神经节苷脂对脑缺氧缺血后新生大鼠海马CA_1区N-甲基-D-天门冬氨酸受体表达的影响

目的 研究新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后海马区N-甲基-D-天门冬氨酸受体(NMDAR)及NMDARmRNA表达的变化和神经节苷脂(GM1)对其的影响。方法 建立HIBD模型。用免疫组化及原位杂交方法检测缺氧缺血(HI)和GM1干预后不同时间点NMDA受体I型亚单位(NR1)阳性细胞及NR1mRNA阳性细胞的表达。结果 HI后新生大鼠海马CA1区NR1及NR1mRNA表达增强,GM1可使其受体表达下调(P<0.05)。结论 GM1可使新生大鼠海马CA1区NR1及NR1mRNA表达下调,对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤具有保护作用。

新生大鼠脑缺氧缺血后迟发性细胞死亡的研究

目的 探讨新生动物脑缺氧缺血 (HI)后迟发性细胞死亡是否存在细胞凋亡 ;分析不同检测手段的敏感性与特异性。方法 在建立新生大鼠脑HI损伤标准动物模型基础上 ,采用脑组织病理学HE染色光镜观察、透射电镜、原位末端标记 (ISEL)及DNA电泳等分别对HI后不同时间点的实验侧脑皮质、海马回中凋亡细胞的形态、特点等进行观察和比较。结果 光镜、电镜下显示实验侧脑皮质及海马神经元皱缩、染色质凝集并出现凋亡小体 ,ISEL及DNA电泳证实有裂解DNA存在。且发现脑皮质及海马回凋亡性细胞死亡通常自HI后 6～ 12h开始 ,2 4h达高峰。结论 缺氧缺血可引起新生动物脑细胞凋亡。在脑HI迟发性损伤中不仅存在坏死 ,而且存在着复杂的细胞凋亡过程。不同的检测手段均具有一定的局限性 ,只有结合多种方法进行检测 ,才能正确判定凋亡细胞的存在。

新生大鼠脑缺氧缺血损伤模型的建立

目的 按Rice方法建立新生大鼠脑缺氧缺血损伤(HIBD)模型。方法 7d龄SD新生大鼠 6 2只 ,随机分为正常对照组 (n =14 )、假手术组 (n =14 )及HIBD模型组 (n =34)。HIBD模型组大鼠行左侧颈总动脉永久性结扎 ,2h后置于 37℃恒温水浴的 1L有机玻璃缺氧舱中 ,输入氧浓度为8%± 0 1%的氮氧混合气体持续缺氧 2h ,观察缺氧缺血后2 4h内神经行为变化及 2 4、4 8、72h脑组织病理改变 ,并用干湿法测定 2 4h脑含水量。结果 HIBD模型组大鼠神经行为异常发生率为 94 12 % ,正常对照组和假手术组未发生神经行为异常。HIBD模型组左侧脑组织出现明显的病理改变 ,HE染色可见神经元损伤和神经胶质细胞增生 ;正常对照组和假手术组脑组织未见异常。HIBD模型组左脑含水量较右脑、正常对照组和假手术组显著增加 (P <0 0 0 1)。结论 应用Rice方法建立的新生大鼠HIBD模型稳定性良好 ,其病理变化有一定的规律性 ,该模型的建立对于研究新生儿HIBD具有重要意义。

新生大鼠脑缺氧缺血模型心肌细胞凋亡的研究

目的 研究新生大鼠缺氧缺血性脑损伤 (HIBD)发生后不同时段心肌细胞凋亡情况。方法 结扎新生 7日龄大鼠右颈总动脉后放入 8%低氧舱 2h制成HIBD模型 ,应用AnnexinV/PI双染流式细胞技术检测缺氧缺血 (HI)后 1、4、18、2 4、4 8、72h及 7d心肌细胞凋亡情况。结果 HI后各HI组心肌细胞的凋亡率均明显高于对照组 (P <0 .0 5 ) ,72hHI组凋亡率又显著高于其他组 (P <0 .0 5 ) ,表明HI后 7d内各组大鼠心肌均存在超出正常凋亡 ,尤以 72hHI组凋亡率最高。结论 新生大鼠HIBD后 1h～ 7d内心肌细胞均存在明显凋亡 ,以HI后 72h更明显 ,提示对缺氧缺血性脑病新生儿保护心肌减少心肌凋亡的治疗应至少用至生后

近红外空间分辨光谱技术及其对新生猪脑缺氧缺血的检测

近红外光谱(NIRS)技术作为一种无创的组织氧检测手段,近年来在脑缺氧缺血的检测方面日益受到重视。文章介绍了自行研制的NIRS仪器(TSAH-100近红外组织血氧无损监测仪)的基本原理及用于新生猪脑氧检测时如何实现传感器与待测脑组织的最佳耦合。检测了28例新生猪在不同氧合状态下的脑组织氧饱和度(regional cerebral oxygen saturation,rSO2),在缺氧结束后进行了有创的动脉氧饱和度及生理参数的检测。结果表明,NIRS无创测得的脑rSO2与血气分析有创测得的动脉血氧饱和度(SaO2)有很好的相关性(p<0.001),并且脑rSO2与缺氧程度及缺氧后生理参数的变化一致。因此NIRS无创测得的脑rSO2能直接判断脑氧合状态,可在一定情况下替代有创血气分析,帮助临床无创、简便地诊断脑缺氧缺血。

脑缺氧缺血损伤新生大鼠热休克蛋白70基因的表达研究

目的 对所建立的新生大鼠脑缺氧缺血 (HI)模型进行热休克蛋白 70基因的表达研究 ,评估检测该基因的表达能否作为缺氧缺血及其程度的有用标志。方法 应用自行研制的新生大鼠缺氧实验装置 ,建立新生大鼠脑缺氧缺血模型。应用竞争性RT PCR方法对脑HI模型进行热休克蛋白 70基因表达的检测。结果 HI组在HI后 2h即观察到HSP70mRNA出现明显表达 ,48h达高峰 ,并在 72h内维持较高水平 ,HI后 7d表达明显下降 ,但仍高于正常水平。正常新生大鼠在相应各时段内 ,其HSP70mRNA的表达则极其微弱。结论 缺氧缺血诱导了HSP70基因的表达 ,检测HSP70基因可作为缺氧缺血及其程度的有用标志 。

黄芪对新生大鼠脑缺氧缺血损伤后海马治疗作用的研究

目的 :探讨新生儿缺氧缺血脑损伤 (hypoxia ischemiabraindamage ,HIBD)后 ,脑细胞损伤的机制和黄芪对海马区的神经保护作用。方法 :用新生大鼠建立新生儿HIBD模型 ,于缺氧后不同时间点取脑 ,分别行组织病理学检查并计数海马CA1区神经细胞死亡率、免疫组化检测结扎侧海马区天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶 3 (caspase 3 )蛋白的表达 ,三等分迷宫测试成熟大鼠学习记忆能力。分假手术组、模型组和黄芪治疗组观察并对比上述指标。结果 :模型组结扎侧海马caspase 3蛋白表达于缺氧缺血 (HI)后 6h轻度升高 ,2 4h达高峰 ,48h后下降 ,5d和 7d时渐恢复至基础水平。黄芪组HI后结扎侧海马神经细胞死亡率明显降低、caspase 3蛋白的表达峰值降低了 3 5 %～ 41% ,成熟大鼠的学习记忆能力明显提高。结论 :黄芪对未成熟脑HIBD后海马部位有明显的神经保护功能 ,此功能与抑制caspase 3的表达有关。

新生大鼠脑缺氧缺血损伤时的COX-2表达变化

目的 采用免疫组化方法研究新生大鼠缺氧缺血性脑损伤 (HIBD)时环氧合酶 2 (COX 2 )的表达变化。方法 通过制备新生大鼠左脑的HIBD模型 ,应用免疫组化方法研究 2、6、2 4、72h、7d时不同时相点脑皮层及海马CA1区COX 2免疫化学阳性细胞的表达及免疫细胞化学阳性数表达变化。结果 7日龄Wistar大鼠对照组可见微量COX 2阳性表达 ,HIBD 2h后即见明显增高 ,并于 6～ 2 4h出现表达高峰 ,其后出现下降 ,并可维持明显表达至 7d。结论 新生鼠HIBD可诱导COX 2表达 ,并可能参与HIBD后的神经毒性损伤。

脑缺氧缺血对GLUT1和GLUT3合成的影响

目的 探讨脑缺氧缺血 (HI)对葡萄糖转运蛋白 1(glucosetransporter 1,GLUT1)和葡萄糖转运蛋白 3(glucosetransporter 3,GLUT3)合成的影响。方法 在成功建立了缺氧缺血新生大鼠模型的基础上 ,应用免疫组化方法检测缺氧缺血新生大鼠脑内海马和皮质部位GLUT1和GLUT3的合成情况。结果 正常情况下 ,海马和皮质部位GLUT1和GLUT3的合成量随日龄增加而增高。海马部位的合成量高于皮质部位 ;缺氧缺血可引起GLUT1和GLUT3的合成增加 ,HI后 2 4h时达到高峰 ,其后呈下降趋势 ,尤其是GLUT3在HI后 7d降至极低水平。皮质部位的合成量高于海马部位。 结论 HI可调控脑内GLUT1和GLUT3水平 ,使其在HI后短期内合成增高 ,以增加脑内葡萄糖的转运 ,适应无氧酵解增加的需要。

脑缺氧缺血后新生大鼠海马CA_1区NMDAR的表达

目的 :研究新生大鼠缺氧缺血性脑损伤 (HIBD)后 ,海马CA1区N甲基D天门冬氨酸受体 (NMDAR)及NMDARmRNA表达的变化。方法 :建立HIBD模型 ,用免疫组化及原位杂交方法 ,检测正常对照 (NORM)组和缺氧缺血 (HI)后不同时间点 ,NMDA受体I型亚单位 (NR1)表达的阳性细胞及NR1mRNA表达的阳性细胞。结果 :HI后 2h时NR1、NR1mR NA的表达稍下降 ,2 4h开始上升 ,72h达高峰 ,与正常对照组相比较有显著意义 (P <0 .0 5 )。结论 :正常新生大鼠海马CA1区有NR1及NR1mRNA的表达 。

新生小鼠急性脑缺氧缺血动物模型的建立

目的 建立急性脑缺氧缺血的动物模型。方法 采用足月妊娠小鼠 (查到阴道栓后 19.5d) ,用剖宫手术方法 ,暴露子宫 ,用止血钳阻断双侧子宫动脉血管 ,致使缺氧缺血后脑部发生病理改变。结果 随着阻断子宫血管时间的延长 ,胎鼠的死亡率增高 ,两者具有直线正相关关系 (P <0 .0 5 )。实验组胎鼠体重 (出生至离乳 )增长缓慢 ,胎鼠爬、翻身及对应激刺激等的运动发育明显迟缓 ,脑部的病理改变明显 ,与人的急性脑缺氧缺血的临床表现 ,脑部病理变化及其后遗症是相似的。结论 采用小鼠做急性脑缺氧缺血的动物模型 ,脑缺氧缺血效果明显 ,本模型的建立 ,可用于人的急性脑缺氧缺血的病理学。

脑缺氧缺血损伤新生大鼠热休克蛋白70的合成研究

目的 观察热休克蛋白70（HSP70）在缺氧缺血（HI）新生大鼠脑内的表达。方法 应用免疫组化法检测正常对照组以及HI组不同时间点的脑海马和皮质部位的HSP70阳性细胞数。结果 正常脑组织内未观察到明显HSP70阳性细胞,HI后阳性细胞明显增加。HI后2h即可观察阳性细胞,48h、72h达到高峰,7d时已经明显下降。结论 HI是脑HSP70合成极为敏感的诱因,且HSF70的生成量随HI后时间增加呈动态变化过程。

脑缺氧缺血新生大鼠诱生型一氧化氮合酶基因的表达及其与脑细胞凋亡的关系

目的 探讨新生大鼠缺氧缺血后脑内诱生型一氧化氮合酶 (i NOS)基因表达的变化及其与脑缺氧缺血所致细胞凋亡的关系。方法 建立新生大鼠缺氧缺血性脑损伤动物模型 ,应用快速竞争性逆转录 PCR技术及原位末端标记法观察脑缺氧缺血后不同时间点缺氧缺血侧大脑组织中 i NOS m RNA的表达及神经细胞凋亡的情况。结果 新生大鼠缺氧缺血后 ,缺氧缺血侧大脑 i NOS m RNA表达自 6h开始明显增强 ,其相对表达量为(0 .41± 0 .1 3 ) ;2 4h达高峰 ,相对表达量为 (2 .0 2± 0 .2 4) ,7d时回至基线水平。缺氧缺血侧脑组织中凋亡细胞数目亦自缺氧缺血后 6h开始明显增多 ,平均为 (2 1 .3± 3 .5 ) /1 0个高倍视野 (1 0 hpf) ;2 4h达高峰 ,约 (63 .7±3 .2 ) /1 0 hpf,与对照组 [平均为 (7.3± 2 .3 ) /1 0 hpf]比较差异有显著性 (P <0 .0 1 )。i NOS m RNA的表达高峰与缺氧缺血后脑细胞凋亡的高峰时相相吻合。结论 缺氧缺血可使新生大鼠脑 i NOS m RNA的表达增强和凋亡细胞增加 ,i NOS过表达在缺氧缺血后脑细胞凋亡的调控过程中起一定作用。

结扎大鼠子宫建立新生乳鼠脑缺氧缺血模型

目的建立新生乳鼠脑缺氧缺血动物模型。方法将临产(妊娠21d)雌性大鼠,在无菌环境条件下,剖开腹部,用止血钳完全阻断子宫体、子宫角的动脉血管,造成新生乳鼠急性脑缺氧缺血,致使脑部发生病理改变以及存活乳鼠行为的变化。结果随着完全阻断血管时间的延长,新生乳鼠死亡数增加,两者具有直线正相关关系(P<005)。成活的乳鼠与正常分娩的乳鼠,在翻身、爬行、对应激刺激(触摸、扎刺、高低温环境变化)等行为对比差异明显,而且身体发育增长缓慢。结论结扎临产大鼠子宫,可造成新生乳鼠急性脑缺氧缺血动物模型。此法操作简单、快速,脑缺氧缺血彻底,乳鼠脑部病理改变明显。存活的乳鼠出现程度不同的神经麻痹疾病症状。此项实验,可为人类探讨新生儿急性缺氧缺血疾病的病理学、生理学、药物治疗学等诸多方面,提供理想可靠的模型动物。

脑缺氧缺血损伤过程中环氧合酶2的作用及机制

环氧合酶(cyclooxygenase,COX)是催化花生四烯酸合成前列腺素以及血栓素的限速酶。COX-2为诱导型,在生理状态下以极低拷贝数表达。研究发现,局部缺氧缺血性模型中,COX-2表达增强,并可能是脑缺血后氧自由基产生的主要机制;有实验发现COX-2与兴奋中毒相关以及与NO介导的损伤相关;另有实验证明有COX-2缺陷的小鼠对抗中枢神经损伤的能力增强。说明COX-2有可能广泛参与了缺氧缺血的病理过程,并为其中重要环节。COX-2与COX-1相比,药物对两类异构体存在选择性的差异;导致大多数的非选择性COX抑制剂等在一些脑缺血研究中出现阴性结果。目前已有实验证明选择性COX-2抑制剂可以明显减轻缺血性脑损伤以及海马CA1神经元的迟发性死亡。COX-2是否为脑缺氧缺血损伤中的一个重要的中间环节或分支因素,值得进一步研究。

围产期脑缺氧缺血性损伤的头颅超声诊断(综述)

围产期窒息后对中枢神经系统所引起的损伤,除颅内出血外,另有脑缺氧缺血性损伤(Hypoxic ischemic damage,简称HID),该损伤与以后神经系统发育障碍密切相关,已成为围产医学中的一个重要课题。本文将就HID的发病机制、病理特征及超声在HID诊断中的应用作一综述。

钙离子对新生大鼠脑缺氧缺血后C-AMP反应元件结合蛋白磷酸化的影响

目的:探讨新生大鼠脑缺氧缺血(HI)后钙离子对c-AMP反应元件结合蛋白(CREB)磷酸化的影响,为临床治疗缺血缺氧性脑病和研制新药提供理论依据。方法:7d龄SD鼠(n=126),完全随机分为3组:假手术组42只(仅作颈正中切口,游离右颈总动脉不结扎);缺氧缺血组42只、钙离子拮抗剂加缺氧缺血组(干预组)42只。后两组用0号线结扎右颈总动脉2h,予以低氧2h,制备成缺氧缺血(HI)脑损伤模型。干预组动物分别在模型制成前、后腹腔内注射钙离子拮抗剂尼莫地平。用免疫组化法测各组HI后不同时间点右侧海马CA1区P-CREB阳性细胞数。结果:HI组右侧海马CA1区P-CREB表达较对照组明显增强(P<0.01),4h达高峰后逐渐下降;干预组新生大鼠右侧海马CA1区P-CREB表达较HI组无明显减少(P=0.452>0.05)。结论:钙离子对CREB磷酸化无明显影响。钙离子拮抗剂可用于缺氧缺血性脑病治疗。

足月儿全脑缺氧缺血性脑病模型的建立

目的建立一种简单稳定、适宜临床研究的足月儿全脑缺氧缺血性脑病(HIBD)大鼠模型并探讨该模型的评价方法。方法将10日龄SD大鼠82只,随机分为假手术组(Sham,n=22)和模型组(HIBD,n=60)。通过结扎10日龄SD大鼠双侧颈总动脉,缺血1.5 h,缺氧30 min后给予血管再通的方法,制备足月儿全脑HIBD大鼠模型;假手术组不做缺血和缺氧处理。(1)病理相关检测:术后3 d,进行TTC染色、HE与尼氏染色,海马区电镜检测,观察脑组织病理结构变化;脑干湿比重法测脑含水量评估脑水肿情况。(2)行为学评价:术后12 h进行惊厥评估,术后3 d进行Longa评分,术后10 d进行悬吊实验,术后3周进行Morris水迷宫实验。结合术后一般情况与行为学实验结果进行HIBD分级。结果与假手术组相比,HIBD组TTC切片染色可见双侧白色梗死灶;HE与尼氏染色可见海马区神经元排列紊乱、坏死脱失;电镜检测可见海马区神经元细胞水肿,线粒体空泡化,自噬溶酶体增多;脑含水量显著升高(P<0.01)。与假手术组相比,HIBD组大鼠早期可有惊厥发作伴不同程度运动神经功能障碍,远期可出现发育迟缓、学习认知能力降低(P<0.01)。结论结扎10日龄大鼠双侧颈总动脉,缺氧后再通,能较稳定地复制出中重度足月儿全脑HIBD大鼠模型,可为进一步探索HIBD发病机制与治疗用药提供理想的动物模型。

围产期脑缺氧缺血对葡萄糖转运蛋白表达的调控机制研究进展

葡萄糖转运蛋白 1(glucosetransporter 1,GLUT1)与葡萄糖转运蛋白 3(glucosetransporter 3,GLUT3)是脑内负责葡萄糖转运的两个重要蛋白质 ,不同的葡萄糖浓度可调节GLUT1和GLUT3的生成量。近来研究显示 ,缺氧缺血也是调控GLUT1和GLUT3的基因表达和产物合成的重要因素 ,由此影响脑的能量代谢 ,甚至导致能量衰竭。本文将围绕GLUT1和GLUT3的结构、功能、表达时相以及围产期脑缺氧缺血对脑内GLUT1和GLUT3的影响和调控作一综述。