短链脂肪酸盐对小鼠腹腔巨噬细胞的抗炎功能研究

目的:探讨短链脂肪酸盐中丙酸钠与丁酸钠对小鼠腹腔巨噬细胞代谢活性、一氧化氮(NO)、炎性细胞因子[白细胞介素1(IL-1)、IL-6及肿瘤坏死因子α(TNF-α)]分泌及吞噬杀菌功能的影响。方法:采用CCK-8检测SCFAs处理后巨噬细胞代谢活性;Griess试剂与ELISA法分别检测SCFAs干预经LPS刺激的巨噬细胞上清液中NO与炎性细胞因子;巨噬细胞吞噬适宜浓度鼠伤寒沙门菌后,经SCFAs干预,平板稀释计数法检测吞噬0、5、10 h细菌存活数,同时检测各组10 h上清液中NO含量。结果:丙酸钠与丁酸钠均能降低巨噬细胞代谢活性,降低LPS刺激后NO、IL-6及TNF-α水平,使巨噬细胞吞噬鼠伤寒沙门菌5 h与10 h后的胞内细菌数量增加。结论:丙酸钠与丁酸钠能降低由LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞炎症反应,增加鼠伤寒沙门菌在巨噬细胞内的存活机率。

基于α7nAChR-miRNA124-STAT3通路探讨肠缺血再灌注电针血清对腹腔巨噬细胞的影响

目的:体外研究观察电针治疗肠缺血再灌注小鼠后,小鼠血清的效应物质干预腹腔巨噬细胞株RAW264.7的过程,探讨电针足三里改善肠缺血再灌注损伤(IIRI)的可能机制。方法:取BALB/c小鼠制备IIRI模型,随机分为正常血清组、模型血清组、电针血清组,电针血清组小鼠于足三里电针治疗30 min。各组小鼠制备动物血清后与RAW264.7细胞共培养,共设6组:对照组、正常血清组、模型血清组、电针血清组、电针血清+miRNA124抑制剂组、电针血清+α7nAChR拮抗剂组。实时荧光定量PCR法检测细胞α7nAChR和miRNA 124水平,Western blotting法检测细胞p-STAT3表达,ELISA法检测细胞上清IL-6浓度。结果:模型血清组p-STAT3及IL-6均较对照组和正常血清组显著增高;与模型血清组比较,电针血清组miRNA 124水平明显增高,而p-STAT3表达显著降低;与电针血清组比较,电针血清+α7nAChR拮抗剂组的α7nAChR水平显著下降,电针血清+miRNA 124抑制剂组和电针血清+α7nAChR拮抗剂组的miRNA 124水平显著下降,而p-STAT3和IL-6表达显著升高。结论:电针足三里可能通过促进巨噬细胞α7nAChR诱导miRNA 124,从而抑制STAT3通路改善IIRI。

敲低多房棘球蚴let-7-5p可抑制BALB/c小鼠腹腔巨噬细胞极化和虫体生长

旨在明确敲低多房棘球蚴emu-let-7-5p对小鼠腹腔巨噬细胞极化和虫体生长的影响。构建表达多房棘球蚴emu-let-7-5p海绵序列的重组腺相关病毒载体,并在293T细胞上验证其抑制效果和特异性。70只清洁级BALB/c小鼠分别经尾静脉注射AAV8-si-let-7-5p、AAV8-control和PBS后两周,每组随机选取2只小鼠分别用Western blot和qRT-PCR分析肝组织中GFP、let-7-5p及其靶基因C/EBP δ的表达。随后,所有小鼠每只腹腔接种1 000个原头蚴,3个月后qRT-PCR检测腹腔巨噬细胞emu-let-7-5p、C/EBP δ、M1型(IL-1β、iNOS和IL-6)和M2型(Arg-1、IL-4和IL-10)相关分子的转录水平,并统计各组小鼠多房棘球蚴的包囊重量和原头蚴数量。结果表明,注射后第15天,AAV8-si-let-7-5p成功靶向小鼠肝脏,并引起emu-let-7-5p的敲低和C/EBP δ的上调表达。感染后3个月,AAV8-si-let-7-5p组小鼠腹腔巨噬细胞emu-let-7-5p和M2型相关分子Arg-1均显著下调,而C/EBP δ和M1型相关分子IL-1β和iNOS均显著上调。此外,AAV8-si-let-7-5p组IL-4和IL-6下调表达,而IL-10上调表达,且小鼠肝脏包囊重量和原头蚴数量显著低于对照组。敲低多房棘球蚴感染小鼠体内emu-let-7-5p,可促进C/EBP δ的表达,进而抑制M2型极化和虫体生长。

改良小鼠腹腔巨噬细胞提取方法

目的改进小鼠腹腔巨噬细胞提取方法。方法从胸壁外侧肌肉进针,突破横膈膜进入腹腔,注入培养液,充分按揉后提取腹腔巨噬细胞。结果腹膜完整性得以保持,便于操作。结论优化了传统提取方式,保持腹腔完整性,使提取操作简便、高效、不易污染,尤其操作感良好,巨噬细胞提取数量有保证。

LPS与ATP共同诱导小鼠原代腹腔巨噬细胞焦亡模型的建立

目的:探索脂多糖(LPS)和三磷酸腺苷(ATP)共同诱导小鼠原代腹腔巨噬细胞焦亡模型的最佳条件。方法:采用流式细胞仪F4/80和CD-11b染色检测巨噬细胞纯度,Annexin V-PE/7-AAD双染色法筛选出LPS和ATP共同诱导细胞焦亡的最适浓度及时间。巨噬细胞随机分为control组、LPS组、ATP组和LPS+ATP组;Western blot检测GSDMD、caspase-1、caspase-11、NLRP3、ASC、pro-IL-1β、pro-IL-18和HMGB1蛋白表达水平;ELISA检测培养上清中IL-1β和TNF-α表达水平;透射电镜(TEM)和扫描电镜(SEM)观察巨噬细胞焦亡形态。结果:巨噬细胞的纯度达到90%;500 ng/ml LPS 24 h+5 mmol/L ATP 4 h为诱导巨噬细胞焦亡的最佳组合方式;LPS+ATP组的GSDMD、caspase-1、caspase-11、NLRP3、ASC、pro-IL-1β、pro-IL-18和HMGB1的蛋白表达量明显高于对照组(P<0.05);培养上清中IL-1β和TNF-α表达量显著高于对照组(P<0.05);电镜下可观察到明显的焦亡特征。结论:成功建立了LPS和ATP共同诱导小鼠原代腹腔巨噬细胞的焦亡模型,为深入探讨免疫细胞焦亡的分子机制提供了稳定的细胞模型。

荧光活性染料DiO标记腹腔巨噬细胞的示踪与应用研究

目的以细胞膜绿色荧光活性染料DiO(DiOC_(18)(3))标记腹腔巨噬细胞(peritoneal macrophage),探讨在巨噬细胞消失反应(macrophage disappearance reaction,MDR)中腹腔巨噬细胞的示踪研究。方法DiO标记腹腔巨噬细胞,过继移植给C57BL/6小鼠;以脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导体内MDR。采用荧光显微镜和流式细胞术检测DiO标记的腹腔巨噬细胞数量及荧光强度;分离收集小鼠的各组织,进行冰冻切片,检测DiO标记的腹腔巨噬细胞分布情况。结果荧光显微镜和流式细胞仪观察发现,腹腔注射LPS能显著降低腹腔中DiO标记的腹腔巨噬细胞数量及荧光强度。在MDR过程中消失的腹腔巨噬细胞,通过冰冻切片发现在肝脏、胸腺及脾脏中有分布。结论DiO标记对腹腔巨噬细胞的存活无影响且能长效保持荧光,是一种安全、有效的示踪腹腔巨噬细胞分布的技术手段。

小鼠腹腔巨噬细胞的异质性观察

目的观察小鼠腹腔巨噬细胞的异质性。方法采用流式细胞术分选获得小鼠小腹腔巨噬细胞(SPM)和大腹腔巨噬细胞(LPM),采用流式细胞仪计数细胞数量,瑞氏-吉姆萨染色观察细胞形态;流式细胞仪检测细胞周期、凋亡细胞,采用实时荧光定量PCR法检测抑凋亡基因Bcl-2和促凋亡基因p53;流式细胞仪检测绿色荧光蛋白平均荧光强度(MFI),评价其吞噬功能。结果 LPM的细胞绝对数显著多于SPM,其直径大于SPM,P均﹤0.01。SPM呈圆形,且大小一致;LPM呈卵圆形,大小不均。体外培养4、12、24 h时LPM细胞凋亡率均低于SPM,P均﹤0.01。SPM中p53基因相对表达量高于LPM,P﹤0.05;SPM与LPM中Bcl-2基因相对表达量比较,P>0.05。SPM处于G0/G1期和G2/S/M期细胞比例分别为95.8%±1.56%、4.87%±0.98%,LPM分别为97.9%±0.17%、2.76%±1.25%,P均﹥0.05。SPM和LPM绿色荧光蛋白MFI分别为1 495.33±427.21、2 837.00±450.83,P﹤0.05。结论小鼠SPM和LPM的细胞数量、形态、增殖、凋亡和吞噬功能均存在一定差异,该异质性可能与其在腹腔中的功能有关。

黄芪对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力的影响

目的:研究黄芪水煎剂(HQD)对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力的影响.方法:取18～22 g昆明小鼠100只,随机分10组,每组10只.分别为对照组,灌服不同剂量黄芪水煎剂组,同剂量不同给药途径组,黄芪与地塞米松并用组.各处理组每天给药1次,连续6 d.结果:在不同剂量灌服给药组中,高、中、低剂量试验组吞噬百分率和吞噬指数均高于对照组(P＜0.01),其中以高剂量组效果最好;在不同给药途径组中,吞噬百分率以腹腔注射的效果优于皮下注射和灌服(P＜0.01),但各组间的吞噬指数差异不明显(P＞0.05);在黄芪与地塞米松并用组中,黄芪能明显对抗地塞米松的免疫抑制作用(P＜0.01).结论:黄芪不同剂量、不同给药途径给药对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力均有不同程度的增强作用,并能对抗地塞米松对其抑制作用.

多抗甲素增强大鼠腹腔巨噬细胞抗癌免疫功能的研究

目的本实验探讨腹腔内注射多抗甲素增强大鼠腹腔免疫功能的机制。方法大鼠腹腔内分别注射0.5、1.0和1.5mg的多抗甲素。2d后处死大鼠分离巨噬细胞。计数并测定乳酸脱氢酶(LDH)和酸性磷酸酶(ACP)的活性,巨噬细胞吞噬活力,一氧化氮(NO)的分泌以及对人K562细胞的细胞毒性进行分析。同时采集大网膜,对大网膜乳斑的数量和面积进行了观察分析。结果大鼠腹腔巨噬细胞数量、LDH和ACP的活性、吞噬活力、NO的分泌以及细胞毒性随着多抗甲素剂量的增加而增加。并且多抗甲素也显著增加了大网膜乳斑的数量和面积。结论腹腔内注射多抗甲素可显著增加大鼠大网膜乳斑的数量和面积,并因此增加PMΦ的数量,增强PMΦ的活性。因而增强了腹腔巨噬细胞的免疫功能。

甘遂醋炙前后对脾淋巴细胞活力和腹腔巨噬细胞释放NO的量效关系比较研究

目的比较甘遂醋炙前后对脾淋巴细胞活力和腹腔巨噬细胞释放NO的量效关系,初步探讨甘遂醋炙减毒机制。方法采用MTT法分析脾淋巴细胞活力和Griess法分析大鼠腹腔巨噬细胞NO释放情况,比较甘遂生品、清炒品、醋润品和醋炙品的致炎毒性及量效关系比较。结果在9.5～4750 mg·L-1浓度范围内,甘遂生品组与阴性对照组比较,能够促进脾淋巴细胞增殖和腹腔巨噬细胞NO的释放(P<0.01),药物作用呈现一定的量效关系;甘遂清炒组、醋润组和醋炙组与甘遂生品组比较,均能抑制脾淋巴细胞增殖和腹腔巨噬细胞NO释放(P<0.05),其抑制顺序为醋炙品>醋润品>清炒品,且抑制作用呈现一定的量效关系。结论在9.5～4 750 mg·L-1浓度范围内,甘遂清炒品、醋润品和醋炙品均能降低甘遂的致炎毒性,且降低毒性作用呈现一定的量效关系,并提示在甘遂醋炙过程中加热和醋润两个炮制程序能够起到降低甘遂致炎毒性的协同作用,从而为探讨甘遂醋炙减毒机制提供了一定的依据。

红景天苷对小鼠腹腔巨噬细胞体外增殖、凋亡、吞噬、ROS和NO产生的影响

目的:研究红景天苷(Sal)对小鼠腹腔巨噬细胞体外增殖、凋亡、吞噬、胞内活性氧簇(ROS)及分泌一氧化氮(NO)的影响,初步探讨其对小鼠腹腔巨噬细胞的免疫调节作用。方法:无菌分离小鼠腹腔巨噬细胞,并制备单细胞悬液,以不同终浓度(80μmol/L、160μmol/L及320μmol/L)的Sal和巨噬细胞共培养4 h,再以脂多糖(LPS)和γ-干扰素(IFN-γ)进行共刺激。利用MTT比色法检测Sal对巨噬细胞体外增殖的影响。用放线菌酮(CHX)诱导巨噬细胞凋亡,用Sytox G reen染色结合荧光酶标仪检测Sal对CHX诱导巨噬细胞凋亡的影响。用流式细胞术(FCM)检测Sal对巨噬细胞吞噬功能的影响。用2-7-二氯氢化荧光素乙二脂(H2DCFDA)染色法结合荧光酶标仪检测Sal对胞内ROS产生的影响;用G riess反应检测Sal对巨噬细胞分泌NO的影响。结果:MTT比色法检测显示,终浓度为80、160、320μmol/L的Sal均可显著促进LPS+IFN-γ刺激巨噬细胞增殖(P<0.05)。荧光酶标仪检测Syto xG reen染色法的结果显示,160μmol/L的Sal可抑制CHX诱导的巨噬细胞凋亡(P<0.01)。FCM结果显示,各浓度的Sal均能促进单纯药物组和实验药物组LPS+IFN-γ刺激巨噬细胞的吞噬功能(P<0.05)。用荧光酶标仪检测DH2DCFDA染色结果表明,各浓度的Sal对LPS+IFN-γ刺激的巨噬细胞胞内ROS的产生均具有显著的抑制作用(P<0.01)。Griess反应检测NO含量的结果显示,各浓度的Sal对LPS+IFN-γ刺激巨噬细胞产生NO均具有促进作用(P<0.05)。结论:Sal对LPS和IFN-γ刺激的巨噬细胞增殖具有显著的促进作用,对CHX诱导的巨噬细胞凋亡具有显著的抑制作用,对静息态和活化态的巨噬细胞的吞噬功能均有增强作用,并能减少LPS和IFN-γ活化的巨噬细胞胞内ROS的产生;但能促进LPS和IFN-γ活化的巨噬细胞NO的分泌。

雷公藤多甙抑制小鼠腹腔巨噬细胞产生一氧化氮

雷公藤多甙（ｐｏｌｙｇｌｙｃｏｓｉｄｅｏｆＴｒｉｐｔｅｒｙｇｉｕｍｗｉｌｆｏｒｄｉＨｏｏｋ．ｆ．，ＴＷＰ）临床广泛用于治疗类风湿性关节炎等多种自身免疫性疾病，既可抑制细胞免疫又可抑制体液免疫［１］．但其在免疫抑制过程中对一氧化氮合酶（ＮＯＳ）的影响却...

黄芪多糖对细菌脂多糖诱导大鼠腹腔巨噬细胞释放TNFα、NO及IL-1的影响

目的 研究黄芪多糖 (APS)对细菌脂多糖 (LPS)诱导大鼠腹腔巨噬细胞释放肿瘤坏死因子α(TNFα)、白细胞介素 1(IL 1)及一氧化氮 (NO)的影响。方法 10mg/LLPS体外诱导大鼠腹腔巨噬细胞 ,小鼠成纤维细胞瘤株 (L92 9)杀伤法检测TNFα的含量、小鼠胸腺细胞增殖法检测IL 1的活性、Griess法检测NO的水平。结果 APS能不同程度地抑制激活巨噬细胞对TNFα、NO与IL 1的分泌。结论 APS抑制巨噬细胞的分泌功能可能是其保肝作用的机制之一。

亮菌多糖IPS-B2对小鼠腹腔巨噬细胞活性及其相关基因转录的影响

目的:观察亮菌多糖IPS-B2对巨噬细胞分泌细胞因子、一氧化氮(NO)生成以及巨噬细胞中白介素-1β(IL-1β),白介素-6(IL-6),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和NO合成关键酶诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因转录的影响。方法:采用ELISA和Griess法检测IPS-B2对小鼠腹腔巨噬细胞生成细胞因子IL-1β,IL-6,TNF-α和细胞毒效应分子NO的影响;采用SYBR GreenⅠ指示的Real-time RT-PCR技术研究IPS-B2对小鼠腹腔巨噬细胞中IL-1β,IL-6,TNF-α和NO合成关键酶iNOS基因在mRNA转录水平上的作用。结果:IPS-B2能显著提高小鼠腹腔巨噬细胞培养上清液中IL-1β,IL-6,TNF-α和NO的含量,增强IL-1β,IL-6,TNF-α和NO合成关键酶iNOS基因的转录水平。结论:IPS-B2可能是通过提高巨噬细胞分泌生物活性物质,并促进此类生物活性物质的基因转录,从而实现其抗肿瘤的重要作用。

酵母多糖对小鼠腹腔巨噬细胞产生一氧化氮和白细胞介素-1的影响

目的探讨酵母多糖对小鼠腹腔巨噬细胞产生一氧化氮 (NO)和白细胞介素 1(IL 1)的影响。方法将不同剂量的酵母多糖加入体外培养的小鼠腹腔巨噬细胞中 ,取细胞培养上清液根据Griess反应检测NO-2 的量 ,间接反映巨噬细胞产生NO的生成量 ,并用溴化四唑蓝 (MTT)比色法检测上清液中IL 1的生成量。结果酵母多糖可明显促进小鼠腹腔巨细胞产生NO和IL 1,NO的生成量呈现剂量依赖关系。结论酵母多糖可诱导小鼠腹腔巨噬细胞产生NO和IL 1,可能是酵母多糖调节机体免疫功能。

当归、丹参和川芎嗪注射液对腹膜透析腹腔巨噬细胞功能的干预作用

目的 :研究当归、丹参和川芎嗪注射液 (简称中药 )对腹膜透析 (PD)腹腔巨噬细胞 (MC)功能的影响。方法 :(1)将MC置于含当归、丹参和川芎嗪的腹膜透析液 (CDS)的培养液中培养 2 4h ,测定 3个中药组、CDS组和对照组MC的一氧化氮 (NO)含量和对四甲基偶氮唑盐 (MTT)还原能力。 (2 )MC分别置于含 2、10、10 0 μg/ml的 3个中药的CDS中培养 2 4h ,观察不同浓度中药对MC吞噬能力、NO含量和MTT还原能力的影响 ,对照组为等量培养液代替CDS。结果 :CDS组MC的NO含量和MTT还原能力均明显低于对照组 (P <0 0 1) ;与CDS组比较 ,川芎嗪组的MCNO含量和 3个中药组MCMTT还原能力均有明显提高 (P <0 0 1) ,并随着培养液中的中药浓度的提高 ,3个中药组MC吞噬能力和NO含量均有显著增加。结论 :在CDS中加中药能改善腹膜腔MC的防御功能 ,降低腹膜炎的发生率 ,对提高PD疗效有重要意义。

用毫微球增加体外小鼠腹腔巨噬细胞与大鼠肝细胞对庆大霉素的摄取

用３Ｈ－庆大霉素制备了聚氰基丙烯酸正丁酯毫微球。结果表明，毫微球可使小鼠腹腔巨噬细胞的ｃｐｍ达３Ｈ－庆大霉素溶液对照组的６．３４倍，使大鼠肝细胞的ｃｐｍ在１，１２和２４ｈ分别达到‘比庆大霉素溶液对照组的２７．７４，９．０３和８．３６倍。毫微球的粒径、使用的稳定剂种类、表面活性剂包裹以及庆大霉素的投药量等对摄取量均有明显影响。本研究为筛选细胞内给药系统提供了依据。

玉屏风散提取液对小鼠腹腔巨噬细胞活化及增殖的影响

目的研究玉屏风散提取液对小鼠腹腔巨噬细胞增殖及活化的影响。方法分别制备玉屏风散水煎液、玉屏风散蒸馏水超声提取液、玉屏风散无水乙醇超声提取液和玉屏风散乙酸乙酯超声提取液。分离健康昆明种小鼠原代腹腔巨噬细胞进行体外培养,培养基中分别加入不同剂量上述药液使终末浓度达到1.67、3.33、8.33、16.67 g·L^(-1)(折合生药)进行细胞培养,以0 g·L^(-1)作为空白对照组。培养24、72 h后,分别加入中性红、2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐(WST-8),用酶标法检测4种玉屏风散提取液对腹腔巨噬细胞活化及增殖的影响。结果与空白对照组相比,4种不同浓度的玉屏风散提取液均可促进小鼠腹腔巨噬细胞吞噬中性红能力及增殖(P<0.01)。与同剂量玉屏风散水煎液相比,除玉屏风散无水乙醇超声提取液(3.33 g·L^(-1))、玉屏风散乙酸乙酯超声提取液(3.33 g·L^(-1))可促进巨噬细胞吞噬中性红能力(P<0.05,P<0.01),玉屏风散乙酸乙酯超声提取液(16.67 g·L^(-1))可促进腹腔巨噬细胞增殖(P<0.01),其余剂量的玉屏风散超声提取液的效果都不如同剂量组的玉屏风散水煎液。结论玉屏风散提取液可促进小鼠腹腔巨噬细胞活化吞噬能力及增殖,但玉屏风散的超声提取条件需进一步探索。