基于PI3K/AKT/mTOR通路研究脑清通颗粒对脑缺血再灌注大鼠的保护作用

目的:探讨脑清通颗粒对脑缺血再灌注大鼠的保护作用及机制。方法:60只大鼠随机分为假手术对照组、模型对照组、尼莫地平组、脑清通颗粒低、中、高剂量组,每组10只。除假手术对照组外,其余各组采用高脂饲料喂养、复合应激刺激和线栓法制备肝热痰瘀证脑缺血再灌注大鼠模型。从第6周起,假手术对照组和模型对照组用等体积生理盐水灌胃,其余各给药组用相应药物灌胃,1次/d,连续给药7d。观察大鼠体征表现;采用神经功能评分、TTC染色及脑梗死体积测定评价脑缺血再灌注模型;尼氏染色观察神经细胞变化;生化法检测SOD和MDA含量、ELISA法检测TNF-α和IL-6含量;免疫组化检测PI3K、AKT和mTOR的蛋白表达;Western blot法检测p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR的蛋白表达。结果:模型对照组大鼠体征表现符合临床肝热痰瘀证基本特征,神经功能评分、脑梗死体积显著增加(P<0.01),大鼠血清SOD含量明显降低(P<0.01),MDA、TNF-α和IL-6含量明显升高(P<0.01),脑组织PI3K、AKT和mTOR的蛋白表达均明显降低(P<0.01或P<0.05),p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR的蛋白表达均明显降低(P<0.01);脑清通颗粒1.3g/kg、2.6g/kg、5.2g/kg组可改善大鼠体征表现,降低神经功能评分和脑梗死体积(P<0.01或P<0.05),升高血清SOD含量(P<0.01),降低MDA、TNF-α和IL-6含量(P<0.01),升高脑组织PI3K、AKT和mTOR的蛋白表达(P<0.01),升高p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR的蛋白表达(P<0.01)。结论:脑清通颗粒可能是通过激活PI3K/AKT/mTOR信号通路达到对脑缺血再灌注损伤的脑保护作用。

脑清通颗粒质量标准的研究

目的：建立脑清通颗粒的质量标准。方法：采用薄层色谱法（TLC）法鉴别方中决明子、川芎、山楂和水蛭,采用高效液相色谱法（HPLC）法测定赤芍中芍药苷的含量。结果：决明子、川芎、山楂和水蛭TLC色谱斑点清晰,无干扰,芍药苷在0.021 6~0.194 4 mg/m L范围内线性关系良好（r=0.999 7）,平均加样回收率为99.19%,RSD=1.13%。结论：所建立的薄层鉴别方法斑点清晰、专属性强、重现性好,含量测定方法分离度好、结果准确,可有效控制脑清通颗粒的质量。

脑清通颗粒对高血压肝热痰瘀证大鼠血浆ET-1和AngⅡ含量的影响

目的:观察脑清通颗粒对高血压肝热痰瘀证大鼠血浆中内皮素-1(ET-1)和血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)含量的影响,探讨其治疗高血压的作用机制。方法:采用慢性复合电刺激加高脂饮食致大鼠高血压肝热痰瘀证模型,测定大鼠血浆中ET-1和AngⅡ的含量。结果:与治疗前及模型组比较,脑清通颗粒各剂量组治疗第2周血压明显降低(P<0.01),第3周降压作用最明显;与模型组比较,脑清通颗粒各剂量组均能降低模型大鼠血浆中ET-1和AngⅡ的含量(P<0.01)。结论:脑清通颗粒可降低高血压肝热痰瘀证模型大鼠血压,其降压机制可能与降低血浆中ET-1和AngⅡ的含量有关。

脑清通颗粒对高血压肝热痰瘀证大鼠血浆IL-6、TNF-α的影响

目的:通过实验观察脑清通颗粒对高血压肝热痰瘀证大鼠血浆中白介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量的影响,以探讨其治疗高血压的作用机制。方法:采用慢性复合电刺激加高脂饮食致大鼠高血压肝热痰瘀证模型,测定大鼠血浆中IL-6和TNF-α的含量。结果:与治疗前及模型组比较,脑清通颗粒各剂量组从治疗第2周后血压均明显降低(P<0.01),且第3周后降压作用最明显;与模型组比较,脑清通颗粒各剂量组均能降低模型大鼠血浆中IL-6和TNF-α的含量(P<0.01)。结论:脑清通颗粒可降低高血压肝热痰瘀证模型大鼠血压,其降压机制可能与降低血浆中IL-6和TNF-α的含量有关。

脑清通颗粒对肝热痰瘀证高血压模型大鼠血清hs-CRP及血管形态的影响

目的观察脑清通颗粒对肝热痰瘀高血压模型大鼠血清超敏C反应蛋白(Hypersensitive C-reactive protein,hs-CRP)及血管形态的影响。方法采用随机数字表法将60只SD大鼠随机分成空白对照组、模型对照组、西药组和中药大、中、小剂量组。正常对照组除给予生理盐水10 ml/kg灌胃外,不进行其他任何干预措施。其余各组均给予环孢菌素A 25 mg/kg皮下注射(2 ml/kg)、高脂乳剂灌胃(10 ml/kg)、附子溶液灌胃(相当于2 g生药/kg)进行造模,并灌胃给药1次/d,模型对照组给予生理盐水10 ml/kg,西药组给予卡托普利10 mg/kg,中药大、中、小剂量组分别给予脑清通颗粒5.2 g/kg、2.6 g/kg、1.3 g/kg,灌胃量均为10 ml/kg,1次/d,连续21 d。结果与空白对照组比较,模型对照组对照组血压和血清中hs-CRP升高,差异有统计学意义(P<0.01),光镜下显示模型对照组血管形态明显紊乱;与模型对照组比较,西药组、中药大剂量组、中药中剂量组、中药小剂量组均可降低血压和血清hs-CRP,血压下降以第3周为著,均具有统计学意义(P<0.05,P<0.01);西药组、中药大剂量组、中药中剂量组血管中、内膜不同程度改善,中药大剂量组改善最为明显。结论脑清通颗粒可使肝热痰瘀证高血压大鼠血清炎症反应降低,此机制可能是中药调整血压,改善高血压血管重塑的重要环节。

脑清通颗粒治疗肝痰瘀型高血压的疗效观察

高血压是临床常见疾病之一,具有较高的发病率,严重影响患者的身体健康。中医属于＂眩晕＂和＂头痛＂范畴,而肝痰瘀型高血压是一种常见的中医分型,临床常给予西药治疗,效果并不很理想[1]。笔者结合多年临床工作经验,对肝痰瘀型高血压患者应用脑清通颗粒治疗,取得较好效果,报告如下。

基于Nrf2/HO-1信号通路探讨脑清通颗粒对脑缺血再灌注大鼠的保护作用及机制

目的:探讨脑清通颗粒对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及机制。方法:90只大鼠随机分为假手术对照组、模型对照组、尼莫地平6.25 mg/kg组、脑清通颗粒1.3、2.6、5.2 g/kg组,每组15只。除假手术对照组外,其余各组采用高脂饲料喂养、复合应激刺激和线栓法制备脑缺血再灌注大鼠模型。从第6 w起,假手术对照组和模型对照组用等体积生理盐水灌胃,其余各给药组用相应药物灌胃,1次/d,连续给药7 d。观察大鼠体征表现;采用神经功能评分、TTC染色及脑梗死体积测定评价脑缺血再灌注模型;尼氏染色观察神经细胞变化;ELISA法检测SOD活力和MDA含量;免疫组化法和Western blot法检测Keap1、Nrf2和HO-1的蛋白表达。结果:与正常对照组比较,模型对照组大鼠体征表现符合临床肝热痰瘀证基本特征,神经功能评分、脑梗死体积显著增加,大鼠血清SOD活力显著降低,MDA含量明显升高,脑组织Keap1、Nrf2、HO-1的蛋白表达明显上调(P<0.05或P<0.01);与模型对照组比较,脑清通颗粒1.3、2.6、5.2 g/kg组可改善大鼠体征表现,明显降低神经功能评分和脑梗死体积(P<0.01或P<0.05),显著升高血清SOD活力,降低MDA含量,下调脑组织Keap1的蛋白表达,上调Nrf2和HO-1的蛋白表达(P<0.01)。结论:脑清通颗粒可能是通过激活Nrf2/HO-1信号通路达到对脑缺血再灌注损伤的脑保护作用。

基于TGF-β1/Smad信号通路探讨脑清通颗粒对肝热痰瘀证高血压大鼠血管外膜的作用及机制

目的:基于TGF-β1/Smad信号通路探讨脑清通颗粒对肝热痰瘀证高血压大鼠的降压作用及机制。方法:除正常对照组外,其余各组均采用环孢菌素A皮下注射加附子和高脂乳剂灌胃制备肝热痰瘀证高血压大鼠模型。造模成功者随机分为模型对照组、卡托普利10 mg/kg组、脑清通颗粒1.3、2.6、5.2 g/kg组,每组10只。除正常对照组和模型对照组用等体积生理盐水灌胃,其余给药组用相应药物灌胃,1次/d,连续给药21 d。观察大鼠的一般状态;测量大鼠尾动脉压;V-G染色法观察血管外膜形态和胶原分布;免疫组化测定Ⅰ型、Ⅲ型胶原、TGF-β1和Smad3的蛋白表达;Western blot法检测TGF-β1、Smad3、ERK1/2、p-ERK1/2和CTGF的蛋白表达。结果:模型对照组一般状态符合肝热痰瘀证的造模标准,平均动脉压(MAP)显著升高(P<0.01),血管外膜胶原Ⅰ、Ⅲ、TGF-β1、Smad3、ERK1/2、p-ERK1/2和CTGF的蛋白表达显著上调(P<0.01);脑清通颗粒1.3、2.6、5.2 g/kg组可明显改善肝热痰瘀证高血压大鼠的一般状态,降低MAP(P<0.01),可显著下调血管外膜胶原Ⅰ、Ⅲ、TGF-β1、Smad3、p-ERK1/2和CTGF的蛋白表达(P<0.01)。结论:脑清通颗粒能够降低肝热痰瘀证高血压模型大鼠血压,降低动脉血管外膜胶原Ⅰ、Ⅲ的表达,抑制血管外膜重塑,其机制可能与抑制TGF-β1/Smad信号通路有关。

脑清通颗粒对肝热痰瘀证高血压病患者血压、血脂及血液流变学的影响

目的:观察脑清通颗粒对肝热痰瘀证高血压病患者血压、血脂及血液流变学的影响。方法:将84例原发性高血压病患者随机分为治疗组、对照组,每组42例。治疗组给予脑清通颗粒口服,对照组予复方降压片、阿司匹林肠溶片和辛伐他汀滴丸,连续治疗8周,观察两组患者治疗前后的血压、血脂水平和血液流变学的变化。结果:与治疗前比较,治疗后治疗组收缩压、舒张压差异均有统计学意义(P<0.01,P<0.05),对照组收缩压差异有统计学意义(P<0.05),治疗后两组比较,收缩压与舒张压差异均有统计学意义(P<0.05);治疗组治疗后TC、TG和LDL-C均降低,HDL-C升高,均有统计学差异(P<0.05,P<0.01),对照组TC、TG、HDL-C与治疗前比较有显著性差异(P<0.05);治疗组可明显降低全血黏度、血浆黏度、红细胞聚集指数、红细胞压低和血沉,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:脑清通颗粒能平稳持久降压,可调节血脂和改善血液流变学。

基于eNOS/NO信号通路探讨脑清通颗粒对肝热痰瘀证高血压大鼠的作用

目的:基于内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)/一氧化氮(nitric oxide,NO)信号通路探讨脑清通颗粒对肝热痰瘀证高血压大鼠的降压作用及机制。方法:随机从70只6周龄SPF级雄性SD大鼠中选取10只为正常组,其余60只大鼠采用皮下注射环孢菌素A加灌胃给予附子和高脂乳剂制备肝热痰瘀证高血压大鼠模型。取造模成功的大鼠50只,随机分为模型组、卡托普利组及脑清通颗粒低(1.3 g·kg^(-1))、中(2.6 g·kg^(-1))、高(5.2 g·kg^(-1))剂量组,每组10只,于造模成功的第2天开始给予相应药物灌胃,正常组和模型组灌胃给予等体积生理盐水,每日1次,连续21 d。分别于造模前、造模第7天、造模第14天、给药第7天、给药第14天和给药第21天测量大鼠尾动脉压,计算平均动脉压(mean arterial pressure,MAP);HE染色观察血管内膜形态学变化;ELISA检测血清血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)、内皮素-1(endothelin-1,ET-1)、eNOS、NO含量;免疫组化和Western Blot检测胸主动脉组织中eNOS蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组MAP及血清ET-1、AngⅡ水平明显升高,血清NO、eNOS水平及胸主动脉eNOS蛋白表达水平显著降低;与模型组比较,脑清通颗粒各剂量组血清ET-1、AngⅡ水平显著降低,NO、eNOS水平显著升高,胸主动脉eNOS蛋白表达水平显著升高,给药14 d后MAP显著下降,差异均具有统计学意义(P<0.05)。HE染色显示,模型组大鼠血管内膜粗糙,结构不完整,有明显脱落现象,平滑肌细胞数量明显减少,而脑清通颗粒各剂量组大鼠血管内膜损伤均得到了不同程度的改善。结论:脑清通颗粒能改善肝热痰瘀证高血压模型大鼠血管内膜损伤,降低血压,其机制可能与抑制ET-1和AngⅡ的释放,激活eNOS/NO信号通路有关。

脑清通混悬颗粒对高血压模型大鼠ET、AngⅡ、CGRP的影响

目的:探讨脑清通混悬颗粒对血压及内皮素(ET)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、降钙素基因相关肽(CGRP)的影响。方法:将70只同批、同饲养条件成年SD大鼠随机分为空白组10只,造模组60只。造模组给予慢性复合应激进行高血压造模14d,自复合刺激造模第2周起同时配合高脂乳剂灌胃法进行肝热痰瘀证型造模,连续高脂乳剂灌胃10d。将造模成功的大鼠选取50只,随机分为高血压模型组,脑清通混悬颗粒大、中、小剂量组及卡托普利药物对照组。分别给予相应量的生理盐水、脑清通混悬颗粒大、中、小剂量和卡托普利溶液灌胃3w,观察其对大鼠血压、ET、AngⅡ、CGRP的变化,以及胸主动脉血管壁形态的影响。结果:脑清通混悬颗粒各剂量组均可有效的抑制大鼠血压升高趋势,但降压作用以第3周为著,治疗前、后及其与模型组比较有显著性差异(P<0.01或P<0.05);脑清通混悬颗粒各剂量组与模型组比较ET、AngⅡ含量降低,CGRP含量升高,具有显著性差异(P<0.01或P<0.05);光镜下结果:模型组血管壁内膜水肿,胶原纤维增生,管壁脂质细胞增多甚或附有斑块,平滑肌组织增生;脑清通混悬颗粒大、中剂量组较模型组内膜相对光滑,局部有少量脂质细胞粘附,胶原纤维、平滑肌组织增生不明显,明显好于模型组。结论:脑清通混悬颗粒治疗肝热痰瘀型高血压大鼠作用的机理可能是通过对血清ET、CGRP、AngⅡ的调节,起到保护血管内皮功能的作用,而血管内皮功能得到改善则血压可相应的下降。