不同腹膜转运特性患者腹膜透析滤出液外泌体miR-503表达差异及生物信息学分析

目的比较腹膜透析滤出液(PDE)外泌体微RNA(microRNA,miR)-503在不同腹膜转运特性患者中的表达差异,并预测miR-503的靶基因及其可能的生物学作用,为其在腹膜转运特性方面的研究提供生物信息学数据。方法选取24例稳定维持性腹膜透析(PD)患者,根据腹膜平衡试验(PET)结果分为高转运(高/高平均转运组,n=12)和低转运(低/低平均转运组,n=12)两组。收集患者留腹过夜的PDE 500 ml,利用超滤杯进行浓缩后,超速离心法提取外泌体,重悬于磷酸盐缓冲液(PBS),通过透射电镜(TEM)、纳米粒子跟踪分析(NTA)、Western印迹和荧光染色鉴定外泌体的形态结构和功能。提取PDE外泌体miR,实时荧光定量PCR法检测两组PDE外泌体miR-503的表达水平,并分析miR-503的相对表达量与PET值和24 h超滤量的相关性。使用Targetscan和miRDB数据库预测miR-503的靶基因,运用富集分析工具DAVID(https://david.ncifcrf.gov/)进行基因本体(gene ontology,GO)功能富集和京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)信号通路分析。结果PDE中提取到的外泌体透射电镜下呈杯状,直径100 nm左右,表达特异性表面标志CD63、CD81和热休克蛋白-70(HSP-70),可被间皮细胞内化吞噬。与低转运组相比,高转运组PDE外泌体miR-503的相对表达量较高(P=0.002),且PDE外泌体miR-503的相对表达量与PET值呈正相关(r=0.547,P=0.006),但与24 h超滤量无相关性(r=-0.297,P=0.159)。miR-503共有156个靶基因可通过2个不同数据库同时预测出,156个靶基因的GO分析显示主要富集在与蛋白激酶结合、调节蛋白修饰和代谢过程以及调控上皮细胞增殖方面。KEGG通路则富集了许多肿瘤相关和经典的信号传导通路,包括转化生长因子-β(TGF-β)通路和血管内皮生长因子(VEGF)信号通路,同时血管内皮生长因子A(VEGFA)也是miR-503的直接靶基因,与许多纤维化机制中的蛋白相关。结论PDE外泌体miR-503在高转运组中明显升高,并与PET值呈正相关。生物信息学分析提示其可能通过靶向VEGFA调控腹膜血管新生。

腹膜透析对糖尿病患者血糖波动的影响及临床意义

目的利用持续动态血糖监测系统(CGMS)比较糖尿病腹膜透析患者和肾功能正常糖尿病患者血糖谱,探讨腹膜透析对糖尿病患者血糖波动的影响。方法选取规律腹膜透析的终末期糖尿病肾病(DMPD组,n=19)和非糖尿病肾病患者(PD组,n=8),并根据年龄、性别和72h平均血糖匹配肾功能正常糖尿病患者(DM组,n=20),应用CGMS进行连续72h动态血糖监测,比较腹透糖尿病和肾功能正常糖尿病及非糖尿病腹透患者血糖波动的特点。结果腹膜转运功能和平均血糖、标准差和平均有效血糖波动幅度显著正相关。和PD组相比,DMPD组多项血糖波动指标如日内血糖波动标准差(P<0.001)、变异系数(P=0.009)和日间血糖平均绝对差(P=0.043)均显著低于DM组。DMPD和DM组均表现为凌晨血糖低,餐后高血糖特点,但DMPD组凌晨血糖低谷明显高于DM组(P<0.001)。结论腹膜透析糖尿病患者血糖波动显著小于平均血糖水平匹配的肾功能正常糖尿病患者。