表达抗PD-1抗体的溶瘤病毒在结肠癌腹腔移植瘤模型中的抗肿瘤作用

为了研究表达小鼠抗PD-1抗体(VT1093M)的溶瘤病毒对结肠癌腹腔移植瘤模型的抗肿瘤作用,利用BALB/c小鼠成瘤的小鼠结肠癌CT26-luc细胞株建立了结肠癌腹腔移植瘤模型。接种后第8天进行分组,设置生理盐水(normal saline,NS)组、病毒VT09X组和VT1093M组,每组5只,注射剂量为2.5×10^(7)pfu/250μL,NS注射250μL,每隔一天注射一次,共注射5次。末次注射后6 d,脱颈处死小鼠,提取外周血中CD45^(+)细胞和腹水细胞,进行体外杀伤实验。治疗组初次出现荧光消失后第13天,进行再挑战实验。结果表明,造模实验确定最佳接种条件为200μL的2.5×10^(6)个/mL细胞悬液;药效实验中,VT09X组和VT1093M组较NS组具有明显的肿瘤抑制效果,VT1093M组治疗期间出现肿瘤消失情况,较VT09X组抑瘤效果明显,但差异无统计学意义;再挑战实验中,VT1093M组均未出现肿瘤再次生长;在体外杀伤实验中,注射病毒组的外周血CD45^(+)细胞在靶效比为1∶40时对CT26-luc杀伤效果明显,对4T1细胞,各组杀伤效果较差。因此,重组溶瘤病毒VT1093M在结肠癌腹腔转移瘤模型中具有显著的抗肿瘤作用,且能激发小鼠产生较为持久的特异性免疫反应。

两种荷人卵巢癌腹腔移植瘤的免疫重建SCID小鼠模型的建立及比较

背景与目的:卵巢癌的死亡率在妇科恶性肿瘤居首位。目前,常规的手术、化疗和放疗难以再提高患者的生存率,因此,生物治疗成为卵巢癌的第四大治疗模式,而生物治疗的评价需要合适的动物模型。本实验目的是建立两种荷人卵巢癌腹腔移植瘤的免疫重建的严重联合免疫缺陷(severecombinedimmunodeficiency,SCID)小鼠模型,通过比较选出较适宜的模型。方法:分别用人卵巢癌细胞株SKOV3细胞和SKOV3.ip1细胞腹腔注射6只和10只C.B17/SCID小鼠建立腹腔瘤模型,比较其生物学、组织学和免疫学特性;并将SKOV3.ip1组小鼠的腹水转种6只小鼠的腹腔,观察成瘤情况。以上22只SCID小鼠均用人外周血淋巴细胞腹腔注射进行人免疫功能重建。结果:用SKOV3细胞和SKOV3.ip1细胞分别建立的两种模型小鼠成瘤率均为100%;成瘤潜伏期分别为20～41天和22～30天(P>0.05);生存期分别为50～78天和32～43天(P<0.0001)。SKOV3.ip1组小鼠的腹水进行转种后有83.3%(5/6)能形成腹腔肿瘤和腹水。两种模型小鼠尸检发现肿瘤分布相似,均形成广泛的盆腔播散;但SKOV3.ip1组伴有0.35～5.60ml血性腹水,而SKOV3组仅有1只有0.20ml腹水。组织学显示两种模型都保持了人卵巢浆液性乳头状腺癌的特点,免疫组化结果表明两种模型都表达卵巢癌相关抗原OC166-9。72.7%(16/22)?

CT灌注扫描评价兔VX2腹腔移植瘤放疗疗效

目的探讨CT灌注成像在评价兔VX2腹腔移植瘤放疗疗效中的应用价值。方法建立兔VX2腹腔移植瘤模型,将实验兔随机分为治疗组和对照组,治疗组接受肿瘤放射治疗,对照组单纯饲养1周。对治疗组放疗前和放疗1周后及对照组均行CT灌注扫描。比较治疗组及对照组前后两次CT灌注参数[血流量(BF)、血容量(BV)及血管表面通透性(PS)],对两组肿瘤大小变化、灌注参数与MVD进行相关分析。结果治疗组和对照组各纳入10只实验兔,放疗1周后治疗组实验兔瘤区BF、BV和PS均较放疗前明显降低(P均<0.01),且均低于对照组(P均<0.01)。对照组瘤区前后两次BF、BV和PS的差异均无统计学意义(P均>0.05)。治疗组与对照组MVD计数的差异有统计学意义(t=12.67,P<0.01)。肿瘤实质区BF、BV与MVD计数呈正相关(r=0.72及0.63,P均<0.05);而PS与MVD计数无明显相关(r=0.40,P>0.05)。结论 CT灌注成像技术能够用于评价兔VX2腹腔移植瘤的放疗疗效。

胶原凝胶包埋肝细胞体外培养和腹腔移植

目的:改进肝细胞腹腔移植方法。方法:用胶原凝胶包埋鼠肝细胞并在体外培养。测定培养液中总蛋白(TP)和尿素氮(BUN)水平。将胶原培养液与鼠肝细胞混合后注入鼠腹腔,混合物在腹腔内形成凝胶并包埋肝细胞。用含酶的培养液将受体鼠腔内移植肝细胞洗出,再置于无葡萄糖(Glu)培养液中培养。测定培养液中Glu水平。对照组处理过程与实验组相同,但不用胶原。结果:胶原凝胶包埋肝细胞组的TP、BUN和Glu值均明显高于对照组(P<0.01)。胶原培养液与肝细胞混合物在注入腹腔24h后变为凝胶。结论:胶原凝胶可促进体外培养或腹腔移植肝细胞生长;胶原培养液腹腔注射和腹腔内胶原凝胶包埋细胞法,使肝细胞腹腔移植更简便、安全、实用。

大鼠胸主动脉腹腔移植模型的技术改良

目的 为了使血管吻合方法更简单 ,移植血管缺血时间更短 ,以避免吻合口出血和狭窄。 方法 纯系SD大鼠 40只 ,均为雄性。体重 130～ 15 0 g为供者 ,体重 2 5 0～ 35 0 g为受者。利用 Teflon管 (外径 1.7mm,内径 1.5 mm,长度 3mm )将移植的胸主动脉两端外翻固定。将肾动脉和腰升动脉间的腹主动脉游离、阻断 ,分别于肾动脉下方和腰升动脉上方剪开其管径的 1/3,插入套管结扎 ,并将牵引线与套管缝合固定 ,然后切断两吻合口间的腹主动脉。 结果手术成功率 90 % ,术后 1个月移植血管通畅率为 10 0 % ,吻合口未发生内膜增生。 结论 此方法简化了血管吻合技术 ,避免了原模型的并发症。

复方藤梨根制剂对人胃癌裸鼠腹腔移植瘤的作用机制研究

目的:研究复方藤梨根制剂(FFTLG)对人胃癌裸鼠腹腔移植瘤的抑制效应及其作用机制。方法:建立人胃癌(SGC-7901)裸鼠腹腔移植模型。24只裸鼠随机分为4组:FFTLG高、中、低剂量组和生理盐水对照组,分别观察荷瘤裸鼠腹腔移植瘤的生长情况,免疫组化检测肿瘤基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达情况。结果:NS组、FFTLG低、中、高剂量组抑瘤率分别为0、7.8%、30.0%和33.3%;实验组与模型对照组相比具有统计学意义(P<0.05,P<0.01);腹腔瘤组织中MMP-9阳性表达细胞百分比分别为(56.13±23.26)%、(45.83±13.40)%、(30.67±11.50)%、(17.53±12.50)%。实验组与模型对照组相比具有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论:FFTLG对裸鼠腹腔移植瘤生长具有抑制作用,且随着剂量的增加其作用增强,其作用机制可能与下调MMP-9的表达有关。

溶血磷脂酸诱导人卵巢上皮癌裸鼠腹腔移植瘤生长研究

目的观察溶血磷脂酸(LPA)对卵巢上皮性癌裸鼠腹腔移植瘤生长及转移的作用。方法建立人卵巢上皮性癌腹腔移植瘤模型,16只裸鼠随机分为2组即对照组和LPA处理组,将6×106个未经处理的卵巢上皮癌细胞株SKOV3和用LPA刺激后的SKOV3细胞分别注入2组裸鼠腹腔,待裸鼠自然死亡后,观察移植瘤大小、重量、腹腔转移灶的数目及腹腔脏器转移情况。结果两组成瘤率均为100%,但LPA组移植瘤生长速度、重量和腹腔转移灶数目均高于对照组(P<0.01)。结论LPA具有促进卵巢癌细胞在腹腔内增生和浸润转移的作用。

二氢杨梅素对裸鼠腹腔移植人胃癌细胞中Caveolin-1表达的影响

目的观察二氢杨梅素(DMY)对裸鼠腹腔移植人胃癌细胞生长的抑制作用及对腹腔瘤组织中Caveolin-1表达的影响。方法复制人胃癌腹腔移植的裸鼠模型。将复模成功的24只裸鼠随机分为4组,即移植瘤模型组,DMY低、中及高剂量处理组。分别观察荷瘤裸鼠的腹腔移植瘤的生长和成瘤情况,测量肿瘤的重量、长短径并计算肿瘤的体积。采用免疫组织化学法和Western blot检测人胃癌腹腔移植瘤腹腔瘤体中Caveolin-1和Ki67的表达。结果与移植瘤模型组比较,100和200 mg/(kg·d)DMY中、高剂量组腹腔移植瘤成瘤个数,腹腔瘤体的重量及腹腔瘤体的体积均降低,呈现剂量依赖性(P<0.05),裸鼠的食欲、活动情况和精神状态等一般情况改善。与移植瘤模型组比较,100和200 mg/(kg·d)DMY中、高剂量组腹腔移植瘤体表达Caveolin-1的阳性细胞百分率和Caveolin-1的蛋白表达水平均增加,呈现剂量依赖性(P<0.05);而Ki67的阳性细胞百分率和Caveolin-1的蛋白表达水平均降低,也呈现剂量依赖性(P<0.05)。结论二氢杨梅素以剂量依赖的方式抑制人胃癌腹腔移植瘤的生长,其作用机制可能与上调Caveolin-1的表达有关。

UC-MSCs腹腔移植对db^-/db^-小鼠血糖和体重的影响

目的明确脐带间充质干细胞(UC-MSCs)对2型糖尿病(T2DM)db^-/db^-小鼠的临床疗效及安全有效的移植途径,旨在为临床应用提供实验与理论数据。方法db/m和db^-/db^-小鼠各10只,每种小鼠各分为2组,db/m对照组,db/m+UC-MSCs组,db^-/db^-模型组,db^-/db^-+UC-MSCs组,5只/组。对照组和模型组给予1mL生理盐水腹腔注射;db/m+UC-MSCs和db^-/db^-+UC-MSCs组腹腔注射UC-MSCs为1×10^7个细胞/只鼠,总液体量为1mL。每周固定时间记录餐后血糖与体重,计算各组小鼠生存率。结果与db-/db-模型组小鼠相比,腹腔途径移植UC-MSCs后,db^-/db^-小鼠的血糖水平明显下降,与非移植db^-/db^-小鼠比较差异有显著性,对db/m小鼠无影响;移植与非移植小鼠体重无明显变化。db^-/db^-+UC-MSCs组小鼠出现部分死亡,生存率为75%,其它组小鼠生存率均为100%。结论UC-MSCs腹腔移植途径可有效控制T2DM小鼠血糖变化,对体重变化无明显影响。可为临床治疗提供参考。

消水散对人肠癌小鼠腹腔移植模型B7/CD28/CTLA-4协同刺激通路及腹水微环境的影响

目的:研究消水散对人肠癌小鼠腹腔移植模型B7/CD28/细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4(CTLA-4)协同刺激通路及腹水微环境的影响。方法:采用腹腔注射人肠癌细胞株HCT116细胞建立人肠癌小鼠腹腔移植模型,分为模型组,消水散低、中、高剂量组,另设正常小鼠为对照组,每组各10只。观察阳虚症状积分,血清促肾上腺皮质激素(ACTH)、皮质醇(CORT)、三碘甲状腺原氨酸(T3)、甲状腺素(T4)、促甲状腺激素(TSH)含量,腹水量,瘤体积,瘤重,B7-1、B7-2、CD28、CTLA-4表达量及其mRNA表达水平,腹膜组织转化生长因子-β1(TGF-β1)、白细胞介素-10(IL-10)表达水平。结果:与正常组比较,模型组阳虚症状积分显著增加(P<0.01),ACTH、CORT、T3、T4、TSH含量显著降低(P<0.01)。与模型组比较,消水散呈剂量依赖性降低小鼠腹水量、瘤体积、瘤重、CTLA-4水平、TGF-β1、IL-10表达水平(P<0.05),增加B7-1、B7-2、CD28水平(P<0.05)。结论:消水散具有抗人肠癌移植瘤恶性腹水作用,这可能与抑制CTLA-4表达,促进T细胞激活,改善机体免疫抑制及腹腔免疫微环境有关。

海藻酸钠/壳聚糖微胶囊包埋人卵巢癌细胞腹腔移植的实验研究

目的 探讨用改性壳聚糖代替聚赖氨酸 ,制备海藻酸钠 /壳聚糖 (ACA)微胶囊用于细胞移植的可行性。方法 使用大功率高压脉冲微胶囊制备仪 ,制备包埋人卵巢癌 (SKOV3)细胞的ACA微胶囊 ,然后采用注射的方法将其移植到小鼠的腹腔。结果 包埋SKOV3细胞的ACA微胶囊移植后 ,在小鼠的腹腔内保持了原有的形状和结构 ,囊内的细胞正常生存并保持增殖功能。结论 壳聚糖作为制备微胶囊的材料 ,具有良好的生物相容性和机械强度。因此 ,可望代替价格昂贵的聚赖氨酸制备微胶囊 ,作为免疫隔离工具在组织细胞移植技术的发展中发挥重要作用。

单链抗体导向的慢病毒介导VP22-TK系统对MUC1^+人卵巢癌裸鼠腹腔移植瘤的作用

目的 探讨抗MUC1单链抗体 (scFv)导向的慢病毒介导的单纯疱疹病毒结构蛋白VP2 2和胸苷激酶 (TK)融合基因及丙氧鸟苷 (GCV)自杀基因系统对MUC1+ 人卵巢上皮癌的特异靶向性生长抑制作用。方法 将慢病毒包装质粒、包膜质粒、转移载体质粒采用磷酸钙沉淀法共转染包装细胞2 93T ,收集病毒上清 ,并建立MUC1+ 人卵巢上皮癌 (3AO)细胞株腹腔移植瘤模型。单药组分为scFv VP2 2 TK +生理盐水 (NS)组、VP2 2 TK +NS组、NS +NS组 ,分别用慢病毒scFv VP2 2 TK、VP2 2 TK或NS1ml腹腔注射 ,继予NS腹腔注射 ;联合用药组分为scFv VP2 2 TK +GCV组、VP2 2 TK +GCV组、NS +GCV组分别应用慢病毒scFv VP2 2 TK、VP2 2 TK及NS腹腔注射 ,2 4h后给予GCV腹腔注射治疗。每组裸小鼠均为 5只。观察各组裸鼠的生存时间及慢病毒的毒性作用。结果 平均生存时间scFv VP2 2 TK +NS组、VP2 2 TK +NS组、NS +NS组、NS +GCV组、VP2 2 TK +GCV组、scFv VP2 2 TK +GCV组分别为 18.4d± 2 .9d、18.8d± 1.5d ,17.6d± 1.1d ,18.5d± 1.6d ,2 4d± 5d和 4 6d± 2 2d ,6组比较 ,差异有显著意义 (χ2 =2 4 .82 ,P =0 .0 0 2 ) ;并且scFv VP2 2 TK +GCV组较VP2 2 TK +GCV组裸鼠平均生存时间明显延长 (χ2 =7.4 3,P =0 .0 0 6 )。

免疫重建荷卵巢癌SKOV3 SCID鼠腹腔移植中IL-7的免疫学作用

目的 建立荷人卵巢癌SKOV3 IL 7SCID鼠和免疫重建荷人卵巢癌SKOV3 IL 7SCID鼠腹腔移植等模型 ,观察IL 7在免疫重建荷卵巢癌SCID鼠体内的作用。方法 用SKOV3 IL 7细胞株建立荷人卵巢癌SKOV3 IL 7SCID鼠模型 ,用PBL与SKOV3 IL 7细胞建立免疫重建荷人卵巢癌SKOV3 IL 7SCID鼠腹腔移植模型 ,观察其生物学特性及免疫反应 ;采用HE染色、ELISA法和免疫组化等方法观察肿瘤组织IL 7合成和肿瘤浸润淋巴细胞情况。结果 在未人化水平下 ,IL 7基因转染组有明显的体内抑瘤作用 ,肿瘤局部有IL 7分泌。在人化水平下 ,观察到所有免疫重建组小鼠血浆人IgG水平随时间延长而逐渐上升 ,终末血IgG水平荷SKOV3 IL 7瘤组显著高于单独免疫重建组 (P <0 .0 5 ) ,荷SKOV3瘤组显著高于单独免疫重建组 (P <0 .0 5 ) ;IL 7有无转染 ,荷瘤鼠体内荷瘤状况相似 ,外周血IL 7水平差异无显著性。但镜下IL 7转染组肿瘤细胞内有更多TIL浸润 ,肿瘤细胞局部有IL 7阳性表达。结论 (1)成功建立免疫重建荷人卵巢癌SKOV3 IL 7SCID鼠腹腔移植模型。 (2 )转IL 7基因SKOV3可在荷卵巢癌SKOV3 IL 7SCID鼠的肿瘤细胞中表达IL 7,IL 7在荷瘤鼠体内有成瘤下降现象 ,这一现象可能主要是局部作用的结果。

猪胰岛细胞微囊化后腹腔移植治疗小鼠糖尿病

目的探讨猪胰岛细胞微囊化后腹腔移植治疗小鼠糖尿病的效果。方法采用胶原酶灌注消化法及不连续密度梯度离心法分离并纯化成体猪胰岛，并用海藻酸钠、多聚赖氨酸对猪胰岛进行微囊化。双硫腙（DTZ）染色观察分离胰岛纯度，葡萄糖刺激胰岛素释放实验检测纯化胰岛和微囊化胰岛体外功能。利用链脲佐菌素（STZ）200mg／kg腹腔内注射，制作BALB／c小鼠1型糖尿病动物模型。成模后动物随机分为3组：猪胰岛微囊组、空微囊组和生理盐水对照组。每只小鼠腹腔内分别移植500个相应胰岛，检测移植前后小鼠的血糖变化。采用单因素方差分析法进行统计分析。结果不连续密度梯度离心纯化后，得到胰岛的纯度为〉90％；碘化丙啶／双醋酸荧光素（PI／FDA）染色后，测定胰岛的活力为〉90％；葡萄糖刺激胰岛素分泌检测，分离纯化的胰岛和微囊化胰岛的刺激指数均〉2．0；将微囊化胰岛移植到STZ诱导的糖尿病小鼠腹腔内，能够使小鼠血糖恢复并维持正常超过60d〈9．3mmol／L）。与空囊移植组和生理盐水对照组比较，血糖为正常水平的控制时间明显延长（F=13．587，P〈0．05）。病理学检查发现，微囊内胰岛形态基本完整，胰岛素染色为阳性。结论微囊化胰岛腹腔移植后，能有效降低小鼠血糖，微囊具有较好的免疫隔离作用。

抗癌消水散对人胃癌小鼠腹腔移植阳虚模型的干预作用

目的:研究抗癌消水散对人胃癌小鼠腹腔移植阳虚模型的影响。方法:采用腹腔注射人胃癌细胞MGC803及冰水建立人胃癌小鼠腹腔移植阳虚模型,将造模成功的50只小鼠分为模型组及抗癌消水散低、中、高剂量组,每组各10只,另取10只正常小鼠为对照组。干预30 d后评价阳虚症状积分,测定血清中促肾上腺皮质激素(ACTH)、皮质醇(CORT)、三碘甲状腺原氨酸(T_(3))、甲状腺素(T_(4))、促甲状腺激素(TSH)含量及B7-1、B7-2、CD28、胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4(CTLA-4)含量,检测腹膜组织中B7-1(CD80)、B7-2(CD86)、CD28 mRNA、CTLA-4 mRNA及转化生长因子-β1(TGF-β1)、白细胞介素-10(IL-10)含量,观察腹水量、瘤体积、瘤重。结果:与正常组比较,模型组阳虚症状积分显著增加,血清ACTH、CORT、T_(3)、T_(4)、TSH水平显著降低,差异均有统计学意义(P<0.01)。抗癌消水散低、中、高剂量组小鼠腹水量、瘤体积、瘤重,血清中B7-1、B7-2、CD28、CTLA-4含量,腹膜组织中B7-1、B7-2、CD28 mRNA、CTLA-4 mRNA及TGFβ1、IL-10含量与模型组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);上述指标低、中、高剂量组组间比较,差异亦有统计学意义(P<0.05),以高剂量组改善为最佳。结论:抗癌消水散具有抗人胃癌小鼠移植阳虚模型瘤恶性腹水的作用,这可能与抑制CTLA-4表达,促进T细胞激活,改善机体免疫抑制及腹腔免疫微环境有关。

胶原凝胶包埋肝细胞体外培养和腹腔移植的研究

目的 研究改进肝细胞腹腔移植的方法。方法 用胶原凝胶包埋大鼠肝细胞 ,并在体外培养 ,测定培养液中总蛋白 (TP)和尿素氮 (BUN)水平。将胶原培养液与鼠肝细胞混合后注入大鼠腹腔 ,混合物在腹腔内形成凝胶并包埋肝细胞。用含酶的培养液将受者鼠腹腔内的移植肝细胞洗出 ,再置于无葡萄糖培养液中培养 ,测定培养液中葡萄糖含量。对照组处理过程与实验组相同 ,但不用胶原。结果 胶原凝胶包埋肝细胞组的TP、BUN和葡萄糖含量均明显高于对照组 (P <0 .0 1)。胶原培养液与肝细胞混合物在注入腹腔 2 4h后变为凝胶。结论 胶原凝胶可促进体外培养或腹腔移植的肝细胞生长 ;胶原培养液腹腔注射和腹腔内胶原凝胶包埋细胞法 ,使肝细胞的腹腔移植更简便、安全、实用。

胚胎胸腺细胞腹腔移植防治小儿原发性肾病综合征的复发

胚胎胸腺细胞腹腔移植防治小儿原发性肾病综合征的复发周红彬苏宝新杨汝菊周芬杨会英我院自１９８９年１月以来对２８例小儿肾病在糖皮质激素中长程疗法过程中，应用胚胎胸腺细胞腹腔移植防治原发病复发的治疗，取得了满意的效果，现报告如下。一、临床资料：将在我院住院...

采用改良Ono方法作大鼠腹腔异位心脏移植研究

目的探讨改良ono方法提高大鼠腹腔心脏异位移植存活率。方法55只wistar大鼠作为供体，采用改良的Ono方法吻合至SD大鼠腹腔。结果55只大鼠移植模型，死亡5只（3只死于术后心脏衰竭，2只死于术后肺部感染），其余均存活超过2个月，无一只死于术后出血。结论改良后的Ono方法可减少模型死亡率，成功率高，结果可靠，为进一步研究心脏移植奠定了基础。

微载体粘附培养的肝细胞腹腔内移植治疗急性肝功能衰竭大鼠的实验研究

目的 评价微载体粘附培养的肝细胞腹腔内移植对D 氨基半乳糖盐酸盐诱导的大鼠急性肝功能衰竭的治疗作用。方法 胶原酶灌注分离大鼠肝细胞 ,行Cytodex 3粘附培养 ,移植 1× 10 7个微载体粘附肝细胞至D 氨基半乳糖盐酸盐诱导的急性肝功能衰竭大鼠腹腔内 ,比较各组间生存率、肝功能及肝脏病理改变情况以评估疗效。结果 微载体移植组大鼠存活率明显高于空载体组 ,移植 5d后两组比较差异显著 (P <0 .0 5 ) ;空载体组大鼠肝功能及肝脏修复明显迟于微载体组。结论 微载体粘附培养的肝细胞腹腔内移植可对急性肝衰竭大鼠提供代谢支持作用 ,提高急性肝衰竭大鼠存活率。