能有效改善脊髓型颈椎病患者的神经电生理状态，降低血清中S一100B和NSE的含量，从而发挥神经保护作用，有很好的应用价值。

不同剂量右美托咪定对兔脊髓缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨不同剂量右美托咪定对新西兰大白兔脊髓缺血再灌注损伤(SCII)的影响。方法按照随机数字表法将50只新西兰大白兔随机分为假手术组(S组)、SCII对照组(C组)、低剂量、中剂量和高剂量右美托咪定组(D1组、D2组和D3组),采用改良Zivin法制作SCII模型。再灌注48 h后,采用Tarlov评分法评估兔后肢运动功能,同时测定脊髓超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)水平表达,并作苏木素-伊红(HE)染色观察病理变化和脊髓前角正常运动神经元计数。结果不同组别Tarlov评分及脊髓前角正常运动神经元的总体数量的总体差异有统计学意义(P<0.05)。与S组比较,其他各组Tarlov评分及脊髓前角正常运动神经元数量均降低(P<0.05);与C组比较,D1、D2和D3组上述两指标均升高(P<0.05);与D2组比较,D3组均降低(P<0.05)。不同组别脊髓SOD和MDA的总体差异有统计学意义(P<0.05)。与S组比较,其他各组脊髓SOD水平均降低,MDA水平均升高(P<0.05)。与C组比较,D1组、D2组和D3组脊髓SOD水平均升高,MDA水平均降低(P<0.05)。与D2组比较,D3组脊髓SOD水平降低,MDA水平升高(P<0.05)。HE染色结果显示各组病理变化与上述指标变化一致。结论右美托咪定用于新西兰大白兔SCII,能够改善其运动功能,抑制氧化应激反应,减少氧自由基的产生,以D2组效果最好,D3组未显示出显著的保护作用。

不同低温对大鼠脊髓缺血再灌注损伤后Bax及Bcl-2蛋白表达的影响

目的：观察不同低温对大鼠脊髓缺血再灌注损伤的保护作用及其对凋亡蛋白Bax、Bcl-2表达的影响。方法将60只SD大鼠随机分为4组，低温18℃实验组（深低温组），低温28℃实验组（中低温组），常温手术对照组（常温组），常温假手术组（假手术组）。前3组采用手术夹闭大鼠左肾动脉与左右髂总动脉分叉上端腹主动脉90 min致脊髓缺血，然后松开再灌注，深低温组、中低温组在阻断前20 min分别降至18、28℃，解除阻断后30 min内将体温升至37.0℃。常温组阻断前无需降温每只大鼠再灌注72 h、1周按照TARLOV法对下肢进行评分。每组分为24 h、72 h、1周3个不同时间点取L1-L5段脊髓，每个时间点5只大鼠，采用普通病理HE染色、Nissl染色，从形态学上观察脊髓组织，TUNEL法观察细胞凋亡情况，免疫组化染色及Western blot法观察脊髓组织Bax蛋白及Bcl-2蛋白表达情况。结果 TARLOV神经评分结果显示，深低温组、中低温组下肢恢复情况明显好于常温组（P＜0.01），而中低温组评分又高于深低温组（P＜0.01）。组织形态学观察假手术组未发现明显病理学改变，深低温组、中低温组、常温组3组均出现不同程度病理改变，且中低温组轻于深低温组，深低温组组轻于常温组；TUNEL结果显示，假手术组几乎未发现凋亡细胞，常温组神经元细胞凋亡情况较深低温组及中低温组明显。免疫组化及Western blot结果显示，深低温组、中低温组各时间点Bax蛋白表达量均低于常温组，但中低温组降低比深低温组明显，组间两两比较，差异有统计学意义（ P＜0.05）。深低温组、中低温组、假手术组各时间点Bcl-2蛋白表达量均高于常温组，且中低温组较深低温组高，组间两两比较，差异有统计学意义（ P＜0.05）。结论低温保护下肢神经功能及减少神经元的死亡，对大鼠脊髓缺血再灌注损伤有保护作用，并且可能通过抑制Bax蛋白的表达及活化Bcl-2蛋白的表达，抑制神经元凋亡发挥其保护作用。过低温度则可能通过抑制Bcl-2蛋白表达而使低温保护效果降低。

高氧液对兔脊髓缺血再灌注损伤的保护作用及对HSP90表达的影响

目的:寻找新的防止脊髓缺血损伤致瘫痪的手段,研究高氧液对兔脊髓缺血再灌注损伤的保护作用及对热休克蛋白90(heatshockproteinHSP90)表达的影响。方法:雄性新西兰大白兔20只,随机分成对照组n=10)及高氧液组((n=10)。夹闭腹主动脉肾下段20min,建立兔脊髓缺血模型。高氧液组于缺血前20min持续以20mL/kg.h)恒速静脉输入高氧液,直到再灌(注后20min;对照组则采用同种方法静脉输入等容量生理盐水。再灌注后4,8,12,24和48h分别对动物后肢运动功能评分。再灌注48h后,处死动物取脊髓(L5),石蜡包埋切片行组织病理学观察及免疫组织化学染色,并按照McCarthy等的方法对免疫组化染色结果进行分析。结果:高氧液组神经功能评分在各时间点均明显高于对照组(P<0.05);与对照组相比,高氧液组脊髓前角正常神经细胞数明显增多(P<0.01),HSP90的表达高氧液组明显多于对照组(P<0.01)。结论:高氧液对兔脊髓缺血再灌注损伤有显著的保护作用,这种保护机制与脊髓缺血后皮质HSP90表达上调有关。